8细胞工程第八章
细胞工程习题总结及参考答案
一．思考题1. 为什么要严格保持细胞工程操作环境和物品的无菌？答：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。
培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。
2. 配制培养基时，为什么要先配制母液？答：1.方便配置其他培养基；2.保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取第三章一．思考题1. 胚状体与合子胚有何异同？答：异：体细胞胚又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
子胚是指由植物的雌雄配子融合形成的合子继而发育形成的胚，经过受精作用。
同：都含有一整套遗传信息,都可以发育成新一代生物个体.二．练习一、单选题1、植物组织培养是建立在___理论基础上的。
(B)A进化论 B植物细胞全能性C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含___。
(C)A含N物质 B碳源 C血清 D生长素3、过滤除菌适用对象___。
(D)A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。
(B)A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（A）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（C）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题•1、非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织具有同样的再生能力（×）•2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。
（×）•3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。
细胞工程智慧树知到答案章节测试2023年济宁医学院
第一章测试1.下列哪个不是细胞工程的研究对象?（）。
A:酵母B:动植物细胞核C:原生质体D:动物胚胎答案:A2.下列哪项不是细胞工程的特点?（）。
A:理论性B:前沿性C:应用性D:争议性答案:A3.下列哪项不是细胞工程发展经历的阶段?（）。
A:诞生期B:探索期C:缓慢发展期D:快速发展期答案:C4.1907年，从蝌蚪脊索中分离出神经嵴组织，并在淋巴液中成功培养几周，开创了组织培养的先河的是生物学家（）。
A:HaberlandtB:KohlerC:RouxD:Harrison答案:D5.克隆动物是属于（）。
A:组织与器官修复技术B:新品种培育技术C:生物制品生产技术D:动植物快速繁殖技术答案:D第二章测试1.下列细胞工程实验室设置的原则有误的是（）。
A:要求严格保持无菌环境B:实验室一般应建在通风效果较好的位置C:细胞工程实验室应具有无菌操作、培养与观察、制备、清洗与消毒、储藏等功能D:无菌操作室应划分为更衣间、缓冲间与操作间答案:B2.植物细胞工程与动物细胞工程实验室设置最大的区别为（）。
A:无菌环境要求的严格程度B:温度的控制要求C:光照时间与强度的控制要求D:墙面及地面设施的要求答案:C3.下列哪个设置属于细胞工程实验所必须的？（）。
A:超净台B:荧光定量PCR仪C:超速离心机D:酶标仪答案:A4.下列动物细胞常放置在下列哪种仪器中进行培养?（）。
A:电热干燥箱B:光照培养箱C:恒温震荡培养箱D:二氧化碳培养箱答案:A5.埃博拉病毒是一种能够引起人类和灵长类动物产生埃博拉出血热的烈性传染病病毒，死亡率高达50%-90%之间。
目前对埃博拉病毒病尚无特效治疗方法，根据实验室生物安全标准，埃博拉病毒的研究需要在下列哪种级别的实验室开展？（）A:P4实验室B:P1实验室C:P3实验室D:P2实验室答案:A6.下列对细胞工程实验室的生物安全要求说法正确的是？（）。
A:实验使用的器皿需采用专门的高压消毒袋盛放，并在清洗前先进行高压消毒B:所有操作均采用专门的器械吸取，不能口吸C:着专门实验服D:操作前后要消毒答案:BCD7.实验中常常将动物细胞置入-20度冰箱中长期储藏。
细胞工程知识点及重点难点总结
第一章绪论1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程,⏹细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。
⏹广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。
2、细胞工程的研究内容（研究生物类型,实验操作对象）⏹根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。
⏹动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术;胚胎工程技术 (核移植、胚胎分割等)；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。
⏹植物细胞工程包括:植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。
3、细胞工程的重要应用（植物、动物）⏹植物细胞工程的应用：脱毒和快速繁殖细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性利用细胞融合技术,克服远缘杂交不亲和性倍性育种离体种质保存细胞培养生产有用物质⏹动物细胞工程的应用动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）新品种培育试管动物与婴儿组织工程珍稀动物资源的保存与保护第二章细胞工程基础1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。
2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。
3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能.4、细胞多能性：指随着胚胎发育,有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能.5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程6、愈伤组织:脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。
愈伤组织的种类胚性愈伤组织（Embryonenic callus）:表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。
八年级生物上册全册教案
八年级生物上册全册教案第一章：生物的特征1.1 生物的生活需要营养教学目标：了解生物的生活需要营养的基本概念，理解生物与非生物的区别。
教学内容：生物的定义，生物的生活需要营养的例子。
1.2 生物能进行呼吸教学目标：了解生物能进行呼吸的基本概念，理解呼吸作用的意义。
教学内容：呼吸作用的定义，生物能进行呼吸的例子。
1.3 生物能排出身体内产生的废物教学目标：了解生物能排出身体内产生的废物的基本概念，理解废物排出的重要性。
教学内容：废物的定义，生物能排出废物的例子。
第二章：生物的生长和繁殖2.1 生物能生长和繁殖教学目标：了解生物能生长和繁殖的基本概念，理解生长和繁殖的意义。
教学内容：生长的定义，繁殖的定义，生物能生长和繁殖的例子。
2.2 生物的遗传和变异教学目标：了解生物的遗传和变异的基本概念，理解遗传和变异在生物进化中的作用。
教学内容：遗传的定义，变异的定义，生物的遗传和变异的例子。
第三章：生物的分类和命名3.1 生物的分类教学目标：了解生物的分类的基本概念，理解生物分类的意义。
教学内容：生物分类的定义，生物分类的依据，生物分类的例子。
3.2 生物的命名教学目标：了解生物的命名的基本概念，理解生物命名的规则。
教学内容：生物命名的定义，生物命名的规则，生物命名的例子。
第四章：生态系统4.1 生态系统的概念和组成教学目标：了解生态系统的概念和组成的基本概念，理解生态系统的作用。
教学内容：生态系统的定义，生态系统的组成，生态系统的作用。
4.2 食物链和食物网教学目标：了解食物链和食物网的基本概念，理解食物链和食物网的作用。
教学内容：食物链的定义，食物网的定义，食物链和食物网的作用。
第五章：人类与生物圈5.1 人类与生物圈的关系教学目标：了解人类与生物圈的关系的基本概念，理解人类与生物圈相互作用的重要性。
教学内容：人类的定义，生物圈的定义，人类与生物圈的关系。
5.2 保护生物多样性的措施教学目标：了解保护生物多样性的措施的基本概念，理解保护生物多样性的重要性。
基因工程-酶工程-细胞工程重点
目录基因工程重点 (1)第1章绪论 (1)第2章基因工程的酶学基础 (1)第3章基因工程载体 (3)第4章基因工程的主要技术及其原理 (4)第5章目的基因的获得 (7)第6章DNA重组的操作 (8)第7章外源基因的表达及其优化策略 (8)酶工程重点 (13)第一章绪论 (13)第二章酶工程基础 (13)第三章酶的发酵工程 (15)第四章酶的分离工程 (16)第五章固定化酶和固定化细胞 (18)第六章化学酶工程 (19)第七章非水相酶催化 (20)第八章核酶 (22)第十章酶抑制剂 (22)第十一章酶的应用 (23)细胞工程重点 (25)第一章绪论 (25)第四章细胞培养 (25)第五章细胞融合与单克隆抗体 (27)第六章胚胎工程 (28)第七章干细胞与组织工程 (29)第八章核移植技术和动物克隆 (31)第九章转基因动物和生物反应器 (32)第十章动物染色体工程 (34)第十一章植物组织培养 (34)第十二章植物的快速繁殖 (36)I第十三章单倍体诱导和育种 (37)第十四章植物胚胎培养 (38)第十五章体细胞胚发育和人工种子 (38)第十六章植物原生质体融合技术 (39)第十七章植物染色体工程 (41)第十八章植物转基因技术 (42)II基因工程重点第1章绪论一、基因工程概念(Conception )：基因工程(gene engineering)：就是对不同生物的遗传物质，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。
二、基因工程一般操作步骤：1、目的既赢得获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测和表达产物的测定三、基因工程四大要素（Four elements）：1、供体基因2、载体3、工具酶4、受体细胞（细菌、植物和动物）第2章基因工程的酶学基础一、名词解释：1.限制/修饰系统(R-M, Restriction-modification system)——任何一种生物体都存在防御外界物质进入的机制。
细胞工程简介
细胞工程主讲人王文星学前导引本课程为必修考试课,理论授课32学时，期末考试闭卷总成绩为100分:出勤+课堂提问占10％，平时测验占20%,期末试卷占70％.平时测验1～次，随堂考试,闭卷。
选用教材：安利国,杨桂文.«细胞工程»第3版，科学出版社，2016主要参考教材：李志勇.«细胞工程»第2版，科学出版社，2010殷红.«细胞工程»第2版,化学工业出版社，2013罗立新等。
«细胞工程»,华南理工大学出版社，2003第1章细胞工程简介内容提要一、定义五、主要研究内容二、与其它生物工程的关系六、重要应用三、发展历史七、本章小结四、研究对象八、思考题一、细胞工程定义细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获取新型生物或特种细胞产品的一门科学技术。
广义的细胞工程：包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。
二、细胞工程与其它生物工程的关系生物化学工程为基因工程、细胞工程、微生物工程、蛋白质工程、酶工程、代谢工程提供产业化技术支持.基因工程技术为细胞工程提供转基因细胞。
细胞工程技术为微生物工程、酶工程及工程产业化提供充足的经过遗传改良和性状稳定的微生物、动植物细胞原料.总结：细胞工程技术是现代生物工程技术各领域连接的桥梁和纽带；与其它生物工程技术是密切联系，不可分割的有机整体。
三、细胞工程发展历史细胞工程的理论基础是细胞学说和细胞全能性学说。
在植物学界，100年前，德国学者Haberlandt（1902)发表了著名的论文《植物细胞离体培养实验》,提出了细胞全能性的观点。
20AD中叶，植物细胞组织培养与细胞的遗传操作相结合，发展成为植物细胞工程。
20AD60s末兴起的植物单倍体技术是一项在植物育种上用途广泛的细胞工程技术。
第八章 细胞工程基本原理
第八章细胞工程基本原理8－1 什么是细胞工程？答：所谓细胞工程是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。
8－2 动物细胞的主要生理特点是什么？答：细胞的主要生理特点表现在如下几个方面。
1. 分裂周期长——动物细胞的分裂周期相对长，一般完成一个细胞分裂周期需12－24h。
2.需贴附于基质生长，并有接触抑制现象——大多数二倍体细胞的生长都需要在一定的基质上贴附，伸展后才能生长繁殖；当细胞在基质上进行分裂增殖并逐步汇成片时（细胞与周围细胞接触），细胞就停止增殖——接触抑制现象。
3.生长寿命有限——正常二倍体细胞传代培养都是有限的，大约在50代左右，然后细胞就会逐步死亡。
4.对环境敏感——由于动物细胞没有细胞壁的保护，使得周围环境物理、化学因素的变化均会影响到动物细胞的生长。
5.对培养基要求高——动物细胞的培养不仅需要 12种必须的氨基酸、8种以上的维生素、多种无机盐、微量元素和葡萄糖外，还需要多种细胞生长因子和贴壁因子。
6.蛋白质的合成途径和修饰途径功能与细菌不同——动物细胞蛋白质的合成在游离的核糖体和粗面型内质网上都可以进行。
内质网上合成的蛋白质多为糖蛋白，需要糖基化；而细菌细胞则没有糖基化过程。
8－3 植物细胞的主要培养特性是什么？答：植物细胞的培养特性主要表现在如下几个方面。
1.个体较大——植物细胞个体一般较微生物大，其直径通常约在10-200微米之间（微生物的体形一般只有几个微米），有纤维素细胞壁。
—76—2.常以非均相集合细胞团方式存在——植物细胞很少单细胞的形式悬浮生长，通常是以直径2mm 大小的多细胞团方式存在于培养系统中，由于组成细胞团的细胞数量差异，容易在培养系统中形成非均匀相的集合细胞团。
细胞工程期末考试复习题目
细胞工程期末考试复习题目细胞工程填空：20个ⅹ 0.5分=10分选择：10个ⅹ 2分=20分名词：10个ⅹ 6分=30分简答：5个ⅹ 6分=30分论述: 1个ⅹ 10分=10分第一章绪论1、细胞工程的定义及特点？细胞工程（cell engineering）：是指主要以细胞为对象，应用生命科学的理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞，组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
细胞工程的特点：前沿性：现代生物技术的热点争议性：新技术给伦理道德带来的冲击综合性：多学科交叉应用性：工程类课程，重在产品与技术第二章细胞培养的设施与基本条件：1、什么是细胞及组织培养？组织工程（tissue culture）：习惯上繁殖所有的体外培养，即器官培养，组织培养和细胞培养的总称。
其本意是指从活的机体中去取出器官、组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、室温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能能的技术称为组织培养。
细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，活在培养液中呈悬浮转肽培养的技术称为细胞培养。
2、了解细胞培养实验室的基本规划及相关注意事项？实验室规划：⑴准备室：培养用具清洗、消毒和做实验准备的场所，一般建在通风和光线充足的地方（阳面）。
⑵缓冲间：保护操作室的无菌环境，避免空气对流。
⑶操作间：要求无菌。
最好设在阴面，防止室温过高；天花板高度不超过2米，保证紫外线有效杀菌效应；门用拉门，避免空气流动。
室内天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，便于清洗与消毒，不易在墙角推挤灰尘。
3、细胞培养的设备有哪些？有何基本作用⑴超净工作台①最好安装在无尘室内，最好在无菌间，避免过多灰尘使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。
②新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和其周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，在采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
细胞工程思考题参考答案
第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。
离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。
有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。
从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。
贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。
由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
《细胞工程》课程说明书
[4] http://61.187.179.69/ec2006/C217/kcms-1.htm
四、教学信息
教学目标
通过本课程的学习使学生掌握细胞工程的基本操作技术、原理及研究对象的特点，为从事生物学相关领域的研究奠定良好的基础。
扩展专题2:科研论文介绍-研读及撰写（2学时）
第17周
课程总结、扩展与答疑（2学时）
答疑
教学方法
与手段
通过教材进行基本内容讲授，多媒体辅助，小组讨论等教学手段相结合。
学习方法
课上听讲，要点分析，分组讨论，课堂小结，课后复习、浏览教学网站、去开放实验室实践。
五、实践教学（独立设课另安排）
六、成绩考核
平时成绩
思考与作业练习见课件
第3周
第3章植物组织与器官培养（4学时）
3.1植物组织培养（2学时）
3.2植物胚胎培养
3.3毛状根培养（2学时）
思考与作业练习见课件
第4周
第4章人工种子与植物脱毒（2学时）
4.1人工种子
4.2植物脱毒
第5周
第5章植物细胞培养与次级代谢产物制备（2学时）
第6章原生质体培养与诱变（2学时）
第6周
第7章细胞融合与体细胞杂交（4学时）
7.1细胞融合（2学时）
第7周
7.2体细胞杂交（2学时）
第8章多倍体与单倍பைடு நூலகம்植物（4学时）
8.1多倍体植物（2学时）
思考与作业练习见课件
第8周
8.2单倍体与纯合二倍体植物（2学时）
视频文献拓展等参考课件
第9周
劳动周
第10周
第9章植物离体受精（2学时）
细胞工程第八章 植物种质资源的保存
二、超低温保存技术 (二) 影响超低温保存效果的主要因素及调 控措施。
1．材料的基本特性 2．预培养和低温锻炼 3．冰冻保护剂的应用 4．化冻方法 5．再培养
第八章 植物种质资源的保存
复习思考题 1．植物离体超低温保存的概念。 2．植物材料超低温保存的细胞学基础。 3．超低温保存的方法及其技术要点。 4．影响超低温保存效果的主要因素及 调控措施。
2、 贮藏保存
用控制贮藏条件 ( 主要是温度和湿度 ) 的方法 , 来保持 品种资源种子的生活力。
长期贮藏保存种子生活力的技术关键是低温和干燥 , 通 过控制种子周围环境中的温湿度 , 迫使种子处于代谢作用 的最低限度。
贮藏保存种质资源采用种质库 , 种质库分三种：长期库、 中期库和短期库。
第八章 植物种质资源的保存
（2）慢速解冻 先置于0 ℃解冻，在逐渐升温至室温。可 以使水分慢慢渗入细胞内。
第八章 植物种质资源的保存
第三节 超低温保存
二、超低温保存技术
7．保存材料复苏培养
保存材料解冻后，需用液体培养基冲洗几遍，除去冷冻 防护剂的残留毒害。
然后可以在固体培养基上进行培养，进行正常生长，再 生植株。
第八章 植物种质资源的保存
第三章、细胞工程实验室设置与基本技术
第八章 植物种质资源的保存
第三节 超低温保存
二、超低温保存技术 冷冻处理方法 （1）快速冷冻
将植物材料从0℃ 或者其它预处理温度直接投入液氮 中保存的方法。降温速度为1000 ℃/min。植物体内 的水分在降温冷冻过程中，从-10℃—-140℃范围内 是冰晶形成和增长的危险温度区，到-140℃时完全停 止增长，关键是利用高速降温越过冰晶增长的危险温 度区，不能形成致死的冰晶，细胞内水分固化，不会 破坏细胞结构。
第八章 突变体的诱导与选择
在离体筛选时，由于生理上的适应性，在选择因子作用下 生存下来的细胞和愈伤组织有时并未发生突变，当选择因 子消失时，这种抗性也随之消失，也就是修饰变异，为了 消除这种修饰变异，获得遗传性的突变，离体筛选时对选 择对象（细胞或愈伤组织）原则上需要在选择压的作用下 反复进行加强性的处理。 Nabor等（1975，1980）以NaCl作为选择因子获得了烟草 耐盐突变体，就是第一步在培养基中加入1.6g/L NaCl， 然后逐渐提高NaCl浓度，在半年内一直提高到8.8g/L，而 获得耐盐的突变体细胞系，耐性细胞在含有0.64g/L NaCl 的培养基中分化生长，对植株及其后代的观察表明，从抗 性细胞系分化而得到的植株其后代对NaCl的耐细胞进行悬浮培养，用甲基磺 酸乙酯（EMS）作为诱变剂，在0～-3℃条件下，得到两个 抗低温的突变细胞系。
三、变异的来源
1 .离体培养细胞的自发突变
组织培养后植株变异的原因： 源植株中预先存在的变异表达。 组织培养过程中引起的可遗传的变异。植株的再生方式、 生长调节物质、继代培养的时间。 由外源遗传及生理作用引起的变异 植物的细胞、组织、在离体培养时，由于环境条件可以 人为控制和培养基中化学因素的影响，会发生各种各样 的变异，外植体体细胞发生的变异称为体细胞变异
在选择突变体中，确定抑制物浓度的原则 是：①如果筛选对抑制剂的抗性比起始材 料高许多倍的突变体，可直接利用比较高 浓度的抑制剂，它这样可以缩小寻找的范 围。此方法存活率极低，只要存活，便是 高抗突变体。②如果需中等程度抗性的突 变体，或估计只能找到这种突变体时，就 选用较低浓度的抑制剂，在抑制剂浓度下 能正常生长的组织继续进行培养分化成植 株，就会得到所需要的抗性突变体。
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8.2.2克隆的相关理论基础
细胞的全能性与细胞机能特化两者之间是 相互矛盾的。单细胞微生物具有全能性， 而高等生物细胞有了机能特化趋势
植物细胞具有全能性而动物发育过程中分 化了的细胞不能再产生完整的个体，因为 分化细胞的基本组发生了不可逆的修饰。 Spemann提出了“分化了的细胞核移入卵 子中能否指导胚胎发育”这样的设想 。
8.2.2克隆的相关理论基础
8.2.3克隆的技术方法
8.2.4克隆技术的应用与意义
8.2.5正确看待克隆技术
8.2.6克隆动物的现状和发展趋势
8.2.1克隆的定义
克隆（clone)一词源于希腊语clonos，原意指 用于扦插的枝条twig，也就是无性繁殖 本意指遗传上完全相同的分子，细胞或来自于 同一祖先的生物个体的无性繁殖群体 外延的含义：1、核移植操作可以得到重组细 胞，重组细胞可以繁殖成一个无性系；2、基 因工程可将特定基因拼接到质粒的复制子上随 复制子的复制，也能得到DNA的无性系 本章专指核移植技术得到无性系动物
第八章 细胞重组与克隆技术
8.1细胞重组 8.2克隆技术
8.1细胞重组
细胞重组（又叫细胞拆合）是指从活
细胞中分离出细胞器及其组分，然后体外 一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其 组分进行重组装配成为具有生物活性的细 胞或细胞器的一种实验技术
8.1.1特点和意义
8.1.2细胞重组技术
8.1.1特点和意义
Prim Singh
Dolly标本与Ian Wilmut
鱼 核 移 植
2.7kg/5months and 7.4kg/17months
快速生长的鲤鲫核鱼
据俄罗斯新闻网2005年10月29日报道，意大利 克雷莫纳繁殖技术研究中心克隆技术专家组组 长切萨雷· 加利教授介绍说，该中心还是首次 一次性成功地克隆出如此多的哺乳类动物。目 前，小猪仔们的健康状况良好。加利教授认为， 克隆猪技术的成果对医学界非常有研究价值， 它有助于医学工作者们进一步探索将动物内脏 移植到人体的可能性。
意大利著名的克雷莫纳繁殖技术研究中心又 报出喜讯，该中心的科学家们在2年前克隆 出世界上第一匹马后，日前又一次性成功地 克隆出了14只小猪仔。
报道说，2003年，世界上第一匹克隆马就诞 生于意大利克雷莫纳繁殖技术研究中心，此 外该中心还成功地克隆过奶牛。目前，克隆 猪技术是欧盟最重要的生物技术开发工程之 一，欧洲生物科学家希望通过克隆猪来更好 地研究哺乳类动物干细胞的克隆方法。
1、胚胎细胞核移植：将未着床的早期胚胎分散成 单个细胞，然后利用细胞融合技术进行核移植。 2、胚胎干细胞核移植：先培养胚胎干细胞系，再 进行核移植。 3、胎儿成纤维细胞核移植：从早期胚儿分离出胎 儿成纤维细胞用于核移植。
8.2.3.4体细胞克隆技术
体细胞克隆技术是将动物体细胞经过抑制培养，使 其处于休眠状态，利用细胞核移植技术将其导入去 核卵母细胞，发育成胚胎后移植至受体，妊娠产仔， 克隆出成体动物。
8.2.3.2核移植技术
细胞核移植要求供体细胞与受体细胞处于 相同的细胞周期，实验中利用的细胞分裂 同步化的方法为“饥饿法”。 1、供体和受体的准备 2、去卵膜和卵核 3、供体细胞制备 4、移核
8.2.3.3克隆动物一般制备技术
不同来源的细胞核都可用作核供体如胚胎细胞、干 细胞、成纤维细胞和体细胞，其中胚胎细胞的应用 比较普遍，体细胞克隆意义最大。
体细胞克隆羊“Dolly”是于1997年2月23日由英国爱丁堡罗 斯林研究所和PPL制药公司的胚胎学家伊恩.维尔穆特博士的 研究小组克隆出一只雌性小绵羊。2003年2月14日多利因患 严重肺病罗斯林研究所人员不忍视其痛苦的等特死亡，无奈 之下施以安乐死。共存活6年，其间于1998年与威尔士山羊 交配自然怀胎产下一小羊“邦尼”。 (普里姆· 塞恩 Prim Singh )
8.1.2.6细胞器拆合重组举例
叶绿体与线粒体是研究较多的移植材料 叶绿体的移植方法：将分离纯化的叶绿 体与原生质体一道培养，通过细胞的胞 饮作用将叶绿体摄入原生质体，经过培 养，原生质体再育成完整的植株。 线粒体的移植方法较多，有微注射法、 载体转移法以及胞饮摄入等。
8.2 克隆技术
8.2.1克隆的定义
8.2.3.1细胞核移植
Spemann提出设想但由于技术限制没有将细胞核 移入卵子。 1952年美国两位科学家利用两栖类卵细胞建立了细 胞核移植技术，并于1955年培育出成体豹蛙 1958到1962年利用细胞核移植技术得到非洲爪蟾 1961年童弟周教授以金鱼为材料进行鱼类不同亚科 间细胞核移植成功。 1989年利用核移植技术无性繁殖了鲤鲫核鱼新品种。
8.1.2.3细胞破碎方法
超声波破碎法 反复冻融法 化学裂解法 高速组织捣碎法
8.1.2.5胞质体、核体和微细胞的制备
细胞松弛素B处理体外培养细胞能诱发培养 细胞排核，结合高速离心就可得到胞质体
核体为与胞质分离得到的细胞核，带有少 量胞质并围有质膜，称为“核体” 制备微细胞需首先用秋水仙素处理细胞可 得微细胞
8.2.3克隆的技术方法
8.2.3.1细胞核移植
8.2.3.2Βιβλιοθήκη 移植技术8.2.3.3克隆动物一般制备技术 8.2.3.4体细胞克隆技术
8.2.3.1细胞核移植
细胞核移植技术是一种利用显微镜操作
技术将一种动物的细胞核移入同种或异种 动物的去核成熟卵内的精细技术 根据核供体可分为胚胎细胞核移植与体细 胞核移植 理论基础：生物的主要遗传物质存在于细 胞核中，因此核移植的受体将具有与核移 植供体完全相同的遗传基础。
维尔穆特表示不会接受克隆羊的最初设想出自亚洲人的头脑。
8.2.4克隆技术的应用与意义
1、检验动物细胞全能性
2、加速动物繁殖，优良育种，保护珍贵 动物 3、医药领域解决人体器官异体移植问题
8.2.5正确看特克隆技术 8.2.6克隆动物的现状和发展趋势
胚胎细胞核移植培育克隆鼠的过程
多莉
多莉
多莉与邦尼
8.1.2细胞重组技术
8.1.2.1显微操纵术 8.1.2.2细胞分离技术
8.1.2.3细胞破碎方法
8.1.2.4细胞器的分离 8.1.2.5胞质体、核体和微细胞的制备 8.1.2.6细胞器拆合重组举例
8.1.2.1显微操纵术
显微操纵术需要借助专门的细胞操作仪， 用微细玻璃针或用微吸管、微电极、微 热电偶等斜插入细胞中去可以将细胞核 挑出来造就去核细胞，也可以进一步作 移核实验与电生理实验，还可以进行各 部分物质的抽取和移植各种物质的注入， 测量微电位的变化等。
8.1.2.2细胞分离技术
根据细胞性质选择合适的分离方法 细胞大小
细胞密度
细胞表面电荷 细胞中一个或多个成分的荧光强弱 细胞对其他介质的吸附作用
8.1.2.2细胞分离技术
可选用的方法： 梯度沉降分离法：根据细胞大小不同 分离细胞 等密度沉降分离法 ： 根据细胞密度 差异来分离细胞 流式细胞仪分离法 ：细胞表面标志
真核生物的细胞核与细胞质相互配套、精 确平衡，但细胞核的作用显的较为突出 细胞生长的过程就是一个在活体内自我装 配的过程 细胞重组技术是一种体外装配技术，需要 细胞分离技术与细胞融合技术结合使用
8.1.2细胞重组技术
细胞重组技术的基本形式： 胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种 微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体 胞质体与核体重新组合形成重组细胞