用光学二次谐波成像技术观察皮肤内不同种类的胶原
生物化学在医学中的应用
生物化学在医学中的应用生物化学是一门研究生命体中物质的合成、分解、代谢、调节等过程的科学,与医学密切相关,应用广泛,其中不乏一些重要的医学应用。
一、代谢物检测在医学中,生物化学技术常常被用于代谢物的检测。
生物体内的代谢物种类繁多,不同代谢物的含量和比例通常反映着生命体内的健康状况。
因此,通过代谢物检测,医生可以更好地了解病人的健康情况。
举个例子,肝脏是人体内的一个代谢器官,它通过代谢、解毒、合成等方式维持人体的正常情况。
如果肝脏受到影响,就会影响健康。
临床上,医生可以通过检测尿液或血液中肝脏相关的代谢物来判断肝脏的健康情况,如血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等。
二、药物代谢动力学除了代谢物检测,生物化学技术还广泛应用于药物代谢动力学研究中。
药物代谢动力学是药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄的过程。
药物代谢动力学的研究对于药物的研发和治疗具有重要意义。
通过药物代谢动力学研究,可以了解药物在人体内的分布情况和代谢速度,进而制定更好的治疗方案。
例如,研究表明,葡萄柚汁中的苯并芘酮,可以抑制人体内一种药物代谢酶,从而降低某些药物的代谢速度,增加对其的暴露。
这种药物代谢动力学的研究结果可以影响临床医生的用药选择和用药方案。
三、生物分子原位显微成像近年来,生物化学在医学中的应用还从单一的代谢物检测和药物代谢动力学研究中拓展到了生物分子原位显微成像。
生物分子原位显微成像技术可以实时、非侵入性地观察和记录生命体内分子的动态过程,为疾病的早期预警、再次细胞学研究等提供了新的思路和方法。
例如,SHG 显微镜是一种通过利用组织内二次谐波生产出的成像技术,能够观察到组织内的胶原蛋白等具有非线性光学特性的生物分子结构。
SHG 显微镜已经应用于胶原蛋白疾病、神经退行性疾病、肿瘤等多个方面的研究。
总而言之,生物化学已经深入到医学中的多个领域,为医学的诊断、治疗、预防和研究提供了全新的思路和技术手段。
未来,随着科学技术的进步,生物化学必将为医学的发展作出更大的贡献。
双光子显微镜的应用优势与维护要素
综 述①中山大学中山医学院科研仪器中心 广东 广州 510080*通信作者:**************作者简介:李娟,女,(1983- ),硕士,助理实验师,从事科研仪器共享服务与管理工作。
中国医学装备2021年12月第18卷第12期 China Medical Equipment 2021 December V ol.18 No.12双光子显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜及双光子激发技术的一种新精密仪器。
在激光扫描显微镜的基础上,双光子显微成像技术以红外飞秒激光作为光源,受散射影响较小,易穿透样本,可深入组织内部非线性地激发荧光,减小激光对生物体的损伤,光毒性小且具有高空间分辨率,适合生物样品的深层成像及活体样品的长时间观察成像[1-2]。
双光子显微镜已成为生命科学各领域重要的研究工具,可在细胞甚至是亚细胞水平对活体动物的神经细胞形态结构、离子浓度、细胞运动、分子相互作用等生理现象进行直接的长时间成像监测,还能进行光激活染及光损伤等光学操纵,广泛应用于脑科学、免疫学、肿瘤、胚胎发育等生物医学相关研究。
通过阐述双光子显微镜的工作原理、样品前期准备、成像难点及设备使用及日常维护要点,梳理双光子激光共聚焦与其他同类成像类设备在成像原理、配置参数、成像特点及应用领域等方面的不同,为使用者提供更多实验方法参考,使之更好地服务于医学临床、教学和科研。
1 双光子显微镜成像技术原理、优势及应用范围1.1 双光子激发技术的基本原理双光子激发理论由诺贝尔奖得主Goppert Mayer于1931年提出,1961年得到了实验验证[3-4]。
该技术的基本原理是:在高光子密度情况下,荧光分子可同时吸收2个长波长的光子,其效果与使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子相同。
长波长的光受散射影响小于短波长的光,易穿透标本;长波长的近红外光对细胞毒性小于短波长的光。
此外,双光子激发要较高的光子密度,为不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器,激光具有高峰值能量及低平均能量,物镜将脉冲激光的光子聚焦时,物镜焦点处的光子密度最高,故双光子激发只发生在物镜的焦点处,只有在焦点平面上才有光漂白及光毒性,所以双光子显微镜无需共聚焦针孔,提高了荧光检测效率。
胶原蛋白:迷思与真相
胶原蛋白:迷思与真相本期特邀博⼠|马晓瑜The applications of collagen胶原蛋白分布于皮肤、骨骼、粘膜等各个组织中,是人体必不可少的基质组成。
在皮肤中,胶原蛋白更是在维持年轻态中扮演了重要角色。
随着合成生物学在国内的发展,重组人源化胶原蛋白不断出现在研究与新闻中。
对于胶原蛋白,海量的信息中既藏有真相、也夹带着误解。
那么,到底应该如何客观看待胶原蛋白这一成分呢?本期的“博士开讲”栏目,《中国化妆品》杂志社邀请到马晓瑜博士,为大家揭示胶原蛋白的真相。
荷兰莱顿大学、法国国家重点实验室(LabEx LERMIT)、巴黎萨克雷大学、中科院上海有机化学研究所、中国药科大学等科研院所从事多年生物医药科研转化工作,研究经历涵盖糖化学生物学、天然产物药物及合成化学领域创新药物及活性分子设计合成与筛选验证。
《中国化妆品》智库专家。
彗柏生物创始人。
98ChinaCosmetics ReviewPart 1什么是胶原蛋白?胶原蛋白,英文名称为Collagen,源于希腊语“Kolla”和“Genos”,原意为“生成胶的产物”。
如今,人们对胶原蛋白已经有了更深入的了解:这是一种结构蛋白,广泛存在于骨骼、肌腱、关节和皮肤等结缔组织中[1]。
尤其在哺乳动物中,胶原蛋白含量丰富,约占体内总蛋白质质量的30%。
胶原蛋白由氨基酸组成,其中最主要的氨基酸为甘氨酸(Gly),脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸(Hyp)。
由于分子间作用力,氨基酸链缠绕形成三股螺旋,形成了胶原蛋白有别于其他基质蛋白的特征性结构[2]。
基于不同的亚基组成,人们目前已经发现了28种不同的胶原蛋白,并根据其分子结构和功能进一步归类为纤维胶原蛋白、纤维结合胶原蛋白、基底膜胶原蛋白、长链胶原蛋白、短链胶原蛋白、以及跨膜胶原蛋白等[3]。
其中,I 型胶原在所有胶原中含量最⾼,起到结构支持的作用;III 型胶原在新生儿皮肤中含量较⾼,人们认为其有修护功能;IV型胶原是基底膜网状结构的主要组成成分;VII 型胶原起锚定功能,能够改善表皮与真皮层的连接;XVII型胶原则是一种跨膜胶原,在改善皮肤衰老、促进毛发再生中具有潜在应用。
克罗恩病与肠结核鉴别诊断研究进展
中国乡村医药克罗恩病与肠结核鉴别诊断研究进展陈银鹏 张秉强克罗恩病是一种慢性炎性肉芽肿性疾病,属于炎症性肠病的一种。
肠结核是结核分枝杆菌引起的肠道慢性特异性感染,常继发于肺结核,也可原发于肠道而无肺部损害,诊断多依赖于内镜或手术活检。
两者在许多方面相似,鉴别诊断困难,临床存在较高误诊率,一旦误诊可造成严重后果。
本综述就两者的鉴别诊断研究进展进行介绍,以供临床诊疗借鉴。
1 克罗恩病与肠结核诊断标准1.1 克罗恩病 克罗恩病无诊断金标准,故诊断时需全面结合患者临床表现及多种检查结果进行综合分析并密切随访。
目前,克罗恩病诊断参考世界卫生组织推荐的标准:① 非连续性或节段性改变;② 卵石样外观或纵行溃疡;③ 全壁性炎性反应改变;④ 非干酪性肉芽肿;⑤ 裂沟、瘘管;⑥ 肛周病变。
当具有①、②、③者为疑诊;再加上④、⑤、⑥三者之一可确诊;具备第④项者,只要加上①、②、③三者之二亦可确诊。
1.2 肠结核 当出现以下情况时应疑诊肠结核:① 中青年患者患肠外结核,如肺结核;② 有消化道症状如腹痛、腹泻、便秘等;右下腹压痛、腹块体征或原因不明的肠梗阻且伴有结核毒血症状(如发热、盗汗等);③ X线钡剂检查提示跳跃征、溃疡、肠管变形和肠腔狭窄等征象;④ 结肠镜检查提示病变主要位于回盲部,包括回盲部炎症、溃疡、炎症息肉或肠腔狭窄等;⑤ 结核菌素试验强阳性或T细胞斑点试验阳性。
肠结核诊断要求符合以下标准之一:① 肠壁或肠系膜淋巴结发现干酪样坏死性肉芽肿;② 病变组织病理检查找到结核分枝杆菌;③ 病变组织取材结核分枝杆菌培养阳性;④ 病变组织取材动物接种后出现结核样改变。
实际在临床工作中,通过达到以上标准而获取诊断较困难,故对高度怀疑肠结核的病例行诊断性抗结核治疗有效,可临床诊断肠结核,有效定义为诊断性抗结核治疗2~6周症状明显改善,2~3个月肠镜检查提示病变明显好转。
作者单位:400000 重庆医科大学附属第一医院内科通信作者:张秉强,2 克罗恩与肠结核鉴别诊断要点2.1 临床表现 两者的临床表现有许多相似处,且患者疾病表现多不典型,单纯通过临床表现来鉴别二者并不可靠。
二次谐波法
二次谐波法二次谐波法是一种常用的测量方法,在多个领域中广泛应用。
本文将介绍二次谐波法的原理、测量步骤和应用范围,以便读者能够更好地了解和运用该方法。
二次谐波法是利用待测物质对入射光产生的二次谐波进行测量的方法。
当入射光通过非线性介质时,会产生二次谐波信号。
该信号的频率为原始频率的两倍,且具有特定的强度与待测物质的浓度相关。
三、测量步骤1. 准备工作:确保实验环境稳定,并校准所使用的光源和检测器。
2. 设置实验条件:根据待测物质和实验需求,选择适当的光源频率和功率,调整入射角度和检测器位置。
3. 放置样品:将待测物质放置在二次谐波发生器中,并调整信号放大器以获得清晰的信号。
4. 开始测量:启动二次谐波发生器,记录并分析得到的二次谐波信号。
5. 数据处理:根据测量结果,进行数据处理和分析,得出所需的待测物质浓度或其他相关信息。
四、应用范围二次谐波法在多个领域中得到广泛应用,包括但不限于以下几个方面:1. 材料科学:通过测量材料的二次谐波信号,可以获得材料的非线性光学参数,从而为材料的设计和应用提供重要参考。
2. 化学分析:通过对待测化合物的二次谐波信号进行测量和分析,可以实现对化合物浓度的准确测定,并用于质量控制等领域。
3. 生物医学:应用二次谐波法可以对生物体内的某些分子或组织进行非侵入性的测量,例如对组织中的胶原纤维浓度进行评估,以及肿瘤标记物的检测等。
4. 光学设备测试:二次谐波法可用于光学元件的测试和校准,例如检测激光器的输出功率稳定性以及光学谐振腔的谐振频率等。
二次谐波法是一种常用的测量方法,可以通过测量样品产生的二次谐波信号来获得相关参数或信息。
本文介绍了该方法的原理、测量步骤和应用范围,并强调了其在材料科学、化学分析、生物医学和光学设备测试等领域中的重要性和应用价值。
读者可以根据实际需求,灵活运用二次谐波法进行相应的测量和分析工作。
二次谐波法
二次谐波法二次谐波法是一种用于研究物质性质的实验方法,通过观察和记录二次谐波信号来分析材料的非线性光学特性。
在这篇文章中,我们将介绍二次谐波法的原理、应用和实验步骤。
二次谐波法基于非线性光学效应,即光的能量在介质中传播时,会与介质分子发生相互作用,导致光的频率发生变化。
二次谐波信号的产生是通过光的二次谐波效应,即将一个光波分裂成两个频率相等的光波。
在实验中,我们首先需要一个激光器作为光源,激光器可以产生单色、相干的光束。
然后,将激光束通过一个透明的非线性晶体或介质样品,这个样品具有二次非线性光学效应。
当激光束通过样品时,部分光子会与样品中的分子相互作用,产生频率为原始光的二倍的光子。
这些二次谐波光子会被收集并进一步分析。
为了观察和记录二次谐波信号,我们通常使用一个光谱仪或者一个二次谐波发生器。
光谱仪可以将光的不同频率分离开来,并通过探测器将其转换为电信号。
二次谐波发生器则可以将二次谐波信号转换为可见光,并通过摄像机或其他成像设备进行观察和记录。
二次谐波法在许多领域都有广泛的应用。
在材料科学中,二次谐波法可以用来研究材料的非线性光学性质,例如材料的非线性折射率、非线性吸收系数等。
这些性质对于光学器件的设计和制造非常重要。
在生命科学中,二次谐波法可以用来研究生物分子的结构和功能,例如蛋白质的二级结构和分子运动等。
在进行二次谐波实验时,需要注意一些实验步骤和注意事项。
首先,要保证实验环境的稳定性,例如温度、湿度等。
其次,要选择合适的样品和光源,以及适当的检测器和分析设备。
在实验过程中,要注意安全,避免直接接触激光束和二次谐波信号。
二次谐波法是一种非常有用的实验方法,可以用于研究材料的非线性光学性质。
通过观察和记录二次谐波信号,我们可以了解材料的非线性响应和光学特性。
这种方法在材料科学和生命科学等领域有广泛的应用,并为相关研究提供了重要的实验手段。
希望通过这篇文章的介绍,读者对二次谐波法有更深入的理解和认识。
二次谐波成像原理及在眼科中的研究进展
The P rin cip le o f Second H arm onic G eneration and Its Progress in Ophthalmology Research
Huanhuan He,Rongrong Gao,Qinmei Wang,Jinhai Huang
Eye Hospital,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027, China Corresponding author: Jinhai Huang,Eye Hospital,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027, China (Email:vip999vip@)
深度进行成像,成像深度优于常规技术
2 SHG成像与其他成像技术的结合
目前对S H G 信 号 了 解 不 够 深 人 ,因此通常还需要与 TPEF显微镜和共聚焦成像等其他方式结合使用,获得信息 互为补充。
2.1 SHG与光学相干断层扫描(OCT)的结合 SHG成像基于组织的非线性光学特性,而OCT则基于
组织的线性光学散射特性(折射率) OCT轴向分辨率高、敏 感 度 高 、探 测 速 度快且无创,在眼前节和眼底成像方面已 得到广泛应用,在SHG成像中引人OCT, 可以提高探测的 灵敏度,增加成像深度。但是OCT不能消除焦点以外的杂 散 光 ,限 制其成像分辨率,SH G 在成像质量和光损方面有 了明显提高,且侧重于纤维排列,在 O C T 中引入S H G 成像 可以发现组织更早期的变化,有利于早期诊断。随着光纤 技术的高度发展,SHG-OCT技术可与光纤光学结合,有望 实现活体的内窥镜检查:
SHG信号的产生需同时满足以下2 个条件:①介质为非 中心对称结构:角膜基质中的I 型和m 型胶原纤维、巩膜 中致密的胶原纤维[2’31以及筛板(Laminacribrosa,L C ) 和视 网膜神经节细胞( Retinal ganglion ce丨丨,RGC )轴突中的微管 (Microtubu丨e , M T)141均为高度非中心对称,所以可以产生 强信号;②相位匹配条件:传播中的倍频光波和新激发出的 SHG保持相位上的一致性才能产生信号:
二次谐波显微成像技术
二次谐波显微成像技术作者:郝淑娟崔海瑛何巍巍邱忠阳丁军荣来源:《教育教学论坛》2017年第52期摘要:二次谐波显微成像技术是一种新型的非线性光学成像方法,在生物医学成像、新型材料科学等领域都有十分广泛的应用。
本文介绍了光学二次谐波显微成像的产生原理、主要特点和其技术发展应用。
关键词:二次谐波;显微成像;应用中图分类号:G712 文献标志码:A 文章编号:1674-9324(2017)52-0194-02微观世界的很多有用信息可以通过采用显微技术获得,显微成像技术在生命科学、医学、工业测量等不同领域有着巨大的研究价值和广泛的应用,因此,显微成像技术一直是人们研究的热点。
非光学显微术,如电子显微技术、扫描隧道显微技术等,存在对观察样品环境要求严格、对观察对象造成伤害、对观察样品限制较多等弱点,而光学显微术没有这些弱点缺陷,因此,光学显微术的发展完善和功能拓展具有重要意义。
近年来,计算机技术、激光技术和精密机械电子等技术得到飞速发展,随着这些技术的提高,出现了激光共焦扫描显微成像技术、双光子激光扫描共聚焦显微成像技术、光学相干层析成像等很多种不同功能和特性的现代光学显微术。
二次谐波显微成像技术是其中的一种现代非线性光学显微术,它利用光与物质相互作用时产生的二次谐波信号进行显微成像或探测。
一、二次谐波显微成像原理在非线性光学过程中,在强激光作用下的非线性介质,其电极化强度与激发光场的关系可以表示为[1]:二次谐波产生过程是和频过程的一种特殊情况,即倍频。
倍频效应是指两个频率相同的入射光发生和频作用,其输出光波的频率为入射光场频率的二倍,其中入射光波称为基频,输出倍频光波称为二次谐波。
相应的极化强度为:二次谐波产生过程也可以看作是不同频率光子的交换过程。
两个频率为ω的光子在谐波产生过程中湮灭,同时生成一个新的光子,频率为2ω。
二次谐波产生需要满足两个条件:一是要求介质要具有非中心对称性。
在电偶极子近似下,具有中心对称性的介质,其二阶电极化率张量为零,则不能产生二次谐波信号。
rf射频促进胶原蛋白再生的原理
rf射频促进胶原蛋白再生的原理"RF射频促进胶原蛋白再生的原理"第一步:了解RF射频技术射频(Radio Frequency)是一种无线电能,具有较长波长和较低频率。
在美容领域,RF射频技术被广泛应用于皮肤紧致、抗衰老和减少皱纹等问题。
它通过产生高频电场和电流,刺激皮肤组织的细胞,从而促进胶原蛋白的再生。
第二步:认识胶原蛋白胶原蛋白是皮肤中主要的结构蛋白质,在维持皮肤弹性和紧致度方面起着重要的作用。
然而,随着年龄的增长、紫外线照射以及其他环境和生活因素的影响,胶原蛋白的产生逐渐减少,导致皮肤松弛、皱纹出现。
第三步:RF射频技术的作用机制通过将射频能量传递到皮肤深层组织,RF射频技术可以产生以下效果:1. 加热作用:射频能量可以提高皮肤组织的温度,达到一定温度范围,直接或间接刺激和促进胶原蛋白的再生。
2. 细胞活化:高频电场和电流可以刺激皮肤细胞,增加细胞活性,促进细胞修复和再生。
3. 血液循环改善:射频能量的加热作用可以扩张毛细血管,改善皮肤血液循环,提供更多氧气和营养物质供应给皮肤细胞。
第四步:RF射频技术对胶原蛋白再生的影响1. 引起热变性:加热作用可以使现有的胶原蛋白发生热变性,导致其收缩和重组,从而提升皮肤紧致度和弹性。
2. 促进新胶原蛋白生成:射频能量的加热刺激了皮肤细胞中的热休克蛋白,进而激活细胞内的信号传导通路,促进新胶原蛋白的合成。
3. 增加胶原蛋白生成的速度:RF射频激活皮肤细胞的代谢过程,并提高胶原蛋白生成的速度,从而增强皮肤的紧致度和光滑度。
第五步:RF射频技术的应用RF射频技术可以广泛用于面部、颈部和身体的各个部位。
常见的应用包括以下方面:1. 面部提升:通过RF射频技术,可以达到紧致面部轮廓、减少皱纹和细纹的效果。
2. 抗衰老:RF射频可以刺激胶原蛋白的再生,对抗衰老过程中的皱纹和松弛有显著改善作用。
3. 身体塑形:RF射频技术可以用于减少脂肪堆积和改善皮肤松弛,达到身体塑形的效果。
二次谐波结合双光子荧光成像方法观察人源胶原蛋白透皮吸收情况
二次谐波结合双光子荧光成像方法观察人源胶原蛋白透皮吸收情况孙娅楠;赵静;李超华;刘珏玲;李松林;陈辉;孙桂荣;王毅【摘要】目的:用二次谐波成像结合双光子荧光成像的方法观察人源胶原蛋白透皮吸收的情况.方法:将荧光标记的人源胶原蛋白(1 mg/mL)涂抹于小鼠表皮层经皮肤吸收1h后用背向二次谐波观察皮肤内胶原纤维作为真皮层定位标志,用双光子扫描共聚焦显微镜观察人源胶原蛋白透皮吸收深度,吸收方式.结果:二次谐波成像结合双光子荧光成像表明人源胶原蛋白透皮吸收1h后可观察到荧光信号沿着毛囊聚集,并有部分荧光分子由毛囊扩散至真皮层.结论:二次谐波可以更快速,更灵敏地检测皮肤中的胶原纤维,以此作为检测物质透皮吸收深度的定位标志,具有不受荧光信号干扰的优点.人源胶原蛋白可以沿着毛囊进入真皮层,并从毛囊中扩散至胶原纤维层从而补充皮肤中的胶原纤维.%Objective:Second harmonic generation imaging (SHG) and two-photon fluorescence imaging were combined to trace the transdermal absorption and distribution of Re-combinant human collagen (R-hc) in mice skin.Method:After applied the R-hc (1mg/mL) for 1 hour,the mice skin was cut off at 2 cm × 2 cm for further observation.The location of collagen fibers in the skin were observed by using the backwards SHG as the dermal layer markers.The process of transdermal absorption and observation of R-hc were traced by two photon microscopy.Result:The SHG combined with two-photon fluorescence imaging showed that the fluorescence signal of R-hc was gathered along the hair follicle and some fluorescent molecules diffused from the hair follicle to the dermis after transdermal absorption for 1 h.Conclusion:SHG can provide faster andmore sensitive detection of skin collagen fibers,which can be used as the depth marker of the transdermal absorption of the test substance without interfering with the fluorescence signal.Human collagen can enter the dermis along the hair follicle,and replenish to the collagen fiber layer in the skin.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2017(026)001【总页数】6页(P24-29)【关键词】二次谐波;荧光成像;皮肤;胶原;透皮吸收【作者】孙娅楠;赵静;李超华;刘珏玲;李松林;陈辉;孙桂荣;王毅【作者单位】中国中医科学院医学实验中心,北京100700;中国中医科学院医学实验中心,北京100700;中国中医科学院医学实验中心,北京100700;中国中医科学院医学实验中心,北京100700;天津伊瑞雅生物科技有限公司,天津300399;北京急救中心,北京100031;天津伊瑞雅生物科技有限公司,天津300399;中国中医科学院医学实验中心,北京100700【正文语种】中文【中图分类】Q512物质透皮途径主要有三条:角质层、毛囊及汗管。
铁电体电畴结构的观测方法
透射电子显微镜(TEM)
透射电子显微术是目前用来观测电畴的主要 方法,其优点是分辨率高,而且可观测电场 作用下的畴的变化,同时也能观测晶体中的 缺陷及其与电畴的相互作用。电子显微术理 论成熟,结合其中的电子衍射图谱、衍射衬 度像和高分辨像,能够严格的区分不同类型 的畴界,从而在此基础上对不同类型的畴结 构进行分析。
2nd Intermediate ‘image’ Projector lens
Diffraction pattern Screen
Final image
衍射模式
单晶衍射花样
多晶衍射花样
非晶
成像模式
低倍形貌像
高分辨晶格像
右图是BaTiO3 单晶中铁电 畴极化反转过程的TEM 形 貌图: a: 初始状态, E = 0kV/cm; b: E= 2.6kV/cm, 作用 1min 后; c: E= 2.6kV/cm, 作用3min 后; d: E= 2.6kV/cm, 作用 5min 后; e: 撤去电场, E = 0kV/cm; f: E = 5.6kV/cm, 作用1min 后。
扫描探针显微镜的分类
扫描隧道显微镜 Scanning Tunneling Microscope (STM)
扫描力显微镜 Scanning 原子力显微镜 Atomic Force Microscope (AFM) 摩擦力显微镜 Lateral Force Microscope (LFM) 磁力显微镜 Magnetic Force Microscope (MFM
根据探针同样品作用力性质的不同,SFM仪器主要有三种成像模式, 接触式(contact mode),非接触式(noncontact mode)和半接触式 (semicontact mode)(即轻敲式(tapping mode))。
基于激光技术的生物成像方法
基于激光技术的生物成像方法生物成像技术是一种能够在生物体内、组织和细胞水平上进行非侵入式、实时、高分辨率的成像的技术。
它可以为生物学研究提供信息和解答,以及为临床医学提供早期诊断、疾病预后和治疗方案的制定提供数据支持。
随着生物成像技术的发展,越来越多的方法被应用到生物学研究和医学临床中。
其中,基于激光技术的生物成像方法有着独特的优势,在研究细胞、组织和生物体的结构、功能和代谢过程方面具有广泛的应用前景。
下面将详细介绍基于激光技术的生物成像方法的类型、原理和应用。
一、基于激光技术的生物成像方法的类型基于激光技术的生物成像方法包括:荧光成像、二次谐波成像、非线性光学成像、多光子成像和光声成像等。
这些方法的原理和应用略有不同。
1.荧光成像荧光成像是一种应用广泛的成像方法,它可以直观地获取活体细胞、组织和器官内部的分子分布、代谢和功能等信息。
荧光成像的原理是利用一种特殊的分子——荧光探针,将其引入到生物样品中,通过激发荧光探针产生的荧光信号来获取样品内部的信息。
2.二次谐波成像二次谐波成像是一种非线性光学成像方法,它利用二次谐波(SHG)信号来成像生物样品。
SHG是一种特殊的非线性光学效应,在生物样品中具有一定的依赖性,可以成像生物组织的三维结构和内部微观结构。
3.非线性光学成像非线性光学成像是一种基于非线性光学现象的成像技术,它包括:多光子荧光成像、双光子吸收成像、双光子荧光共聚焦成像、光时空编码成像等多种成像方法。
非线性光学成像可以成像样品的三维结构、分子分布和代谢过程等生物信息。
4.多光子成像多光子成像是一种近年来发展起来的高分辨率激光成像技术,它具有很高的成像深度、分辨率和空间分辨率。
多光子成像可以应用于观测单个分子、细胞等微观结构,并且在成像过程中不会给样品造成损伤。
5.光声成像光声成像是一种新兴的光学成像技术,它利用激光脉冲激发样品内的超声波产生声波信号,并将其转化为光学信号来成像生物样品。
胶原蛋白的检测方法
胶原蛋白的检测方法
胶原蛋白是一种重要的蛋白质,存在于人体的结缔组织中,具有支撑和保护组织的功能。
因此,检测胶原蛋白的含量和质量对于人体健康非常重要。
目前常用的胶原蛋白检测方法有以下几种:
1. 生化检测法:利用生化方法测定血液中胶原蛋白的含量,包括ELISA法、免疫扩散法和凝胶电泳法等。
2. 组织学检测法:利用光镜、电镜等显微镜将组织切片后观察胶原蛋白的形态和分布情况。
常用的方法有HE染色、伊红染色和偏光显微镜等。
3. 生物物理学检测法:利用生物物理学方法测定胶原蛋白的结构和功能,包括原子力显微镜、X射线衍射和圆二色光谱等。
4. 分子生物学检测法:利用分子生物学技术检测胶原蛋白基因的表达情况和突变信息,包括PCR法、Southern blotting法和Northern blotting法等。
以上几种检测方法各有优缺点,选择合适的方法可以提高胶原蛋白的检测灵敏度和准确性。
同时,不同的疾病和症状可能需要不同的检测方法,因此需要根据具体情况选择合适的检测方法。
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新型光学成像技术在医学领域的应用
新型光学成像技术在医学领域的应用随着医学科技的不断发展,从病人体内获取更精细的图像信息变得越来越重要。
在现代医学中,成像技术是非常关键的一个领域,可以通过成像技术来帮助医生更好地了解疾病的发展情况、进行准确的诊断和治疗。
而在现在的医学领域中,新型光学成像技术正在快速发展,并且已经被广泛应用于不同的医学领域。
本篇文章将介绍新型光学成像技术在医学领域的应用及其应用前景。
什么是新型光学成像技术?新型光学成像技术是指通过光学原理,利用先进的算法、光学设备和电子技术,对生物或物质体进行三维成像并获取其结构、形态、功能信息的技术。
目前,新型光学成像技术在测量、显微、诊断等领域都获得了广泛的应用。
通过新型光学成像技术,医生可以采集到更为精确和全面的病理信息,为医学诊断和治疗提供更强有力的支持,以下是这些技术在医学领域的具体应用:1. 光学相干断层扫描(OCT)光学相干断层扫描是一种用于成像眼睛、皮肤和其他人体组织的快速非侵入性成像技术。
OCT主要通过测量不同材料的反射率、折射率和色散率等物理属性,得到具有高分辨率的组织图像,可以帮助医生更准确的进行诊断和治疗。
其中,OCT在眼科领域的应用是最为广泛的。
眼科医生可以使用OCT来查看视网膜中不同层次的构造和病变情况。
OCT的一个巨大优势是可以提前发现青光眼、白内障等眼病的发展轨迹,以及其他疾病的病理变化情况。
2. 二次谐波成像(SHG)二次谐波成像是一种高分辨率、非侵入性的成像技术,可以应用于诸如乳腺癌、皮肤癌和淋巴结等疾病的诊断。
相比于常规采用的组织学的检查方式,SHG具有更高的分辨率和更快的成像速度。
3. 光学投影体层摄影(OPL)光学投影体层摄影技术是一种基于光学原理的成像技术,通过动态的投影,对活体患者进行三维成像。
OPL技术是一种相对较新的技术,可以成像非单一层级的三维解剖结构和亚细胞结构的动态变化。
这项技术在生物医学影像中极具潜力,可以使医生观察到人体内部没有被发现的病变情况。
二次谐波细胞成像的研究进展
Ke r y wo ds:s c d ha mon c ge e a i n;c l m a i g;l be e on r i n r to e ti g n a l
外 , HG 成像 采 用 近 红 外 的飞 秒 激 光 作 为 光 源 , S 具
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Ab t a t e o d h r n cg n r to ( HG )i a i g h st e a v n a e flr e p n ta sr c :S c n a mo i e e a in S m gn a h d a t g so a g e e r —
( 南 大学 先 进 光 子 学 中心 , 京 2 0 9 ) 东 南 1 06
摘 要 :由于二次 谐 波 ( eo d h r ncg n rt n HG) 术 具 有 探 测 深 度 深 , 生 物体 S c n amo i e eai ,S o 技 对 的损 伤 小 , 间 空 间分 辨 率 高 以及 对 结构 的对 称 性敏 感 等特 性 ,HG 成像 成 为 : 来 生 物成 像领 时 S 近年 域 的研 究热 点 。介 绍 了S HG 成像 技术 的原 理及 其 在细 胞成 像 中的应用 , 点介 绍 了基 于染 料标 记 重 的成 像技 术 , 别是 利 用 电压 敏 感 染料 , 性 材 料和 金 属 纳米 粒 子作 为 标 记 的几 种 S 特 手 HG 细胞 成像 技 术 , 后展 望 了该技 术在 生 物成像领 域 的应用 前 景 。 最
胶原检测的原理和方法
胶原检测的原理和方法
胶原检测的原理和方法主要有以下几种:
1.免疫测定法:利用抗体与特定的胶原蛋白结合来进行检测。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫沉淀法(RIA)。
这些方法可以定量测定胶原蛋白的含量,也可以区分不同类型的胶原蛋白。
2.生化方法:利用特定化学试剂对胶原蛋白进行处理,通过测定反应产物的吸光度或荧光等信号来定量胶原蛋白的含量。
常用的方法有水解法、氨基酸分析法和羟脯氨酸分析法等。
3.结构分析法:利用X射线衍射、核磁共振等技术对胶原蛋白的结构进行分析,如测定胶原蛋白的螺旋结构含量、链间交联程度等。
4.光学显微镜观察法:通过显微镜观察组织或细胞中胶原蛋白的形态和分布情况。
常用的方法有光学显微镜、电子显微镜和原子力显微镜等。
这些方法可以单独或联合使用,根据具体需求选择适合的检测方法来评估胶原的含量、结构和功能等。
二次谐波响应二维材料 应用
二次谐波响应二维材料在光学领域的实际应用一、应用背景随着科学技术的不断发展,人们对光学材料的性能和应用需求也越来越高。
二次谐波响应二维材料作为一类新型光学材料,具有独特的光学性质和应用潜力,引起了广泛的关注和研究。
二次谐波响应是指当材料受到高强度光照射时,会产生频率为光照频率的二次谐波信号。
二维材料是指厚度只有几个原子层的材料,具有特殊的电子结构和光学性质,如石墨烯、二硫化钼等。
二次谐波响应二维材料在光学领域的应用主要是基于其非线性光学特性。
与线性光学材料不同,非线性光学材料在高强度光照射下会产生新的光学效应,如二次谐波产生、光学整流、光学开关等。
这些新的光学效应为光学器件和光学通信系统的发展提供了新的思路和技术手段。
二、应用过程二次谐波响应二维材料在光学领域的应用过程一般包括如下几个步骤:1.材料制备:首先需要制备具有二次谐波响应特性的二维材料。
常用的制备方法包括机械剥离法、化学气相沉积法、溶液剥离法等。
通过这些方法可以制备出高质量的二维材料样品。
2.光学特性测试:对制备好的二维材料样品进行光学性质测试,包括透射谱、反射谱、吸收谱等。
这些测试可以帮助研究人员了解材料的光学特性,为后续的应用提供基础数据。
3.光学器件设计与制备:根据二次谐波响应二维材料的特性,设计并制备相应的光学器件。
例如,可以利用二次谐波产生特性设计制备二次谐波发生器、倍频器等器件,用于产生特定频率的光信号。
4.光学性能测试与优化:对制备好的光学器件进行性能测试,例如二次谐波产生效率、光学整流效果等。
根据测试结果,可以对器件进行优化,提高其性能和稳定性。
三、应用效果二次谐波响应二维材料在光学领域的应用效果主要体现在以下几个方面:1.高效能量转换:利用二次谐波响应二维材料的特性,可以实现光能的高效能量转换。
例如,将二次谐波发生器应用于光伏电池中,可以将光能转化为电能,提高光伏电池的能量转换效率。
2.光学信号处理:利用二次谐波响应二维材料的非线性光学特性,可以实现光学信号的处理和调控。
重组胶原蛋白经皮渗透、紧致、修复
重组胶原蛋白经皮渗透、紧致、修复的体外研究冯丽萍 范婷(江苏江山聚源生物技术有限公司,江苏泰州214500)胶原蛋白来源方式中,合成生物学与传统动物中提取方式相比,独特优势在于避开病毒携带隐患、批次重现性差、目标蛋白难分离的问题,而且合成生物学的生产效率比较高。
重组胶原蛋白是近年来合成生物学的产物之一,是将胶原蛋白的DNA序列体外合成后导入不同宿主(微生物、动物、植物)通过发酵、分离纯化获得重组胶原蛋白[1]。
药物经皮给药目的是利用皮肤给药治疗全身性疾病,药物经历三个阶段:一是经皮渗透,即透过表皮进入真皮。
二是皮肤吸收,即在真皮通过毛细血管作用进入体循环。
三是在作用部位聚集,即化妆品功能性成分作用于皮肤表面或进入表皮或真皮,并在该部位积聚和发挥作用。
例如,美白产品中的美白剂常作用于表皮中的基底层,阻断黑色素的产生;而抗衰老产品的功效成分则常作用于真皮层的成纤维细胞,使皮肤富有弹性[2]。
《化妆品安全评估技术导则(2021 年版)》指出,当分子量大于1000道尔顿时,可以不考虑透皮吸收。
但本文通过离体皮肤实验证明了,55000道尔顿的重组胶原蛋白仍然能经皮渗透。
一、材料与方法(一)试剂与材料测试模型:选离体皮肤作为测试模型(广东博溪生物科技有限公司)。
试剂:PBS缓冲溶液(索莱宝)、4%多聚甲醛组织固定液(Biosharp)、Hoechst(碧云天,C1022)、Phalloidin(碧云天,C2203S)、离体皮肤组织培养液(FSK4,广东博溪生物)、维生素C (Sigma)、维生素E(Sigma)、多聚甲醛(国药)、PBS(索莱宝)。
设备:CO2培养箱(Thermo,1501)、超净工作台(苏净安泰,SW-CJ-1F)、莱卡生物显微镜(DM2500LED)、正置显微镜(Olympus,BX53)。
样品:重组胶原蛋白(PA2190S001 江苏江山摘要:采用荧光标记重组胶原蛋白,涂抹于体外培养的离体皮肤,经过荧光显微观察,离体皮肤基底层下方(真皮层)可观察到荧光信号,说明重组胶原蛋白经皮渗透深度可达到真皮层。
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第14卷第4期 2005年8月激光生物学报AC7rA L蟠ER BIOLoGY SINICAv01.14No.4 Aug.2005・激光生物与光子中医学・用光学二次谐波成像技术观察皮肤内不同种类的胶原j王毅1,鲍进1,盛巡2,李萍2,马辉¨(1.清华大学物理系,中国北京100084;2.北京中医医院药物研究所,中国北京100010摘要:目的:用光学二次谐波成像的方法比较成熟皮肤与新生皮肤内不同种类胶原的含量,以及正常皮肤与创伤皮肤内胶原种类的变化。
方法:用前向及背向二次谐波观察正常及创伤皮肤内的胶原,并与传统的天狼猩红染色法相对照。
结果:与传统方法相比,二次谐波可以更快速,更灵敏地检测组织中的胶原。
背向二次谐波信号强度随着切片厚度的增加而增强。
结论:光学二次谐波成像技术是一种灵敏、简单、快速检测皮肤组织内胶原的新方法,具有很好的应用前景,可应用于活体检测。
关键词:二次谐波;光学成像;皮肤;胶原中图分类号:0437;口334文献标识码:A文章编号:10Cr7.7146(20Q5悼027年05Prob吨聊e I/ⅢCouag钮in De肿is哪iIlg Second 1]【ar瑚Ilic Gen坨瑚ltion h 衄雩堍删G K1,戤D胁1,船哪‰2,ⅡP垤2,心肌i1。
(1.DeparhIlem of Physics,Tsi咄m U证versitr,Beijing 100084,Clli腿;2.Tra出donal C11inese Medicine Res锄h I蒯tute of Beij吨,Beijillg 100010,伽mAbs仃ad:唰训Hann砌c Ge响谢on(sHGim硒ngis usedto口k孵I andtypeⅢ洲【18聊iIl妇111is侧npariIlg widl 1l抡p0:Iarizati∞IIlicroscopr iInagirIg of stained couagen by SiriIls Ded.7nle resI|:lts幽0w tllal opdcal SHG iIIl画Ilg is Ino陀鸵n-sidve to the衄.e坞nt t,p瞄0fc0:盼gen in de珊is and it咖be used鹊锄in、rivo n0Ilinvasi、re乜00l t0evalu8ce me Wrleradon of coHa寥n i11wDmd k柚ir唔.Key woms:Seo∞d I{a肋砌c Genel蜘on(跚G;opdcal iIIlagiIlg;出n;coⅡagen二次谐波成像是新近发展起来的激光扫描非线性光学显微术。
它利用超快激光脉冲与介质相互作用产生的倍频相干辐射作为图像信号来源,具有高分辨、高对比度的三维成像能力。
胶原、肌肉等生物组织能够产生很强的二次谐波信号【1剖。
二次谐波可采用近红外光源激发,对生物样品的杀伤作用小, 在高散射体中的穿透能力强,有利于提高探测深度。
基金项目:北京市自然科学基金项目(项目编号:7043cr70 收稿日期:2005-0每15 二次谐波反映样品本身的非线性光学性质,可以不需要染料标记,避免由此带来的光毒性。
该成像方法适合对活体进行动态测量,在生物医学研究领域具有广阔的应用前景。
正常人皮肤中80%为工型胶原,其余大部分为Ⅲ型胶原,I型胶原排列有序,纵横交错,构成网状结构的真皮层;Ⅲ型胶原包裹着胶原纤维束,分布在第4期王毅等:用光学二次谐波成像技术观察皮肤内不同种类的胶原 275边界结构处。
在创伤恢复过程中,胶原的排列逐渐从无序到有序,Ⅲ型胶原在创伤愈合的开始占主导地位,在愈合的末期,Ⅲ型胶原又被工型胶原所代替。
因此工型胶原与Ⅲ型胶原的比率是衡量创伤的愈后程度的重要指标。
对于创口内,衡量I、Ⅲ型胶原比率的方法目前常采用组织特染和免疫组化两种方法。
但特染仅能表达胶原总体的变化,不能同时区分I、Ⅲ型胶原的类型,且易褪色,不易长久保存和回顾性研究。
免疫组化法,尽管特异性强,但操作程序繁琐,其染色效果受很多因素影响,如抗体效价,实验者经验等,结果不易稳定。
且抗体较昂贵,不易保存,同时也不能在同一切片中反映两种胶原类型(I/Ⅲ型的变化。
近来出现的天狼星红偏振光法H1虽然操作简单(同胍染色相近,但不能活体动态观察样品,是组化观察法的缺点。
最近,特别是近一年,二次谐波成像在对活生物样品进行无损测量或者长时间动态观察方面显示出独特的应用潜力,得到方法学研究与生命科学研究领域的重视睁副,其图象质量高、杀伤小、不需要染色等特点也为长时间观察创伤愈合的动态过程提供了一种新的实验方法。
在本试验研究中,我们将系统比较天狼星红偏振法与二次谐波成像法的成像质量的不同,及背向二次谐波强度与探测深度的关系,为二次谐波在动物活体上的应用奠定基础。
1材料与方法1.1实验装置本工作在实验室已有的激光扫描双光子荧光显微镜基础上,通过改装信号探测外通道,从背向上收集信号,实现了背向二次谐波成像。
背向二次谐波成像和双光子荧光成像都是从背向上进行探测,都不受样品厚度的影响,从技术上来讲可以说是完全兼容的。
在这套成像系统中,可以同时进行双通道复合测量。
激发光源是掺钛蓝宝石飞秒超快激光器 (TsullaIl】i,Spectra Physics,UsA,波长入选为81l r髓, 脉冲宽度120fs,重复频率80nl比。
激光输出的功率可达1W,经光路衰减后在样品处仍有200HlW左右,加上衰减片组之后可在0~200mW之间调节。
激发光由物镜聚焦到样品上,产生的背向传播的二次谐波信号由同一个物镜收集,经过窄带滤波片(中心波长405.6mn,半高全宽8衄,由光电倍增管转化为电信号送计算机处理,得到背向二次谐波图像。
如果样品有自荧光或者经过荧光染料染色,将同时外一个信号通道,送到计算机中成像。
双光子荧光波长略大于激发波长的一半,光谱比较宽,一般为几十到几百纳米;而二次谐波的波长正好是激发波长的一半,光谱很窄,半高全宽大约只有10m。
因此,在双光子荧光通道使用带通或高通滤波片,很容易避开二次谐波的峰值波长;在二次谐波通道使用半高全宽只有8咖的窄带滤波片,可以很好地挑选出二次谐波信号,荧光信号的贡献可以忽略。
前向发生的二次谐波信号先经一块带通滤波片,再经过窄带滤波片(同背向,由光电倍增管转化为电信号送计算机处理,得到前向二次谐波图像。
利用这套实验装置,我们对创伤皮肤切片样本进行了观察。
1.2样品制备1.2.1组织切片取人正常及溃疡组织(由北京市中医医院药物研究所提供后用生理盐水冲洗,组织放人20%福尔马林固定液中,固定3d后,元水乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡,石蜡包埋后切片(4脚;进行背向二次谐波强度比较实验时,切片厚度为5脚,10胛,20肿,30耻,40脚后进行天狼星红染色或直接进行前向及背向二次谐波观察。
1.2.2天狼星红染色取石腊切片,二甲苯脱蜡、水化,天青石蓝(selestine B1ue B,si 舯a公司染色10 IIlin,蒸馏水洗三次,放人天狼星红(sirius RoSe BB, nuca公司一苦味酸溶液中染色25IIlin,直接进梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
1.3实验方法1.3.1利用二次谐波成像技术结合偏振光成像及免疫组化法对比观察新生胶原和成熟胶原的区别观察不同皮肤(正常,创伤中,I,Ⅲ型胶原的种类及分布变化取人正常及溃疡皮肤切片,按2.1及2.2方法准备天狼星红染色切片,用二次谐波成像观察, 结合光镜、偏光显微镜图像,观察工,Ⅲ型胶原的种类及分布变化。
1.3.2观察不同厚度切片背向二次谐波强度变化取人正常皮肤,按2.1方法制成不同厚度切片(5舢,10耻,20耻,30舯,40胛,观察背向二次谐波随样品厚度的变化规律。
2结果2.1利用二次谐波成像技术结合偏振光成像及免疫组化法对比观察新生胶原和成熟胶原的区别如图1所示,天狼星红染色的切片在偏光显微镜下,I型胶原为黄红色,Ⅲ型胶原为绿色(图1B,276激光生物学报第14卷齐,二次谐波信号强,而Ⅲ型胶原信号很弱(图lc。
由图1中上图可见,正常皮肤中,工型胶原占大多数,Ⅲ型胶原较少,二次谐波信号强,且I型胶原粗大,排列有序(上图A,B,C。
下图为创伤病人皮肤切片,创口处于修复初期,工型胶原较少。
偏光图象下,切片内几乎观察不到胶原,而在前向二次谐波成像图中可以看到有类似于Ⅲ型胶原强度的信号分布(下图A,B,C。
图1用二次谐波成像方法观察皮肤天狼猩红染色切片上图:正常人皮肤;下图:人创伤皮肤A.光学显微镜下天狼星红染色图(20×;B.偏光显微镜下天狼星红染色图(20×;c.前向二次谐波图像 (20×Fig.1SHG im缚ng of skin slices stained by Sirius red卜}o瑚al h砌肌skin(abo、他;1瞩bund hunm skin(belowA.optical 111icIosc叩y iⅡmges(20×;B.Pol撕z撕0n IllicIoscopyiIllages(20×;C.Fo刑ard SHG images(20×2.2观察不同厚度切片背向二次谐波强度变化为了探讨背向二次谐波应用于活体标本检测的可能性,我们验证了背向二次谐波强度随不同厚度切片变化的情况。
图2为同一位置不同厚度的未染色切片背向二次谐波图像,切片厚度分别为5脚, 10肿,20脚,30脚,40pM(图2A,B,C,D,E,由图中可以看出,背向二次谐波强度随切片厚度的增加信号逐渐变强,厚度为40州的切片背向二次谐波信号最强。
3讨论二次谐波是现代生物学领域一项新的成像技术,作为一种非线性成像方法越来越引起人们的重视,适用于观察标记后的膜结构‘7。
83及未染色的,排列紧密,整齐有序的非中心对称的蛋白质如胶原、肌肉、微管等叫,它所具备的优点使其在多个方面得到应用,如心外科,眼科,及组织工程等n¨2|。
但做为一个新技术,很多性质还有待研究,尚处于探索阶段。
表1不同厚度切片背向二次谐波强度的变化 1址.1Backwa【rd SHG inte璐毋varies衍tll di艉rerlt slice deptIl样品厚度(肼510203040 Deplll of呲二次谐波强度’1920202225 SHGinte璐itr*二次谐波强度为一幅512×512像素图扣除背景后的平均灰度值*SHG峨Ilsityis‰av哪ge value ofa512×512陋li脚ge de-dllc6I唱kd唔删第4期王毅等:用光学二次谐波成像技术观察皮肤内不同种类的胶原 277胶原纤维的分子又叫原胶原(‰pocouagen,各种类型的胶原分子都是由三条肽链组成。