SDS法提取DNA

SDS碱裂解法制备质粒DNA提取和纯化_百替生物

SDS碱裂解法制备质粒DNA提取和纯化[适用对象] 生物工程专业[实验学时] 8学时一、实验目的使学生掌握从大肠杆菌中制备质粒DNA的方法，提供实验所需载体。

二、实验原理质粒细菌染色体外的DNA分子，其范围大小在1kb至200kb以上不等。

它独立于细菌染色体外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。

质粒在基因工程中是最常用的载体。

提取质粒DNA也是基因工程中最常见的实验操作。

提取质粒首先进行大肠杆菌细胞的制备，制备后用碱裂解液进行细胞裂解，使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。

尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。

而裂解过程中，细菌蛋白、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。

当用钾离子取代钠离子时，这些复合物会从溶液中有效地沉淀下来。

离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA，最后用聚乙二醇沉淀法进行质粒的纯化。

对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。

三、仪器设备培养皿摇床天平高速离心机（×12000g）微量移液器（2－20μl、20－200μl、200－1000μl）、电泳仪、微波炉。

四、相关知识点本课程知识点综合：涉及到质粒DNA提取过程、质粒纯化过程和琼脂糖凝胶电泳技术。

多课程知识点的综合：微生物学细菌的培养和质粒抽提技术。

五、实验步骤细胞培养接种培养挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于2.0ml LB（含相应抗生素）液体培养基中，37℃、250g振荡培养过夜（约12-14hr）。

离心取1.5ml培养物入微量离心管中，室温离心8000g×1min，弃上清，将离心管倒置，使液体尽可能流尽。

实验一 SDS法提取植物基因组DNA

实验一SDS法提取植物基因组DNA【实验目的】学习和掌握常用基因组DNA提取方法。

【实验要求】1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作；2..获得高纯度、完整DNA样品。

一、原理利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

二、药品试剂及耗材——液氮——提取缓冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入） ---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc---- 氯仿：异戊醇（24：1）——异丙醇—— 70%乙醇—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0 耗材：移液枪，15、2.0、1.5ml离心管，篮、黄、白枪头各四套离心管架4个，离心管盒2个，水浴泡沫8个，研钵及小药勺8套棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀三、操作程序1. 将1 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。

2. 加入 1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入120μl 20%SDS(达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。

3. 加入0.45 ml 5M的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。

需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。

4. 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15 min。

SDS 法DNA提取

SDS法提取植物基因组DNA
(可用于southern blot)
1、称取材料放入液氮充分预冷的研钵中，液氮充分研磨至粉末状。

研磨过程中不断添加液氮，勿使其干。

2、将研磨成粉末的材料转入50mL离心管中，移入15mL预热至65℃的SDS提取缓冲液（100mmol/L Tris-HCl（pH8.0），50mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl），2%体积的β-巯基乙醇，2mL 10% SDS。

65℃水浴20min，其间轻轻颠倒混匀数次。

3、加入5mL 5mol/L乙酸钾（KAc）冰浴放置20min，8000r/min离心10min，取上清。

4、加入等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），混匀，8000r/min离心10min，取上清。

再加入等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提1次。

5、加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀，-20℃静置1~2h，12000r/min离心15min，去上清。

6、用适量预冷70%乙醇清洗沉淀2次。

7、将沉淀干燥后溶于TE。

8、加入1%体积10mg/L RNaseA于37℃保温60min。

9、加等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提2次，12000r/min离心5min，取上清。

10、加入1/10体积3mol/L醋酸钠和2倍体积-20℃预冷的无水乙醇混匀，-20℃静置60min。

11、12000r/min离心10min，弃上清，
12、用70%乙醇清洗沉淀2次，室温干燥。

13、沉淀溶于100μL双蒸水中。

-20℃保存备用。

DNA抽提缓冲液（lysisbuffer）：50mMTris-Hcl（Ph7.2）50mMEDTA3%SDS1%B-巯基乙醇（用时加）饱和酚：氯仿（V：V,l：1）异丙醇3M醋酸钠NaOAc（Ph8.0）1.称取0.075—0.085g干菌丝置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至细粉末状，迅速转至1.5ml的离心管中并加入750plDNA提取缓冲液（65°C预热），在振荡器上振荡几秒钟充分混匀，然后放到65°C水浴锅中水浴60min,每10min摇动一次。

2.加入750』饱和酚：氯仿（V：V4：1）轻轻颠倒离心管数次充分混匀，室温下12000rpm离心15min,取上清液置于新的离心管中。

3.加入1/30体积的3M醋酸钠NaOAc（PH8.0）和0.54体积的异丙醇，轻轻混匀后置于4°C冰箱中30min,室温下12000rpm离心2min,小心倒掉上清液，然后用冷的70%乙醇洗涤沉淀两次（轻轻颠倒离心管若干次），倒掉乙醇。

4.将装有DNA沉淀的离心管置于真空干燥器中，干燥约30min（时间以DNA变干为准）。

5.加入500』的ddH2O溶解DNA沉淀，同时加入1—2plRNase（终浓度为20pg/ml）,37水浴60min。

6.加入等体积的饱和酚：氯仿（V：V4：1），充分混匀，然后室温下12000rpm离心15min,取上清液置于新的离心管中。

7.重复步骤3。

8.重复步骤4。

9.加入100mlTE溶解DNA,待完全溶解后置于一20°C冰箱中备用。

关于基因组酶切：每次切100ul体系，79ulDNA,（浓度200微克以上），单酶切的话酶7微升，buffer14ul，酶切5小时或者过夜都可以。

Q1：Southern杂交的基本原理是什么？应用范围？原理：其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。

基因组DNA首先用一种或几种限制性内切核酸酶消化，消化后的片段通过标准琼脂糖电泳按照大小进行分离。

SDS提取DNA的方案

1.5.2.2 菌丝体DNA的提取与检测提取缓冲液I：6.2g 葡萄糖，2.0g 聚乙烯吡咯烷酮（PVP），80μL 巯基乙醇，加去离子水定容至100mL。

提取缓冲液II：100mmol/L Tris-Cl（pH8.0），20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。

TE 缓冲液：10 mmol/L Tris-CL（pH 8.0），1 mmol/L EDTA（pH 8.0）酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）。

氯仿∶异戊醇∶乙醇（80∶4∶16）。

其他试剂：液氮、异丙醇、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/L NaAc（pH5.2）。

实验步骤:（1）称0.5g 菌丝，放入适中石英砂和液氮，迅速研磨成粉末状，液氮要加3次。

（2）将磨得粉末移入2mL 离心管中，加0.5mL 提取缓冲液I，缓慢混匀。

10000rpm 室温离心10min，吸去上清液；向沉淀中加入0.8mL 提取缓冲液II，缓慢混匀。

65ºC水浴锅中水浴30min，每5min 缓慢旋转混匀一次。

（3）加入0.7mL 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），缓慢混匀。

6000rpm 离心5min。

（4）取上清液转移到另一离心管中，加入1mL 氯仿:异戊醇:乙醇（80:4:16），缓慢倒入混匀，室温下静置5-10min。

（5）室温6000rpm 离心5min。

（6）小心吸取上清液转移到另一离心管中，加入等体积异丙醇，缓慢上下颠倒混匀。

室温下放置5min，出现絮状沉淀。

室温下6000rpm 离心5min。

（7）吸去上清液，向沉淀中加入40ulTE缓冲液，30ul，3mol/L NaAc 和80μL 预冷的无水乙醇，缓慢上下颠倒混匀，-20ºC 冰箱放置2h。

（8）室温下6000rpm 离心5min。

（9）吸去上清液，用1mL70%乙醇漂洗液漂洗两次，6000rpm 离心5min。

倒去上清液，将离心管倒置在干净的吸水纸上轻轻磕几下，尽量去除上清液，放置三min自然干燥后，将沉淀溶于25μLTE 缓溶液中，-20ºC 贮存。

SDS法提取植物基因组DNA

SDS法提取植物基因组DNA【实验目的】学习和掌握常用基因组DNA提取方法。

【实验要求】1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作；2.获得高纯度、完整DNA样品。

一、原理：利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

二、药品试剂及耗材：——液氮——提取缓冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入）---- 20% SDS ph7.2---- 5 mol/L KAc---- 氯仿：异戊醇（24：1）——异丙醇—— 70%乙醇—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0耗材：移液枪，15、2.0、1.5ml离心管，篮、黄、白枪头各四套离心管架4个，离心管盒2个，水浴泡沫8个，研钵及小药勺8套棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀三、操作程序1.将 2 ml离心管中。

2.加入65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。

3.加入的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。

需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。

4.24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15 min。

5.转移上清液到另一新离心管中，加入（见丝状沉淀）-20℃放置30分钟沉淀核酸。

6.25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。

7.弃上清，70％乙醇洗两次。

DNA提取液配方,粗体方法

主要成分是：NaCl，Tris-HCl（PH=7.4），EDTA（PH=8），SDS。

NaCl，Tris-HCl主要是调节溶液的PH，维持一定的离子浓度,提供一个缓冲液的环境，防止核酸被破坏；EDTA主要是二价金属离子的螯合剂，使影响DNA的DNA酶中的钙离子，锰离子，镁离子等和EDTA结合，使酶失去活性，有利于提取完整DNA；SDS主要是和蛋白质结合，使其变形沉淀，从而利于DNA的提取，减少和清除带白质杂质；裂解细胞！配方：每升中加入EDTA 9.3g， SDS 5g， NaCl 14.6g， Tris 24.2g 相当于Tris 200mM PH=7.4 EDTA 25mM PH=8注意：Tris与EDTA 应当分别配好调PH值器材：灭菌的研磨棒，离心管，配好的DNA提取液，1000ul的移液枪，预冷的异丙醇，离心机，７５％的乙醇，灭超水拟南芥ＤＮＡ粗提步骤；１．选取两片适当大小的叶片放入１．５ｍｌ离心管（已标记）中，用液氮浸没１—２ｓ，取出立刻磨碎至粉末状。

或不用液氮，研磨至匀浆状；２．加入ＤＮＡ提取液８００ｕｌ溶解，同时再次磨样，使之彻底为匀浆，摇匀；３．在１２０００ｒｐｍ条件下，离心１０ｍｉｎ，取上清至另一新离心管（同标记）中，弃去沉淀，（切记：宁少勿沉淀）；４．加入７００ｕｌ异丙醇（－２０℃预冷）至管中，摇晃混匀，然后放置－２０℃下１－２ｈ，或者４℃下过夜，析出ＤＮＡ；５．在１２０００ｒｐｍ下，离心１０ｍｉｎ，弃上清，留沉淀；６．向沉淀中加入７００ｕｌ、７５％的乙醇，进行洗涤，然后在１２０００ｒｐｍ下，离心４ｍｉｎ，重复三次；７．倒出乙醇，在超净工作台上吹干，加入５０ｕｌ灭超水溶解，１２０００ｒｐｍ下，离心４ｍｉｎ，吸取上清液，转至另一新管中备用。

DNA抽提原理解析

分子生物学实验用到的DNA主要是质粒DNA和基因组DNA其提取的主要原理有:1，碱裂解法制备质粒DNA质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA是进行DNA重组的常用载体。

作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。

在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。

从宿主细胞中提取质粒DNA是DNA重组技术中最基础的实验技能。

分离质粒DNA 有三个步骤:培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。

碱法质粒抽提用到三种溶液:溶液I , 50 mM葡萄糖/ 25 mM Tris-CI / 10 mM EDTA ，pH 8.0 溶液II ，0.2 N NaOH / 1% SDS 溶液III ，3 M醋酸钾/ 2 M醋酸让我们先来看看溶液I的作用。

任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH值，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。

那么50 mM 葡萄糖是干什么的呢？说起来不可思议，加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。

因此，如果溶液I 中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。

所以说溶液I 中葡萄糖是可缺的。

那么EDTA 呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。

在溶液I 中加入高达10 mM的EDTA无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。

如果不加EDTA其实也没什么大不了的。

只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA 会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢？实话告诉你，只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。

有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。

第二章质粒DNA的微量提取SDS法ppt课件

的条带进行比较估算出大概的数据。
3
4
5
按0.5μg上样量计。应按13条带计算，因为3kb的量是其它片段量的近三倍
6
7
8
9
0.5kb 的条带由500bp和517bp组
10a
成，这样即使在低分子量区域条
带的强度也比较均一。
10b
碱基对 10,002
8,001 6,001 5,001 4,001 3,001 2,000 1,500 1,000
补充内容—2.凝胶电泳检测DNA的浓度
实验步骤实验步骤见下一个试验—《琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法》
结果 1%的琼脂糖凝胶，90V,40分钟。
•NEB 标准分子量片段(1kb DNA Ladder)
片段
1 kb DNA Ladder虽然不能对DNA质量
1
进行精确定量分析，但可以通过与相近 2
载体(Vector)：
用于携带重组DNA，并且能够使外源DNA一起复制或表达的质粒(运载工具)。具备的条件:
1.具备条件
2.结构特征
（1）易于鉴定；
（2）在受体细胞中可以独立复制；
(1)抗性基因（Ampicillin gene,
Kanamycine gene)
(2)启始复制子（ori)；
（3）易于筛选；
(1)取2l提取的质粒DNA，加入98L蒸馏水对待测DNA样品做1:50(或更高倍数的稀释); (2)蒸馏水作为空白,在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零。 (3)加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm的吸收值，并记录。 (4) 通过计算确定DNA浓度或纯度，浓度单位为g /ml,
实验二
质粒DNA的微量提取

SDS法提取DNA

DNA抽提缓冲液（lysis buffer）：50mM Tris-Hcl（Ph7.2）50mM EDTA3% SDS1% β-巯基乙醇（用时加）饱和酚：氯仿（V：V,1：1）异丙醇3M醋酸钠NaOAc（Ph8.0）1．称取0.075－0.085g干菌丝置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至细粉末状，迅速转至1.5ml的离心管中并加入750μl DNA提取缓冲液（65℃预热），在振荡器上振荡几秒钟充分混匀，然后放到65℃水浴锅中水浴60min，每10min摇动一次。

2．加入750μl饱和酚：氯仿（V：V,1：1）轻轻颠倒离心管数次充分混匀，室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。

3．加入1/30体积的3M醋酸钠NaOAc（PH8.0）和0.54体积的异丙醇，轻轻混匀后置于4℃冰箱中30min，室温下12000rpm离心2min，小心倒掉上清液，然后用冷的70％乙醇洗涤沉淀两次（轻轻颠倒离心管若干次），倒掉乙醇。

4．将装有DNA沉淀的离心管置于真空干燥器中，干燥约30min（时间以DNA变干为准）。

5．加入500μl的ddH2O溶解DNA沉淀，同时加入1－2μl RNase（终浓度为20μg/ml）,37水浴60min。

6．加入等体积的饱和酚：氯仿（V：V,1：1），充分混匀，然后室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。

7．重复步骤3。

8．重复步骤4。

9．加入100ml TE溶解DNA，待完全溶解后置于－20℃冰箱中备用。

关于基因组酶切：每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。

Q1：Southern杂交的基本原理是什么？应用范围？原理：其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。

基因组DNA首先用一种或几种限制性内切核酸酶消化，消化后的片段通过标准琼脂糖电泳按照大小进行分离。

sds提取dna原理

sds提取DNA原理介绍SDS（十二烷基硫酸钠）提取DNA是一种常见的DNA提取方法。

在DNA提取的过程中，SDS可以有效地溶解膜脂和蛋白质，使DNA从细胞中释放出来。

这篇文章将详细探讨SDS提取DNA的原理及其操作步骤。

SDS提取DNA的原理SDS是一种阴离子表面活性剂，具有良好的去脏能力和溶解膜脂的性质。

在SDS溶液中，SDS分子靠头基之间的疏水作用力形成胶束结构，将DNA分子包裹在其中。

SDS分子的亲水头基与水分子相互作用，使得DNA在SDS胶束中溶解，并且蛋白质也会被SDS分子包裹，失去其功能。

SDS提取DNA的操作步骤SDS提取DNA的具体操作步骤如下：步骤1：细胞破碎首先，需要将待提取DNA的样品中的细胞完全破碎，以释放DNA。

常用的方法是将细胞悬浮液与SDS缓冲液混合，并在高速离心下沉淀细胞。

步骤2：蛋白质去除利用SDS的蛋白质包裹性质，将细胞裂解产生的蛋白质与其他杂质一起去除。

在此步骤中，后续会加入蛋白酶K，用于降解细胞蛋白质。

步骤3：酒精沉淀向提取液中加入等体积的醇类溶液，如等体积的冷乙醇，用于使DNA出现沉淀。

由于SDS与DNA结合，在SDS的作用下，DNA会从溶液中沉淀出来。

步骤4：洗涤和溶解将DNA沉淀用乙醇洗涤以去除杂质。

然后，用适当的缓冲液溶解DNA沉淀以获得纯净的DNA溶液。

常用的缓冲液有TE缓冲液（Tris-EDTA缓冲液）等。

SDS提取DNA的注意事项在进行SDS提取DNA的过程中，需要注意以下几点：1.实验室应采取严格的无菌措施，以防止外源性DNA的污染。

2.细胞裂解的时间和条件需要充分优化，以获得较高的DNA产率。

3.高浓度的SDS在溶液中可能产生泡沫，需注意避免泡沫的产生。

4.在进行酒精沉淀步骤时，注意等体积醇类溶液的配制和温度的控制，以确保DNA的完全沉淀。

5.在溶解DNA沉淀的过程中，需充分溶解，避免DNA残留在溶液中。

结论SDS提取DNA是一种常见且有效的DNA提取方法。

sds碱裂解法制备质粒dna

sds碱裂解法制备质粒dna
SDS碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法。

该方法利用定量的SDS和NaOH对细菌细胞进行裂解，使DNA迅速释放。

接着，加入适当的中和缓冲液，使DNA回复其天然形态，并去除蛋白质等污染物。

最后，通过酒精沉淀法或硅胶柱层析法纯化DNA。

以下是该方法的具体步骤：
1.生长细菌
生长适量细菌菌株并收获细菌：可以选择不同种类、不同来源、不同
体积得到不同量的细菌。

2.裂解细胞壁
将细菌沉淀后加入缓冲液和SDS混合。

SDS能够破坏细菌的细胞膜，使细胞壁裂解，从而将DNA释放出来。

3.中和
加入NaOH将溶液pH值升高至12，使DNA形状发生改变，变得易于析出。

接着，加入Tris-HCl中和缓冲液降低pH值，恢复DNA天
然形态，并使DNA强度不受影响。

4.去除杂质
通过高速离心将DNA沉淀下来，将上清液与DNA分离。

可以采用氯仿提取法以去除蛋白质和其他杂质，专用的富集试剂和离心柱可做更细致的纯化。

5.精华DNA
通过酒精沉淀法或硅胶柱层析法纯化DNA。

酒精沉淀法适用于大量DNA纯化，但对于大片段、GC富集的DNA适用。

硅胶柱层析法适用于小规模、高质量、片段少的DNA纯化，但成本稍高，操作复杂。

总之，SDS碱裂解法是一种快速，简单的质粒DNA提取方法。

由于其便捷的操作和高质量的DNA回收率，它已被广泛应用于基因工程和分子生物学等领域。

质粒dna提取的方法

质粒dna提取的方法
提取质粒DNA的常用方法主要有：
1. 碱裂解法：将含有质粒DNA的细菌株进行裂解，使细菌质粒DNA与蛋白质分离。

一般使用碱性裂解缓冲液（如0.2 M NaOH）和含有细菌裂解酶（如SDS）的胰酶溶液进行裂解，然后使用中性盐溶液（如3 M醋酸钠）进行酸性沉淀，最后通过离心分离沉淀的质粒DNA。

2. 除菌剂法：使用含有除菌剂（如SDS）的裂解缓冲液直接裂解细菌细胞，使质粒DNA与细菌蛋白质分离。

然后使用物理方法（如离心）分离DNA和蛋白质，最后使用醋酸盐沉淀法分离质粒DNA。

3. 膜裂解法：将含有质粒DNA的细菌株均匀涂在含有质粒DNA结合断裂物的特殊膜上，经裂解后，膜上会形成质粒DNA的斑点。

然后使用洗脱缓冲液将质粒DNA从膜上洗脱，得到纯化的质粒DNA。

4. 商业化质粒DNA提取试剂盒：市面上有各种质粒DNA提取试剂盒可供选择，这些试剂盒能够提供简便、快速、高产量且高质量的质粒DNA纯化方法。

根据试剂盒的不同，步骤和原理会有所区别。

不同的方法适用于不同的实验目的和样品类型，请根据具体情况选择合适的提取方法。

SDS 法DNA提取

SDS法提取植物基因组DNA
(可用于southern blot)
1、称取材料放入液氮充分预冷的研钵中，液氮充分研磨至粉末状。

研磨过程中不断添加液氮，勿使其干。

2、将研磨成粉末的材料转入50mL离心管中，移入15mL预热至65℃的SDS提取缓冲液（100mmol/L Tris-HCl（pH8.0），50mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl），2%体积的β-巯基乙醇，2mL 10% SDS。

65℃水浴20min，其间轻轻颠倒混匀数次。

3、加入5mL 5mol/L乙酸钾（KAc）冰浴放置20min，8000r/min离心10min，取上清。

4、加入等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），混匀，8000r/min离心10min，取上清。

再加入等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提1次。

5、加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀，-20℃静置1~2h，12000r/min离心15min，去上清。

6、用适量预冷70%乙醇清洗沉淀2次。

7、将沉淀干燥后溶于TE。

8、加入1%体积10mg/L RNaseA于37℃保温60min。

9、加等体积酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提2次，12000r/min离心5min，取上清。

10、加入1/10体积3mol/L醋酸钠和2倍体积-20℃预冷的无水乙醇混匀，-20℃静置60min。

11、12000r/min离心10min，弃上清，
12、用70%乙醇清洗沉淀2次，室温干燥。

13、沉淀溶于100μL双蒸水中。

-20℃保存备用。

dna的粗提取方法

dna的粗提取方法DNA的粗提取方法DNA是生物体内最基本的遗传物质，对于研究生物学、医学等领域具有重要意义。

因此，DNA的提取方法也成为了科学研究中的一项重要技术。

下面将介绍一种简单易行的DNA粗提取方法。

材料准备1. 10% SDS溶液：称取10克SDS加入100毫升去离子水中，混合均匀后加热至70℃左右，搅拌至SDS完全溶解即可。

2. 0.5M EDTA溶液：称取186.1克EDTA加入500毫升去离子水中，调节pH至8.0。

3. 1M Tris-HCl缓冲液：称取121.14克Tris-HCl加入1000毫升去离子水中，调节pH至8.0。

4. NaCl溶液：称取58.44克NaCl加入1000毫升去离子水中，搅拌均匀后过滤灭菌。

5. 蛋白酶K：用去离子水将蛋白酶K稀释至10mg/ml浓度。

6. 高锰酸钾：用去离子水将高锰酸钾稀释至0.1%浓度。

7. 95%乙醇：用去离子水将95%乙醇稀释至70%浓度。

8. 细胞样品：可以是动物组织、细菌、真菌等样品。

步骤步骤一：制备细胞裂解液1. 取适量的细胞样品，用PBS缓冲液洗涤3次，去除细胞外的杂质。

2. 向含有10% SDS的裂解液中加入适量的蛋白酶K，搅拌均匀后在60℃水浴中孵育2小时。

3. 将孵育后的裂解液加入相同体积的高锰酸钾溶液中，搅拌均匀后再加入相同体积的4M NaCl溶液中，轻轻摇晃混合即可。

步骤二：沉淀DNA1. 将上述混合溶液离心10分钟，收集上清液至新离心管中。

2. 向上清液中滴加等体积的冷乙醇（70%），轻轻摇晃后放置于-20℃冷冻库中保存至少30分钟以上。

3. 将离心管取出，离心10分钟，倒掉上清液，将沉淀用无菌去离子水洗涤3次。

步骤三：纯化DNA1. 将沉淀加入含有0.5M EDTA的去离子水中，搅拌均匀后放置于60℃水浴中孵育30分钟。

2. 在孵育过程中，制备1M Tris-HCl缓冲液，并调节pH至8.0。

3. 孵育结束后，向上述溶液中加入相同体积的1M Tris-HCl缓冲液，轻轻摇晃混合均匀。

植物DNA提取_SDS法

1植物基因组DNA的提取1）取适当新鲜叶片放入2ml离心管中，在液氮中迅速研磨成粉末。

2）加入800µl的DNA提取液和5µl的RNase A（10mg/ml）,振荡混匀。

37℃，水浴30min（水浴过程中上下颠倒混匀）。

3）加入800µl的“三混”溶液，充分混匀。

12000rpm，离心10min。

4）吸取650µl的上清液至一干净的2ml离心管，加入等体积氯仿，充分混匀。

12000rpm，离心10min。

5）吸取450µl的上清液至一干净的1.5ml离心管，加入450µl的异丙醇和45µl的3M醋酸钠（pH=5.2）,轻轻混匀，DNA析出，呈絮状沉淀。

-20℃放置30min。

6）12000rpm，离心10min。

弃上清，加入600µl的75%乙醇溶液，清洗两次。

7）弃上清液，用移液器吸尽残留酒精溶液，超净台中干燥（约5min），加入100µl的1×TE或ddH2O溶解，并置4℃中溶解过夜。

8）采用紫外分光光度计法检测DNA的含量及纯度，1%琼脂糖凝胶检测DNA的质量。

将DNA浓度统一稀释至100ng/µl，-20℃保存。

2试剂配制1）DNA提取液(1L，1%SDS，0.1M Tris，0.1M NaCl，10mM EDTA，pH=8.5)在去离子水中依次加入3.2g Na2EDTA，5.8g NaCl，12.1g Tris base，以及100ml的10%的SDS溶液，搅拌均匀后，用HCl调节pH至8.5，定容至1L。

2）“三混”溶液将Tris平衡酚、氯仿、异戊醇按体积比25：24：1，充分混匀，4℃中静置分层并避光保存。

3）3M醋酸钠(1L)称取408.24g NaAC·3H2O溶解到800ml蒸馏水中，用冰醋酸调pH至5.2，定容至l L，高压灭菌备用。

4）1×TE溶液(1L，10mM Tris，1mM EDTA，pH=8.0)在500ml水中加入1.211g Tris base，0.372g Na2EDTA，用HCl调pH至8.0，定溶至1L，高压灭菌备用。

SDS法提取DNA

SDS法提取DNA
植物各个部位都可用作总DNA抽提的材料，常用的材料一般为植物幼叶。

其基本原理是：先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基磺酸钠（SDS）等离子型表面活性剂，
溶解细胞膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜破裂。

再加入酚和氯仿等表面活性剂，使蛋白变性。

最后加入无水乙醇沉淀DNA；沉淀的DNA，即为植物总DNA，溶于TE溶液中保存备用。

三、实验材料、器具及试剂
水稻幼叶
高速台式离心机，振荡器，水浴箱，离心管架，玻璃滴管，移液器，研钵，离心管，2ml离心管，枪头，烧杯，量筒等。

无水乙醇，氯仿，异戊醇，TE缓冲液（）,抽提液（200mM T ris-HCl, ; 250mM NaCl; 25mM EDTA; %SDS）
四、实验步骤
⑴取幼叶5g左右放于研钵中,加入少许石英砂，再加入400μｌ抽提液，磨成绿色浆状。

⑵倒入2 ml离心管。

约用400μｌ抽提液洗涤研钵，也倒入离心管，将两次抽提液混匀。

⑶置于56℃水浴中5分钟。

⑷加入适量氯仿，振荡，充分混匀。

⑸14000rpm离心5分钟。

取上清液于离心管。

⑹加入等体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，静置直到DNA析出。

⑺14000rpm离心2分钟，去上清液。

⑻加入70%乙醇漂洗。

适当风干，溶于100-200μl TE溶液中待用。

五、注意事项：
⑴幼叶不宜太多；氯仿的量尽可能多些；与氯仿混合时充分摇匀，否则蛋白变性不完全。

⑵研磨幼叶后匀浆较重要，这直接影响DNA的产量。

⑶处理：若第5步上清液较为混浊，则需要重复第4和第5步。

sds法提取动物dna的原理

sds法提取动物dna的原理以sds法提取动物DNA的原理DNA是生命的基础，是决定生物遗传特征的重要分子。

在分子生物学领域，DNA提取是一项基础而重要的技术。

sds法提取动物DNA是一种有效的DNA提取方法，目前已广泛应用于动物学、生态学、保护生物学等领域。

sds法提取动物DNA的基本原理是通过使用表面活性剂SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K将细胞壁或细胞膜破坏，使DNA暴露在外，然后使用酒精沉淀法将DNA分离出来。

这种方法适用于大部分动物组织和细胞样本。

用生理盐水或PBS（磷酸盐缓冲液）清洗样本，去除表面上的杂质和细胞外DNA。

然后，将样本加入含有SDS和蛋白酶K的提取缓冲液中，经过适当的温度和时间处理，使细胞壁或细胞膜破裂，释放出DNA。

然后，通过添加盐类和乙醇等物质使DNA凝聚成团，从而方便离心分离。

最后，对DNA进行洗涤、干燥和溶解等操作，得到纯净的DNA。

sds法提取动物DNA的优点是操作简单、成本低、适用范围广。

同时，使用SDS和蛋白酶K可以有效地破坏细胞膜和细胞壁，使DNA 释放出来，提高了DNA提取的效率和纯度。

此外，这种方法还可以应用于高通量的DNA提取和PCR扩增等实验。

需要注意的是，sds法提取动物DNA的成功与否和许多因素有关，如样本数量、质量、处理时间、温度、浓度等。

此外，由于SDS的表面活性，它可以影响DNA的电荷和结构，从而可能对后续实验产生影响，因此需要进行适当的DNA纯化和质量检测。

sds法提取动物DNA是一种常用的DNA提取方法，具有简单、快速、经济等优点。

在动物学、生态学、保护生物学等领域，它已被广泛应用于DNA分析和研究。

随着分子生物学技术的不断发展，sds法提取动物DNA将继续为人们的科研工作提供有效的支持。

真菌DNA提取的六种方法

真菌DNA提取方法方法一：取出约0.1 g 菌丝体,加入1 mL 裂解缓冲液( Tris-HCl 100 mmol/L (p H 9.0) ; EDTA 100 mmol/ L ;NaCl 400 mmol/L ;2 %SDS) ,加入少许石英砂,在研钵中将菌丝进行充分研磨。

将菌体移入1.5 mL 的离心管中,于65℃水浴保温30 min ,每10 min 取出充分混匀1 次。

加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(体积比为24 ∶24 ∶1) ,轻轻混匀5min ,12 000 r/ min 离心10 min 。

吸取上清液,加入等体积氯仿,轻摇5 min ,12 000r/ min 离心10 min 。

收集上清液,加入0.75 倍体积的异丙醇沉淀DNA ,用70 %乙醇冲洗2～3 次后自然风干,加入500μL 1 ×TE 缓冲液溶解DNA 。

加入2 μL RNase( 10 mg/ mL ) , 37 ℃水浴保温30min 。

加入等体积苯酚∶氯仿(体积比为1 ∶1) ,轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。

取上清液加入等体积氯仿,轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。

吸取上清液,用2 倍体积的无水乙醇沉淀DNA , -20 ℃短暂放置后,12 000 r/ min 离心。

用70 %的乙醇洗涤沉淀DNA 2 次,自然风干后溶于适量0.1 ×TE缓冲液中,贮存于- 20 ℃备用。

方法二1.实验试剂（1）DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS（2）3M NaAc（3）TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA（4）酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)（5）氯仿:异戊醇(24:1)（6）异丙醇（7）无水乙醇（8）75%乙醇（9）RNaseA2.实验步骤（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉（2）加入4mL提取液，快速振荡混匀（3）加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本）（4）1000rpm，4℃，5min（5）上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm，4℃离心5min）（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min （7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE中（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃处理1h（9）用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min以上。