动物细胞工程知识点
选修3-2.2动物细胞工程
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 细胞全能性 固体培养基 蔗糖 植物激素
已分化的组织→愈 伤组织→胚状体、 丛芽→完整植株
动物细胞培养 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清
动物组织→单个细 胞→细胞悬液→原 代培养→传代培养
原理
培养基状态 培养基特有成分 培养过程 生长特点 接种前处理 培养目的
动物细胞培养过程中需注意的问题 2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
二、动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素，定期更换培养液
2、营养
可以补充培养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等 基中缺乏的物 质如生长因子， 通常需加入动物血清等一些天然成分 保证细胞顺利 的生长增殖
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、 习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克 隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可 能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供 体动物100%的复制。
一、动物细胞核移植技术和克隆动物
3、体细胞核移植技术的应用前景
受精卵发育成新个体的生殖方式。
无性生殖：不经过两性生殖细胞结合，直接由母体
的一部分发育成新个体的生殖方式。如细胞有丝分裂、 植物组织培养、动物体细胞核移植等。
克隆：群细胞或者生物个体。现在指个体水平的 核移植技术、细胞水平的动物细胞培养、基因水平的 DNA复制等。
⑷为什么用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以 内的细胞？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，
动物细胞工程复习
型的C细胞，因此需用______选__择__培性养基筛选出D细胞用
于培养，D细胞的名称是杂来自交其瘤特细点胞是______既__能__无__限__增___殖__又__能__产___生__特__异__性___抗__体____。
(4)在培养时通过__有__丝____分裂方式大量繁殖。D细 胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项） _无__菌__、___无__毒__的__环___境__；__充__足___的__营__养__；__。适宜的温度和pH； 适宜的气体环境
抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小
结合同位素的单抗
----生物导弹
单抗
放射性 同位素
动物细胞培养过程 两个过程
单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒
三个“一” 一个新细胞－－杂交瘤细胞
一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势
(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠
杂交瘤细胞特点： 既能产生特异性 抗体，又能大量 增殖。
（二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞
体外培养
小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
√ B-B 、B-瘤 、瘤-
（未融合的B、瘤）
（一选）选 择性培养基： 只有杂交瘤 细胞才能存 活
2.3单克隆抗体的应用
单克隆抗体最主要的优点： 特异性强，灵敏度高，并能 大量制备。
体内的 效应细B 胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，
应给小鼠注射_________抗___原_类物质。
（2）d过程是一个__细__胞___融__合____过程，该过程的进
行常用__聚___乙__二__醇____或______灭__活___的__病的毒诱导。
(完整版)动物细胞工程知识点
动物细胞工程12月20日动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2、原理：细胞增殖3、过程分散成单个细胞，制成细胞悬液注意：①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。
②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。
③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。
思考回答：⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。
⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?答：不需要。
因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。
⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。
（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高）⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。
⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体4、重要概念①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
动物细胞工程知识整理
＿＿＿培养 ② 单个细胞 细胞悬液 培养 接触抑制 动物细胞 ① 细胞培养 供体 体细胞 ＿＿＿＿＿＿ 卵巢卵 母细胞 减 Ⅱ中 期 去核 无核卵母细胞 注 入 ＿＿＿＿＿＿ 发 育 胚 胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体遗传 物质相同的个体动物细胞工程要点梳理一、动物细胞培养1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成＿＿＿＿＿＿＿，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和＿＿＿＿＿。
2．过程：注：①②代表的是＿＿＿＿＿＿或胶原蛋白酶。
10～50代的细胞群叫细胞株。
50代以后的细胞群叫＿＿＿＿＿。
3．条件：（1）无菌、无毒的环境：培养液应进行＿＿＿＿＿处理。
（2）营养（合成培养基成分）：糖类、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入＿＿＿、血浆等。
（3）温度：适宜温度36.5±0.5 ℃；pH ＿＿＿＿。
（4）气体环境：空气95%，＿＿＿5%。
4．应用：如病毒疫苗、干扰素、＿＿＿＿＿。
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．动物体细胞核移植：将一个动物细胞的＿＿＿＿＿移入一个去核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体。
2．种类：（1）体细胞核移植：难。
（2）＿＿＿＿＿移植：易。
3．过程：4．应用：（1）加速家畜＿＿＿＿改良进程，促进＿＿＿＿＿繁育。
（2）保护濒危物种。
（3）生产＿＿＿＿＿＿。
（4）作为异种移植的＿＿＿＿。
（5）用于组织器官的移植。
5．问题：克隆动物存在＿＿＿＿＿、生理缺陷、＿＿＿＿＿等。
三、动物细胞融合不同＿＿＿＿＿的两个细胞灭活的病毒PEG杂交细胞选择B淋巴细胞抗原刺激骨髓瘤细胞克隆检测＿＿＿＿＿浆细胞杂交瘤细胞单克隆抗体B－B细胞瘤－瘤细胞杂交瘤细胞体外培养1．概念：＿＿＿＿＿＿动物细胞结合形成一个细胞的过程，又叫细胞杂交。
2．结果：形成＿＿＿＿细胞。
3．过程：4．意义：克服了＿＿＿＿杂交的不亲和性。
四、单克隆抗体1．抗体的产生：＿＿＿＿＿＿产生的抗体具有特异性。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的概念动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的操作，以获得人们所需要的生物产品或细胞本身。
它是现代生物技术的重要组成部分，涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植等多个方面。
二、动物细胞培养（一）基本原理细胞培养的基本原理是细胞的增殖。
细胞在适宜的环境中，能够吸收营养物质，进行新陈代谢，并通过分裂增加数量。
（二）培养条件1、无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还会添加一定量的抗生素，以防止培养过程中的污染。
2、营养物质：包括糖、氨基酸、无机盐、维生素等，这些物质要按照细胞所需的种类和量进行精确配置。
3、适宜的温度和 pH：哺乳动物细胞的培养温度一般在 365℃左右，pH 则在 72 74 之间。
4、气体环境：细胞培养所需的气体主要有氧气和二氧化碳，氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则用于维持培养液的 pH。
（三）培养过程1、取材：通常从动物的组织或器官中获取细胞，如从胚胎或幼龄动物的器官组织中获取细胞，其分裂能力更强。
2、原代培养：将取得的组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶中培养。
3、传代培养：当细胞贴满瓶壁时，需要用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱落下来，然后分瓶继续培养。
三、动物细胞融合（一）概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
（二）诱导融合的方法1、物理法：如电激融合法。
2、化学法：常用的诱导剂是聚乙二醇（PEG）。
3、生物法：如灭活的病毒。
（三）应用1、制备单克隆抗体：这是动物细胞融合技术最突出的应用。
2、用于基因定位和染色体转移等研究。
四、单克隆抗体（一）概念单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
（二）制备过程1、给小鼠注射特定的抗原，使其发生免疫反应，产生能分泌特定抗体的 B 淋巴细胞。
高二动物细胞工程知识点
高二动物细胞工程知识点动物细胞工程是指运用细胞生物学、遗传学、分子生物学等理论和技术，对动物细胞进行研究、操作和改良的一门学科。
它在农业、医学和科学研究等多个领域具有重要的应用价值。
本文将介绍一些高二动物细胞工程的基础知识点。
一、细胞培养基础动物细胞培养是动物细胞研究中最基本的技术手段之一。
常见的细胞培养基包括无血清培养基和含血清培养基。
无血清培养基不含动物血清，通过添加人工合成的营养物质来满足细胞生长所需。
而含血清培养基则利用动物血清中所含有的生长因子和营养物质来维持细胞的生长。
二、细胞培养技术1. 细胞传代：细胞传代是指将原始培养的细胞分为若干个小培养皿中，使细胞继续生长和分裂。
细胞传代的目的是为了扩增细胞数量，以满足后续的实验需求。
2. 细胞冻存：细胞冻存是将细胞在低温下保存，以便日后使用。
通过添加特定的保护剂和冷冻液，可以在极低温度下减少细胞的代谢活动，避免细胞死亡。
3. 细胞鉴定：细胞鉴定是通过观察细胞的形态、生长特性、标记物等来确定细胞的身份和纯度。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞分子标记和遗传分析等。
4. 细胞转染：细胞转染是将外源基因导入细胞的过程。
常用的转染方法有化学法、电穿孔法和病毒介导的转染法等。
三、动物细胞培养的应用1. 药物筛选：动物细胞培养可以用于药物的筛选和评价。
通过将药物添加到细胞培养系统中，观察其对细胞的影响，可以评估药物的毒性和疗效。
2. 组织工程：动物细胞培养可以为组织工程提供细胞来源。
通过培养和增殖体外的细胞，可以获得大量的细胞用于组织重建和移植。
3. 基因工程：动物细胞培养可以用于基因工程研究。
通过导入外源基因，可以改变细胞的性质和功能，用于疾病基因治疗和基因表达研究。
四、动物细胞工程的挑战与展望尽管动物细胞工程在许多领域都已取得了重要的成果，但仍面临着一些挑战。
例如，细胞培养过程中的细胞衰老、细胞突变和污染等问题需要得到解决。
此外，细胞工程的应用还需要更深入的研究和探索，以满足不断发展的医学和科学需求。
动物细胞工程知识清单高二下学期生物人教版选择性必修3
生物选必三必背长空（第2章动物细胞工程）1.细胞的全能性是指细2.人工诱导原生质体融合的方法3.杂交是指4.植物体细胞杂交的原理5.微型繁殖技术的优点6.什么叫次生代谢物7.分散动物细胞时不用胃蛋白酶的原因是28.动物细胞培养时需要分瓶传代培养的原因是9.诱导动物细胞融合的方法有10.杂交瘤细胞的特点11.制备单克隆抗体时，第一次筛选的目的是，第二次筛选时进行，目的是。
12.单克隆抗体的优点是。
13.单克隆抗体的应用有。
14.ADC在临床上具有靶点清楚，副作用小的优点，原因是。
15.核移植时，受体选择卵母细胞的原因是。
16.克隆动物是供体100%的复制吗？为什么？。
17.卵母细胞去核的原因是。
18.体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞核移植的原因是。
19.动物细胞培养加入血清的作用是。
20.胚胎工程是指。
21.防止多精入卵的两道屏障，名称及发生时间：22.受精的标志。
23.内细胞团将来发育成。
24.胚胎移植是指。
25.胚胎移植的基本程序（5步）26.供体的选择标准，受体的选择标准27.同期发情处理的意义：28.胚胎移植的实质是29.胚胎移植的意义：30.胚胎分割是指248生物选必三必背长空（第2章动物细胞工程）1.细胞的全能性是指细胞经分裂和分裂后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。
2.人工诱导原生质体融合的方法物理法包括电融合法、离心法；化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca—高PH 融合法等。
3.植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
4.植物体细胞杂交的原理细胞膜的流动性、植物细胞的全能性5.微型繁殖技术的优点高效、快速地实现种苗的大量繁殖；保持优良品种的遗传特性；可实现工厂生产。
6.什么叫次生代谢物一般认为不是植物基本的生命活动所必需的的产物。
7.分散动物细胞时不用胃蛋白酶的原因是多数动物细胞生存的适宜PH为7.27.4,，而胃蛋白酶最适PH为2，PH>6会失活，胃蛋白酶在此环境中没有活性。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的定义和范围动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的遗传操作以及细胞和组织培养技术，以改造细胞、创造新的生物品种或生产生物产品的一门综合性科学技术。
其范围涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植、细胞重组、转基因动物等多个方面。
二、动物细胞培养技术（一）基本原理细胞培养是动物细胞工程的基础，其原理是细胞具有分裂和生长的能力。
在适宜的条件下，细胞可以不断增殖并保持一定的生理特性。
（二）培养条件1、无菌环境：防止微生物污染是细胞培养成功的关键。
2、合适的培养基：包含细胞生长所需的营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐等。
3、适宜的温度和 pH：一般来说，培养温度在 37℃左右，pH 在 72 74 之间。
4、气体环境：通常需要 95%的空气和 5%的二氧化碳，二氧化碳用于维持培养基的 pH 稳定。
（三）培养过程1、取材：从动物体内取出组织或器官，进行处理以获得单细胞。
2、原代培养：将获得的细胞直接培养，这是细胞培养的第一代。
3、传代培养：当原代培养的细胞生长到一定密度时，进行分瓶培养。
（四）应用1、生物制品的生产，如疫苗、抗体等。
2、细胞生物学和分子生物学的研究。
3、药物筛选和毒性测试。
三、细胞融合技术（一）原理细胞融合是指两个或多个细胞通过物理、化学或生物方法融合成一个杂种细胞的过程。
其原理基于细胞膜的流动性。
（二）方法1、病毒诱导融合：使用某些病毒，如仙台病毒，促使细胞膜融合。
2、化学诱导融合：常用的化学试剂有聚乙二醇（PEG）。
3、电融合：通过电场作用使细胞排列紧密接触，进而融合。
（三）应用1、单克隆抗体的制备：将免疫小鼠的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体。
2、细胞遗传和细胞免疫的研究。
四、细胞核移植技术（一）原理细胞核移植是将一个细胞的细胞核移植到另一个去核的细胞中，使其发育成一个新的个体。
这基于细胞核的全能性，即细胞核包含了生物体发育所需的全部遗传信息。
动物细胞工程
动物细胞工程第一章动物细胞工程概论一、动物细胞工程的概念1.动物细胞工程的定义动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的技术方法对动物细胞进展各种操作并使其在体外生长、增殖、分化以生产有用产品或引向成体化〔产生型生物个体〕的技术体系，是生物技术〔生物工程〕的重要组成局部。
狭义细胞工程指对细胞个体进展的各种操作，广义的细胞工程包括对细胞、组织、器官所进展的各种操作。
2.动物细胞工程争论的主要内容以狭义细胞工程为主，兼顾组织、器官工程等内容的争论。
(1)狭义细胞工程：争论体外分别、培育、增殖、分化动物细胞的条件以及保存、操作及利用动物细胞的工艺技术体系。
(2)组织工程：争论体外培育、增殖动物组织的条件以及保存、操作及利用动物组织的工艺技术体系。
(3)器官工程：争论体外培育、增殖器官的条件以及保存、操作及利用动物器官的工艺技术体系。
(4)动物胚胎工程：争论动物胚胎生产、保存、操作及移植的工艺技术体系。
3.动物细胞工程争论的意义(1)是动物生殖的重要技术手段加快动物生殖速度：A.体外受精生产胚胎 B.胚胎移植生产动物 (2)是人类关心生殖技术的重要组成局部体外受精—胚胎移植技术，可以抑制雄性不育和雌性不孕；(3)是动物遗传育种的重要技术手段对精子或卵子进展遗传操作，或利用细胞融合、胚胎嵌合技术可以使假设干个动物性状进展有机组合，产生的生物个体；(4)生产药物直接培育细胞或组织，从细胞或组织代谢物中直接获得药物;对细胞进展遗传操作，生产转基因动物，利用转基因动物生产药物〔生物反响器〕；(5)保存珍惜动物资源由于动物克隆技术的成功，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生命个体，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生物种群(6)供给人类器官移植的材料人类器官移植进展很快，目前可以进展心脏、肝、肾脏移植，可以进展皮肤、角膜、骨髓细胞移植。
三、动物细胞工程讲授的主要内容1.动物细胞、组织培育2.动物细胞融合3.动物细胞重组4.向细胞内引入高分子物质5.动物细胞冷冻保存6.动物胚胎工程四、动物细胞工程试验〔实习〕内容1.试验仪器设备的识别与使用2.动物细胞培育用液的制备3.动物胎儿成纤维细胞分别与培育4.动物细胞常规检查和生物学检测5.培育细胞的冻存与复苏五、动物细胞工程争论取得的重要进展1.采集、冷冻与人工授精技术的成熟和进展，为充分发挥利用雄性动物生殖潜力奠定了根底；2.雌性动物卵母细胞体外成熟培育技术的成功，使人们在体外完成动物生殖过程成为可能；3.体外受精与胚胎移植技术的成功，产生了试管婴儿，试管牛，试管猪，试管山羊，试管兔；4.细胞核移植技术的成功，使人们克隆高等哺乳动物的梦想得以实现体细胞核移植、胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植技术的成功，为克隆动物和转基因动物生产供给了技术支撑；5.胚胎干细胞与组织干细胞成功分别、体外扩增与诱导分化争论的成功，为人类医学进展供给了贵重的材料；胚胎干细胞，胰腺干细胞，神经干细胞，骨髓干细胞，皮肤干细胞，角膜干细胞6.转基因细胞〔细胞转染基因〕技术的成功，为转基因动物的生产制造了条件；7.胚胎嵌合技术一种或两种动物胚胎共同生长发育形成一个生物个体的技术，即在一个生物体内，含有来源于两个不同胚胎的细胞和组织；8.细胞融合技术将两种或两种以上的细胞融合，形成一个具有性状的细胞，这种技术称为细胞融合技术。
2.3-动物细胞工程
体内培养：从小鼠腹水中提取；体外培养：从培养液 中提取。
单克隆抗体的应用
单抗诊断试剂盒
生物导弹
①疾病诊断：试剂盒。 ②生物导弹：用单克隆抗体与抗癌药物连接，用 于治疗癌症。
例题：用小鼠制备单克隆抗体可用于人类疾病的诊断和 治疗，关于单克隆抗体的叙述错误的是（ ） A. 由杂交瘤细胞分泌 B. 具有特异性强、灵敏度高的特点 C. 与抗癌药物结合可制成“生物导弹” D. 用于疾病治疗时人体不会产生任何免疫排斥
去核卵母细胞
细胞核移植
动物细胞培养 核移植 胚胎移植
胚胎移植
代孕母体
动物克隆成功的条件
（1）具有包含本物种完整基因组的细胞核的活细胞 如：乳腺上皮细胞。 （2）能有效调控细胞核发育的细胞质物质 如：去核卵细胞的细胞质。 （3）完成胚胎发育的必要的环境条件 如：诱导重组细胞生长、分化的实验条件和怀胎母 体的子宫环境。
高等动物的胚胎发育
桑椹胚
受精卵→二分裂球→四分裂球→八分裂球→桑椹胚→囊 胚→原肠胚→组织和器官→幼体。
什么是细胞核移植？
重组细胞
早期胚胎
去核卵母细胞
核移植：将动物一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细 胞核的卵母细胞中，形成重组细胞，并最终发育成一个新 的动物个体。
电脉冲刺激
过程：去核（显微操作）→注核→形成重组细胞。
例题：用a表示骨髓瘤细胞，b表示B淋巴细胞，则细胞融 合过程中两次筛选的目的分别为（ ） A. a、aa、ab、bb、b →a、aa、ab →ab培养 B. a、aa、ab、bb、b →ab、bb、b →ab培养 C. a、aa、ab、bb、b →ab →产生特定抗体的ab培养 D. a、aa、ab、bb、b →aa →能无限增殖的aa培养
动物细胞工程 知识点汇总
专题2 细胞工程 2.3 动物细胞工程知识点汇总1. 动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（4）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。
④气体环境：95%空气+5%CO2。
O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。
（3）体细胞核移植的大致过程是：高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）（注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达）；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛。
2.2 动物细胞工程
第2章细胞工程第2节动物细胞工程一、动物细胞培养1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2.原理：细胞增殖3.地位：动物细胞工程的基础4.关键操作：原代培养和传代培养。
（一）动物细胞培养的条件1.营养（1）成分①已知成分将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
①未知成分使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。
（2）培养基的物理性质培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。
2.无菌、无毒的环境①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；①在无菌环境下进行操作；①还需要定期更换培养液。
3.温度、pH和渗透压（1）适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5①为宜。
（2）适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。
（3）适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。
4.气体环境（1）组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
（2）气体作用：①O2：O2是细胞代谢所必需的；①CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。
（二）动物细胞培养的过程①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。
①传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养；①细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；①接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
1.取动物组织（1）取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。
2.制成细胞悬液（1）制成细胞悬液的步骤：①将组织分散成单个细胞；①用培养液将细胞制成细胞悬液。
（2）将组织分散成单个细胞的原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；①能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
细胞工程(动物部分)
绪论1.细胞培养与组织培养：属于体外培养，是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增值。
细胞的离体培养称为细胞培养，组织的离体培养称为组织培养。
2.细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。
3.细胞核移植：是利用显微镜操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞的过程。
4.干细胞：是动物体内具有分化潜能、并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。
5.转基因动物：是通过基因工程技术将外源的目的基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
第一章1.细胞工程实验室与其他一般实验室的区别：要求保持严格无菌环境、避免微生物及其他有害因素的影响。
2.细胞工程能进行的六方面工作：无菌操作、培养、制作、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
3.植物细胞工程实验室特殊的设置：光照条件的培养箱、试管苗需要温室和移植驯化室。
4.细胞工程实验室通用的仪器设备：超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、电热干燥箱、水纯化装置、低温装置、高压蒸汽消毒器。
5.实验室的生物安全分为p1，p2 ，p3 和p4四个生物安全等级，其中P4生物安全实验室等级最高。
第二章1.清洗的主要目的是清除培养器皿中的杂质和微生物等影响细胞生长的成分。
2.细胞培养过程中主要使用两类消毒方法:物理灭菌法法和化学消毒法。
物理法灭菌法：a.紫外线法适用于无菌室或超净工作台的台面等大面积消毒。
紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5cm,照射时间以30min左右为宜。
（注意：紫外灯关闭5min后方可进入使用）b. 湿热消毒:适用于含有不耐热成分的培养基和试剂的消毒，为121.3℃，20min .（注意点：加足水、排尽气、气压降到0时才能打开盖）c.干热消毒法:适用于消毒玻璃仪器，160℃以上，并保持90~120min，以杀死细菌和芽孢 d.过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤,薄膜0.22~0.45um直径。
高二生物选修三2.2动物细胞工程知识点
高二生物选修三2.2动物细胞工程知识点高二生物选修三2.2动物细胞工程知识点动物细胞工程动物细胞工程常用技术：动物细胞培养细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体的制备其中动物细胞的培养，是动物细胞工程的基础，也即动物细胞培养是细胞核移植，动物细胞培养，单克隆抗体的制备的基础。
动物细胞培养1. 概念：就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2. 原理：细胞增殖3. 动物细胞培养过程动物组织块剪碎组织用胰蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液原代培养原代培养4. 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，（单层）要求：培养瓶（皿）内表面光滑无毒易于贴附。
接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
原代培养：动物组织消化后的初次培养称为原代培养。
特点：10代以内，能保持正常的二倍体核型。
目前使用或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。
传代培养：原代培养接触抑制时用胰蛋白酶处理后的分瓶培养称之为传代培养。
细胞株：10-50代，遗传物质没有发生改变细胞系：50代后，遗传物质发生改变5. 细胞培养条件（1）无菌，无毒无菌：添加抗生素无毒:定期更换培养，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（2）营养糖，促生长因子，无机盐，氨基酸，血清，血浆，微量元素加入血清，血浆的目的：血清，血浆可以补充培养基中缺乏的物质。
（3）温度，pH 温度：36.5+0.5 pH：7.2-74 （4）气体环境95%空气加5%CO2 O2是细胞代谢所必须的CO2主要作用是维持培养液pH 6. 动物细胞培养与植物组织培养的培养基相比其特点是：动物细胞培养：液体培养基，含有血清和血浆植物细胞培养：固体培养基，含有植物激素动物细胞核移植技术与克隆动物1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成新的个体。
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动物细胞工程12月20日
动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养
1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2、原理：细胞增殖
3、过程
分散成单个细胞，
制成细胞悬液
注意：
①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。
②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。
③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。
思考回答：
⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?
答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。
⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?
答：不需要。
因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。
⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。
（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高）
⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?
答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。
⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体
4、重要概念
①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。
培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。
②细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
③原代培养：动物组织消化后的初次培养
④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。
5、培养条件：
⑴无菌无毒环境：无菌——对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。
；无毒——定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。
⑵营养：
成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。
培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基）
⑶温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。
⑷气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养。
O2：是细胞代谢所必需的CO2主要作用是维持培养液的pH。
6、应用：生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。
基因工程中受体细胞的培养。
用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。
科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据。
培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清
培养结果植物体细胞株、细胞系
培养目的快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物
二、动物细胞核移植技术
1．概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
2、原理：动物细胞核的全能性
3、动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。
原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。
4、体细胞核移植过程：
（以克隆高产奶牛为例）
（一般选用传代10代以内的细胞）
将供体细胞注入去核卵母细胞
①通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受
体卵母细胞。
②用物理或化学方法（如电脉冲、钙离子载
体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等）激活受体
细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。
注意：
①细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合，体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。
②受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。
③该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
④用卵母细胞做受体细胞原因：a．卵母细胞体积大，便于操作；b．含有促使细胞核表达全能性的物质；c.营养物质丰富
⑤克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
思考回答：
⑴、为什么不能直接利用动物细胞培育动物体？
动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。
因此，需要借助核移植来实现。
⑵、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100％的复制吗?为什么?
克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA即线粒体中的DNA 来自于受体卵母细胞。
所以不是供核动物完全相同的复制。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，供核动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和供核体动物完全相同。
另外，在个体发育过程中有可能发生基因突变，产生供体动物没有的性状。
基于上述三个方面的原因，克隆动物不会是供体动物100％的复制。
5、应用：
⑴畜牧业：可以加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育
⑵保护濒危物种：可望利用体细胞核移植技术增加濒危动物的存活数量。
⑶医药卫生：转基因克隆动物可作为生物反应器，生产珍贵医用蛋白；转基因克隆动物细胞、组织和器官可作为异种移植的供体；人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化，形成相应的组织、器官后，可用于组织器官的移植。
⑷其他领域：研究克隆动物和克隆细胞可使人类深入了解胚胎发育及衰老过程；用克隆动物做疾病模型能使人们更好追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。
6、存在问题：成功率低，克隆技术的各个环节有待进一步改进。
绝大多数克隆动物还存在健康问题，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等；对克隆动物食品的安全性问题也存有争议。