实验三叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定.ppt
实验三叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定.ppt
×100%
样品重量（mg）×1000
▪ 稀释倍数：若提取液未经稀释，则取1
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实验报告
▪ 1.试述叶绿体色素的吸收光谱特点及生理意 义。
▪ 2.在皂化反应中加入乙醚有什么作用？
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理化性质测定
▪ 将上一个实验中提取的 叶绿体色素溶液适当稀 释后，进行以下实验：
▪ 1.荧光现象的观察。 ▪ 取l支试管加入浓的叶
绿体色素提取液，在直 射光下观察溶液的透射 光与反射光颜色有何不 同，可观察到反射出暗 红色的荧光。
▪ 2.氢和铜对叶绿素分子中镁 的取代作用
▪ 方法一；取两支试管。第 一支试管加叶绿体色素提取 液2mL，作为对照。第二支 试管加叶绿体色素提取液2 mL，再加入稀盐酸1滴，摇 匀，观察溶液颜色变化。当 溶液变竭后，再加入少量醋 酸铜粉末，微微加热，观察 记录溶液颜色变化情况，并 与对照试管相比较。解释其 颜色变化原因。
▪ 叶绿素中的镁可以被氢 离子所取代而成褐色的 去镁叶绿素。去镁叶绿 素遇铜则成为铜代叶绿 素，铜代叶绿素很稳定， 在光下不易破坏，故常 用此法制作绿色多汁植 物的浸渍标本。
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实验步骤(1)
▪ 根据朗伯一比尔定律，某有 ▪ 今欲测定叶绿体色素混合
色溶液的吸光度D与其中溶 液浓度C和液层厚度L成正 比，即：
的水分）和流动相（有 的盐，产生的盐能溶
机推动剂）间具有不同 的分配系数，所以移动 速度不同，经过一定时 2021间/3/4后，可将各种色素分 开。
于水中，可用此法将 叶绿素与类胡萝卜素 分开。
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实验原理
▪ 叶绿素与类胡萝卜素都具有 光学活性，表现出一定的吸 收光谱，可用分光光度计精 确测定。叶绿素吸收光量子 而转变成激发态，激发态的 叶绿素分子很不稳定，当它 变回到基态时可发射出红光 量子，因而产生荧光。叶绿 素的化学性质很不稳定，容 易受强光的破坏，特别是当 叶绿素与蛋白质分离以后， 破坏更快，而类胡萝卜素则 较稳定。
叶绿体色素的提取、分离、定量及理化性质的鉴定
实验日期：2011.9.28叶绿体色素的提取、分离、定量及理化性质的鉴定1、实验原理叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a 、叶绿素b 、胡萝卜素和叶黄素组成。
它们与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。
1. 叶绿体色素的结构与分离叶绿素a为蓝黑色固体，在乙醇溶液中呈蓝绿色；叶绿素b为暗绿色，其乙醇溶液呈黄绿色。
Chla与Chlb是吡咯衍生物与镁的络合物，它们很相似，不同之处仅在于Chla第二个吡咯环上的一个甲基(-CH3)被醛基(-CHO)所取代即Chlb。
Chla与Chlb 是植物进行光合作用必需的催化剂，易溶于石油醚等非极性溶剂中。
通常植物中叶绿素a的含量是叶绿素b的三倍。
其结构式如下：类胡萝卜素是一种橙色的天然色素，属于四萜，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，其中β异构体含量最多。
β-胡萝卜素(R=H)和叶黄素(R=OH)叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体内，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在石油醚中溶解度较小。
秋天，高等植物的叶绿素被破坏后，叶黄素的颜色就显示出来。
叶绿素与类胡萝卜素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
提取液可用色谱分析的原理加以分离。
因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
2. 叶绿体色素的物理性质叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它从第一单线态返回基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
因为分子吸收的光能有一部分消耗于分子内部的振动上，发射的荧光的波长总是比被吸收光的波长要长。
3. 叶绿体色素的化学性质叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。
实验三_叶绿体色素的提取、分离和性质分析ppt课件
２、研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？ 3、铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用，这有何 实用意义？
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光。
记录波长和吸光度A于下表中，并在标准绘图纸上绘出叶绿体色 素的吸收光谱曲线。
λ （nm）
400
420
440
460
480
500
…... 600
620
640
660
680
700
A
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4、叶绿体色素含量的计算
在标准曲线上查出波长600nm时的叶绿 体色素浓度。
叶绿体色素含量（mg·g-1）=
叶绿体色素浓度（mg·L-1）×提取液体积（mL）×10-3 样品鲜重（g）
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5、叶绿素提取液荧光现象观察
➢ 取试管3： ➢ 从与入射光垂直的方向观
察； ➢ 再在透射光方向观察叶绿
体色素溶液的颜色； ➢ 记录叶绿素体色素溶液颜
色有何不同 ，分析原因。
6、光对叶绿素的破坏作用
将试管4置于暗处，试管3置于强光 下，照射2~3小时后，观察试管颜 色的变化，解释这种现象。
用滤纸条浸色素提取液（试管1），吹干，反复多 次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养 皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层 分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。
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➢ 标明各层成 分名称和判 断依据。
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3、叶绿体色素吸收光谱曲线
取1ml提取液于比色杯中（试管2），加3ml95%乙醇。 用95%乙醇作为对照，在400~700nm之间每隔20nm测一次
实验3 叶绿体色素的提取、分离、性质
实验三叶绿体色素的提取、分离、性质及含量一、实验目的1、掌握叶绿体色素的提取方法；2、掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；3、掌握叶绿体色素的部分理化性质。
二、实验原理叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。
它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。
提取液可用色层分析的原理加以分离。
因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。
三、实验仪器及材料仪器及试剂：吹风机、定性滤纸、脱脂棉、火柴、碘钨灯、95%乙醇、汽油、醋酸铜、浓盐酸、CaCO3材料：菠菜叶片四、实验步骤1、提取称菠菜叶子10g，加少许石英砂、CaCO3、乙醇研磨，研成匀浆，过滤，用乙醇定容至50ml，分装于5个试管内。
2、分离用滤纸条浸色素提取液（试管1），吹干，反复多次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素：叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
用铅笔标出各种色素的位置和名称。
3、叶绿体色素吸收光谱曲线取1ml提取液于比色杯中（试管2），加3ml95%乙醇。
实验三叶绿体色素的提取分离和性质分析
提取效率
通过比较不同提取时间、不同溶 剂浓度和不同提取温度对提取效 率的影响，发现最佳提取条件为 提取时间30分钟，溶剂浓度为
95%，提取温度为4°C。
提取物纯度
通过观察提取液的颜色和吸光度 ，可以初步判断提取物的纯度。 在最佳条件下，提取液颜色深且 吸光度较高，说明提取的叶绿体
色素纯度较高。
叶绿体色素的分离结果分析
将叶绿素标准品制作成标准曲线，根据标准曲线计算提 取液中各色素的浓度。
用分光光度计在400~700nm波长范围内扫描色素提取 液，记录各波长下的吸光度值。
根据各色素的浓度和吸光度值，计算各色素的吸收系数 和相对含量。
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CATALOGUE
结果分析
叶绿体色素的提取结果分析
提取方法
采用研磨法从植物叶片中提取叶 绿体色素，该方法能够充分破碎 细胞壁，释放出叶绿体中的色素
实际应用
生态意义
了解叶绿体色素的组成和性质有助于 深入探究植物对光能的吸收和利用机 制，对于维护生态平衡和保护环境具 有重要意义。
实验结果可用于指导农业生产、园艺 和林业等领域，通过合理调节植物的 光合作用，提高作物的产量和品质。
对实验的反思和改进建议
反思
在实验过程中，需要注意操作的规范性和准确性，以避免误差和干扰因素对实验结果的影响。同时，需要充分考 虑实验的安全性和环保性。
工业应用
叶绿体色素在食品、化妆 品、染料等领域有广泛应 用，具有潜在的经济价值 。
02
CATALOGUE
实验原理
叶绿体色素的组成和结构
叶绿体色素是由多种色素分子构成的 复合物，主要包含叶绿素a、叶绿素 b、叶黄素和胡萝卜素等。
叶绿素a和叶绿素b具有卟啉环结构， 是光合作用的主要色素分子，而叶黄 素和胡萝卜素则具有类胡萝卜素的结 构。
叶绿体色素的提取和分离ppt 中图版
3．在“叶绿素体色素的提取与分离”实验中，收集到的滤液绿色过浅，
其原可能是( )
①未加石英砂，研磨不充分 ②一次加入大量的丙酮提取
③分次加入少量丙酮提取 ④使用放置数天的菠菜叶
A．①②③
B．②③④
C．①③④
D．①②④
【答案】 D
4．如下图表示某同学做“叶绿体色素的提取与分离”的实验的改进装置， 下列与之有关的叙述中，错误的是( )
探究活动——叶绿体色素的提取和分离
绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中。色素在层析液中的溶解度 不同，它们随层析液在滤纸上的扩散速度不同，溶解度高的随层析液在 滤纸上扩散得快，反之则慢。
1．加入丙酮后，要进行迅速、充分地研磨，迅速研磨可以防止溶剂 挥发，充分研磨是为了使更多的色素溶解在溶剂中。
1．下列有关“叶绿体色素的提取与分离”实验的说法错误的是( ) A．研磨时加入石英砂是因为石英砂颗粒较硬，使研磨充分 B．研磨时加入碳酸钙粉是因为碳酸钙粉可中和有机酸保护叶绿素 C．因丙酮有毒，所以研磨时加入的丙酮要加入适量水稀释以降低毒性 D．叶绿体色素可溶于层析液，由此推测层析液化学成分可能是有机物 【答案】 C
A
叶绿素a带和叶绿素b带较宽
B
叶绿素a带和叶绿素b带较窄
不论你在什么时候开始，重要的是开始之后就不要停止。
生 物 不论你在什么时候结束，重要的是（结中束图之版后·就必不修要1悔）恨。
人若软弱就是自己最大的敌人。 人若勇敢就是自己最好的朋友。 “不可能”只存在于蠢人的字典里。 抱最大的希望，为最大的努力，做最坏的打算。 家！甜蜜的家！！天下最美好的莫过于家！ 游手好闲会使人心智生锈。 每一件事都要用多方面的角度来看它。 有理想在的地方，地狱就是天堂。 有希望在的地方，痛苦也成欢乐。 所有的失败，与失去自己的失败比起来，更是微不足道。
实验3、叶绿体色素的提取、分离理化性质 及光合速率测定
2.光对叶绿素的破坏作用 2.光对叶绿素的破坏作用 取上述色素丙酮提取液少许，分装于 支 取上述色素丙酮提取液少许，分装于2支 试管中， 支试管放在黑暗处 支试管放在黑暗处， 试管中，1支试管放在黑暗处，另1支试管放 支试管放 在强光下（太阳光下），经 在强光下（太阳光下），经1-2h后，观察两 ）， 后 支试管中溶液的颜色有何变化。 支试管中溶液的颜色有何变化。
4.H+和Cu2+对叶绿色分子中Mg2+的取代作用 对叶绿色分子中Mg
（1）取两支试管，一支试管加叶绿体色素提取液 ）取两支试管， 2ml，作为对照。另一支试管加叶绿体色素提取液 ，作为对照。 5ml，再加入 ％HCl数滴摇匀，观察溶液颜色变化 数滴摇匀， ，再加入5％ 数滴摇匀 小粒， （2）当溶液变褐后，再加醋酸铜晶体 小粒，微微 ）当溶液变褐后，再加醋酸铜晶体1小粒 加热，观察记载溶液颜色变化情况， 加热，观察记载溶液颜色变化情况，并与对照试 管相比较。解释其颜色变化原因。 管相比较。解释其颜色变化原因。 （3）另取醋酸－醋酸铜溶液 ）另取醋酸－醋酸铜溶液20ml，置于烧杯中。取 ，置于烧杯中。 新鲜植物叶两片，放入烧杯中，用酒精慢慢加热， 新鲜植物叶两片，放入烧杯中，用酒精慢慢加热， 随时观察并记录叶片颜色的变化， 随时观察并记录叶片颜色的变化，直至颜色不再 变化为止。解释原因。 变化为止。解释原因。
叶绿体色素的分离叶绿体色素的分离1取一张圆形滤纸最好用色层析滤纸剪成圆形在其中心戳一圆形小孔直径约3mm另取一张滤纸条5cm15cm纸条宽度根据培养皿高度确定用滴管吸取浓叶绿素提取液滴沿纸条的长度方向涂在纸条的一边使色素扩散的宽度限制在05cm以内用电热吹风机吹干后重复途几次然后沿长度方向卷成纸捻使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端
叶绿体色素的提取 分离 理化性质和叶绿素含量的测定
实验报告课程名称：植物生理学及实验（甲）实验类型：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定姓名：专业：学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：一、实验目的和要求二、实验内容和原理装三、主要仪器设备四、操作方法与实验步骤订五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析七、讨论、心得一、实验目的和要求1、掌握植物中叶绿体色素的分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。
2、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。
二、实验内容和原理以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。
原理如下：1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。
2、皂化反应。
叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。
COOCH3COO-C32H30ON4Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH+C20H39OHCOOC20H39COO-3、取代反应。
在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。
(H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+ )褐色绿色4、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。
5、定量分析。
叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。
根据朗伯-比尔定律，最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与吸光值之间有如下的关系： OD1=Ca*ka1+Cb*kb1OD2=Ca*ka2+Cb*kb2查阅文献得，叶绿素a和b的80％丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下。
波长/nm 比吸收系数k叶绿素a 叶绿素b 663 82.04 9.27645 16.75 45.60 将数值代入式子得：OD663=82.04*Ca+9.27*Cb OD645=16.75*Ca+45.60*Cb 经整理后，得到式子：Ca=0.0127 OD663 - 0.00269 OD645 Cb=0.0229 OD645 -0.00468 OD663三、主要仪器设备天平（万分之一）、可扫描分光光度计、离心机、研具、各种容（量）器、洒精灯等四、操作方法与实验步骤1、定性分析：鲜叶5g+95%30ml（逐步加入），磨成匀浆，过滤入三角瓶中，观察荧光现象。
叶绿素的提取、分离和测定幻灯片PPT
一、叶绿素的提取、别离
〔一〕原理
叶绿体中含有叶绿体色素〔叶绿素a 和b、胡萝卜素及叶黄素〕。这些色素 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用 酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不 同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附 剂上的吸附能力不同，将它们彼此别离 开。
〔二〕仪器和药品
2、测量光密度值
取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于 663及645nm下读取光密度值
三、实验结果
计算结果 代入公式求出各叶绿素的含量〔单位mg/L〕 最后计算时需考虑稀释因子
叶绿素a含量〔mg/g鲜重〕=CA*5 *25*2/1000
=0.25CA
叶绿素b的含量〔mg/g鲜重〕=0.25CB
Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
(二〕步骤
称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆 器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙 酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL， 避光静置5min。用移液管吸取上面的绿 色清液1mL置于一大试管中，参加丙酮 4ml稀释，摇动试管，作测定用。
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、石油醚 碳酸钙
〔三〕步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到别离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
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实验原理
▪ 色素分离的方法有多种， ▪ 叶绿素是一种二羧
纸层析是最简便的一种。 当溶剂（有机推动剂） 不断从纸上流过时，由 于混合物（叶绿素提取 液）中各种成分在固定
酸——叶绿酸与甲醇 和叶绿醇形成的复杂 酯，故可与碱起皂化 反应而生成醇（甲醇
相（滤纸纤维素所吸附 和叶绿醇）和叶绿酸
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理化性质测定
▪ 3.皂化作用（绿色素与黄色素的分离） ▪ 4. 叶绿体色素吸收光谱曲
▪
取叶绿体色素提取液2 mL于大试管
中，加入4mL乙醚，摇匀，再沿试管 壁慢慢加人3～6mL蒸馏水，轻轻混匀，
▪
线 将上述叶绿体色素提取液
静置片刻，溶液即分为两层，色素已 全部转入上层乙醚中。用滴管吸取上 层绿色层溶液，放入另一试管中，再 用蒸馏水冲洗一、二次。在色素乙醚
▪ 叶绿素中的镁可以被氢 离子所取代而成褐色的 去镁叶绿素。去镁叶绿 素遇铜则成为铜代叶绿 素，铜代叶绿素很稳定， 在光下不易破坏，故常 用此法制作绿色多汁植 物的浸渍标本。
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实验步骤(1)
▪ 根据朗伯一比尔定律，某有 ▪ 今欲测定叶绿体色素混合
色溶液的吸光度D与其中溶 液浓度C和液层厚度L成正 比，即：
擦干，去掉中脉剪碎，放人研钵中。 插入试管中，使尖端浸入溶剂内
▪ （2）研钵中加入少量石英砂及碳 酸钙粉，2-3 mL95%乙醇，研磨 至糊状，再加2-3 mL95％乙醇， 过滤，即得色素提取液。
（色点要高于叶面，滤纸条边缘 不可碰到试管壁），盖紧胶塞， 直立于阴暗处层析。
▪ 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，
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叶绿体在细胞中运动视频
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叶绿体在细胞中的分布与结构
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类囊体膜的结构及功能
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实验原理
植物叶绿体色素是吸收
太阳光能，进行光合作 用的重要物质。它一般 由叶绿素a、叶绿素b、 胡萝卜素和叶黄素组成。 这些色素都不溶于水， 而溶于有机溶剂，故可 用乙醇、丙酮等有机溶 剂提取。
▪ D＝KCL ▪ D：吸光度，即吸收光的量，C：
溶液浓度, K：为比吸收系数（吸
提取液中叶绿素a、b和类 胡萝卜素的含量，只需测 定该提取液在三个特定波 长下的吸光度D，并根据 叶绿素a、b及类胡萝卜素
▪
光系数）， L：液层厚度，通 常为1cm.
如果溶液中有数种吸光物质， 则此混合液在某一波长下的 ▪ 总吸光度等于各组分在相应 ▪
的水分）和流动相（有 的盐，产生的盐能溶
机推动剂）间具有不同 的分配系数，所以移动 速度不同，经过一定时 2021间/3/4后，可将各种色素分 开。
于水中，可用此法将 叶绿素与类胡萝卜素 分开。
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实验原理
▪ 叶绿素与类胡萝卜素都具有 光学活性，表现出一定的吸 收光谱，可用分光光度计精 确测定。叶绿素吸收光量子 而转变成激发态，激发态的 叶绿素分子很不稳定，当它 变回到基态时可发射出红光 量子，因而产生荧光。叶绿 素的化学性质很不稳定，容 易受强光的破坏，特别是当 叶绿素与蛋白质分离以后， 破坏更快，而类胡萝卜素则 较稳定。
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理化性质测定
▪ 将上一个实验中提取的 叶绿体色素溶液适当稀 释后，进行以下实验：
▪ 1.荧光现象的观察。 ▪ 取l支试管加入浓的叶
绿体色素提取液，在直 射光下观察溶液的透射 光与反射光颜色有何不 同，可观察到反射出暗 红色的荧光。
▪ 2.氢和铜对叶绿素分子中镁 的取代作用
▪ 方法一；取两支试管。第 一支试管加叶绿体色素提取 液2mL，作为对照。第二支 试管加叶绿体色素提取液2 mL，再加入稀盐酸1滴，摇 匀，观察溶液颜色变化。当 溶液变竭后，再加入少量醋 酸铜粉末，微微加热，观察 记录溶液颜色变化情况，并 与对照试管相比较。解释其 颜色变化原因。
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理化性质测定
▪ 将上一个实验中提取的 叶绿体色素溶液适当稀 释后，进行以下实验：
▪ 1.荧光现象的观察。 ▪ 取l支试管加入浓的叶
绿体色素提取液，在直 射光下观察溶液的透射 光与反射光颜色有何不 同，可观察到反射出暗 红色的荧光。
▪ 2.氢和铜对叶绿素分子中镁 的取代作用
▪ 方法一；取两支试管。第 一支试管加叶绿体色素提取 液2mL，作为对照。第二支 试管加叶绿体色素提取液2 mL，再加入稀盐酸1滴，摇 匀，观察溶液颜色变化。当 溶液变竭后，再加入少量醋 酸铜粉末，微微加热，观察 记录溶液颜色变化情况，并 与对照试管相比较。解释其 颜色变化原因。
计、电子天平、量筒、 研钵、剪刀、漏斗、滤 纸、移液管（1mL）、 试管及试管架、洗耳球、 酒精灯等。 • 试剂：丙酮、80%丙酮、 醋酸酮、5%盐酸、碳 酸钙、石英砂等
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实验步骤(1)
▪ 1.叶绿体色素的提取
▪ 分离：在大试管中加入推动剂，
▪ （1）取植物新鲜叶片1克，洗净，
然后将滤纸固定于胶塞的小钩上，
在该波长下的吸光系数即 可求出其浓度。
Ca=12.7D663 –2.69 D645（3） Cb=22.9 D645 –4.68D663（4）
波长下吸光度的总和，这就 ▪ Ck=4.7D440- 0.27Ca+b
是吸光度的加和性。
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实验材料和器材
• 实验材料
▪ 卤地菊叶片
• 器材：721型光光度
▪ 2.叶绿体色素的分离
▪ 点样：取前端剪成三角形的滤纸条， 用毛细管取叶绿素提取液，如图点 样于“色点”处，注意每次所点溶 液不可过多，点样后晾干，再重复
取出滤纸，风干，观察色带的分 布。叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b 为黄绿色，叶黄素为黄色，胡萝
卜素为橙黄色。用铅笔标出各种 色素的位置和名称。
操作数次。
实验三：叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定
▪ （一）实验目的及意义 ▪ （二）实验原理 ▪ （三）实验步骤 ▪ （四）实验报告
2021/3/4
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实验目的和意义
▪ 绿色植物的光合作用是 在叶绿体中的叶绿体色 素中进行的，了解叶绿 体色素的组成、性质及 测定对于理解光合作用 的本质很有帮助。
▪ 因此，测定叶绿素含量 便成为研究光合作用与 氮代谢必不可少的手段， 在作物育种、科学施肥、 看叶诊断中有着广泛的 应用