血凝和血凝抑制试验中制备红细胞悬液的几点体会

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血凝实验实训报告

一、实验目的1. 掌握血凝实验的基本原理和操作步骤。

2. 学会使用血凝抑制实验检测禽流感病毒抗体水平。

3. 了解血凝实验在禽流感疫病监测和免疫抗体检测中的应用。

二、实验原理血凝实验是一种检测病毒抗原或抗体存在的方法。

禽流感病毒表面的血凝素（HA）蛋白具有识别并吸附于红细胞表面的受体，从而使红细胞发生凝集现象。

通过观察红细胞凝集情况，可以判断病毒抗原或抗体的存在。

血凝抑制实验是血凝实验的一种衍生方法，通过加入特异性抗体，抑制病毒与红细胞表面的结合，从而判断抗体水平。

三、实验材料与仪器1. 材料：禽流感病毒抗原、鸡红细胞、抗禽流感病毒抗体、生理盐水、微量移液器、酶标板等。

2. 仪器：微量振荡器、离心机、显微镜等。

四、实验步骤1. 配制病毒抗原稀释液：取禽流感病毒抗原，用生理盐水进行倍比稀释，得到一系列浓度梯度。

2. 设置实验组：取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液，然后将稀释后的病毒抗原加入第一排第1孔，混匀后依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μl。

3. 加入抗体：从第1孔吸取25μl混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μl加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μl。

第三排孔至第五排孔同上操作。

4. 加入红细胞：依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μl 1%鸡红细胞悬液。

5. 混匀：将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，使红细胞与病毒抗原充分混合。

6. 静置：室温（20-25℃）静置30分钟，观察红细胞凝集情况。

7. 结果判定：将板作45度倾斜，观察红细胞凝集情况。

若红细胞出现明显的凝集现象，则表示病毒抗原存在；若红细胞无凝集现象，则表示病毒抗原不存在。

8. 血凝抑制实验：取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液，然后按照血凝实验的步骤加入抗体和红细胞，观察红细胞凝集情况。

五、实验结果与分析1. 血凝实验结果：通过观察红细胞凝集情况，可以判断病毒抗原的存在与否。

2. 血凝抑制实验结果：通过观察红细胞凝集情况，可以判断抗体水平。

浅析影响血凝和血凝抑制实验的原因

４加样
如果短时间内不能检测，应放在一２Ｏ ℃ —．８Ｏｃ冰箱内保存，运送病毒悬液和红细胞悬液在使用前一定要摇匀，以保证每一血清时应将血清放在盛有冰块的保温设备中运送。被检血清应避孔中加入的浓度准确一致，避免加入的浓度高低不一，人为造成免反复冻融，反复冻融的血清抗体效价会降低。血清保存不当，误差。摇晃红细胞悬液时力度不宜过大，防止红细胞的结构被破腐败变质会严重影响试验结果。坏，造成溶血。加液体时，避免吸头与反应板孔接触造成污染。尤其是在最（１）反应板应选择一次性使用９６￣Ｌｖ型板，要保持板面及后加入红细胞悬液时，孔内已有稀释液、血清、单位抗原等，如凹孔的干净，板面应水平，不能弯曲、倾斜，使用不合格的反应果吸头接触到孔内混合液，会造成各个孔内液体相互污染，导致板会严重影响结果。板孔倾斜的角度会影响红细胞的沉降速度，试验结果出现误差。所以，在使用移液器时，一定要保持加样器角度过小，红细胞沉降加快，血凝价偏低，血凝抑制价偏高。角吸头与凝集板孔间的距离，以保证每个凝集孑Ｌ内液体数量和浓度
１被检样品
种，应— ２０ｏＣ保存。在进行抗原效价的测定时，同一种抗原最好
１．１采样两瓶以上混合后使用，并做重复试验，取其平均值，减少误差。（１）随机采集的被检样本要能够代表整个鸡群。一般条件抗原的凝集价在外界不稳定，冷藏保存或反复冻融时其血凝价降

血凝抑制试验易出现的问题与纠正方法

沉于溶器底部，上清液清亮透明。红细胞发生溶血的原因有：（1）红细胞保存时间太长，超
过使用期限。（2）红细胞悬液冻溶。（3）PBS 液配制不准确。 ( 三 ) 标准阳性血清的抗体效
价误差大于 1 个滴度原因 1 ：4 个血凝单位抗原配
制不准确，4 单位抗原要现用现配，混合均匀，配好的抗原室温下放置不超过 4h，不可反复冻融。为了防止 4 单位抗原配制不准确，在作血凝抑制试验前必须作回归试验来测定 4 单位抗原是否准确。方法是：在血凝板的 1 ～ 4 排 1 ～ 5 孔各加 0.025 ml PBS 液，取配好的 4 单位抗原 0.025 ml 加入反应板的第一孔内，混匀后吸取 0.025 ml 加入第二孔，依次倍比稀释至第 4 孔，从第 4 孔吸取 0.025 ml 弃去，第 5 孔做对照，1 ～ 5 孔各加 0.025 ml pbs 液， 1 ～ 5 孔各加 1% 红细胞悬液，震荡混匀，20℃～ 25℃静置 40 min 后观察结果，若 1 ～ 2 孔红细胞完全凝集，
（七）八份被检样品的抗体效价均为 1 log2
原因 1 ：可能 8 份被检血清加后未进行倍比稀释，这种情况一般发生在使用八通道移液器时遗漏了将被检血清作倍比稀释这一环节，第一孔由于抗体滴度高发生全部抑制凝集，
( 四 ) 结果出现慢原因：环境温度过低，如果环境温度低于 20 ℃ 时，结果就会出现慢，需延长时间才能出现结果，因此在作试验时应将环境调到 20℃～ 25℃。 ( 五 ) 结果出现快，而且整板无凝集当试验环境温度超过 30℃时，反应速度加快，试验结果出现快，往往在 20 min 左右就可读数，一旦时间过长，结果就会消失，使整板无凝集现象，会误认为抗体滴度为 10 log2。因而要求试验温度应控制在 20℃～ 25℃之间，反应 40 min 及时

血凝抑制实验实训报告

一、实验目的1. 掌握血凝抑制实验的基本原理和操作方法。

2. 了解血凝抑制实验在禽流感抗体检测中的应用。

3. 培养实验操作技能和结果分析能力。

二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测禽流感病毒抗体水平的方法。

该实验原理是利用禽流感病毒对鸡红细胞具有血凝活性，当病毒与鸡红细胞接触时，红细胞会发生凝集现象。

如果血清中含有禽流感病毒特异性抗体，则抗体与病毒结合后，会抑制病毒与红细胞的凝集作用。

三、实验材料1. 实验动物：鸡红细胞。

2. 实验试剂：禽流感病毒抗原、标准阳性血清、标准阴性血清、血清样品、PBS 缓冲液、1%鸡红细胞悬液、微量移液器、酶标板、振荡器、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备96孔酶标板，用微量移液器在每孔加入25μL PBS缓冲液。

2. 将标准阳性血清、标准阴性血清、血清样品分别进行倍比稀释，从高浓度到低浓度依次加入孔中，每孔25μL。

3. 在每个孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后室温静置30分钟。

4. 在每个孔中加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后室温静置30分钟。

5. 将酶标板置于振荡器上振荡10秒，使红细胞充分混合。

6. 室温静置30分钟后，观察红细胞凝集情况。

7. 根据红细胞凝集程度，判断血清样品中禽流感病毒抗体水平。

五、结果与分析1. 阳性对照：红细胞凝集，表明禽流感病毒抗原具有血凝活性。

2. 阴性对照：红细胞未凝集，表明标准阴性血清不含有禽流感病毒抗体。

3. 标准阳性血清：红细胞凝集，表明标准阳性血清含有禽流感病毒抗体。

4. 血清样品：根据红细胞凝集程度，判断血清样品中禽流感病毒抗体水平。

六、实验讨论1. 本实验通过血凝抑制实验检测了血清样品中禽流感病毒抗体水平，为禽流感疫病监测和免疫抗体检测提供了有力手段。

2. 在实验过程中，应注意以下几点：（1）严格遵守实验操作规程，避免人为误差；（2）保证实验材料的质量，如鸡红细胞、禽流感病毒抗原等；（3）控制实验条件，如温度、振荡时间等；（4）观察结果时，注意红细胞的凝集程度，以便准确判断抗体水平。

血凝与血凝抑制试验工作的几点心得体会

球。

吸液时必须充分摇匀疫苗。

（6）吸出的疫苗液切不可再注回于瓶内，针筒排气溢出的疫苗液应吸附于酒精棉球上，并将其收集于专用瓶内，用过的酒精棉球、碘酊棉球也应置于专用瓶内，与疫苗瓶一同进行无害化处理。

（7）羊只注射部位剪毛后用碘酊或70～75%酒精棉球消毒，再用挤干的酒精棉球擦干消毒部位。

（8）做好记录，填写免疫登记证（表），打上耳标，记录内容包括：耳标号、羊的品种、数量、日龄、疫苗的来源、批次、接种时间等。

参考文献[1]　蒋梅，杨仕标，张念祖.小反刍兽疫的流行趋势与防控[J].动物医学进展，2007，28（b08）：88-91.[2]　王昌建.小反刍兽疫[J].湖南农业，2003，（11）：19.[3]　李彦芳.小反刍兽疫的诊断与防控[J].新疆畜牧业，2014，（2）：53-54.摘　要：分析稀释液pH值、试验温度、红细胞浓度和种类等因素是如何影响血凝与血凝抑制试验结果的准确性，避免试验结果偏差的出现，以便更好的指导生产。

关键词：血凝；血凝抑制；偏差；pH值；试验温度；红细胞浓度血凝与血凝抑制试验普遍用于禽流感和新城疫的抗体检测，主要用于检验禽流感和新城疫免疫抗体的监测以便指导养殖场制定免疫程序，此试验方法虽简单但某些细节不注意，会引起结果偏差，造成严重的后果。

因此熟练的掌握检测方法得出正确的结果非常重要。

血凝与血凝抑制试验分为血凝实验和血凝抑制实验两个部分。

血凝实验的原理是利用某种病毒的血凝素能与某种动物的红细胞发生凝集的现象叫凝集实验，血凝抑制实验的原理是某种动物的病毒被相对应的特异性抗体中和，从而抑制了某种病毒的血凝素和某种动物的红细胞发生凝集的现象叫血凝抑制实验。

1　实验试剂制备中易出现的问题血凝与血凝抑制实验前期需要制备的试剂有阿氏液配制，PBS和1%鸡红细胞等。

实验对稀释液的pH值和盐浓度都有要求如下表PBS的PH值禽流感H5抗原效价（1-11孔）PBS对照（12孔）pH值7.29孔完全凝集完全沉淀pH值6.29孔完全凝集完全沉淀pH值5.811孔完全凝集完全凝集在血凝和血凝抑制实验中血凝实验的抗原效价标定异常重要，抗原标定太高检测出的抗体就偏低，抗原标定的偏低检测出的抗体就偏高。

血凝抑制实验_实验报告

一、实验目的1. 了解血凝抑制实验的基本原理和操作方法。

2. 掌握血凝抑制实验在禽流感病毒检测中的应用。

3. 学会通过血凝抑制实验结果判断禽流感病毒的感染情况。

二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测病毒感染的方法，通过检测血清中病毒特异性抗体的存在和效价，来判断动物是否感染过某种病毒。

在禽流感病毒检测中，该实验主要用于检测血清中的禽流感病毒抗体水平，从而判断禽流感病毒感染状态。

实验原理：当禽流感病毒与含有抗体的血清混合后，病毒表面的血凝素（HA）与抗体结合，导致病毒颗粒聚集，血凝素活性降低，从而使红细胞不发生凝集。

通过观察红细胞是否发生凝集，可以判断血清中是否含有禽流感病毒抗体。

三、实验材料1. 禽流感病毒抗原2. 1%鸡红细胞悬液3. 0.5%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）4. PBS缓冲液5. 96孔V型酶标板6. 微量移液器7. 振荡器8. 恒温培养箱9. 移液器吸头四、实验方法1. 准备工作（1）将禽流感病毒抗原用PBS缓冲液稀释至适当浓度。

（2）将鸡红细胞悬液用PBS缓冲液稀释至1%。

（3）将PVP用PBS缓冲液溶解，浓度为0.5%。

2. 血凝抑制实验（1）取96孔V型酶标板，每孔加入25μL PBS缓冲液。

（2）在第一排第1孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后，从第1孔吸取25μL加入第2孔，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μL。

（3）向每孔加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后置于振荡器上振荡10秒。

（4）将酶标板置于室温（20-25℃）下静置30分钟。

（5）观察红细胞是否发生凝集，记录结果。

3. 结果判定（1）完全抑制：红细胞不发生凝集。

（2）部分抑制：红细胞发生凝集，但凝集程度较轻。

（3）未抑制：红细胞发生凝集，凝集程度明显。

五、实验结果与分析1. 结果记录根据实验结果，记录每孔红细胞凝集情况，并计算抑制率。

血凝和血凝抑制试验注意事项

养殖与饲料2020年第07期血凝和血凝抑制试验注意事项郭燕江苏省泰兴市滨江镇兽医站，江苏泰兴225400摘要随着规模养鸡业的迅速发展和养殖户科学养殖意识的增强，血凝和血凝抑制试验技术越来越重要，其操作繁杂，影响其结果的因素很多，只有加强每一个环节的质量管控，严格按照规范程序操作，才能获得准确的试验结果，为科学防控提供理论依据。

为此，本文从1%鸡红细胞悬液配制、试验器材的准备及操作、血凝价的判定、4单位抗原的配制、抗原回归试验、血凝抑制效价的判定、试验后的整理和消毒等方面简述了血凝和血凝抑制试验应注意的事项，以供参考。

关键词血凝；血凝抑制试验；1%鸡红细胞悬液；4单位抗原配制；抗原回归试验；注意事项收稿日期：2020-04-03郭燕，女，1995年生，助理兽医师。

随着规模养鸡业的迅速发展和养殖户科学养殖意识的增强，实验室检测技术越来越重要。

血凝和血凝抑制试验是实验室常用的免疫抗体检测技术之一，主要用于鸡新城疫和禽流感病毒病的检测诊断以及监测鸡的免疫状态。

笔者结合日常实验室操作，浅谈该试验应注意的事项，以供参考。

11%鸡红细胞悬液配制采血应选用3只SPF 公鸡或无新城疫、禽流感病毒抗体的健康公鸡，其目的是为了避免某些鸡只的红细胞可能出现自凝现象。

采血后将血液迅速加入含抗凝剂的容量瓶中混合均匀，抗凝剂与血液的比例为1:4。

离心操作中，注意在离心管加入PBS 液混合时不要用力，防止红细胞破裂产生溶血。

以2000r/min 的速度离心5~10min ，离心次数不宜过多，3次即可。

每次离心后，用吸管吸去上层清液和白细胞膜。

白细胞膜吸除得越干净越好。

配置好的鸡红细胞悬液放置后若出现上清液呈红色，说明有溶血，不可使用。

2试验器材的准备及操作血凝和血凝抑制试验主要用到的器材有96孔V 形微量反应板、单道或多道微量移液器、吸头、恒温培养箱、微量振荡器等。

试验过程全部无菌操作，试验人员注意安全，做好自身防护。

选用清洁干燥的反应板，移液器吸头尽量选用合格的一次性产品，一个吸头只能移取一种溶液。

血凝与血凝抑制试验(附思考题及答案)

• 对照：第11孔只有红细胞和病毒，必然发生凝集；第12孔只有红细胞，只会发生沉淀。
五、结果判定
• 血凝试验：根据血凝价稀释病毒悬液 • 血凝抑制试验：血凝抑制试验效价：出现完全血凝抑制时的最高
血清稀释度。
Байду номын сангаас
六、思考题
• 1、血凝价判定偏高或者偏低对血凝抑制价的判定结果有什么影响？
• 若血凝价判定偏高，即稀释的倍数偏高，使得病毒浓度未达到要求的4个血凝单位，则需要中和病毒的血清更少，即血清的稀释倍数更大，因此结果会偏高。
将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液备用 • 0·85%生理盐水 • 鸡血清
四、实验步骤
• （一）血凝试验 • 1～12孔加入生理盐水 • 第一孔加入50ul病毒悬液，倍比稀释至第11孔 • 1～12孔加入1%的红细胞50ul • 震荡后置于37度恒温箱25～30min后，观察结果 • 病毒的血凝价？ • 病毒的血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
血凝和血凝抑制试验
安尧o
一、实验目的
• 1、掌握病毒血凝与血凝抑制试验的原理。 • 2、掌握试验的设计、操作步骤和结果的判定。
二、实验原理
• 血凝试验（HA）：
• 血凝抑制试验（HI）：
• 某些病毒能够使动物的红细胞发生凝集现象。
• 红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应，红细胞表面存在凝集原
• 在病毒悬液中加入特异性抗体
• 2、血凝和血凝抑制试验的应用？ • 血凝试验可以检测某种病毒是否具有凝集红细胞的能力，测
定病毒的血凝价、滴度，血凝抑制试验可以检测抗体是否有效，抗体的效价。
请在此处添加标题
• （二）血凝抑制试验 • 1～11孔加入25ul生理盐水 • 第1孔加待检血清25ul，倍比稀释至第10孔 • 1～11孔加入25ul4个血凝单位的病毒悬液 • 1～12孔加入1%红细胞50ul • 震荡后置37度恒温箱25~30min观察结果。 • 红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点

血凝和血凝抑制实验

实验三血凝和血凝抑制实验一、实验目的与要求掌握血凝和血凝抑制实验操作及应用二、实验内容H5亚型猪流感抗体检测与分析三、实验步骤（一）血凝（HA）试验1、用微量移液枪在微量反应板的第一排1-12孔均加入50μLPBS，换枪头；2、吸取50μL抗原，加入第一孔，反复吹打5次混匀；3、从第一孔吸取50μL加入第二孔，吹打混匀吸取50μL加入第三孔，如此稀释至第11孔，从第11孔吸取50μL丢弃，第12孔作为红细胞对照；4、各孔均加入50μL0.5%鸡红细胞悬液（已充分摇匀）；5、轻轻混匀，室温25℃静置20min观察结果；（二）血凝抑制（HI）试验1、血清样品处理：先加150μL胰酶溶液于300μL血清中，56℃水浴灭活30min 后冷却至室温；加900μL高碘酸钾，混合，室温孵育15min；加900μL丙三醇盐溶液，混合，室温孵育15min；加750μL生理盐水混合，4℃保存；2、根据HA试验中测定的HI抗原效价配制4单位抗原；3、在微量反应板第5-8排的2-11孔加入25μLPBS，第12孔加入50μLPBS；4、吸取50μL血清（编号为2-4血清、阳性血清、编号为1-4血清、阴性血清）加入第1孔，混匀后吸取25μL于第二孔，混匀后吸25μL于第三孔，依次稀释至第11孔，第11孔混匀后弃去25μL；5、各排前11孔均加入4单位抗原25μL，第12孔作为红细胞对照，室温下25℃静置30min；6、各孔均加入50μL0.5%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻摇匀，室温下25℃静置30min。

四、实验结果及分析血凝（HA）试验，从第三个孔开始显示“滴泪”第一排为阳性对照第二排为阴性对照第三排，血清5-6第四排，血清6-6参考文献[1]GB/T 27535-2011，猪流感HI抗体检测方法[S].。

血凝抑制实验报告三篇

血凝抑制实验报告血凝抑制实验报告三篇血凝抑制实验报告一禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。

该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。

但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。

一、血凝试验操作程序1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。

2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。

3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。

第三排孔至第四排孔同上操作。

4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。

5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。

6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。

以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）二、血凝抑制试验操作程序1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。

（即1HAU抗原除以4）2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μLPBS。

3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。

4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。

5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。

1%鸡红细胞悬液配制注意事项

国畜禽种业中2020.7作者简介:赵明娟(1981.10-),女,河南省人,硕士,高级兽医师,主要从事动物疫病监测工作。

*通信作者。

1%鸡红细胞悬液配制注意事项赵明娟*崔鸿博刘乾(北京市怀柔区动物疫病预防控制中心101400)摘要:1%鸡红细胞悬液是采用血凝和血凝抑制试验开展新城疫和高致病性禽流感抗体检测的重要试剂之一,正确配制红细胞悬液对试验结果的准确性至关重要。

作者根据多年实验室工作经验总结1%红细胞悬液制备过程中的几点注意事项,旨在为广大实验室工作人员提供参考。

关键词:1%鸡红细胞悬液;配制;注意事项参考文献:[1]刘博君,孙德欣,吕亚军.冬季维持蛋鸡高产的主要技术措施[J].畜牧与饲料科学,2010,31(10):138-139.[2]吕桂利.冬季蛋鸡的饲养管理[J].畜禽业,2009(2):49-50.血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验是新城疫和高致病性禽流感诊断技术之一[1,2],也是新城疫和高致病性禽流感免疫抗体检测的重要方法。

1%鸡红细胞悬液是该项试验中的重要试剂之一,准确配制是保证试验结果正确的重要因素。

笔者通过多年临床经验总结了配制该试剂各个环节需要注意的内容,希望能为从业人员提供参考,不足之处欢迎批评指正。

1采集血液根据国标[1,2]要求,需要采集至少3只SPF 或无禽流感和新城疫抗体的非免疫鸡的抗凝血。

实际操作中也可采集1只符合条件的公鸡血液。

每5ml 的血液能获得约2ml 的红细胞。

一般采集公鸡翅静脉血,一人保定公鸡,一人用5ml 一次性注射器采集血液。

采血前需用酒精棉球为采集部位消毒,同时可以起到湿润羽毛,起暴露血管的作用,便于采血者操作。

2抗凝处理2.1阿氏液处理将采集的血液与阿氏液以1:1的比例混合,轻轻地充分摇匀,在4℃环境下可保存两周。

阿氏液的量一定要大于血液量,否则容易造成血液凝固,有结块,影响血球悬液的制备。

实际工作中,若需要的量较小,可将阿氏液放于15ml 或50ml 扣盖离心管中,再将采集的血液沿管壁缓缓注入与其混合。

关于血凝抑制试验中存在的十种问题及解决方法

４＂Ｃ冰箱 ຫໍສະໝຸດ 保存，要力求新鲜，如暂时不测定可冷冻保存，血清使用前要充分摇匀。
５病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀
病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时浓度高低不一，会造成人为误差。抗原和红细胞使用前一定要振荡摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。
刘娟（江苏省邳州市动物卫生监督所）
中图分类号：￥８５１．４文献标识码：ｃ文章编号：１００７．１７３３（２０１３）０３－００４２－０２
及红细胞，防止红细胞溶血，离心的转速为１０００转／ｍｉｎ，
抑制。在基层工作中，微量血凝抑制试验（ＨＩ）广泛应用
于禽流感、新城疫、产蛋下降综合征和传染性支气管炎等母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。凝抑制试
４被检血清的保存不当
剂抽到采血器中，再去采血（一般采用翅静脉采血），将采
出的３￣４份鸡血混合、离心，制备１％鸡红细胞。避免先采血后加抗凝剂，加入时间、方法不当易产生血凝块，影响检测结果。翅静脉采鸡血时，由于血管较细，进针后
第２孔，依次倍比稀释至第４孔，从第４孔吸取ｏ．０２５ｍｌ弃之。每孔均加入０．０２５ｍ１１％鸡红细胞悬液，轻轻混匀，室
随着人们对动物源性食品质量卫生安全要求的日益

血凝实验实验报告

一、实验目的1. 理解血凝现象的原理。

2. 掌握血凝实验的操作步骤。

3. 学习通过血凝实验判断血凝素和血凝抑制抗体的存在。

二、实验原理血凝现象是指某些病毒能够凝集动物红细胞的能力。

利用这一特性，可以通过血凝实验检测病毒的存在以及血清中抗体的水平。

血凝抑制试验（HI试验）是一种常用的血清学检测方法，通过检测血清中的血凝抑制抗体，可以判断感染状态、疫苗接种效果等。

三、实验材料1. 红细胞：鸡红细胞、兔红细胞等。

2. 病毒：流感病毒、副流感病毒等。

3. 血凝素（HA）：用于血凝实验。

4. 血凝抑制抗体（HI）：用于血凝抑制实验。

5. 实验器材：微量移液器、酶标板、振荡器、离心机等。

四、实验方法1. 血凝实验（1）将红细胞用生理盐水洗涤三次，制成1%的红细胞悬液。

（2）取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液。

（3）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后吸取25μl加到第二孔，依次倍比稀释至第二排最后一孔，弃去25μl。

（4）在每孔中加入25μl 1%红细胞悬液。

（5）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30min。

（6）观察结果，记录出现血凝现象的孔数。

2. 血凝抑制实验（1）取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液。

（2）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后吸取25μl加到第二孔，依次倍比稀释至第二排最后一孔，弃去25μl。

（3）在第三至第六排孔中加入不同浓度的血清。

（4）在每孔中加入25μl 1%红细胞悬液。

（5）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30min。

（6）观察结果，记录出现血凝抑制现象的孔数。

五、实验结果与分析1. 血凝实验通过观察实验结果，发现病毒悬液孔数越多，红细胞凝集现象越明显。

说明病毒具有血凝活性。

2. 血凝抑制实验通过观察实验结果，发现不同浓度的血清孔数出现血凝抑制现象的孔数不同。

说明血清中含有能够抑制血凝的抗体。

六、实验结论1. 血凝实验结果表明，病毒具有血凝活性。

血凝与血凝抑制试验的操作细节浅析

健康养殖·诊疗畜牧业环境 2020.2484摘　要：血凝和血凝抑制试验原理是病毒抗原中的血凝素能凝集动物红细胞，形成血凝现象；血凝和血凝抑制试验操作简便、结果快速准确、试验仪器设备少等特点，使其成为区县级兽医实验室检测禽流感与鸡新城疫免疫效果最常用的检测方法之一。

笔者结合自身参加实验室检测工作的实践经验，从对其需要注意的细节进行了归纳分析。

关键词：血凝和血凝抑制试验；操作细节；经验1　检验样品的集采和保存血凝和血凝抑制实验中检测样品为动物血清，血清质量是影响试验的重要因素。

禽类血液样品采用方法以翅下静脉采血为主，采样人员动作要缓慢平稳，避免血管塌陷或刺穿血管，注意每个动物更换一次采血器材；血液样品必须用采样器材从静脉中直接采集，禁止使用屠宰后接取血样或刺穿血管后采集血管溢出血液，造成采集血液出现气泡、红细胞破裂等情况发生，进而影响血清质量。

通过血清自动分离或离心方法获得血清后，要及时开展检测；4d内开展检测的可放在4℃中冷藏保存，同时要确保保存血清容器密闭性良好；超过5d开展检测的要放在-20℃环境下冷冻，在开展检测前，按照检测数量要求，将待检血清取出在室温下使之溶解，避免血清反复冻融。

2　96孔V型板的选用有机玻璃的血凝板可以重复使用，但在检测后V型板会受到污染，所以在试验后要进行仔细清洗，同时要确保动作轻柔，避免孔内因长期摩擦清洗受损，影响以后试验结果；一次性V型板可以避免因清洗不净、反复清洗等原因影响实验结果，但是应选用的一次性反应板要表面平整、无弯曲、无二次压痕、内壁光滑的优质塑料反应板，每次实验前应尽量选择新拆开的一次性反应板，避免长期开放式存放造成污染，影响实验结果。

3　移液器枪头的选用试验操作时应选择密封性好、无弯曲、嘴口尖的一次性优质枪头，防止因添加液体的剂量不准确、液体滞留外壁、液体溢出反应孔等现象造成试验结果不准确。

4　PBS缓冲液的配制PBS缓冲液有缓冲酸碱物质维持反应体系pH值的作用，配制的PBS缓冲液pH值控制在7.0～7.2之间。

保存与现配红细胞悬液在新城疫血凝与血凝抑制中的对比试验

９６孔Ｖ型微量反应板、微量移液器、枪头、Ｌ。振荡１０Ｓ后置３７℃温箱中１０～１５ｍｉｎ，判定
１ｍＬ一次性注射器、５ｍＬ一次性注射器、数个青霉结果。保存１周的红细胞悬液血凝试验的操作同素瓶、烧杯、培养皿等。
最大稀释倍数为抗原血凝价ｌ１］。
１．５血凝抑制试验
根据血凝试验结果，选择４单位抗原作为ＨＩ城疫抗体水平检测的具体操作方法同血清中新城疫
试验的工作量抗原。１）血清中新城疫抗体水平的检测。用微量移液器吸取生理盐水３０Ｉ加入９６孔Ｖ型板的第１检血清３ＯＩ加入第１孑Ｌ混匀后，依次倍比稀释至量移液器向各孑Ｌ加人３ＯＩ１的红细胞悬液；振荡
周的红细胞悬液与现配红细胞悬液进行新城疫ＨＡ１６份鸡蛋对应鸡只的血清（１６份）。与ＨＩ的对比试验。另外，用血清进行检测时，采血１．４血凝试验
对鸡只造成的应激较大，而鸡蛋的获取比较容易，不
１０－１５Ｓ后，室温作用２０ａｉｒｎ，观察结果。
２结果与分析
１）现配１红细胞悬液。标准抗原的凝集价为２）保存１周的１红细胞悬液。标准抗原的凝
饲料２０１３年第１１

血凝血凝抑制试验总结

1、如果是马上要做实验，先把实验所需的抗原、标准阳性血清、阴性血清、待检血清取出回温，如果待检血清已冷藏，可取出放入37℃恒温培养箱中回温，待血清析出后取出（时间大约看具体情况而定）。

2、试验准备阶段：a准备好清洗干净的血清离心管（要有刻度装血液）。

b采血：注射器内先加入一半体积的阿氏液（防止血液凝集，当所需红细胞较多时，加入注射器量程一半的阿氏液，当所需红细胞较少时，加入1.5 ml～2 ml的阿氏液）。

c 1%红细胞悬液的制备采集至少3只SPF（无特定病原体）公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积的阿氏液混合，用PH 7.2、0.01 mol/L PBS液洗涤3次，每次去掉上层的清液后加入少量PBS用注射器反复抽吸使之混匀，再加至所要刻度，放入离心。

每次均以1000 r/min离心10 min，洗涤后用PBS配成体积分数为1%的红细胞悬液，4℃保存备用（实际PBS液用1%的生理盐水代替）。

d所需1%红细胞悬液的体积≥4 HAU+1 ml（本例中为30 ml+1 ml=31 ml），否则配置的1%红细胞悬液不够用（理论计算为30.1 ml，取31 ml以防万一）。

e阿氏液（Alsevers）制备葡萄糖 2.05 g柠檬酸钠0.80 g柠檬酸0.055g氯化钠0.42 g加蒸馏水至100 ml，散热溶解后调PH值至6.1, 69 kPa高压灭菌15 min，4℃保存备用。

3、血凝试验目的：检测试验所用的标准抗原的血凝滴度，如检测结果血凝滴度为210 = 1024，表示标准抗原稀释1024倍仍能与红细胞发生凝集反应。

注意：一瓶新的未使用的抗原（禽流感或新城疫为粉状），需要加入（用注射器）2ml的稀释液（0.9%生理盐水，一般瓶身上有标注加入的体积2ml）a反应板要同时做三排（每排12孔），原因：根据三排的多数结果来确定血凝滴度。

例如：三个结果为：210、29、29，则本次试验标准抗原血凝滴度为29。

1%红细胞悬液的制备实验报告

1%红细胞悬液的制备实验报告
1%鸡红细胞悬液是采用血凝和血凝抑制试验开展新城疫和高致病性禽流感抗体检测的重要试剂之一，正确配制红细胞悬液对试验结果的准确性至关重要。

产品名称：1%鸡红细胞悬液
规格：100ml无菌采血，阿氏液保存
储存：2℃-8℃保存
1%鸡红细胞悬液制备方法：
1.准备好试验所需的所有材料，包括离心管、低速离心机、试管架、PBS缓冲液（生理盐水）、注射器、100ml大青瓶及塞子等等。

2.抗凝血第一次离心。

用注射器采集若干毫升抗凝鸡血，根据需要确定。

将抗凝血缓慢注入离心管内，盖好盖子后将离心管放入离心机，配平后1500r/min离心5min，离出抗凝剂及血浆等。

3.第一次离心结束后，将上层液体及白细胞层用注射器吸出，加入适量PBS缓冲液，配平后进行第二次离心，1500r/min离心
5min，进一步清洗红细胞。

4.第二次离心结束后，同样吸出上层液体及白细胞层，再加入适量PBS缓冲液，配平后进行第三次离心，2000r/min离心10min，进一步清洗红细胞。

5.离心结束，后一次吸出上层清液。

量取99ml PBS缓冲液加入100ml大青瓶（或其他容器），用注射器（或其他，如吸管）吸取
1ml洗净的红细胞，缓慢加入99ml PBS缓冲液中，塞紧瓶塞。

6.1%红细胞制备好后，一般置于2℃-8℃冰箱保存，用时充分混匀即可。

血凝实习报告

血凝实习报告一、实习背景及目的随着医疗技术的不断发展，临床实验室在诊断和治疗疾病中发挥着越来越重要的作用。

血凝试验作为临床实验室常见的一项检测项目，对于诊断出血性疾病、评估患者凝血功能以及指导临床治疗具有重要意义。

本次实习旨在了解血凝试验的基本原理、操作步骤以及临床应用，提高自己的实践操作能力。

二、实习内容及过程1. 血凝试验基本原理的学习血凝试验是利用血液中的凝血因子在一定条件下发生反应，形成凝血酶，进而使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成血凝块的过程。

通过观察血凝块的形成情况，可以判断患者的凝血功能是否正常。

2. 血凝试验的操作步骤（1）准备工作：取96孔酶标板，加入适量的PBS液。

（2）标准抗原的制备：将标准禽流感抗原加入到第一排第一孔中，充分混匀。

（3）抗原的倍比稀释：从第一排第一孔吸取抗原液，加入第二排第一孔，混匀后再次吸取，加入第三排第一孔，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔。

（4）加入鸡红细胞悬液：依次向第一至第五排的每孔中加入25L的1%鸡红细胞悬液。

（5）振荡与观察：将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30分钟，观察结果。

（6）结果判定：将板作45度倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。

以完全凝集（不流淌）为阳性，反之则为阴性。

3. 临床应用及意义血凝试验在临床上有广泛的应用，如诊断出血性疾病、评估患者凝血功能、监测抗凝治疗效果等。

通过血凝试验的结果，可以帮助医生判断患者的病情，制定合理的治疗方案。

三、实习心得与体会通过本次实习，我对血凝试验的基本原理、操作步骤及临床应用有了更深入的了解。

血凝试验作为一种常见的临床实验室检测项目，在疾病的诊断和治疗中发挥着重要作用。

在实际操作过程中，我认识到严谨的操作态度、仔细观察实验现象的重要性，以确保检测结果的准确性。

同时，我也意识到理论知识与实践操作之间的联系，今后在学习过程中要更加注重理论与实践的结合。

总之，本次血凝试验实习使我受益匪浅，不仅提高了自己的实践操作能力，而且加深了对血凝试验的认识。

血凝试验实训报告

一、实验目的通过本次实训，了解血凝试验的基本原理和操作方法，掌握血凝试验在疾病诊断和预防中的应用，提高实验室操作技能。

二、实验原理血凝试验是一种利用病毒表面的血凝素与宿主红细胞表面受体结合，导致红细胞凝集的试验方法。

根据病毒血凝素与宿主红细胞表面受体的结合，可以检测病毒的存在和含量。

三、实验材料1. 实验仪器：血凝板、微量移液器、振荡器、恒温箱等。

2. 实验试剂：待检血清、阳性对照血清、阴性对照血清、1%鸡红细胞悬液、生理盐水、病毒抗原等。

四、实验步骤1. 标准曲线制备（1）取96孔血凝板，每孔加入25μl生理盐水。

（2）将阳性对照血清、阴性对照血清和待检血清分别进行倍比稀释，加入对应的孔中。

（3）将病毒抗原加入第一孔，混匀后依次向其他孔中加入25μl，进行倍比稀释。

（4）向所有孔中加入25μl 1%鸡红细胞悬液。

（5）将血凝板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30分钟。

（6）观察红细胞凝集情况，记录各孔的红细胞凝集程度。

2. 结果分析（1）根据标准曲线，确定待检血清的病毒滴度。

（2）计算待检血清的病毒滴度，以血凝单位（HI）表示。

五、实验结果1. 标准曲线制备：根据阳性对照血清和阴性对照血清的稀释度，绘制标准曲线。

2. 待检血清病毒滴度：根据待检血清的稀释度和红细胞凝集程度，确定待检血清的病毒滴度。

六、实验讨论1. 血凝试验是一种简单、快速、灵敏的病毒检测方法，广泛应用于病毒性疾病诊断和预防。

2. 在实验过程中，应注意操作规范，避免人为误差。

3. 血凝试验的结果受多种因素影响，如试剂质量、操作技巧、实验条件等，因此在实验过程中要严格控制实验条件。

4. 本次实训提高了我们对血凝试验原理和操作方法的了解，为今后的实验室工作奠定了基础。

七、实验总结通过本次实训，我们掌握了血凝试验的基本原理和操作方法，了解了血凝试验在疾病诊断和预防中的应用。

在实验过程中，我们学会了如何制备标准曲线、如何观察红细胞凝集情况，并计算待检血清的病毒滴度。