SMCC法抗体定向偶联技术的优化与应用研究介绍
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物是一种将抗体与药物分子连接起来的分子复合物。通过将药物与抗体结合,可以实现对特定靶点的高选择性和高亲和力,从而提高药物的疗效和减少副作用。近年来,抗体药物偶联物在临床治疗中取得了显著的进展,成为肿瘤治疗和其他疾病治疗的重要策略之一。
目前,研究人员主要关注以下几个方面的抗体药物偶联物的研究:
1. 靶向区域的选择:在抗体药物偶联物的设计中,首先需要选择适当的靶点。研究人员通过对肿瘤细胞表面分子的研究,发现一些与肿瘤细胞高度相关的抗原,如HER2、EGFR等,这些抗原成为抗体药物偶联物的重要靶点。还可以通过改造抗体分子,使其能够识别其他特定的靶点。
2. 偶联药物的选择:在选择偶联药物时,需要考虑药物的化学性质和生物活性。一方面,偶联药物需要具有一定的稳定性,在体内能够稳定结合在抗体上,并且能够在靶点附近释放。偶联药物需要具有较高的抗肿瘤活性,能够有效杀灭肿瘤细胞。
3. 结合策略的优化:抗体药物偶联物的结合方式有多种,如化学偶联、基因工程偶联等。研究人员通过优化偶联反应的条件和方法,以及构建新的偶联分子,不断改进抗体药物偶联物的稳定性和生物活性。
4. 药物代谢和体内动力学:抗体药物偶联物在体内被代谢和消除的过程对其疗效和安全性有重要影响。研究人员通过研究药物的代谢途径和动力学特性,优化抗体药物偶联物的药代动力学,并提高其在体内的稳定性和持续时间。
5. 临床应用的研究:许多抗体药物偶联物已经进入了临床试验阶段,取得了一些初步的疗效和安全性数据。研究人员通过不断优化抗体药物偶联物的设计和制备方法,以及临床试验的推进,加速了抗体药物偶联物的临床应用进程。
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物是近年来在生物医学领域取得重要进展的一种新型药物,它是将具有
高度特异性和亲和力的抗体与药物分子结合起来,通过抗体的靶向作用将药物准确地送达
到疾病相关的细胞或组织中,从而提高药物的疗效和减轻副作用。以下是抗体药物偶联物
研究的一些最新进展。
通过抗体药物偶联物可以实现靶向治疗。传统的化学药物通过静脉输注进入体内后往
往会在整个生物体内广泛分布,其对正常细胞和组织的毒性副作用较大。而抗体药物偶联
物通过抗体的靶向作用可将药物准确地送达到疾病相关的细胞或组织中,从而增加药物在
疾病部位的浓度,同时减少对其他正常细胞的损伤。
抗体药物偶联物具有更好的稳定性和药代动力学特性。通过将药物与抗体偶联,可以
增加药物在体内的半衰期和循环时间,从而延长治疗效果。抗体药物偶联物还可以通过调
节偶联物的药物负荷、药物释放速度和药物释放方法等来控制抗体药物偶联物的药代动力
学特性,实现更好的治疗效果。
抗体药物偶联物具有更强的药物作用力。通过抗体的靶向作用,药物可以更高效地结
合到疾病相关的细胞或组织中。抗体药物偶联物还可以通过改变药物的结构和药物的给药
途径等方式,调节药物的药效,提高治疗效果。通过将多个药物分子偶联到同一个抗体上,可以实现多药联合治疗,从而提高药物的综合疗效。
抗体药物偶联物还具有更好的安全性和降低毒性副作用的特点。通过靶向作用,抗体
药物偶联物可以减少药物对正常细胞和组织的副作用,从而降低药物的毒性。药物和抗体
的偶联还可以增加药物在肿瘤细胞内的稳定性,减少药物的分解和代谢,从而提高抗肿瘤
抗体偶联技术开发与应用方案(二)
抗体偶联技术开发与应用方案
一、实施背景
随着生物医药技术的快速发展,抗体偶联技术(Antibody-Drug Conjugate,ADC)已成为肿瘤治疗领域的研究热点。ADC药物通过将抗体与细胞毒性药物偶联,实现对肿瘤细胞的精准杀伤,同时降低对正常组织的损伤,为肿瘤治疗提供了新的解决方案。本方案旨在从产业结构改革的角度,对抗体偶联技术的开发与应用进行全面规划,以推动其快速发展。
二、工作原理
抗体偶联技术是将细胞毒性药物与抗体进行偶联,利用抗体与肿瘤细胞的特异性结合,将药物精准输送至肿瘤细胞内,从而提高药物的疗效并降低毒副作用。ADC药物由抗体、连接子和细胞毒性药物三部分组成。抗体作为载体,负责识别和结合肿瘤细胞;连接子将抗体与细胞毒性药物连接在一起;细胞毒性药物则发挥杀伤肿瘤细胞的作用。
三、实施计划步骤
1.靶点选择:根据临床需求,筛选具有高表达、高活性的
肿瘤相关抗原作为靶点。
2.抗体筛选:利用杂交瘤技术、基因工程等方法,筛选出
与目标抗原特异性结合的抗体。
3.连接子设计:根据抗体的性质和细胞毒性药物的特性,
设计合适的连接子,确保药物稳定性和活性。
4.药物合成与优化:将抗体、连接子和细胞毒性药物进行
偶联,合成ADC药物,并通过药效学和药代动力学实
验,对药物进行优化。
5.临床试验:进行Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期临床试验,评估ADC
药物的疗效、安全性和耐受性。
6.生产与上市:根据临床试验结果,申请ADC药物的生
产和销售许可,并组织生产与销售。
7.监测与评估:对上市后的ADC药物进行持续监测和评
估,确保其安全性和有效性。
荧光纳米颗粒标记免疫分析
免疫分析是利用抗体和抗原之间的高特异性反 应而对抗原 、抗体或相关物质进行检测的技术 。在 标记免疫分析出现之前 ,免疫分析基本处于定性或 半定量阶段 。标记免疫分析引入了探针系统进行检 测 ,大大提高了灵敏度 。根据标记物的不同可以将 免疫分析分为放射性免疫分析 ( RIA) 、酶联免疫分 析 ( ELIA) 、化学发光免疫分析 ( CLIA) 、荧光免疫分 析 ( FIA) 等 。
particles fluorescent particles Eu2O3 coated with APTMS
chelated Eu3 + ion2incorporated PEG tethered nanosphere
adsorption thionyl chloride N , N 2diisopro2 pylethylamine N2succinimidyl242( N2maleim idomethyl) cyclohexane212 carboxylate (SMCC)
Leabharlann Baidu
Abstract Fluorescent nanoparticles are popular labels in immunoassay research. They effectively increase the number of fluorescers on a detection molecule and contribute to ultra high sensitivity. But there are many differences in labeling and immunoassay of nanoparticles from conventional fluorescent labels. This restrains their broad application in diagnosis. The labeling methods , immunological configurations and influence factors of fluorescent nanoparticles in recent years are reviewed.
创新医药抗体偶联药物发展分析
创新医药抗体偶联药物发展分析
抗体偶联药物(ADCs)是一种创新的医药技术,通过将抗体与药物紧
密结合,实现靶向治疗肿瘤等疾病。随着技术的不断发展,ADCs在肿瘤
治疗领域具有巨大的潜力。本文将对创新医药抗体偶联药物的发展进行分析,重点讨论其优势、挑战以及未来趋势。
首先,抗体偶联药物具有明显的优势。与传统的化疗药物相比,ADCs
能够更加精准地靶向肿瘤细胞,减少对正常细胞的毒性影响。抗体的高度
特异性使得ADCs能够精准识别特定肿瘤细胞上过表达的抗原,并将药物
释放到目标细胞中。此外,ADCs还具有较长的血液循环周期,延长药物
在体内的半衰期,增加药物的疗效。
然而,抗体偶联药物的发展仍然面临一些挑战。首先,ADCs的制备
技术相对复杂,包括合成抗体、药物连接和药物传递等环节。制备过程中
可能产生不同的异构体和杂质,对药物的活性和安全性产生负面影响。此外,ADCs的稳定性也是一个关键问题,由于药物与抗体的共价键连接,ADCs易受到降解和失活的影响。另外,ADCs的药物载体也需要合理设计,以保证药物的释放速度和目标细胞内的靶向性。
为了致力于克服这些挑战,ADCs的开发趋势逐渐向着优化抗体、改
进链接技术和设计新的药物载体方向发展。首先,通过优化抗体的特性和
偶联点,提高ADCs的亲和力和稳定性,降低副作用。此外,改进抗体的
药物连接技术,以增加药物的稳定性和药效。例如,引入新的化学修饰物
和改变链接的位置,可以改善ADCs的性能。最后,设计新的药物载体,
以提高药物的释放速度和存活时间。这包括使用可控释放系统、pH敏感
抗体偶联药物技术
抗体偶联药物技术
抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)技术是一种新型的
靶向治疗方法,它将单克隆抗体与小分子细胞毒性药物通过连接子进行偶联,形成一种能够同时具有靶向性和杀伤性的药物。以下是对抗体偶联药物技术的主要方面的详细介绍:
1. 抗体选择
在ADC技术中,抗体的选择是至关重要的。理想的抗体应具有高亲和力、
高特异性和高稳定性。通常使用的抗体是针对肿瘤相关抗原的单克隆抗体,这些抗原通常在肿瘤细胞表面过度表达,而在正常细胞中不表达或低表达。
2. 药物载荷
ADC中的药物载荷通常是小分子的细胞毒性药物,如化疗药物或毒素。这些药物通过连接子与抗体进行偶联,形成ADC。连接子的选择对于药物的稳定性、抗体的靶向性以及药物的释放至关重要。
3. 连接子
连接子是ADC中的关键组成部分,它能够将抗体与药物载荷连接在一起。
理想的连接子应具有稳定性、可选择性、可降解性和低免疫原性。常用的连接子包括硫醚连接子、腙连接子和二硫键连接子等。
4. 药代动力学优化
ADC的药代动力学性能对其疗效和安全性具有重要影响。研究人员通过改变抗体与药物载荷的比例、优化连接子的稳定性等手段来优化ADC的药代动力学性能。优化后的ADC应具有较高的肿瘤组织浓度、较低的正常组织浓度以及
较长的半衰期。
5. 安全性评估
ADC的安全性评估是其开发过程中的重要环节。在临床前研究中,需要对ADC进行全面的安全性评估,包括对动物的毒理学研究、药代动力学研究以及
对免疫原性的评估等。在临床试验中,需要对患者的安全性进行密切监测,包括对不良反应的记录和处理。
医学ASOC的概念
医学ASOC的概念
医学ASOC是医学文献中的一个术语,全称为Antisense Oligonucleotide Conjugates(反义寡核苷酸偶联物),是近年来新兴的生物技术,在药物研发和治疗中展现出巨大的潜力。
ASOC是由短寡核苷酸(octamer oligonucleotide)通过成键方式与其他生物活性物质(一般是药物分子)共价结合而成的一种药物分子。ASOC的核酸片段与靶点的mRNA互补结合,引发一系列的生物学反应,从而发挥治疗作用。
ASOC的设计和合成需要经过多个重要的步骤。首先,需要对特定的靶分子进行深入的研究,找到基因组中合适的mRNA靶点,并确定合适的寡核苷酸序列。然后,将这些寡核苷酸序列与其他生物活性物质(如药物分子)结合,形成ASOC。最后,对ASOC进行体内外的活性和安全性评价,以确定其治疗效果和潜在的毒副作用。
ASOC的应用非常广泛,可以用于治疗多种疾病。例如,ASOC可以用于癌症治疗,通过特异性地靶向肿瘤细胞的相关mRNA,抑制肿瘤细胞的增殖和生存能力,从而达到治疗的效果。此外,ASOC还可以用于治疗遗传性疾病,通过靶向病理基因的mRNA,纠正或抑制其功能异常,从而改善病情。另外,ASOC还可以用于治疗感染性疾病,例如HIV、乙肝等,通过靶向病原体的相关mRNA,干扰其复制和感染能力。
ASOC具有许多优势,使其成为一种有吸引力的药物研发和治疗方法。首先,ASOC可以实现高度的特异性靶向,只作用于特定的mRNA,减少对整个基因组的影响,从而降低了治疗的副作用。其次,ASOC具有较强的穿透细胞膜能力,可以进入靶细胞内部,发挥治疗作用。此外,ASOC具有较好的稳定性和可控性,可以根据需要调整其剂量和给药途径。最重要的是,ASOC可以用于治疗一些传统药物难以解决的疾病,例如肿瘤或遗传性疾病。
抗体偶联细胞(acc)技术
抗体偶联细胞(acc)技术
抗体偶联细胞(Antibody Conjugated Cell,ACC)技术是一种将固定在细胞膜上的特异性抗体与荧光染料或磁性微珠结合,用于检测特定细胞表面标志物的技术。ACC技术具
有高灵敏度、选择性和特异性的优点,可以广泛应用于生物医学研究、临床诊断、药物研
发等领域,已成为细胞表面分析的常用工具之一。
抗体偶联细胞技术的原理是将细胞表面标志物与特异性抗体结合,并将抗体与荧光染
料或磁性微珠偶联,使细胞表面标志物和抗体偶联物结合成复合物。荧光染料或磁性微珠
的特异性信号可以用于检测、分离和纯化细胞膜上的特定表面标志物。
抗体偶联细胞技术可以应用于多种不同类型的细胞分析,包括细胞分选、流式细胞术、荧光显微镜、磁性分选和细胞免疫荧光检测等。在流式细胞术中,抗体偶联细胞技术常常
被用于检测特定的免疫细胞亚群、表面标志物或细胞因子的表达水平。在药物开发中,抗
体偶联细胞技术也被用于筛选和评估可能对细胞表面标志物和基质相互作用的药物分子。
在应用抗体偶联细胞技术时,我们需要根据要检测的细胞表面标志物的特异性,选择
合适的抗体和荧光染料或磁性微珠。选择合适的抗体可以最大程度地提高分析的灵敏度和
特异性,而荧光染料或磁性微珠的特性则很大程度上影响了检测的可行性和灵敏度。
随着技术的不断进步,抗体偶联细胞技术将会在细胞表面分析中发挥越来越重要的作用。例如,利用神经元表面标志物的荧光分析技术,可以在神经元分子分析和神经网络形
成研究中实现全面和准确的细胞表面分析。此外,抗体偶联细胞技术也可以用于肿瘤细胞
藻胆蛋白与单克隆抗体交联试剂的探索
藻胆蛋白与单克隆抗体(kàngtǐ)交联试剂的探索
R-phycoerythrin标记(biāojì)抗猪瘟病毒荧光抗体的制备及其与FITC标记荧光抗体检测的比较(bǐjiào)研究
用摩尔(móěr)比100∶1的化学(huàxué)交联剂SPDP分别(fēnbié)将RPE、抗猪瘟病毒抗体衍生,两种衍生物再以摩尔比1∶1液相交联,HPLC纯化制备出RPE标记的抗猪瘟病毒荧光抗体。对制备的荧光抗体从荧光特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用固相免疫荧光检测法,以制备的RPE、FITC分别标记的荧光抗体检测猪瘟病毒细胞毒。结果表明,RPE标记的荧光抗体检测阳性微球在蓝绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无本底光干扰,检测灵敏度高达2.67×10-
6mg.mL-1,是FITC标记的荧光抗体检测灵敏度的10倍。RPE可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。
藻红蛋白标记抗鸡IgG荧光抗体的高效制备
【摘要】:藻红蛋白的斯托克位移大,荧光量子产率高,荧光明亮,是一种应用前景广阔的荧光染料。制约藻红蛋白应用的主要因素是分离纯化困难及其成品售价昂贵。通过我们已经建立的藻红蛋白低成本高效制备平台,使其应用于预防兽医学检测成为可能。首次采用适宜摩尔浓度的交联剂SPDP将藻红蛋白与抗鸡IgG抗抗体以摩尔比1∶1高效交联,经高效液相色谱法纯化制备出藻红蛋白标记的抗鸡IgG荧光抗抗体。本研究对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、纯度及稳定性等方面进行了鉴定。结果表明,藻红蛋白标记的抗鸡IgG荧光抗体为电泳纯,荧光明亮,抗体活性高,性质稳定,可用于鸡传染病的间接免疫荧光检测
一种抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定_于传飞
一种抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定
于传飞†, 李萌†, 郭玮, 王兰, 张峰, 刘春雨, 王文波, 王军志, 高凯*
(中国食品药品检定研究院, 北京 100050)
摘要: 用两种方法即液质联用和紫外分光光度法对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定, 为科
学评价和有效控制药物抗体偶联比提供可靠方法。采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析, 根据
偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目; 采用紫外分光光度计在252及280 nm处进行吸收度测量,
根据抗体和药物在不同波长处的吸收系数不同, 由二元一次方程求导出药物抗体偶联比。两种方法测得的药物
抗体偶联比分别为3.21及3.25, 结果相似, 都可用于此种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比分析。
关键词: 抗体药物偶联物; 药物抗体偶联比; 液质联用
中图分类号: R917 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2014) 03-0363-05 Determination of drug antibody ratio in an antibody-drug conjugate YU Chuan-fei†, LI Meng†, GUO Wei, WANG Lan, ZHANG Feng, LIU Chun-yu,
WANG Wen-bo, WANG Jun-zhi, GAO Kai*
(National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China)
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物的研究进展
抗体药物偶联物(antibody-drug conjugates,ADCs)是一种由单克隆抗体与化学药
物通过共价键结合而成的生物分子复合物。ADCs在肿瘤治疗上具有广阔的应用前景,其能够实现药物的靶向性、增加药物在肿瘤部位的稳态浓度,并最终导致肿瘤的死亡。
ADCs主要由三部分组成,即载体抗体、毒性药物和结合二者的连接剂。其中,抗体的选择决定了ADCs的药物靶向性,而药物和连结剂的选择则决定了ADCs的药物毒性。ADCs
的制备关键在于要实现药物与抗体之间的扩散过程,这不仅要求化学药物的稳定性、连结
剂的活性,还要考虑抗体活性和整个结构的稳定性。因此,ADCs的制备需要耗费较大的精力和费用。
在临床应用层面上,ADCs主要用于治疗肿瘤类疾病,如乳腺癌、黑色素瘤等。其中不乏一些ADCs已经进入临床阶段,如Ado-trastuzumab emtansine(Kadcyla,T-DM1)和Brentuximab vedotin(Adcetris)等。这些药物在肿瘤治疗上已经获得了很好的临床疗效,但是ADCs仍面临着一些制约因素,例如药物选型、药物的物理化学性质、药物分配
和代谢、抗体地位等诸多问题亟需解决。
总体而言,ADCs的研究进展是与多学科的交叉融合相伴随的。在此背景下,药物学、化学、细胞生物学、分子生物学等领域均为ADCs的研究做出了巨大的贡献。
未来,ADCs的发展会趋于多样化与个性化,从中发现动态的疗效和药物安全性之间的关联。ADCs的优化将依赖于新的生物标志物和建立“药物-靶标结构-功能-疗效”的整合
抗体工程及其临床应用
抗体工程及其临床应用
近年来,抗体工程技术的发展为人们带来了更多的治疗选择,尤其是在癌症等疾病治疗领域。抗体工程技术通过对人体免疫系统中存在的抗体进行改造和深入研究,以此为基础,设计出具有更高治疗效果和更好治疗作用的新型抗体药物。本文将介绍抗体工程技术的基本原理、临床应用以及未来的发展前景。
一、抗体工程技术的基本原理
抗体工程技术是基于生物技术的研究方法,它的研究目的在于设计和生产特定的抗体,以此为基础研究和开发治疗某些特定疾病的新型药物。该技术主要由以下三部分组成。
1.人工合成抗体基因
在抗体工程技术的初期阶段,主要是利用各种技术,开发出适合于人类生理情况的抗体基因,并将其植入到有效载体中,然后转化成一种具备治疗效果的新型抗体药物。
2. 生产抗体
通过离子交换、凝胶过滤等技术,可以对生产合成抗体进行提纯,使之更加纯净、安全、有效。
3. 测试新型抗体药物
将新型抗体药物注入到动物或人体中,通过药物代谢和副作用等方面的研究,来评估抗体的治疗效果。
二、抗体工程技术的临床应用
目前,抗体工程技术已经在临床治疗中取得了一定的成果,下面会介绍主要的两种临床应用。
1. 抗体药物治疗癌症
癌症是目前全球面临的一个重大疾病问题,而且常规的治疗方法对患者的生活质量和疾病的治疗效果都会有一定程度的影响。而抗体药物可以通过直接作用于癌细胞表面的特异性分子上,释放信号分子,抑制癌细胞的生长和分裂,达到治疗癌症的目的。目前,通过抗体工程技术设计出的新型抗体药物在癌症治疗中的应用似乎有更好的效果。
2. 抗体偶联毒素治疗皮肤病
_量子点抗体偶联技术研究进展
邢仕歌
储晓刚
*
( 中国检验检疫科学研究院 食品安全研究所,北京 100123 ) 量子点是一种半导体纳米晶体, 其具有激发光谱宽、 发射光谱窄, 光稳定性好, 良好的生物相容性等
各种优越的性能, 目前广泛应用于生物标记 、 生物传感和生物成像的研究中 。量子点生物学应用中最为关键 的一步, 是如何将抗体等生物大分子有效的偶联于量子点表面并保持其生物活性 。近年来, 尽管对量子点的 但量子点和生物分子之间偶联技术的综述还少见报道 。本文 制备方法和生物学应用进行了较为深入的研究, 从非共价偶联技术和共价偶联技术两个方面对各种量子点抗体偶联技术的特性进行分析, 也对未来量子点 生物学应用中将会遇到的挑战和发展趋势进行展望 。 量子点; 抗体偶联; 非共价结合; 共价结合
图1 Fig. 1
亲和素化的量子点和生物素化的抗体之间进行非共价结合
[43 ]
Noncovalent conjugation of streptavidincoated quantum dots ( QDs) to biotinylated antibodies
2. 2
双功能衔接器 / 蛋白 A 系统
952
分析化学
第 41 卷
3. 2
氨基和巯基共价结合
[ N1为了避免抗体结合位点的非特异性吸附 , 琥珀酰亚胺基 4马来酰亚胺甲基]环己烷羧化物 [38 ] ( SMCC ) 偶联反应被用于抗体和量子点的偶联 。 在 SMCC 的偶联反应中, 二硫苏糖醇 ( DTT ) 活化抗 SMCC 表面的顺丁烯二酰亚胺基结合。 在该方法中, 巯基和 QDs二硫键结合在 体产生巯基( Fc 片段) , 两个重链组成的铰链区, 能够选择性的粘附以构建两个抗体片段 , 每个片段都包含有自由的巯基和一个 抗原结合位点( 图 4b) 。
纳米药物 10、纳米诊断试剂
第10章纳米诊断试剂
生物学及生物医学的飞速发展对传统的检测及诊断方法提出了新的挑战,要求建立活体(in vivo)、原位(in situ)、实时(real time)、动态(dynamic)的检测及诊断新方法。传统的光、电生物化学传感器已不能适应这些新的要求,使用这些传感器经常会导致生物学损伤及相关的生化恶果。因此,发展新型、无创、实时、动态检测及诊断探针已经成为人们的一个研究热点。近年来,随着纳米技术的迅速发展,以纳米粒子为基础的新型生物传感技术不断涌现,这些新型生物传感器,不仅可以解决一些生命活动中的重大问题,还将在疾病的早期诊断及治疗中发挥巨大的作用。国家863计划将生物和现代农业技术领域中的纳米生物技术研究集中在医用纳米生物传感器和成像技术、纳米药物制剂或载体、纳米生物农药等三个方面[1]。目前已开发出基于荧光纳米颗粒的白血病、红斑狼疮和某些癌症的早期诊断方法,用这样的生物纳米试剂诊断白血病比现有试剂的灵敏度高数千倍[2]。
用于疾病早期诊断的纳米试剂很多,如半导体量子点、纳米金及磁性纳米粒子纳米诊断试剂等。本章前三节将重点介绍这三类纳米粒子及其诊断试剂的最新研究进展,第四节将简要介绍其它纳米诊断试剂的进展情况,最后一节介绍芯片技术在疾病诊断中的应用。
10.1量子点及其在医学诊断中的应用
10.1.1 引言
量子点是三维受限的、近似球状的无机半导体纳米晶体,尺寸通常在2-8nm之间,由200-10000个原子组成[3]。与传统的有机荧光染料相比,荧光量子点具有极其优良的光谱特性:(1)发射波长可通过控制它的粒径大小和组成来“调谐”,大小均匀的量子点谱峰为对称高斯分布,谱峰的半峰宽在30
SMCC-结构反应解释
SMCC是一类含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯和马来酰亚胺的双功能偶联剂.可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。NHS活性酯与伯胺在PH7-9的环境形成酰胺键。马来酰胺与巯基在PH6.5-7.5的环境下形成稳定的硫醚键。在水溶液中,NHS活性酯的水解是(与氨基的反应)个竞争反应。马来酰胺比NHS稳定,但是在PH大于7.5时,马来酰胺会慢慢水解,失去与巯基反应的特异性。因而,在使用SMCC时通常是在PH7.2-7.5的环境下进行,并且先让NHS发生反应。SMCC结构里的环己烷环可以降低马来酰胺的水解速率。这使得蛋白质在用SMCC修饰之后可以冻干存放一段时间。很多蛋白质都选用该试剂来进行马来酰亚胺修饰。
用SMCC来制备抗体-酶或者半抗原作载体的蛋白质,经常采用两步合成法。首先,含有氨基的蛋白质与几倍的偶联剂反应,反应结束后通过脱盐柱或者透析的方法除掉没有反应玩的SMCC。然后,再与含有巯基的蛋白质反应。在实际操作中要注意的是,SMCC怕潮湿,存放时要和干燥剂一起存放。并且使用中从冰箱拿出来时要先在室外放置一段时间平衡温度,以免立刻开启,空气中水分遇冷凝结,破坏SMCC结构。
INSTRUCTIONS
SMCC(succinimidyl4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate),50mg
Molecular Weight:334.32Spacer Arm:8.3ÅNet Mass Added:219.09
Storage:Upon receipt store desiccated at4°C.
抗体药物偶联物研究进展
抗体药物偶联物研究进展
李良;邵荣光
【期刊名称】《中国医药生物技术》
【年(卷),期】2014(000)004
【总页数】4页(P300-302,293)
【作者】李良;邵荣光
【作者单位】100050 北京,中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室;100050 北京,中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤
室
【正文语种】中文
近年来抗肿瘤抗体药物在基础研发、临床应用等方面都得到了快速发展。但现有抗体药物单独使用抗肿瘤疗效有限,临床上多与化疗药物联合应用,且多数初始接受抗体治疗有效的患者易产生耐药。抗体药物偶联物(antibody drug conjugates,ADCs)在提高抗体药物的治疗效果、克服耐药和充分利用抗体靶向性方面具有独特优势。目前,ADCs 俨然已成为新型抗肿瘤抗体药物研发的重点。本文拟对现有ADCs 研究现状作一简要概述。
1 ADCs 设计原理
单克隆抗体在对肿瘤细胞相关抗原的特异性和靶向性方面具有独特优势。由于对肿瘤细胞抗原具有高特异性亲和力,单克隆抗体的应用价值不仅体现在治疗方面,它同时还是药物靶向输送的理想载体。利用单克隆抗体对肿瘤细胞表面特异性抗原的
高亲和力可以将化疗或其他可杀伤肿瘤细胞的药物靶向输送至肿瘤病灶部位。当抗体与肿瘤细胞结合或被肿瘤细胞内吞后,化疗药物在肿瘤细胞周围或肿瘤细胞内以活性形式释放并发挥杀伤肿瘤的作用。ADCs 正是基于该基本原理设计的[1]。
目前在研的 ADCs 多为抗体和高效细胞毒药物的化学偶联物,其主要结构包括抗体、高效细胞毒药物、linker 三部分。ADCs 的抗体主要包括 B-细胞过表达抗原(CD20、CD22、CD40、CD79 等),T-细胞过表达抗原(CD25、CD30等),癌细胞抗原(HER2、EGFR、EpCAM、EphB2、PSMA、Cripto 等),内皮细胞抗原(endolin)等[2],理论上针对这些肿瘤相关抗原的单克隆抗体都有可能用于ADCs 的研发。相对抗体而言,可供选择的用于ADCs 偶联的细胞毒药物并不多。早期 ADCs 所选择的药物主要是已经在临床应用的化疗药物,例如阿霉素、长春
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华中科技大学
硕士学位论文
SMCC法抗体定向偶联技术的优化与应用研究
姓名:冯燕
申请学位级别:硕士
专业:生物医学工程
指导教师:杨祥良
2011-05-24
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
摘要
蛋白质偶联技术是采用一定的技术手段将具有生物活性的蛋白质与其它载体分子或标记物结合在一起的一种方法,在生命科学和医学领域有着广泛的应用。在标记免疫分析方法中,抗体与酶等标记物的偶联效果会直接影响到免疫方法的灵敏度和可靠性。
常用的偶联方法如戊二醛法、碳二亚胺法、过碘酸钠氧化法法等不可避免地会产生酶或抗体的自身交联产物或多聚物,致使偶联效率降低、结合物活性减弱。在此基础上发展起来的异性双功能偶联剂虽然可以克服这一不足,但酶在抗体上的连接位点具有随机性,导致抗体和酶的活性会受到影响。因此,在实际应用中,需建立一种能定向偶联的抗体偶联技术。
本研究采用SMCC法,研究优化了免疫球蛋白IgG与辣根过氧化物酶HRP的偶联条件,主要研究内容包括:
1) 采用体内诱生腹水法制备氯霉素单克隆抗体,并对其活性进行测定,建立竞
争曲线。
2) 从投料比、反应温度、反应时间三个方面对抗体的DTT还原反应过程进行
了研究,探讨了还原条件对免疫球蛋白的结构、活性等方面的影响。
3) 采用SMCC法将抗体与HRP偶联,并对其活性进行鉴定,并将其用于酶联
免疫吸附实验。
研究结果表明,DTT还原反应的温度和时间对抗体结构和活性影响不大,而DTT 的加入量则有明显影响:在封闭巯基的条件下,投料比小于为600时,还原产物以大分子片段居多,当投料比大于600后,产物主要为小分子片段,且抗体活性开始下降,到6000时活性几乎完全丧失;在未封闭巯基条件下,由于游离巯基会重新聚合,当投料比在600~12000之间,抗体活性与产物的组成差异均不明显。在将其应用于羊抗小鼠二抗与HRP的偶联中,确定优化的SMCC法偶联条件为DTT与抗体
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 投料的比为8000,反应温度为25℃,反应时间在20~30min。
关键词:定向偶联,抗体,SMCC,DTT
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
Abstract
The ability to conjugate a protein to another carrier or molecule has been widely used in life science research and medical science. In immunoassay, the conjugation of antibody and enzyme will directly effect sensitivity and reliability of the method.
Present methods, such as glutaraldehyde-modified,EDC-modified and sodium periodate-oxidized, have inevitably formed much polyer, reduced the efficiency and decreased activity of the conjugation. Heterobifunctional conjugation reagents like SPDP, MBS can overcome this shortage, but enzyme will crosslink somewhat randomly to nearly all parts of the antibody molecule,this in turn leads to an influence of antibody and enzyme.So we must establish a site-directed conjugation schemes for application.
This research conjugating condition of IgG and HRP was studied and optimized making use of SMCC-modified.
In this research,monoclonal antibody was produced by immuning asctic fluid,the activity and titer of antibody was determined by ELISA,and the competition inhibition curve was established. The DTT reduction reaction of IgG has been studied from feed ratio,reaction temperature,reaction time,and investigate its influence on the structure,activity of immunoglobulin. HRP has been conjugated with antibodies using SMCC as a crosslinking reagent,which would be used in ELISA.
The results showed that reaction temperature and reaction time have little effect on the structure and activity of immunoglobulin,but there is notable effect on them if we change the feed ratio.In the condition of blocking free sulphydryl, the activity of antibody begin to decline when the feed ratio is 600, and the activity is almost completely loss of when the feed ratio is 6000; but the free sulphydryl would re-aggregation if we do not block it, then the difference of structure and activity of antibody are not obvious when the