牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展
牛奶中抗生素残留规律研究
表 １ 奶 牛 的 投药 程 序
为保 障人 们 的身 体健 康 以及 促 进 我 国畜 牧 业 的快 速 发
展 ． 须 进 行 兽 药 残 留 的 研 究 ． 有 效 地 控 制 动 物 性 产 必 并 品 的 药 物 残 留 问 题 本 试 验 的 投 药 程 序 依 照 新 疆 地 区 奶 牛 生 产 中 药 物 的 使 用 剂 量 及 方 法 进 行 ． 了 解 每 种 药 物 在 牛 奶 中 的 残 以 留量 变 化 规 律 ． 得 相 关 的 科 学 数 据 ． 药 物 在 奶 牛 饲 获 对
基 金 项 目 ： 十 一 五 ” 家 科 技 支 撑 计 划 “ 北 奶 产 业 技 术 开 发 与 集 成 示 “ 国 西 范 ” ２ ０ ＢＡ ０ Ａｌ — ６） 新 疆 科 技 厅绿 色食 品科 技 行 动项 目 （０ ６ Ｄ ４ １ ０ ： （０ ６ １０ ） 国 家奶 产业 技 术体 系 。 ２ ０ ３ ７ ： １ 作 者 简 介 ： 欣 欣 （９ ４ ， ， 族 ， 士 研 究 生 ； １ ８ 一） 女 汉 硕 主要 研 究 方 向 ： 刍动 反 物 营 养
试 验 在 新 疆 维 吾 尔 自 治 区 乌 鲁 木 齐 市 五 一 农 场
进行 选择 患有 乳房 炎 的荷斯 坦 牛 ２ ０头 ． 随机 分 成 四 组 ， 组 ５头 试 验 奶 牛 的用 药程 序 如 表 １ 示 ． 每 所 投药
后 ， 霉 素 钾 、 霉 素 和 头 孢 噻 呋 钠 分 别 在 停 药 １ 、ｄ 青 链 ｄ ３ 和 ５ 中 午 采 集 牛 奶 样 品 ； 效 土 霉 素 在 停 药 １ 、ｄ、 ｄ 长 ｄ３
养生 产 中应用 有较 大 的经 济 和社 会 意义
牛奶中抗生素残留的检测方法
doi:10.19369/j. cnki. 2095 — 9737.2021.04.043牛奶中抗生素残留的检测方法范松阳(黑龙江省地质矿产实验测试研究中心，黑龙江哈尔滨150000)摘要：牛奶等乳制品中如果残留抗生素既会导致品质变差，严重时还会对发酵乳制品的生产造成影响，使其产量降低，并导致后期产品风味变差，损害生产者的经济效益，同时人们摄入后会 严重危害健康，如导致人体发生过敏反应（过敏性休克、皮疹等），使肠道中有益菌的生长被抑制，而致病菌、念珠菌等大量增殖，引起局部或者全身感染，还会使人体对抗生素形成抗药性，明显加大临床治疗难度。
现概述奶牛中抗生素残留的检测方法，供参考。
关键词：牛奶；抗生素残留；检测方法中图分类号：T S252. 7 文献标识码：B文章编号2095—9737(2021)04 —0074 —021理化检测法1.1检测原理该法主要是根据抗生素分子的性质，使用相 关实验仪器对其进行分离检测。
分离时常用的实 验技术为电泳检测或者色谱检测等，检测时常用 的实验技术为紫外检测、化学发光检测、荧光检测 或者质谱检测等。
1.2优缺点该法具有精确可靠、重复性好、检测灵敏、分 离效率高、结果稳定的特点，属于检测抗生素残留 的一种精确方法。
2微生物检测法该法是检测牛奶抗生素残留时应用比较广泛 的经典方法，主要有氯化三苯基四氮唑法（T TC 法）、纸片法、管蝶法以及试剂盒法等。
2.1检测原理主要是根据抗生素对微生物的机能、生理代 谢产生的抑制作用来对样品中残留抗微生物药物 进行定性。
2.2优缺点这种检测方法具有费用低、操作简单、结果可 靠、不需使用高级实验设备的优点，可应用于普通 养殖场及实验室。
但由于需要进行微生物培养，因此有相对较长的检测时间，无法实现定量检测，不可检测出某些抗生素的最低限。
2.3常用方法2.3. 1T TC 法将9m L灭菌脱脂乳中接种提前制备好的嗜热链球菌菌种，放人3 6±1C恒温培养箱中经过15 h活化，然后对脱脂乳按1 〇 1比例进行稀释制 成测试菌液。
浅谈我国液相色谱法检测牛奶中抗生素残留研究现状
后进行高效液相色谱测定， 建立 了一种简单 、 高效的同时
检测牛奶 中四环 素 、 霉素 、 金 强力霉 素三种 四环素类 抗 生 素残 留量 的方法 。该 方法可 以在 十分钟 内分 离检 测三种
定法三大类。其中， 高效液相色谱是 目前应用最为广泛的
一
四环素类抗生素。张俊升运用反相高效液相色谱一二极 管阵列检测器建立了牛奶中土霉素、 金霉素的残 留分析
维普资讯
《 诤量与溺试技 术》 ｏ ８年第 ３ ２ｏ ５卷第 ７期
浅 谈 我 国 液 相 色 谱 法 检 测 牛 奶 中 抗 生 素 残 留 研 究 现 状
ＳｍｐｅＩ ｔｏ ｕ ｔｎｏ ｈ ｔ ｍｉａｉｎｏ ｔ ｉｔ ｓｎｉ ｉ ｌ ｎｒｄ ｃｏ ｎ ｔｅ ｅ ｎ ｔ ｆＡｎ ｉ ｏｉ ｉ ｎ Ｄｅ ｒ ｏ ｂ ｃ
素 的刺 激而 发生过 敏反应 ． 而从 未使用 过抗生素 的初 生 婴儿如果 由于食用 含有 青 霉素 残 留的牛 奶 而被 致 敏 ， 当
三个方面。如张琰图等利用恒 电流电解 方法在线 电生
Ｂ Ｏ一和鲁米诺 之 间产 生 的 化学 发 光 ， 出 了一 种 高 效 ｒ 提 液相色谱 化学发光 法检测 ４种 四环素类 抗 生素药 物 的新 方法 ． 方法 已成功应用 于牛 奶 中残 留 四环素类 抗生 素 该 含量 的分 析 ， 韩宝 武等 通过 对 牛 奶 中 四环 素类 药 物 进 行 提取 ， 经多壁碳 纳米管 做 吸附剂 的固相萃 取柱 净化 ， 再 然
量， 通过样 品的提取 、 脱蛋 白、 离心、 层析柱净化、 衍生化等步
骤， 提取出牛奶中的抗生素分子， 进行定性、 定量研究。
３ 优势 和现 状 在检 测牛奶 抗生 素 残 留 的理 化检 测 方法 中 ， 效 液 高
牛奶中抗生素残留检测的研究现状
第１７期 收稿日期：２０２０－０６－１３作者简介：马 娅（１９８７—），女，甘肃定西人，兰州石化职业技术学院讲师，硕士研究生，主要研究方向为化学与生物传感器。
牛奶中抗生素残留检测的研究现状马 娅，马丽娜，史俊杰，焦林宏，王红玉（兰州石化职业技术学院，甘肃兰州 ７３００６０）摘要：牛奶在人们饮食中占有重要地位，但是种种原因使得抗生素残留于牛奶中，严重影响奶品品质及人体安全，乳品中抗生素残留的检测和管理尤为重要。
本文主要介绍牛奶中抗生素残留的三种检测方法：微生物检测法、理化检测法和免疫法。
而我国在生产管理上常用的筛查检测方法有ＴＴＣ法和ＳＮＡＰ法，两种方法各有优劣，而基于ＴＴＣ法的试纸检测法是一种正在研发的有潜力的筛查分析方法。
关键词：牛乳；抗生素；残留；检测方法中图分类号：Ｏ６５７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０２０）１７－００８３－０２ 牛奶因其营养成分齐全、营养价值高、易消化吸收等特点，被誉为“食品之王”，逐渐成为人们生活中不可或缺的一种食品。
然而，奶牛饲养中为预防疾病常在饲料中添加抗生素，服用大剂量抗生素药物，获得的奶品中添加抗生素防止其腐坏［１］，这些因素均会导致抗生素在牛奶中残留，长期饮用含抗生素残留的牛奶不仅危害人类的健康，同时由于抗生素对发酵乳中发酵菌种的繁殖产生抑制作用使其发酵异常从而影响奶制品的品质［２］。
世界卫生组织（ＷＨＯ）在１９７９年就已经将抗生素列为污染物，之后各个国家都开始关注牛奶中抗生素残留检测，提出了不应检出抗生素的要求。
２００１年中华人民共和国农业行业标准也规定了无公害食品－生鲜牛乳中不能检出抗生素。
我国农业部在２００１年１０月发布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》，明确规定“新鲜牛乳中抗生素不得检出”。
２００２年发布的《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定，奶中最高允许残留量（单位ｎｇ／Ｌ）标准是：新霉素为５００；庆大霉素为２００；林可霉素为１５０；四环素、土霉素、磺胺类等均为１００［３］。
牛奶抗生素残留检测方法研究进展
Ａｂｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ Ｉ ｎ ｒ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｙ ｅ ａ ｒ ｓ， ｔ ｈ ｅ ｅ ｍｅ ｒ ｇ ｉ ｎ ｇ ｆ ｏ ｏ ｄ ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓ ａ ｔ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ａ ｔ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｉ ｇ ｈｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｏ ｏ ｐ ｈ ｏ ｌ ｅ ｓ ｉ ｎ ｆ ｏ ｏ ｄ ｓ ｆｅ ａ ｔ ｙ Ａｓ ａ ｎ ｕ ｔ ｉｔ ｒ ｉ ｏ ｕ ｓ ｉ ｎｅ ｘ ｐ ｅ ｎ ｓ ｉ ｖ ｅ ｆ ｏ ｏ ｄ ， ｍｉ ｌ ｋ ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓ ａ ｌ ｍｏ ｓ ｔ ｉ ｎ ｖ ｏ ｌ ｖ ｅ ｅ ｖ ｅ ｒ ｙ ｏ ｎ ｅ ． Ｏｎ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｒ ｅ ｓ ｅ ｉｏ ｒ ｕ ｓ ｐ ｒ ｏ ｂ ｌ ｅ ｍｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｉ ｎ ｍｉ ｌ ｋＳ ｏ ｉ ｔ ｉ ｓ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｔ ｏ ｃ ｈ ｏ ０ ｓ ｅ ａ ｐ ｒ ｏ ｐ ｅ ｒ
现 代 农业 科技
２ ０ １ ３年 第 ５期
牛奶抗 生素残 留检测方法研究进展
刘雪 杰 １ ， ２ 邱宏端 陈济琛 ｚ 林新 坚 ｚ
（ ‘ 福 州 大 学 生 物 科 学 与 工程 学院 ， 福建 福州 Ｉ ３ ５ ０ １ ０ ８ ； 福建省农业科学院土壤肥料研究所）
摘 要 近年 来 ， 不 断 出现 的食 品 安 全 问题 引起 了人 们 的 重视 ， 凸显 了食 品 安 全方 面存 在 的 一些 漏 洞。 牛 奶 作 为 一种 营 养丰 富、 价 格低 廉 的食 品 ， 其安 全 问题 几乎 牵 涉到 每一 个人 ， 而 抗 生素 残 留问题 是 牛奶 安全 问题 中比较 严 重的 一 个。 如 何 快速 准 确地 检测 牛奶 中是 否存 在 抗 生 素残 留很 重要 。 主要 综述 了检 测牛 奶 中抗 生素 残 留的 不 同方法 及各 自的特 点 。 ’ 关键 词 牛奶 ； 抗 生素 残 留 ； 检测 方 法 中 图 分 类 号 Ｒ１ ５ ５ ． ５ 文献 标识 码 Ａ 文章 编 号 １ ０ ０ ７ — ５ ７ ３ ９ （ ２ ０ １ ３） ０ ５ — ０ ３ ０ ０ — ０ ３
牛奶中抗生素残留现状及检测方法的研究进展
０ 前 言
目前 ． 国内外关于抗 生素的残留检测方法 主要有 以下三大类 ：
光 分光光 度法 、 毛细管 电泳【 １ ］ 等． 最 常用 的是 高效液相 色谱及 其联 用 中抗生素残留问题 Ｅ ｌ 益受到消费者的重视 ． 已成为乳业 管理 和技术 的 技 术包括薄 层色谱 一 质 谱（ Ｔ Ｌ Ｃ — Ｍ Ｓ ） 、 气相 色谱一 质谱 （ Ｃ Ｃ — ＭＳ ） 、 液 相 难题之一 本文综述了牛奶中抗生素的残留现状和危害 ． 并介 绍了三 色谱 一 质谱 （ Ｌ Ｃ — ＭＳ ） 、 超ｌ ｝ 缶 界流体色谱一 质谱 （ Ｓ Ｆ Ｃ — Ｍ Ｓ ） 等。Ｍ ａ ｒ ｃ ｈ ｅ ｔ ｔ ｉ ｔ ￣ 大类检测方法 等 使用高效液 相色谱法检 测牛奶 中的青 霉素 Ｇ 、青 霉素 ｖ、苯唑西 林、 邻氯青霉 素 、 双氯青霉 素 ， 其 中青 霉素 Ｇ的检测 限度为 ４ ｇ ／ Ｌ ， 其 １ 牛 奶 中抗 生 素 的来 源 它 ４种青 霉素 的检测 限为 １ ０ ￣ ＃Ｌ 林维宣 等采用色谱一 串联质谱法 牛奶 中抗生素的残留主要以下几个方面原因： （ １ ） 对泌乳期奶牛用药 （ Ｌ ｃ — Ｍｓ ／ Ｍｓ ） 检测技术对 牛奶 中 ４种多 肽类抗生 素黏菌 素 Ｂ 、 黏杆菌 不当引起牛乳中抗生素残 留； （ ２ ） 把抗生素作为奶牛饲料添加剂使用 ； （ ３ ） 素、 杆菌肽 和维 吉尼霉素 残留量进行检测 表明 ． ４种抗 生素 的检测下 因挤奶工具和贮奶设备造成的患病奶牛与健康奶牛之间的交叉污染 ； （ ４ ） 限可达 ２ ０ — ２ ５ ０ ｔ ｘ ｇ ／ ｋ ｇ ， 且重复性强 。 这些方法 能对抗 生素进行定性 、 定 部分不法奶农为防止细菌的大量繁殖和牛奶 的酸败而人为添加抗生素。 量测定 ， 检测速度快 ， 灵 敏度 、 特 异性 和分辨率均 很高 ， 重 复性好 。但 是其 检测要 求高 ， 需要 昂贵 的检测设 备 ． 检 测程序 较复杂 ， 检测 费用 ２ 牛 奶 中 残 留 的抗 生素 的种 类 及 其 危 害 较高． 而且 只能用 于单个样 本 的检 测 ． 一般应 用于科 研 ． 很 难在 基层 抗生素在奶牛疾病 预防和治疗 中发挥了巨大的作用 ． 但牛奶 中残 推广应用 。 留的抗生素对人体存在潜在 的危 害 ， 表 现在 ： （ １ ） 引起过敏反应 ， 由于 ４ ． ２ 微生物学检测方法 许 多抗生素药物如青霉 素、 四环素 、 磺胺类药 物均有一定抗原性 ， 可引 目前 ． 牛奶 中抗菌药物残 留的微生物学分析方法 一般分为微生物 起 人们的过敏反应 ； （ ２ ） 诱 导人体 内产 生耐药性菌株 ， 造成人体 内的菌 生长抑制法 、 微生物受体法和酶促 比色法 群 失调 ， 使人 的免疫 力降低 ， 严 重时可危及 病人生命 ： （ ３ ） 影响奶制 品 ４ ． ２ ． １ 微 生 物 生 长 抑 制 法 品质 ， 降低产量和质 量 ， 给生产 者造成经济 损失 ： （ ４ ） 一些 化学性质稳 其测定原理基于抗生素对微生物 的生理机能 、代谢 的抑制作用 ． 定 的抗 生素被排 泄到环境 中将会造成环境 污染 ． 破坏生态平衡 ： （ ５ ） 抗 可定性或定量确定样品 中抗生素的残 留 其工作菌株大多选用枯草芽 生 素本身存在一定 的副作用 （ 见表 １ ） 孢杆菌 、 嗜热脂肪芽孢杆菌 、 藤黄八叠球菌等敏感菌株 ， 其方 法包括纸 表１ 常见 抗 生 素 的 种 类 及 副 作 用 片法 （ Ｐ ａ ｐ ｅ ｒ Ｄ ｉ ｓ ｃ ） 、 戴 尔沃一 ｐ法和戴尔沃 一 ｐ多 次测试法 、 亮黑还 原法 （ Ｂ Ｒ — ｔ ｅ ｓ ｔ ） 、 藤 黄微球菌法 （ Ｓ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｕ ｔ ｅ ａ ｔ ｅ ｓ ｔ ） 、 三磷酸腺苷法 （ ＡＴ Ｐ ｔ ｅ ｓ ｔ ） 、 抗 生素种类 副作用 三碟法 （ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ － ｐ ｌ ａ ｔ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ） 、 六碟法 （ Ｓ ｉ ｘ － ｐ ｌ ａ ｔ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ） 。 这些方法都需要培养 喹诺 酮类 ｆ 如恩诺 沙星） 影响软骨发育 ． 学龄前儿童应用会导致鼻软骨 塌陷 微生物 ． 且存 在检测时 间长 ． 人为 因素影 响大及很难 实现标准 化定 量 ｐ － 内酰胺类（ 女 口 苄青霉 可引起过敏反应． 重者可引起过敏性休克而危及生命 检测等缺点。 但 由于操作简单 ， 价格低廉 ， 在我 国基层乳品企业还有应 氯霉素类（ 如氯霉素１ 会导 致内 脏损伤． 引发再生障碍ｆ 贫血和儿童的灰婴综合征 用 。 ４ ． ２ ． ２ 微生物受体法 磺胺类ｆ 磺胺二 甲嘧啶１ 可产生恶心 、 呕吐、 食欲不振 ， 有肾毒性 微 生物受 体分析法 Ｃ ＨＡ Ｒ Ｍ Ｉ 和Ｃ Ｈ Ａ ＲＭ Ｉ Ｉ 可适用 于检测 不同基 大环 内酯类（ 如红霉素） 可引起 腹泻 、 恶心等 胃肠道反应 质样品中各种抗 生素残留。Ｃ Ｈ Ａ Ｒ Ｍ Ｉ 是 专用于牛奶中 Ｂ 一 内酰胺抗 生 四环素类 ｆ 如四环素１ 影响牙齿和骨骼 的发育 ． 并有一 定的肝毒性 素残留的检测方法 ． 也是美 国官方分析 师协会 （ Ａ Ｏ Ａ Ｃ ） 承认 的第一 个 快速测 定法。Ｃ Ｈ Ａ Ｒ Ｍ Ｉ Ｉ 适用抗生素大类筛选 ， 具有灵敏度高 、 检测谱 氨基糖苷类ｆ 如链霉素） 易损 害听觉神经 ． 引起共济失调 光． 操作 简单快速等优点 ４ ． ２ ＿ ３ 酶 比色 法 ３ 牛 奶 中抗 生 素 残 留 标 准 酶 比色法来 自于 Ｐ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ 法 ．是用于快速检测 牛奶中 Ｂ － 内酰胺 一 内酰胺类抗生 素时 Ｄ Ｄ 一 随着 消费者 和国家 主管 部 门对牛奶 中抗 生素残 留危 害的认 识 ． 类抗生 素的定量 酶比色法。其 原理是 测定 Ｂ 一 内酰胺类抗生 素的量 ２ ０ ０ １ — ２ ０ ０ ２ 年农业部公布了《 无公害食 品生鲜牛￣ Ｌ ） （ Ｎ Ｙ ｆ ５ ０ ４ ５ — ２ ０ ０ １ ） ． 羧肽酶灭 活的程 度。这 种方法对于牛奶 中的 Ｂ — ０ ． ０ １ ７ Ｉ Ｕ ／ ｍ Ｌ之间 规定 了“ 抗生 素不得 检出” ． ２ ０ ０ ２年 １ ２月又发布 了《 动物性食 品中兽 可以定量估计 到 ０ ＿ ３ 免 疫 分 析 法 药最高残留限量》 ， 其中对牛乳中的兽药残 留限量作 了明确规定 ． ２ ０ ０ ８ ４ 免 疫分析法 的基 本原理是 以抗原或半抗 原和抗体 特异性结合 为 年 １ ０ 月 ６日， 国务院第二 十八 次常务会 议通过《 乳 品质量 安全 监督管 抗原一 抗体复合物的免疫反应为基础的生化测试技术 ．可分为 酶联 免 理条例》 ， 将抗生素残留检测项 目列为强制性检测项 目。 疫 吸附法 （ 核 心反应是抗原抗体识别 ） 和受体 吸附分析法 （ 核心反应是 ４ 牛 奶 中 抗 生 素 残 留 的检 测 方 法 受体配体识别 ） 。 与常规的理化分析技术相比 ． 免疫分 析技术最突出的 仪器 配置需求低 ， 可达到 ｎ ｇ — Ｐ ｇ级 ， 分 析 当前 ． 我国生产管理上常用的抗 菌药物残 留快速检测方法 主要有 优点是取样量小前处理 简单 、 Ｌ Ｃ或 Ｇ Ｃ的几十倍以上 Ｔ Ｔ Ｃ法和 Ｓ Ｎ Ａ Ｐ法 ， 但两者 分别存 在检测 用时久 、 操作较 为繁琐 和检 效率为 ＨＰ ． ３ ． １ 酶联免疫 吸附法 测 广谱性 小等缺点。 这就要求质检部门寻求更为有效的抗生素残留快 ４ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ是当前应用 最广 、 发展 最快 的免疫 测定技 术 ． 具 有灵敏 度 速检测方法。
乳品中抗生素残留检测方法研究进展
南京林业大学乳品中抗生素残留检测方法研究进展Review on the Methods for Determination of Antibiotic Residues in Milk Products侯雯食品科学与工程森林资源与环境学院指导老师：石瑞2011/12/22乳品中抗生素残留检测方法研究进展侯雯南京林业大学森林资源与环境学院江苏南京 210037摘要随着我国奶牛饲养业的日益发展，多种抗生素被越来越多地被应用于饲料添加剂和预防奶牛疾病中,不可避免地产生了乳品抗生素的残留。
乳品中残留的抗生素不但危害人体的健康,造成人体免疫力的降低，同时也会影响牛奶的品质，经济蒙受损失，对正常贸易产生负面影响。
文章从牛乳中抗生素残留的现状、来源、产生的危害、目前所用的检测方法以及近期检测方法的研究进展等方面进行综述，并对控制抗生素残留提出了相关的建议。
本文为加强我国对乳制品中抗生素的检测监督，解决目前乳品工业发展中面临的一些问题提供了参考。
关键词：乳品; 抗生素残留;微生物法;高效液相色谱法;免疫法Review on the Methods for Determination of Antibiotic Residues in Milk ProductsHouwen Forest Resources and Environment, Nanjing Forest University, Nanjing Jiangsu Province,210037ABSTRACT：With an increasing development of the milk industry in our country, multi-antibiotics have been applied widely to the feed additives and the preventing and treating diseases of dairy cattle ,which inevitably produces residues in milk. The antibiotic residues in milk not only do damage to people’s health, causing hypoimmunity ,but also have negative effects on the quality[在此处键入文档的摘要。
牛奶中抗生素残留检测技术进展
抗生素将会抑 制细菌的发酵 ， 降低产量 和质量 ， 给生产 者造
成经济损失。
牛奶 、奶 粉 、婴幼 儿奶 粉 和生 牛奶 的 阳性率 分 别 １．％ 、 ３ ３ ３ ． ３ ．％、．％；广州市卫 生防疫站 对广州市牛奶 中抗 ７８ ４４ ３２ ％、 生素 残留进行监测 ， 结果 如下 ： 消毒牛奶 、 奶粉 、 婴幼儿奶 粉 和生 牛奶 的阳性率分别为 ２ ％、９ ４ ％、０ 可见国内市 １ ３ ％、４ ６ ％。 场 中牛奶抗生素超标现象 十分严重 ， 碰引起神会重视 。
２ 牛奶中抗生素残留的现状
１ ． 产生耐药性菌株 ．２ １
某些 细菌因长期接触抗生素而 产生 了耐 药性 ，当机体 发病 时， 因耐药 菌株 的存 在而使治疗效果 下降或完全失 效 ， 从而 危及病人生命 。
牛奶 中抗生素残留问题 日益 受到国际社会 的重视 。 联合 围粮农组织（ Ａ 和世界卫生健康组织 （ Ｏ） Ｆ Ｏ） ＷＨ 早在 １６ ９９年 就提 出 ，应对各种 动物性食品 中的抗生 素残 留规定允许标
１ ． 对泌乳期奶 牛的用药 治疗 对 泌乳期奶 牛用药不 当或 ．１ ２ 不注意安全时间是造成牛乳 中抗 生素残留的重要原 因， 尤其 是采用乳房灌注治疗奶牛乳房炎 时 ， 更易造成牛乳 中抗 生素 的残 留。美国食品和药 品管理局 （ Ｄ 调查结 果表明 ， 药 Ｆ Ａ） 用 不当是造成牛乳 中抗生素残 留的主要原因 。 １ ． 生素作 为奶 牛饲 料添加 剂使 用 在 饲料 中添加抗 ． ２抗 ２ 生素 ， 可有效抑制或杀灭 畜体 内的有 害微生物 ， 维持畜体 胃 肠道微生物 的平衡 ， 而促进动 物的健康 ， 从 提高其生产性能 。
牛奶中抗生素残留检测技术的研究进展
相同 ， 但填料更加精细 （ 直径 ５—１ ｍ） 需高压泵推动 ， ０ ， 柱效 高 （０ １５塔板／ ， ｍ） 速度 快 ， 灵敏 度与 Ｇ Ｃ相 近。与 Ｇ Ｃ相 比， Ｐ Ｃ Ｈ Ｌ
流动相参与分离 机制 ， 其组 成 、 比例和 ｐ Ｈ值 等可 灵活调 节 ， ： 如 离子对 色谱 、 胶束 色谱 、 手性分 离色谱 等 ， 许 多极难 分 离的 待 使 测 物得 以分 析。反相 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ发展最快 ， 目前 已成为大多数 抗生素 残 留 的 常 规 分 析 方法 Ｊ 主要 原 因是 ： １ 化 学 键 合 固 定 相 （ 。 。 （） Ｃ 或 Ｃ） 性质稳定 ， 不流失 ；２ 使用水 、 （） 甲醇或 乙睛等水溶 性有 机 溶剂作 流动相 ， 不干扰紫外检测 ， 成本低 ；３ 样 品中极性杂质 先 （） 流 出， 只需待测物 出峰后 即可重复进样 ， 分析速度快 。
第４ ０卷第 １ ０期
２１ ０ ２年 ５月 Ｇ ａ ｇｈ ｕ Ｃ ｅ ｉ ｌ ｎ ｕ ｔ ｕ ｎ ｚ ｏ ｈ ｍ ｃ ｄ ｓ ｙ ａＩ ｒ
Ｖｏ ． ０ Ｎｏ ０ １ ４ ．１ Ｍａ ２ ２ ｖ． ０ｌ
牛 奶 中抗 生 素 残 留检 测 技 术 的 研 究 进 展 木
陈家越
是 关 键 问题 。液 一 联 用 要 通 过 一 个 “ 口 ’来 实 现 。在 接 口 质 接 ， 有 关 检 测 技 术 列 为 标 准 检 测 方 法 。
一
率很高 ， 故可极大地放大反应效果 ， 从而使测定 方法达到很 高的 敏 感 度 。１７ 年 Ｅ ｇａ 和 Ｐｒ — ｎ 表 了 酶 联 免 疫 吸 附 测 ９１ ｎｖｌ ｌ ｅ ｍ ａ ｎ发 ｌ 定（ ＬＳ 用 于 ＩＧ定量测 定的文章 ， Ｅ ＩＡ） ｇ 使得 １６ ９６年开始用 于抗 原 定 位 的 酶 标 抗 体 技 术 发 展 成 液 体 标 本 中微 量 物 质 的 测 定 方
牛乳中青霉素残留检测技术研究进展
收 稿 日期 ：２ １－０ －２ ０ ５ ２ ０
５ ２
２ １ 年 第９ 总 第 ７ ９ ００ 期 ； 期
肉类研究
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牛乳 中青霉 素残 留检 测 技术研究进展
卢秀彬 ， 陈峰 ，杨 斌 ，魏 彦杰
（ 南大 学 食 品科 学学 院 ，重庆 ，４ ０ １） 西 ０ ７ ６
Ａｂｓ ｒ ｃ ： Ｐｅ ｉ ｉ ｉ ｅ ｉ ｕ ｓ ｉ ｓ ｅ ｎ ｍ ｉ ａ ｅ ｂ ｅ ｄ ｌ ｏ ｃ ｒ ｅ ａ ａ ｅ ｎ ｅ ａ ｔ ｅ ｔ ｔａ ｔ ｎ ｃ ｌ ｎ ｒ ｓｄ ｅ ｓ ｕ ｓ ｉ ｌ ｈ ｖ ｅ ｎ ｗｉ ｅ ｙ ｃ ｎ ｅ ｎ ｄ ｂｙ ｍ ｎ ｇ ｍｅ ｔｄ ｐ ｒｍ ｎ ｌ ｋ Ｏ ０ ｄ ｓ ｆ ｔ ｎ ｎ ｅ ｎ ｔ ｎ ｌｏ ｇ ｎ ｚ ｔｏ ｓ ． ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｍ ｅ ｈ ｄ ｆｐ ｎ ｃ ｌ ｎ ｒ ｓｄ ｅ ｎ ｍｉｋ ｗｅ ｅ ｆｆ Ｏ ａ ｅ ｙ ａ ｄ ｉ ｔ ｒ ａ ｉ ａ ｒ ａ ｉ ａ ｉ ｎ Ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｔ ｏ ｓ ｏ ｅ ｉ ｉ ｉ ｅ ｉ ｕ ｓ ｉ ｌ ｒ ｏ ｏ ｌ ｉ ｔｏ ｕ ｅ ， ｎ ｌ ｄ ｎ ｃ ｏ ｉ ｌ ｇ ｅ ｅ ｔ ｎ ｍ ｅｈｏ ｓ ｍｍｕｎ ｌ ｇ ｃ ｌｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｍ ｅ ｈ ｄｓ ａ ｄ ｐ ｙ ｉ ａ ｎ ｒ ｄ ｃ ｄ ｉ ｃ ｕ ｉ ｇ ｍｉ ｒ ｂ ｏ ｏ ｙ ｄ ｔ ｃ ｉ ｔ ｄ ，ｉ ｏ ｏ ｏ ｉ ａ ｅ ｅ ｔ ｔ ｏ ｎ ｈ ｓｃ ｌ ｏ ｃ ｅ ｓｒ ｅ ｅ ｔ ｎ ｍ ｅｈ ｄ ． ｈ ｍ ｔ ｄ ｔｃ ｉ ｔ ｏ ｓ ｉ ｙ ｏ
鲜奶中四环素类药物残留检测方法建立
鲜奶中四环素类药物残留检测方法建立——高效液相色谱法近年来，由于在奶牛饲料和治疗中广泛应用到了四环素类抗生素(TCs)，从而引起牛奶中TCs 的残留。
长期食用含TCs的牛奶会危害人体健康，因此应严格控制畜禽肉中TCs的残留量。
本文在参考国内外检测方法的基础上，建立了用液相色谱法测定鲜奶中四环素类抗生素残留量最佳方法，填补了我单位这方面工作的技术空白，可为牛奶样品中四环素类药物及其代谢产物残留的监督检验和残留监控提供技术支持。
1．仪器与试药戴安公司高效液相色谱仪（带可变波长紫外检测器），漩涡混合器，超声波仪，离心机，氮吹仪。
土霉素(0TC)、四环素(TC)、金霉素(CTC)标准储备液配制：准确称取0TC、TC、CTC 固体标准品各0.01g，用0.1mol/L盐酸溶解，并用甲醇定容至10mL，此三种标准储备液含量为1mg/mL (4℃下可保存一周)。
混合标准溶液：取0TC、TC标准储备液各1mL，CTC标准储备液2mL，用甲醇定容至1O ml，此混合标准液中OTC、TC含量分别为100μg／ml（ppm），CTC含量为200μg／ml（ppm） (当天配制当天使用)。
Mcllvalane-EDTA缓冲溶液配制：分别称取1水柠檬酸11.8g,12水磷酸氢二钠27.6g，12水乙二胺四乙酸二钠37.2g，溶于1L水中，用盐酸调节PH至3.8。
0.01mol/L磷酸二氢钠溶液配制：称取1.56g磷酸二氢钠溶于100 mL水中，用30%硝酸调节PH 至2.5，经微孔滤膜过滤，超声备用。
2、色谱条件色谱柱：安捷伦ODS-C18,4.6×250mm，5μm；预柱：C18微柱；流动相:乙腈+0.01mol/L磷酸二氢钠溶液=27+73；流速：0.8 mL／min检测波长：355 nm；柱温：室温；进样量：2OμL。
3、实验步骤样品测定：取2mL鲜奶样品，加入50 mLMcllvalane-EDTA缓冲溶液，漩涡混合1min,低温超声10min，转移至50 mL聚丙烯离心管中，冷却至4℃，以5000r/min的速度离心10min（温度低于15℃），过滤，取5mL上清液过C18微柱（先用3mL甲醇，2mL水预洗），用1mL水洗涤小柱并挤干，最后用2mL甲醇洗脱，洗脱液经氮吹仪吹干后用甲醇+水（浓度比为30：70）溶解，过0.45μm 滤膜，取20μL进样，记录峰高，从工作曲线上查得含量。
牛奶中抗生素残留的危害及检测方法的研究进展
ｔ ｌ ｉｃ ｓｅ ｅｒ ａ ｏ ｓｆｒａ ｔ ｉ ｔ ｓ ｕ ｓｉ ｌ ｎ ａ ｍ ， ｎ ｉ ｎ ｅｍｏ ｅｐ ｐ ｌ ｒ ｔ ｏ ｎ ｂ ｏ ｄ ｏ ｎ ｉ ｉｔ ｓｉ ｌ ｉ ｅｄ ｓ ｕ ｓ ｓｔ ｅ ｓ ｎ ｎ ｉ ｏｉ ｒ ｉ ｅ ｍｉ ａ ｄ ｈ ｒ ａ ｄ ｃｔ ｇｔ ｒ ｏ ｕ ａ ｍｅ ａ ｄ ａ ｒ ａ ｆ ｔ ｏ ｉ ｍｉ ｃ ｈ ｏ ｂ ｃｅ ｄ ｎ ｋ ｉ ｈ ａｈ ａ ｂ ｃ ｎ ｋ
（ 中国 农业 科 学 院兰 卅 畜 牧 与兽 药 研 究 所 ｌ 农 业 部 动 物 毛 皮 及制 品质 量 监 督 检 验测 试 中心 （ 兰州 ）甘 肃 ， 兰州 ７０５） ３０ ０
摘要： 抗生 素越 来越 多地被 应 用于畜 牧业 中 ， 其在 乳 制 品的残 留问题备 受 关 注。 阐述 了牛奶 中抗 生素 残留 的原 因和危 害性 ． 述 了 国 内外 较 流 行 的 牛 奶 中抗 生 素 的 检 测 技 术 和 新 的 检 测 方 法 研 究 进 展 。 综
生 不 良 影 响
和质 检部 门最 常用 的也是 这 两种方 法 。 近年来 ， 多学 者对 许 这两 种 方法 在 提 高操 作 效 率 和细 胞计 数 方 面 作 了改 进 。 取
得 了较好 的效果 。
１ 牛 奶 中抗生 素残 留的原 因和 危害 。
牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展
牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展摘要：抗生素在畜牧业中的广泛应用，不可避免地造成牛奶中残留抗生素。
抗生素残留不仅危害人类健康，同时也影响牛奶的品质，造成经济损失。
本文综述牛奶中抗生素残留的来源和危害、现状以及残留的检测方法。
关键词：牛奶；抗生素残留；微生物法；高效液相色谱法；色/质联用法；免疫法随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。
对此，检测技术也迅速发展，以寻求简便、快速、准确、敏感性高的检测方法满足日趋严格的残留限量要求，保障人们饮用牛奶的卫生和安全。
1.牛奶中抗生素残留的来源及其危害1.1牛奶中抗生素残留的来源一般认为，对泌乳牛用药不当或不注意安全时间是牛乳中抗生素残留的重要因素，尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。
在牛饲料中添加饲料添加剂已十分普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用是预防疾病，这是牛奶抗生素残留的重要原因。
此外，一些不法交奶户在高温季节为防止乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，这也是乳中抗生素残留的一个来源。
1983年，Egan调查表明，用经抗生素治疗的乳牛用过的挤乳器给正常乳牛挤乳，可使正常牛的乳中残留抗生素，所以挤乳是乳中抗生素残留的另一个来源。
1.2牛奶中抗生素残留的危害牛奶是老少皆宜的营养品，牛奶中若含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反应。
即使是正常饮用者，体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素治疗很难奏效。
抗生素是奶牛场治疗乳房炎的常规药物，由于长期大量使用，使耐药菌株增加，一些乳房炎病例变得难以用常规方法治愈。
这种情况又促使临诊兽医在治疗过程中加大抗生素的用量。
此外，牛奶中抗生素残留会影响奶制品品质，如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等，则残留在其中的抗生素会抑制细菌的发酵，使产量和质量降低。
因此市场不允许出售抗生素残留过量的牛奶，同时也造成牛奶生产者的经济损失。
牛奶抗生素残留检测方法研究进展
牛奶抗生素残留检测方法研究进展摘要近年来，不断出现的食品安全问题引起了人们的重视，凸显了食品安全方面存在的一些漏洞。
牛奶作为一种营养丰富、价格低廉的食品，其安全问题几乎牵涉到每一个人，而抗生素残留问题是牛奶安全问题中比较严重的一个。
如何快速准确地检测牛奶中是否存在抗生素残留很重要。
主要综述了检测牛奶中抗生素残留的不同方法及各自的特点。
关键词牛奶；抗生素残留；检测方法近年来，出现的一系列牛奶安全问题，严重打击了消费者对奶制品的信心。
牛奶中抗生素残留则是奶制品安全问题中较为突出的一个，已成为公众关注的焦点[1]。
世界粮农组织（FAO）、世界卫生组织（WHO）的食品法、欧盟（EU）和美国食品与药品管理局（FDO）等对牛奶中抗生素残留量都有明确严格的规定，严禁抗生素残留量超标的牛奶上市[2]。
在奶牛饲养中，如果不遵守规定的休药期、不合理用药、使用违禁药物等会导致牛奶中抗生素残留超标[3]。
乳中抗生素残留主要存在2个方面的潜在危害：一是干扰人体正常菌群，引起细菌耐药性，导致部分人产生过敏反应；二是原料乳中的抗生素残留势必会对乳制品加工生产产生干扰，造成原料乳的浪费，致使企业效益蒙受损失[4]。
目前监测牛奶中抗生素残留的方法主要有4大类[5]：即微生物检测法、酶联免疫法、理化检测法和免疫传感器法。
每种方法依据的原理不同，适用范围、操作要求、灵敏度也不尽相同。
本文综述了4类主要的检测方法，分析了它们的优点及局限性。
1 检测方法1.1 微生物检测法微生物检测法是较为广泛应用的最经典方法，测定原理是根据抗生素对微生物生理机能、代谢的抑制作用来定性确定样品中抗微生物药物残留[6]。
其优点是操作简单、可靠、费用低、无需高级实验设备，一般实验室及养殖场都能使用。
因为牵涉到微生物的培养，所以检测时间相对较长，不能实现定量检测，不能满足某些抗生素最低限的检测。
微生物检测法主要包括纸片法、TTC 法、管蝶法、试剂盒法等[7]。
牛奶中抗生素类兽药残留快速检测的研究进展
经引起世界各 国和 国际 团体的高度重视 。人 长期摄人
行为的打击惩罚力度 ， 以净化绿色食品销售环境 ， 加快绿
规 范来经 营 ， 通过这些措 施能够更好地促 进绿 色食 品
产业 的发 展。 参 考文献 ：
【 １ 】 石荃 ． 锦州市加快发展绿色农业 的思考 与建议 ［ Ｊ 】 ＿ 环境 保护 和 产 品检验 ， 积 极
ＭＩ Ｌ Ｋ Ｃ Ｏ． ， Ｉ ｜ Ｔ Ｄ． ， Ｈｕ ａ Ｖ ａ ｎ ２ ２ ３ ０ ０ １ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｅ ｃ ａ ｕｓ ｅ ａ ｎ ｄ ｈ ａ ｒ ｍ ｏ ｆ Ａｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｏ ｆ ｖ ｅ ｔ ｅ ｉｎ ｒ ａ ｒ ｙ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｎ ｔ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ａ ｒ ｅ ｎ ｅ ｗ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ —
作者 简介 ： 黄闯 （ １ ９ ８ ｌ 一） ， 男（ 汉） ， 讲师 ， 硕士 ， 研究方 向 ： 食 品营养 与安全 。
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进剂类 、 抗原虫药类 、 灭锥虫药类 、 镇静 剂类和 Ｂ 肾上
牛奶中抗生素残留检测的研究进展及应用现状
料科学与工程学报,2007,25(1):143-146[3]吴克刚，柴向华.食品微胶囊技术[M].北京:中国轻工业出版社，2006：71-72[4]Quintanar-Guerrero D,Allemann E,Doelker E,et al.A mechanisticstudy of the formation of polymer nanopartles by the emulsification-diffusion technique[J].Pharm Res,1997,15(7):640-647[5]朱银燕，安学勤.微乳中界面聚合法制备包载胰岛素纳米胶囊[J].日用化学工业，2009,39(1):5-8[6]王锦成，陈思浩，徐子成，等.辣椒素的纳米胶囊的合成及性能研究[J].化工新型材料，2007,35(2):55-57[7]叶琳，肖作兵.纳米微胶囊技术与纳米化妆品研究进展[J].香精香料化妆品,2006(4):22-26[8]梁治齐.微胶囊技术及其应用[M].北京：中国轻工业出版社,1999:2-3[9]郭慧林，赵晓鹏.纳米胶囊的制备及其应用[J].功能材料,2003,34(6):609-611[10]杨安树,陈红兵.纳米技术在食品加工中的应用[J].食品科技,2007(9):12-15[11]曾晓雄.纳米技术在食品工业中的应用研究进展[J].湖南农业大学学报:自然科学版,2007,33(1):90-94[12]Gouin S.Microencapsulation-industrial appraisal of existing tech－nologies and trends[J].Trends in Food Sci Tech,2004,15(7-8):330-347[13]肖作兵，黄丽娉，杨斌.纳米甜橙香精的制备研究[J].食品工业,2007(6):38-40[14]肖作兵，叶琳，章苏宁.壳聚糖基肉味香精纳米胶囊化的制备[J].食品工业，2006(3):26-28[15]肖作兵，叶琳，章苏宁，等.牛肉香精纳米微胶囊的制备研究[J].食品科学，2007，28(3):155-157[16]肖作兵，邵莹莹.薄荷纳米香精的制备技术研究[J].香料香精化妆品,2008(3):44-48[17]刘彩云，周围，毕阳，等.纳米技术在食品工业中的应用[J].食品工业科技,2005,26(4):185-187[18]袁飞,徐宝梁,黄文胜,等.纳米技术在世界范围内食品工业中的应用[J].食品科技,2007(2):17-20[19]/nanotechnology/reports/reportpdf/report10.pdf.Down on the farm:The impact of nano-scale technologies on food and agriculture,ETC Group[J/OL],Nov.2004收稿日期：2009-09-02抗生素在奶牛饲养业中作为医治乳房炎等疾病,是一种高效的兽药,随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用及生活水平的提高,牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视,已成为乳业管理和技术的难题之一[1]。
牛奶中抗生素残留检测技术的研究进展
牛奶中抗生素残留检测技术的研究进展陈家越【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2012(040)010【摘要】在奶牛饲养过程中,用于预防和治疗作用的抗生素药物在治疗疾病和提高牛奶产量方面做出了相当大的贡献,随着抗生素的广泛使用,其残留所带来的一系列问题也接踵而至。
研究表明,动物性食品中残留抗生素是诱发儿童肥胖的一个重要因素,同时抗生素的后效应也引起了人们的高度重视。
因此,关于抗生素检测的研究越来越引起人们的关注。
本文对抗生素残留检测技术进行了综述,并对抗生素检测技术今后的发展方向作了展望。
%In dairy farming,antibiotics made a considerable contribution in the prevention and treatment of diseases and improving milk production.With the wide spread use of antibiotics,residual brought a series of questions followed.Studies showed that antibiotic residues in animal foods was an important factor to induce obesity in children,at the same time,the after-effects of antibiotics also attracted great attention.Therefore,on the detection of antibiotic research drew increasing attention.Antibiotic residue detection techniques were reviewed,and antibiotics detection technology in the future direction of development was also discussed.【总页数】3页(P8-10)【作者】陈家越【作者单位】福建船政交通职业学院安全技术与环境工程系,福建福州350007【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.牛奶中抗生素残留检测技术 [J], 侯亚莉;朱奎;丁双阳2.牛奶抗生素残留快速检测技术进展及应用现状 [J], 叶兴乾;刘东红;陈健初3.牛奶中抗生素残留检测技术进展 [J], 沈永聪;李守军;杨林4.牛奶中抗生素残留检测技术进展 [J], 沈永聪;李守军;杨林;5.荧光免疫分析法在牛奶抗生素残留检测中的研究进展 [J], 阿说阿沙;邹文佳;付婧洁;杨腾昆;余林霖;杨柳;江海洋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展3.1微生物检测法微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如纸片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。
采用传统的微生物检测方法，缺点是：(1)时间长；(2)显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法做出准确判断；(3)操作复杂。
优点是费用低，一般实验室都能操作。
其中，纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。
3.1.1纸片法纸片法，即PD法(Paper Disc)。
常用的纸片法有枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片检测法。
这两种方法主要用来检测牛奶中的β－内酰胺类抗生素，其操作过程基本相同，而选用的菌种不同。
枯草杆菌纸片法检测的结果易出现假阳性，为了确定阳性物质是否为青霉素（或β－内酰胺类），对加热后的乳样用青霉素酶处理，以灭活乳样中的青霉素。
然后再行检测，检测限可达0.01 IU/mL。
而嗜热脂肪杆菌纸片检测法不仅用于检测奶样中β－内酰胺类抗生素，并能暗示是否还存在其它抑菌物质，检测限可达0.008 IU/mL以下。
一般在4h 内即可获得结果。
因此，在实践中嗜热脂肪杆菌纸片法比枯草杆菌纸片法应用更为广泛。
此外，神保胜彦(1991)对纸片法作了进一步研究和改进。
改进后的纸片法不仅能够确定抗生素的种类，而且提高了检出率和准确性，氯霉素最低检出量0.01mg/kg，土霉素0.05mg/kg，链霉素1mg/kg，红霉素0.05mg/kg，青霉素0.0025mg/kg。
3.1.2 TTC法TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。
该法简便、快速，无需特殊设备，3～4h可见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用。
检测各种抗生素所用的TTC法试验的灵敏度（最低检出量）分别为：青霉素0.004 U/mL，链霉素0.5 U/mL，庆大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL。
目前趋向研究更为灵敏、准确、简便、快速的微生物检测方法。
如美国和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺实验法（CAST）。
此外，美国近年来补充的一个新的实验方法－快速抗生素筛选法（FAST）。
尽管这些快速微生物检测法有时会产生一些假阳性，但在某种程度上是允许的；如产生这类情况，可进一步做确证实验。
3.2理化检测法理化检测方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法、联用技术等等，能进行定性、定量和药物鉴定，敏感性较高，但有的检测程序较复杂，有的检测费用较高。
在牛奶中抗生素残留检测方面，最常用的理化检测方法是高效液相色谱和联用技术。
3.2.1高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)是目前广泛应用的一种理化检测方法，它引入了气相色谱理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。
几乎所有的化合物包括高极性／离子型待测物和大分子物质，均可用HPLC进行测定。
HPLC的分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细(ф 5～10μm)，需高压泵推动，柱效高(105塔板／m)，速度快，灵敏度与GC相近。
与GC相比，HPLC流动相参与分离机制，其组成、比例和pH值等可灵活调节，如离子对色谱、胶束色谱、手性分离色谱等，使许多极难分离的待测物得以分析。
反相HPLC发展最快，目前已成为大多数抗生素残留的常规分析方法。
主要原因是：(1)化学键合固定相(C18或C8)性质稳定，不淋失；(2)使用水、甲醇或乙腈等水溶性有机溶剂作流动相，不干扰紫外检测，成本低；(3)样品中极性杂质先流出，只需待测物出峰后即可重复进样，分析速度快。
最常用的检测方式为浓度型的紫外检测器和荧光检测器。
紫外检测器(UVD)最普及，其次是荧光检测器和电化学检测器(EChD)。
由于奶样中药物残留量少，背景干扰往往很严重，因此一般都通过柱前衍生反应来提高紫外检测器检测残留的灵敏度。
彭莉等报道了用高效液相色谱法（HPLC）检测牛奶中氯霉素的残留量，采用乙酸乙酯提取牛奶中残留的氯霉素，用紫外检测器在278nm检测样品。
平均加收率94.8％，变异系数< 12.0％。
此方法样品前处理简单、回收率高、实用性强、检验灵敏度高、重现性好、检测数据准确可靠，可作为牛奶中氯霉素残留检测的确证方法。
由于大部分抗生素在高于230nm的光谱区无吸收，而在低于230nm的紫外区许多样本基质和流动相产生干扰，需衍生化后测定，限制了紫外检测器的应用。
但是，大部分抗生素是手性分子，因此旋光检测器有很大发展潜力。
旋光检测有以下特点：(1)选择性高，样本仅需简单提取即可；(2)灵敏度高，利用He－He激光作光源，灵敏度可达5～10uα水平；(3)可同时得到流出组分的比旋度[α]，用以定性。
目前，该方法已用于红霉素、庆大霉素、羧苄青霉素和吩羧青霉素残留的测定。
此外，光二极管阵列检测器(DAD)是近10年来HPLC最重要的突破。
DAD可同时接收整个光谱区的信息，在色谱峰流出同时能进行每个瞬间的动态光谱扫描并快速采集信号，经计算机处理后得到色谱—光谱的三维图谱，信息量大大增加。
一次进样可得到每个组分峰的定量、定性和纯度信息，灵敏度亦明显提高。
3.2.2联用技术各种分析技术联用是现代兽药残留分析乃至整个分析化学方法上的发展特点。
计算机的应用加速了这一趋势。
联用技术可扬长避短，一般集分离、定量和定性(分子结构信息)于一体，因而特别适用于确证性分析。
常见的联用技术，有TLC－MS、GC－MS、LC－MS、CZE－MS、LC－NMR、SFC－MS等。
TLC－MS是最简单的离线联用技术。
GC－MS已相当成熟，应用相对较多。
但这些联用仪价格昂贵，远不如HPLC或GC那样普及。
MS无疑可作为HPLC的通用型检测器。
使用微型柱(15×0.3cm id)和适宜的接口技术，如热喷雾(TSP)、微粒束(PB)等解决了LC与MS的连接问题；使用软电离技术，如快原子轰击(FAB)、场解吸(FD)等解决了难气化物质的离子化问题。
LC－MS现在已进入实用阶段，其灵敏度较荧光检测器高1个数量级，能方便地对ng级的兽药残留组分进行检测与结构确证。
LC－NMR还可提供待测物立体化学方面的信息。
LC/MS是除GC/MS之外的一种集高效分离和多组分定性、定量于一体的系统。
LC/MS 对高沸点、不挥发和热不稳定的化合物分离和鉴定具有独特的优势。
色/质联用法由于实现了高效层析分离和检测联机，可用微电脑控制层析条件、程序和数据处理，其特异性、灵敏度和重复性均好，并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物检测。
其分析方式有直接探头分析法、直接液体导入法、GC/MS、LC/MS联用法等。
使用电子轰击离子化、化学电离、快速原子轰击、热喷雾电离、等离子体喷雾、粒子束电离、大气压化学电离（APCI）和电喷雾电离（ESI）技术对不同MS离子源条件下青霉素类药物分子碎片类型的特征已经作了大量的工作。
另外离子阱质谱技术（MS/MS）也已用于鉴别青霉素类药物。
如Straub 等使用LC/ES/MS测定了牛奶中的几种青霉素残留。
青霉素，邻氯青霉素与苄青霉素的最低测定限为3～5μg/kg。
Kihak 等以NCI方式的LC/PB/MS技术成功地对牛奶中OTC、TC与CTC残留进行确证，方法检测限为0.02～0.05μg/mL。
3.2.3其它理化检测方法牛奶中抗生素残留检测方法还有气相色谱法（GC）、高效薄层色谱（HPTLC）、超临界流体色谱(SFC)和毛细管区域电泳法(CZE)等。
这些方法尽管在残留检测中不常用，但因其各自特有的性能，能弥补常用方法中不足之处。
如GC有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用，如氢焰离子化检测器(FID)、氯磷检测器(NPD)等，检测限可达μg/kg级；HPTLC的斑点原位扫描定量、定性和高效分离材料(Φ3～10μm)改变了常规TLC在灵敏度和重现性方面的不足，但保持了TLC的简便、快速和样品容量大的优点，可使用正相或反相板，分辨率几乎与HPLC相当，在抗生素残留的快速筛选性检测方面应用广泛；SFC可弥补GC和HPLC的不足，方便地连接各种灵敏的检测器(MS，ECD等)；CZE是90年代以来研究最活跃的分析技术之一，兼有高压电泳的高速、高分辨和HPLC灵活、高效的优点，柱效高达105塔板／m。
Nishi等(1989，1990)使用CZE和MEKC成功地分离了十几个β－内酰胺类抗生素。
CZE将在简化样本前处理、多残留分析和分析自动化方面发挥重要作用。
目前CZE 的主要问题是样品量太小，限制了检测的灵敏度。
CZE－MS可能是最好的解决办法。
此外，随着接口技术的显著改进，质谱作为一种质量流速型检测器，正广泛应用于残留分析的检测中。
电化学检测器也已用于检测邻氯青霉素、头孢菌素和青霉素。
3.3免疫法目前药物残留免疫分析技术主要分为两大类：一为相对独立的分析方法，即免疫测定法(immunoassays，IAs)，如RIA、ELISA、固相免疫传感器(soindphase immunosensor )等；二是将免疫分析技术与常规理化分析技术联用，如利用免疫分析的高选择性作为理化测定技术中的净化手段，典型的方式为免疫亲合色谱(immunoaffinity chromatogrphy,IAC)。
与常规的理化分析技术相比，免疫分析技术最突出的优点是操作简单，速度快、分析成本低。
以使用微量滴板的ELISA为例，免疫测定法取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度低，检测奶与GC/MS或GC/ECD相似，可方便地达到ng/g～pg/g级，分析效率则为HPLC或GC 的几十倍以上。
目前大部分抗生素已经建立了免疫测定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、四环素、莫能菌素等。
免疫分析能与其他技术联用。
在联用方法中，免疫分析技术既可作为HPLC或GC等测定技术的样品净化或分离手段，如IAC/HPLIAC/GC、HOIAC/HPLC；也可作为其离线或在线检测方法，如HPLC/IA、TLC/IA、CZE/IA、SFC/IA、FIA/IA等，这些方法结合了免疫分析的选择性、灵敏度与HPLC、GC等技术的高速、高效分离和准确检测能力，使分析过程简化、分析成本下降，拓展了待测物范围。
在HPLC/IA等分析中，IA一般作为离线检测方法。
又称免疫图谱法（immunograms），适用于液相检测器无响应或分离困难的残留组分的检测。
FIA/IA可以实现IA的动态、实时和自动检测，分析速度快，已发展为一种专门的免疫测定技术－FIIA。