散发性结直肠癌DNA错配修复系统蛋白表达及其临床意义

760上海交通大学学报（医学版）2019, 39 (7)

要由DNA错配修复（mismatch repair，MMR）系统基因缺陷（deficient mismatch repair，dMMR）引起；MSI 与85%的遗传性非息肉病性结直肠癌（又称Lynch综合征）相关[4]。对MMR系统蛋白表达进行免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）染色与基于DNA的MSI 测试结果高度一致，具有良好的灵敏度（>90％）和优异的特异度（100％）[5]，且IHC适用范围广、检测成本低，对实验室配置要求较低。MMR系统蛋白与Lynch综合征相关的结直肠癌的风险评估、诊断、预后已有大量研究，但其与散发性结直肠癌（sporadic colorectal carcinoma，SCRC）的相关性研究尚处于起步阶段。本研究旨在分析MMR系统及其组成蛋白MLH1（mutL homolog 1）、MSH2（mutS homolog 2）、MSH6（mutS homolog 6）和PMS2（postmeiotic segregation increased 2）与SCRC临床病理特征的关系，探究其在SCRC临床中的应用价值。

1资料与方法

1.1 研究对象

选取2014年4月至2018年8月在上海交通大学医学院附属同仁医院（简称同仁医院）住院治疗的结直肠癌患者。入选标准：①癌组织原发于结直肠。②行结直肠癌根治术。③病理资料完整。④患者签署知情同意书。排除标准：①同时或异时性恶性肿瘤患者。②Lynch综合征患者（根据2004年提出的Bethesda修订标准[6]）。③家族性腺瘤性息肉病患者。共入选患者209例，其中男120例（57.4%），女89例（42.6%）；年龄24～89岁，平均年龄（66.9±12.5）岁，中位年龄67岁。根据美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）结直肠癌分期系统（第8版）对209例患者进行病理分期。

1.2 IHC染色

IHC采用MaxVision二步法，IHC通用试剂盒、通用型二抗购于上海碧云天生物有限公司；MLH1抗体、MSH2抗体、MSH6抗体、PMS2抗体和p53抗体均购于美国Abcam公司。

1.3 MMR状态及p53和KRAS基因突变分析

上述209例患者肿瘤组织取材后进行石蜡包埋。石蜡标本由同仁医院病理科保存。IHC检测结果均由同仁医院病理科副主任级别医师判读，判读标准[7]为在细胞核着色区（MLHl、MSH2、MSH6、PMS2蛋白均位于细胞核）呈棕黄色为阳性，无着色时为阴性。若MMR系统基

因无缺失，则MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白均表达，核着色为阳性；若发生dMMR，则MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白中任意一种或多种缺失，核着色为阴性。

采用IHC检测p53蛋白表达情况，根据p53基因特性[8]，突变后的p53基因无功能蛋白表达增多，IHC结果为阳性，野生型p53基因功能蛋白表达量少，IHC结果为阴性。

采用荧光定量PCR技术检测由蜡块包埋的肿瘤组织中KRAS基因的突变情况，检测由上海远见生物科技有限公司完成。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。定性资料采用χ2检验；当样本量<5时，用Fisher's确切概率法检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 SCRC患者的临床病理特征

209例SCRC患者肿瘤多数位于左半结肠或直肠（149例，占71.3%）；肿瘤直径多介于4～6 cm（102例，占48.8%）；AJCC分期多处于Ⅱ期和Ⅲ期，分别为74例和76例（分别占35.4%和36.3%）；多为高中度分化（157例，占75.1%）；病理组织分型以非黏液细胞癌例数较多，为154例（占73.7%）（表1）。

2.2 MMR系统与SCRC临床病理特点的关系

dMMR比例及MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白缺失率分别为30.1%（63/209）、17.2%（36/209）、2.4%（5/209）、12.9%（27/209）、16.7%（35/209）（表1）。患者不同年龄、肿瘤位置、肿瘤直径、病理组织分型间的dMMR比例差异均有统计学意义（均P<0.05），而不同性别、AJCC分型、分化程度间则差异无统计学意义（均P>0.05）；不同肿瘤位置、肿瘤直径、病理组织分型间的MLH1、PSM2缺失率差异均有统计学意义（均P<0.05）；不同年龄患者间的MSH6缺失率差异有统计学意义（P=0.000）；MSH2的缺失在不同临床病理特征患者间差异均无统计学意义（均P>0.05）（表1）。

2.3 MMR系统与KRAS、p53基因的关系

IHC检测结果显示，209例患者中有165例p53蛋白染色结果呈阳性（图1），即为p53基因突变，这些患者的

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MLH1缺失率显著高于未突变患者（P =0.012）。由于部分肿瘤组织保存时间过长或体积过小，提取RNA 时，只有

67例患者的RNA 浓度适于进一步的荧光定量PCR 检测。结果显示，其中有24例患者KRAS 基因发生了突变，这些患者的MLH1缺失率显著低于未突变患者（P =0.044）

（表1）。

表1 SCRC 患者中MMR 系统蛋白缺失与临床病理特点及其他基因突变的关系

Tab 1

Relationship between MMR proteins deletion and clinicopathological status and other gene mutations in the SCRC patients

性别0.721

0.323

1.000

0.297

0.735

注：

NA （not available ）表示无法计算P 值孙伟杰，等 散发性结直肠癌DNA 错配修复系统蛋白表达及其临床意义