促红细胞生成素在脑红蛋白基因修饰的骨髓间充质干细胞向大鼠脊髓损伤部位迁移中的作用解析
骨髓间充质干细胞颅内移植联合应用促红细胞生成素治疗创伤性颅脑损伤的实验探究
中文摘要
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
骨髓间充质千细胞颅内移植联合应用促红细胞 生成素治疗创伤性颅脑损伤的实验研究
硕士研究生：万兴 指导老师：王文宏
东南大学医学院（２１０００９）
中文摘要
目的 本实验通过体外分离并培养大鼠的骨髓问充质干细胞（ｂｏｎｅ
ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ
ｉｒｏｎ
ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ），对其进行鉴定后并应用超顺磁性氧化铁（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ ｏｘｉｄ，ＳＰＩＯ）对其进行标记，并通过Ｆｅｅｎｅｙ’Ｓ法建立大鼠创伤性颅脑损伤（ｔｒａｕｍａｔｉｃ 用重组人促红细胞生成素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
４
５ ６
万方数据
东南大学硕士学位论文
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于各时间点进行颅脑ＭＲＩ检查，动态观察标记的ＢＭＳＣｓ的分布及迁移，最后于移 植后第２８ｄ每组取２只大鼠处死后行脑组织普鲁士蓝染色，验证标记细胞在脑内的 存活及迁移情况。
结果
ｌ
通过全骨髓贴壁筛选法培养细胞，培养２４ｈ后，可见部分细胞开始贴壁，多呈圆球 形和梭形；当培养至第７ｄ时，细胞呈集落样贴壁生长，集落逐渐扩大，相邻细胞 间相互融合，排列紧密，细胞胞体增大，多呈梭形。细胞经培养传代后，细胞呈梭 形成纤维样生长，形态单一，分布均匀。流式细胞仪检测结果显示，第３代的ＢＭＳＣｓ 表面ＣＤ２９、ＣＤ９０表达阳性，而ＣＤ３４、ＣＤ４５表达阴性。 Ｆｅ浓度为２５ｕｇ／ｍｌ的ＳＰＩＯ标记ＢＭＳＣｓ后４８ｈ，经细胞涂片行普鲁士蓝染色，倒置 显微镜下观察见所有标记细胞内均可看到蓝色的铁颗粒，颗粒在细胞质中，呈簇状 或散在分布，细胞标记率为１００％。标记ＳＰＩＯ和未标记ＳＰＩＯ的ＢＭＳＣｓ的活细胞 比率分别为９８．５％、９９％，差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。 各组大鼠在细胞移植术后随着时间延长ＮＳＳ评分不断降低，不同时间点差异有统
促红细胞生成素与脑缺血性损伤
促红细胞生成素与脑缺血性损伤【关键词】促红细胞生成素脑缺血性损伤促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾脏和胚胎肝脏产生的一种能促进红细胞生成的细胞因子,其通过结合细胞表面的特异性受体而发挥作用。
以往认为EPO特异而专一地作用于造血细胞，但目前认识到EPO对其它细胞也有作用。
功能性EPO受体除存在于造血系统外，还存在于各种非造血系统,包括中枢神经系统（central nervous system,CNS）。
EPO作为细胞因子超家族中的一员,在体内和体外均显示出显著的神经保护功能[1]。
本文回顾了EPO在脑缺血损伤方面的研究及对脑保护作用的机制。
1 EPO的生物学特性EPO是第一个被发现并应用于临床的造血生长因子。
早在1906年,Carnot等发现兔失血后会在外周血中产生一种可作用于造血系统以加速红细胞生成的物质，由此提出存在一种体液因子以反馈方式调节血细胞生成。
时隔30多年以后此观点得以证实，这种因子被命名为促红细胞生成素。
天然EPO是一种含唾液酸的酸性糖蛋白，分子量为34 000，由165个氨基酸组成。
人EPO基因位于第7号染色体长臂11～12区，由4个内含子(1 562 bp)和5个外显子(582 bp)构成。
由基因重组技术合成的重组人促红细胞生成素（rhEPO）分子量为30 400，其理化性质和生物学活性与天然内源性红细胞生成素相同。
目前已知CNS存在脑源性EPO，其分子量（33 kD）较血清EPO（35 kD）小，可能因其唾液酸基较小之故，但作用却比血清EPO为强。
2 内源性EPO及EPO受体不断证实CNS存在EPO。
正常脑组织EPO及EPO受体均呈低水平表达, 缺氧、缺血等病理状态时表达增加,脑脊液EPO浓度明显升高。
目前，在人类大脑皮质、海马及恒河猴的许多脑部区域可以检测到EPO 受体，主要存在于神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞、脑毛细血管内皮细胞，且研究表明EPO受体总在EPO出现前表达[2]。
重组人促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后炎症因子表达及运动功能的影响
重组人促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后炎症因子表达及运动功能的影响【摘要】急性脊髓损伤是一种严重的神经系统损伤，会引起炎症反应和运动功能障碍。
本研究旨在探讨重组人促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后炎症因子表达及运动功能的影响。
通过实验设计，观察了重组人促红细胞生成素对炎症因子表达的影响以及对运动功能的影响。
结果显示，重组人促红细胞生成素能够显著减轻炎症因子表达，并改善受损大鼠的运动功能。
可以得出重组人促红细胞生成素具有潜力作为急性脊髓损伤的治疗药物。
未来的研究将进一步探讨其作用机制并丰富相关临床应用。
【关键词】急性脊髓损伤、重组人促红细胞生成素、炎症因子、运动功能、大鼠、实验设计、研究结论、研究展望、病理机制、神经再生、治疗策略、生物医学研究、炎症调节、功能恢复1. 引言1.1 研究背景急性脊髓损伤是一种常见的神经系统损伤，其发病率逐年上升，给患者的生活和健康带来了极大的困扰。
当前的治疗方法主要是通过手术和药物治疗来缓解症状，但是效果并不十分理想。
寻找新的治疗方法显得尤为迫切。
本研究旨在探讨重组人促红细胞生成素对急性脊髓损伤的治疗作用，分析其对炎症因子表达和运动功能的影响，为寻找新的治疗方法提供实验依据和理论支持。
通过对大鼠进行实验观察，并对数据进行统计分析，将有望揭示重组人促红细胞生成素在急性脊髓损伤中的作用机制，为临床应用提供新的思路和方法。
1.2 研究目的研究目的是通过探究重组人促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后炎症因子表达及运动功能的影响，进一步了解其对脊髓损伤的治疗作用。
通过分析炎症因子的表达情况和运动功能的变化，我们能够揭示重组人促红细胞生成素对脊髓损伤后炎症反应和运动恢复的影响机制，为未来临床治疗提供科学依据。
本研究还旨在探索重组人促红细胞生成素在脊髓损伤治疗中的潜在应用前景，为开发新的治疗策略和药物提供参考。
通过本研究，我们希望为脊髓损伤的临床治疗提供新的思路和方法，促进患者的康复和生活质量的提高。
促红细胞生成素
【关键词】促红细胞生成素潜在性细胞保护作用1.EPO对神经细胞的保护作用近年来的研究发现EPO及其受体(erythropoietin receptor，Epo-R)除主要分布于循环血液中调节红细胞生成外，在人和啮齿类动物的大脑中也广泛存在，主要分布于海马及大脑皮层中的神经元和神经胶质细胞中;其中EPO及Epo R在神经元和星形细胞中均有表达，而小胶质细胞仅有Epo R的表达，少突胶质细胞EPO及Epo R均无表达［4］。
目前大量体外实验及体内各种脑损伤缺血缺氧模型实验进一步证实EPO具有神经营养作用及神经保护作用：Spandou等［5］研究发现，于损伤前24小时开始每天给予大剂量的EPO (20000～30000 U/kg)能有效地减轻大鼠实验性新生儿缺氧缺血性脑病诱导的脑损伤，促进短期功能恢复。
Kaptanoglu等［6］研究发现，EPO能抑制大鼠脊髓损伤引起的运动神经元凋亡，且能改善运动功能，减轻脂质超氧化反应。
Hoke等［7］发现轴突受到损伤时与周围神经病变模型中，其周围的雪旺细胞分泌EPO，与轴突上的Epo R结合，从而保护轴突避免神经元退行性病变。
Yatsiv等［8］研究发现，EPO能改善鼠闭合性脑外伤引起的运动及认知功能障碍，减轻炎症反应、轴突变性及细胞凋亡。
EPO发挥细胞保护作用的可能作用机制是在许多不同的体内外细胞损伤模型中，EPO均具有抗凋亡，抑制炎性反应，抗氧化应激等神经保护作用。
Kumral等［9］研究发现，EPO可通过下调促凋亡基因Bax，DP5的表达，上调抗凋亡基因Bcl2的表达，抑制新生儿缺氧缺血性脑损伤引起的细胞凋亡。
孟宪栋等［10］整理短暂性全脑缺血模型,研究EPO对大鼠脑缺血后学习记忆能力的保护机制。
结果EPO组大鼠学习记忆能力［(19.13±2.53)次，(5.88±1.25)次］明显高于生理盐水组［(26.88±2.85)次，(3.63±1.30)次］(P＜0.01)，其海马区CytC分布较生理盐水组明显增强(P＜0.01)。
骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素对脊髓损伤大鼠的保护作用
骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素对脊髓损伤大鼠的保护作用谢鹏;阮文辉【期刊名称】《海南医学院学报》【年(卷),期】2016(022)001【摘要】目的:研究骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素治疗对脊髓损伤大鼠模型的保护作用.方法:选择SD大鼠作为实验动物,使用Hatteras InstrumentsPCI3000进行脊髓打击以建立脊髓损伤大鼠模型,根据治疗方法不同将模型大鼠分为对照组、BMSCs组、EPO组以及BMSCs联合EPO组.检测脊髓组织中凋亡细胞的数目、神经标志分子和神经营养因子的含量、凋亡和损伤分子的表达.结果:BMSCs组、EPO组以及BMSCs联合EPO组的凋亡细胞数目以及Caspase-3、c-fos的mRNA含量均低于对照组,BMSCs联合EPO组的凋亡细胞数目以及Caspase-3、c-fos的mRNA含量均低于BMSCs组和EPO组;BMSCs组、EPO组以及BMSCs联合EPO组脊髓组织中NF-200、MBP的mRNA含量以及NGF、BDNF的蛋白含量均高于对照组,BMSCs联合EPO组脊髓组织中NF-200、MBP的mRNA含量以及NGF、BDNF的蛋白含量高于BMSCs组和EPO组.结论:骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素治疗能够抑制损伤脊髓组织中的细胞凋亡、增加神经营养因子含量、抑制凋亡和损伤分子表达,对脊髓损伤具有保护作用.【总页数】4页(P9-12)【作者】谢鹏;阮文辉【作者单位】汉中市中心医院骨关节创伤科,陕西汉中 723000;汉中市中心医院骨关节创伤科,陕西汉中 723000【正文语种】中文【中图分类】R651.2;R-332【相关文献】1.重组人促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠心肌损伤 [J], 滕金龙;李丹;于海初;蔡尚郎;潘新亭2.重组人促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠体外循环肾炎症反应的影响 [J], 刘凯;李宗杰;吴海卫;王常田;许飚;李德闽3.脑红蛋白修饰的骨髓间充质干细胞在促红细胞生成素治疗大鼠急性脊髓损伤中的作用 [J], 皮燕燕; 何霞; 胡岚翔; 余化龙4.骨髓间充质干细胞经Nrf2/HO-1信号通路对创伤性脊髓损伤大鼠神经的保护作用 [J], 孙启孟;李宗明;张姣5.骨髓间充质干细胞移植联合促红细胞生成素治疗大鼠脊髓损伤 [J], 曾云;熊敏;余化龙;何宁;王志勇;刘志刚;韩珩;陈森因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
促红细胞生成素
• 细胞因子的生物学作用
• 刺激造血及免疫细胞分化发育 • 介导固有免疫 • 介导适应性免疫 • 神经—内分泌—免疫网络等
细胞因子的分类
• 按功能分: • 白细胞介素（IL） • 肿瘤坏死因子（TNF） • 干扰素（IFN） • 集落刺激因子（CSF） • 生长因子（GF） • 趋化因子（Chemokine）
EPO 的生成
• 产生细胞：1993年Maxwell等通过免疫双标记和
免疫电镜证实，Epo生成细胞是肾间质中位于毛 细血管与耗氧小管之间的形态学定义的Ⅰ型细胞， Ⅰ型细胞包括两种不同的细胞群即成纤维细胞和 树枝状细胞。肝脏是胎儿时期Epo合成的主要器 官，也是成人肾外合成Epo的主要器官。 • 大约90%的EPO由肾小管旁间质细胞分泌。正常 人血浆EPO水平维持在15-20IU/ L。
对于慢性肾脏病患者，如发现有其它贫血原因，且 血清肌酐＞2mg/dl，则贫血最可能的原因是EPO缺乏。
如果上述贫血检查提示存在EPO缺乏或缺铁之外的异 常，则需要进一步的评估，以除外其它贫血原因 （见附录：EPO 抵抗原因）。
rHuEPO在慢性肾脏病患者 治疗中的意义
纠正慢性肾脏病患者贫血
贫血定义和检查
贫血实验室检查内容：
血红蛋白/红细胞压积（Hb/Hct） 红细胞指标（红细胞计数、平均红细胞体积、平均红细胞
血红蛋白量、平均红细胞血红蛋白浓度等），网织红细胞 计数（有条件提倡检测网织红细胞血红蛋白量）， 铁参数（血清铁、总铁结合力、转铁蛋白饱和度、血清铁 蛋白）， 大便隐血试验。
解读rHuEPO使用途径：iv vs sc
• 皮下注射：药物峰浓度仅为静脉注射的1/10；但半衰 期延长(iv 4~13h; sc. 24h)；等效剂量较静脉注射少2132%
促红细胞生成素临床应用研究进展
促红细胞生成素临床应用研究进展艾维;杨云华;赵连玉【摘要】促红细胞生成素（ erythropoietin，EPO）在临床上被广泛用于各种原因贫血的治疗，如肾性贫血及肿瘤相关性贫血。
EPO不仅可改善血红蛋白水平和贫血症状，还可强烈刺激骨髓红系祖细胞，使红细胞的分化和增殖加速；EPO治疗肿瘤相关性贫血能够使输血需求下降，改善患者的生活质量。
研究发现，促红细胞生成素是一种重要的细胞保护因子，不仅参与造血的调控，在肾小管、脑、心脏、肝脏等多种器官与组织中发挥着重要的细胞保护作用，且对神经系统也具有直接保护作用。
另外，EPO能促进成骨细胞的分化和功能。
因其细胞保护作用的研究进展以及抗炎作用的发现，目前EPO可以在临床多领域应用。
【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】3页(P844-845,846)【关键词】促红细胞生成素;肾性贫血;肿瘤相关性贫血;内皮细胞;成骨细胞;综述【作者】艾维;杨云华;赵连玉【作者单位】天津市第四中心医院肾内科，天津 300140;天津市第四中心医院肾内科，天津 300140;天津市第四中心医院肾内科，天津 300140【正文语种】中文【中图分类】R973促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白，作用于骨髓中红系造血祖细胞，能促进其增殖、分化。
本品能经由后期母红细胞祖细胞引导出明显的刺激集落的生成效果;在高浓度下，本品亦可刺激早期母红细胞祖细胞而引导出集落的形成，在临床上被广泛用于各种原因贫血的治疗。
目前，大量研究证实，EPO 除了促红细胞生成外，还可以通过促进有丝分裂、抗氧化应激、抑制细胞凋亡等，对机体非造血细胞发挥非常重要的作用［1］。
另外，有研究表明，EPO 能增加内皮祖细胞的动员、增殖和存活，促进受损内皮细胞的修复，从而恢复内皮细胞正常的生理功能，并可进一步促进新血管的形成。
随着研究的不断深入，EPO 的应用越来越广泛，本文对EPO 在临床中的各种应用进行综述。
重组人促红细胞生成素对成年大鼠脊髓中央管膜下神经干细胞增殖能力的影响
重组人促红细胞生成素对成年大鼠脊髓中央管膜下神经干细胞增殖能力的影响周潇齐;吴波;严鑫平;朱美松;彭延凯;陈仲【摘要】Objective To investigate the effect of erythropoietin(EPO)on the proliferation of neural stem cells(NSCs)derived from central canal of adult rat spinal cord in vitro ,so as to provide a theoretical basis for clinical treatment of spinal cord injury by autotransplanting or allograft transplanting of adult spinal cord NSCs. Method NSCs were isolated from the central canal of the adult rats spinal cord by microsurgical method,and Nestin(nestin)and Sox2 immunofluorescence stain were used to identify the cells. After cells were treated with different dose of EPO,5,10,20 and 40 U/mL,respectively,the optical treatment concentration and time were determined by CCK8 assay. The effect of EPO on the cell count and the expression of Cyclin D1 in NSCs were detected at the treatment time 96 h. Result The NSCs derived from the central canal of adult SD rats spinal cord could stably express protein Nestin and transcription factor Sox2. As the results of CCK8 test,cell counts and real-time quantitative PCR showed the optimal treatment of concentration and time maybe 20 U/mL and 96 h. Conclusions This study shows that EPO can promote the proliferation of NSCs derived from central canal of adult rat spinal cord,and the optimal treatment of concentration and time for proliferation might be 20 U/mL and 96 h.%目的探讨促红细胞生成素(EPO)对成年大鼠脊髓中央管膜下神经干细胞(NSCs)体外增殖能力的影响,为临床进行成体脊髓中央管膜下NSCs自体移植或异体移植治疗脊髓损伤提供实验室理论依据.方法通过显微外科方法分离成年大鼠脊髓中央管膜下NSCs行体外培养,利用CCK8检测筛选EPO促进NSCs增殖的适宜处理时间,并检测96 h的EPO对NSCs的细胞计数和Cyclin D1表达的影响.结果成年SD大鼠脊髓中央管膜下可提取出稳定表达Nestin蛋白和Sox2转录因子的NSCs;CCK8结果示20 U/mL、96 h可能为EPO促进NSCs增殖的适宜浓度和处理时间,细胞计数及荧光定量PCR结果示EPO处理NSCs 96 h后可明显促进细胞增殖.结论 EPO可促进行体外培养的成年大鼠脊髓中央管膜下NSCs的增殖,且20 U/mL和96 h可能为EPO促进NSCs体外增殖的适宜浓度和适宜处理时间.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)012【总页数】5页(P1973-1977)【关键词】促红细胞生成素;成年大鼠;脊髓;神经干细胞;增殖【作者】周潇齐;吴波;严鑫平;朱美松;彭延凯;陈仲【作者单位】南方医科大学珠江医院脊柱外科,广州 510280;湖北省荆州市第一人民医院骨科,湖北荆州434008;厦门大学附属东南医院骨科中心,福建漳州 363000;南方医科大学珠江医院关节骨病外科,广州 510280;南方医科大学珠江医院脊柱外科,广州 510280;南方医科大学珠江医院脊柱外科,广州 510280【正文语种】中文脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是脊柱外科常见疾病之一，对患者的身体机能造成严重伤害，并带来巨大的个人和社会经济负担［1］，其伤后神经功能修复问题仍是世界性难题。
促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后caspase-3表达及神经细胞凋亡的影响
Ｅ ｅｔｆｅｏ ｂ ａｔｕ ｎ ｒｔｒ ｏｅｎ ｒ－Ｐ ） ｎ ｈｎ ｅ ｃｓａｅ３ ｄ ｐｐｏｉａ ｅ ｕ ｉ ｌｏｄ ｎ ｒ ｆ ｃｏｒｃｍ ｉ ｎｈｍａ ｙｈｏ ｉ ｉ（ Ｅ Ｏ ｏ ａｇｓ ｆａｐｓ－ ａ ｏ ｔｓ ｒ ｃｔｓ ｎ ｒ ｊ ｙ ｎ ｅ ｐ ｔ Ｈ ｃ ｏ ａ ｎ ｓ ｆ ａ ｅｐ ａｃ ｉ ｕ ｔ
２０ ０８年 １ ２月 第 ５卷 第 ６期
促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后 ｃｓａｅ 表达及神经细胞凋亡的影响 ａｐｓ． ３
胡 杨 郑 启 新 秦 文
【 要 ］ 目的 摘
通 过 观 察重 组 人红 细胞 生 成素 （ ｃｍｂｎ ｎｈ ｍ ｎｅｙｈｏ ｏｅｉ，Ｈ ．Ｐ ） ｒ ｏ ｉａｔ ｕ ａ ｔｒｐ ｉ ｎ ｒ ｕＥ Ｏ 对大 鼠急性 脊髓 损 ｅ ｒ ｔ
伤后 Ｃ ｓａｅ３表 达及 凋亡 的影 响 ， ａｐ ｓ一 探讨 其 脊髓 保 护 的作 用机 制 。 方 法 ６ ０只 Ｓ 大 鼠随 机分 成 ３ ： Ｄ 组 假手 术组 ， 照 组和 治 疗组 ， 组 ２ 对 每 ０只 ， 用 Ａｌ ｎ 打击 法 制 成急 性 脊髓 损伤 模 型 。 察 药物 治 疗前 后 大 鼠的 神经 采 ｌ ｅＳ 观 功能 行 为 ， 免疫 组化 染 色检 测 ｃｓａｅ３表 达 ， 用 ａｐ ｓ一 原位 脱 氧 糖核 苷 酸末 端 转移 酶 介导 的缺 口末 端标 记 法 （ｕ ｅ Ｔ ｎｌ 法） 记 凋 亡细 胞 ； 标 比较 各 组 问差 别 。 结果 著优 于 对照 组 （ ＜ ．１ 。结 论 Ｐ ００ ） 护作 用 。 ［ 键 词］ 关 脊髓 损伤 ； 重组人 红细 胞生成 素 ； 自由基 ；ａ ａｅ ； ｃｓ ｓ一 凋亡 ｐ ３ 【 中图分 类号］ ６ ７ Ｒ ８ 【 文献标 识码】 Ａ ＨＥ 免疫 组 化染 色 示 Ｅ Ｏ治 疗 组脊 髓损 伤 程度 小 ， 经 元细 胞破 ， Ｐ 神 坏少 ；ａｐ ｓ一 各时 相 点 的表 达 明 显 降低 ，ｈ和 ７ Ｔ ｎ ｌ ｃ ｓａｅ３在 ８ ｄ ｕ ｅ 标记 凋 亡 阳性 细胞 显 著减 少 ； 鼠神经 功 能恢 复 显 大 Ｅ Ｏ能 下 调 Ｃ ｓａｅ Ｐ ａｐ ｓ． 达， ３表 抑制 脊髓 神 经 细胞 凋 亡 ， 继 发 性脊 髓 损伤 有 保 对
人重组促红细胞生成素在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的
［１０］ 赵瑞杰，李引乾，王会，等．Ｃａｓｐａｓｅ家族与细胞凋亡的关系［Ｊ］． 中国畜牧杂志，２０１０，４６（１７）：７３－７８．
［１１］ 鄂颖，尚德高，尤胜．苦参碱联合顺铂对人肝癌细胞株 ＨｅｐＧ２裸鼠 移植瘤模型瘤体生长及 ｃａｓｐａｓｅ－３和 Ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响［Ｊ］．临 床和实验医学杂志，２０１９，１８（５）：４５７－４６０．
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｘｐｌｏｒｔｈｅｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｈ－ＥＰＯｉｎｗｈｉｔｅｍａｔｔｅｒｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅｒａｔｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １２６３ｄａｙｓｏｌｄｐｒｅｔｅｒｍｒａｔｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｃｅｎｔｅｒｏｆｏｕｒｈｏｓｐｉｔａｌｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｒｈ－ＥＰＯｇｒｏｕｐ，ｉｓ ｃｈｅｍｉａａｎｄｈｙｐｏｘｉａｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｏｎｔｈｅ２ａｎｄ４ｄａｙｓａｆｔｅｒｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙａｎｄｂｌｏｔＷｅｓｔｅｒｎｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅＭＶＤ，ＥｐｈＢ４，ＣＤ３４ａｎｄｅｐｂｒｉｎＢ２．Ｒｅｓｕｌｔｓ ２ｄａｙｓａｆｔｅｒｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗａｓｎｏｔｓｅｅｎ，ＥｐｈＢ４，ＣＤ３４ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｅｐｂｒｉｎＢ２ｃｏｎｔｅｎｔｉｎｒｈ－ＥＰＯｇｒｏｕｐｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｉｓｃｈｅｍｉａａｎｄｈｙｐｏｘｉａｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎ
临床药师干预一例脑梗死合并肾性贫血患者使用促红细胞生成素治疗的病例
临床药师干预一例脑梗死合并肾性贫血患者使用促红细胞生成素治疗的病例发表时间：2016-04-08T13:30:36.377Z 来源：《医师在线》2015年12月作者：屈东香窦智磊马俊洁杨秀艳闵天娇[导读] 黑龙江省齐齐哈尔市第一医院临床药学室对有心肌梗塞、肺梗塞、脑梗塞患者应慎重给药。
黑龙江省齐齐哈尔市第一医院临床药学室 161005【摘要】促红细胞生成素（EPO）是调节红细胞生成的糖蛋白，主要产生于胎儿的肝脏和成人的肾脏，EPO及其受体主要存在于骨髓的造血干细胞并刺激其向红细胞分化[1]，现广泛应用于治疗贫血，尤其是肾性贫血。
但EPO能使血压升高和原有的高血压恶化，甚至可引起脑出血，而且随着红细胞压积增高，血液粘度可明显增高，应注意防止血栓形成，因此对有心肌梗塞、肺梗塞、脑梗塞患者应慎重给药。
笔者在临床监护的一名脑梗死合并肾性贫血的患者，遇到了是否该应用EPO的问题，本文主要分析讨论该例患者是否适用EPO。
【关键词】促红细胞生成素；肾性贫血；脑梗死；临床药师1 病例资料患者女，78岁，因“突发左侧肢体无力3小时”于2014年8月1日入院。
患者4年前因脑梗死住院1次；既往高血压病史30年，规律服用硝苯地平控释片治疗；有“心功能不全、心房颤动”病史10余年，时常出现气喘、双下肢浮肿于当地医院治疗（具体不详）后可改善；有肾功能不全病史5年，肾性贫血病史1年，于当地入院治疗（具体不详）后无明显改善。
入院时查体：T36.8℃，BP162/75mmHg，双肺呼吸音清，心界无扩大，心律齐，腹软无压痛。
神经系统查体：嗜睡，双侧瞳孔等大同圆，直径2.5mm，对光反射灵敏。
左侧鼻唇沟浅，口角低，伸舌偏左，肢体肌张力欠合作，左侧上肢肌力1级，下肢肌力2-级，四肢腱反射迟钝，左侧病理征阳性，脑膜刺激征阴性。
GCS：12分，NIHSS：25分，ESRS：3分，有吞咽困难。
入院后完善相关检查，结合患者既往病史及临床症状，诊断为“脑梗死、高血压病、高脂血症、慢性肾功能不全、肾性贫血等”。
神经干细胞与促红细胞生成素在脊髓损伤中的应用与进展
神经干细胞与促红细胞生成素在脊髓损伤中的应用与进展脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是由多种损伤因素引起的感觉和运动障碍，这些损伤因素包括：创伤、缺血、医源性损伤等，尽管各国研究者在其治疗方面做了很多努力，但脊髓损伤的治疗仍然是世界性的难题，目前还没有一种安全、有效的治疗方法。
本文就神经干细胞和促红细胞生成素在脊髓损伤中的应用和研究进展做一综述，以便为临床治疗脊髓损伤提供新的思路和方法。
标签：脊髓损伤；神经干细胞；细胞移植；促红细胞生成素脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是由多种损伤因素引起的感觉和运动障碍，其治疗仍是世界性难题。
为此，各国科学家都做了不懈的努力，不断有新技术、新方法问世。
其中，干细胞移植技术就是其中一项。
目前，已有大量的动物实验证实干细胞移植技术是治疗SCI的有效方法，其机制可能与其释放多种神经递质、促进神经再生等有关，但其具体作用机制还有待于进一步研究[1]。
目前，应用于SCI治疗研究的细胞主要有：神经干细胞（neural stem cells，NSCs）、胚胎干細胞（embryonic stem cells，ESCs，简称ES或EK细胞）、骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMscs）、诱导性多功能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）、脐血干细胞、非干细胞，如嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）、施万细胞（Schwann cells）等[2-3]。
由于NSCs自身所具有的独特的优势，如：具有较高的增殖和自我更新潜能；多向分化潜能；低免疫原性等，而成为SCI较理想的移植材料[4]。
促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）产生于成人肾和胎儿肝脏，是一种由165个氨基酸残基组成的糖蛋白。
促红细胞生成素
• 禁忌
• 1.未控制的重度高血压患者。 2.对本品或其 他红细胞生成素制剂过敏者。 3.合并感染 者，宜控制感染后再使用本品。
• 注意事项
• 1.本品用药期间应定期检查红细胞压积（用药初期每星期 1次，维持期每两星期1次），注意避免过度的红细胞生成 （确认红细胞压积在36vol%以下），如发现过度的红细 胞生长，应采取暂停用药等适当处理。 2.应用本品有时会 引起血清钾轻度升高，应适当调整饮食，若发生血钾升高， 应遵医嘱调整剂量。 3.对有心肌梗塞、肺梗塞、脑梗塞患 者，有药物过敏病史的患者及有过敏倾向的患者应慎重给 药。 4.治疗期间因出现有效造血，铁需求量增加。通常会 出现血清铁浓度下降，如果患者血清铁蛋白低于100ng/ml， 或转铁蛋白饱和度低于20%，应每日补充铁剂。 5.叶酸或 维生素B12不足会降低本品疗效。严重铝过多也会影响疗 效。
• 贮藏 • 2～8℃避光保存 • 有效期 • 24个月
谢 谢 观 看！
• 药代动力学
• 皮下注射给药吸收缓慢，2小时后可见血清促红素 浓度升高，血药浓度达峰值时间为18小时，骨髓 为特异性摄取器官，药物主要为肝脏和肾脏摄取。 促红素给药后大部分在体内代谢，动物（大鼠） 实验表明，除肝脏外，还有少部分药物在肾、骨 髓和脾脏内降解。肾脏不是促红素的主要排泄器 官，使用促红素的贫血患者，药物以原形经肾脏 排泄的量小于10%。
• 促红细胞生成素的临床应用
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仙桃一医新生儿科
• 促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）是一种刺激骨髓 造血的糖蛋白类激素，是一种含唾液酸的酸性蛋白。人类 EPO基因位于7号染色体长臂22区，相对分子量为34， 000，有4个糖基化位点。自从1989年美国Amgen公司[3] 在国际上首次研制成功重组人红细胞生成素 （recombinant human erythropoietin, rHuEPO）, 其理化 性质和生物学活性与天然内源性红细胞生成素相同。EPO 通过与靶细胞上特异性的EPO 受体(erythropoietin receptor，EPO-R)结合发挥生物效应。传统认识中， EPO 是一种作用于骨髓造血细胞，促进红系祖细胞增生、 分化和成熟的内分泌激素，对机体供氧状况发挥重要的调 控作用。
促红细胞生成素在中枢神经系统中的作用
促红细胞生成素在中枢神经系统中的作用【关键词】生成素促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是组织氧合状态的一种主要决定因素，EPO通过结合细胞表面的特异性受体（EPO-R）而发挥作用，以往认为EPO特异而专一地作用于造血细胞，但目前认识到EPO对其他细胞也有作用，功能性EPO-R除存在于造血系统外，还存在于各种非造血系统，如中枢神经系统（CNS）。
本文对EPO及EPO-R 在CNS中的作用做一综述。
1 EPO和EPO-R的分子结构及其在CNS的分布1.1 EPO和EPO-R的分子结构人类EPO基因定位于7q 11-12 ，含5个外显子和4个内含子，其序列在哺乳动物种族（人、鼠、猪、绵羊）间有80%～82%同源性。
EPO是一种含唾液酸的酸性糖蛋白，由193个氨基酸序列合成，经过转化其活性蛋白为165个氨基酸，随后被高度糖基化。
天然存在的EPO有α和β两种亚型，两者的主要区别在于碳水化合物含量不同，而生物学特性和抗原性相同。
重组人促红细胞生成素（rHu-EPO）是一种通过基因重组DNA技术生产的、含有与天然分离的EPO完全相同氨基酸序列的糖蛋白，生物学活性也相似。
目前已知CNS存在脑源性EPO，其分子量（33kD）较血清EPO（35kD）为小，可能因其唾液酸基较小之故，但作用却比血清EPO为强。
EPO 合成释放受制于多种因素的调节，组织缺氧是主要的刺激因素。
细胞内不贮存EPO，仅在需要时通过增加mRNA的合成而产生。
EPO是一种存活因子，具有抑制细胞凋亡、减少正常细胞丢失的功能，为多种细胞的存活所必需。
EPO必须通过EPO-R才能发挥其功能。
EPO-R基因定位于19p 13.3 ，属细胞因子受体超家族中造血生长因子受体家族成员，是一种含508个氨基酸的单链跨膜糖蛋白，其胞浆区中boxl、box2为保守区，为促进有丝分裂与诱导酪氨酸磷酸化配基偶联所必需，胞浆近膜区部分为与JAK2作用所必需。
促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响
促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响叶蓓;陈建珍;张立光;李曼【摘要】目的研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响.方法健康成年雄性Wistar大鼠30 只,随机分为三组:对照组、损伤组、治疗组, Allen's法制作成脊髓打击伤动物模型,伤后1、3、7、14d 用改良的后Gale联合评分法(the combine behavioral score,CBS) 观察大鼠运动功能的恢复情况,通过HE染色观察EPO对损伤脊髓组织病理变化的影响.结果脊髓损伤组的大鼠各时间点CBS评分较对照组明显降低,差异具有显著性(P＜0.01);EPO组的大鼠后肢运动、肌张力及损伤平面以下各种反射较损伤组有不同程度的提高.脊髓损伤第3天,治疗组脊髓组织可辨别神经元形态;第7～14 d治疗组脊髓组织结构较清晰,神经元形态正常.结论 EPO能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复,减轻和延缓伤后早期的病理损害.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2010(014)001【总页数】3页(P49-51)【关键词】脊髓损伤;促红细胞生成素;运动功能;大鼠【作者】叶蓓;陈建珍;张立光;李曼【作者单位】苏州卫生职业技术学院,江苏,苏州,215009;苏州卫生职业技术学院,江苏,苏州,215009;苏州卫生职业技术学院,江苏,苏州,215009;山东大学齐鲁医院,山东,济南,250012【正文语种】中文脊髓损伤引起神经元损伤及神经纤维的中断,从而阻碍神经冲动的传导,导致神经功能不良引起截瘫,其治疗至今尚无有效的治疗方法。
因此如何有效的救治脊髓损伤患者,保护脊髓损伤后神经元,促进脊髓损伤后的功能恢复,具有极其重要的医疗价值和社会意义。
目前国内外很多学者都在致力于各种药物对脊髓损伤治疗保护作用的研究,包括改善血液循环的药物、脂质过氧化物抑制剂、自由基清除剂、钙离子通道阻断剂等[1]。
骨髓间充质干细胞移植联合促红细胞生成素治疗大鼠脊髓损伤
骨髓间充质干细胞移植联合促红细胞生成素治疗大鼠脊髓损伤曾云;熊敏;余化龙;何宁;王志勇;刘志刚;韩珩;陈森【期刊名称】《湖北医药学院学报》【年(卷),期】2012()5【摘要】目的:观察骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)移植联合促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响,并探讨其可能的机制。
方法:体外分离、培养、纯化BMSCs。
改良的Allen法制造大鼠脊髓损伤模型。
将75只雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、脊髓损伤组、EPO治疗组、BM-SCs治疗组及EPO+BMSCs治疗组,每组15只。
EPO治疗是在脊髓损伤前24 h腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)5 000 U/kg,BMSCs治疗是将纯化的BMSCs在脊髓损伤时经尾静脉注射,术后第1、3、7、14、21、28天采用BBB法进行大鼠后肢运动功能评分,观察大鼠神经功能恢复情况,术后第1、28天HE染色观察脊髓形态学变化,Western blot检测第14天损伤局部脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达水平。
结果:与脊髓损伤组比较,术后3 d起,EPO和BMSCs均可促进大鼠后肢功能恢复和损伤时形态学的改善,二者联合使用效果更好。
Western blot结果显示假手术组BDNF表达水平最低,脊髓损伤组表达水平略有升高,BMSCs组和EPO组BDNF表达水平均明显升高(P<0.05),EPO+BMSCs联合治疗组BDNF的表达水平明显高于单个治疗组水平(P<0.05)。
结论:BMSCs移植联合EPO能明显促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,其机制可能是上调局部BDNF的表达。
【总页数】5页(P355-358)【关键词】骨髓间充质干细胞;促红细胞生成素;大鼠;脊髓损伤;脑源性神经营养因子【作者】曾云;熊敏;余化龙;何宁;王志勇;刘志刚;韩珩;陈森【作者单位】湖北医药学院附属东风医院骨科.脊柱【正文语种】中文【中图分类】R65【相关文献】1.骨髓间充质干细胞靶向移植和促红细胞生成素联合治疗脊髓损伤. [J], 郑竑;张韬;林振恩;涂少臣;陈学生2.骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素治疗大鼠脊髓损伤 [J], 曾智谋;范忠诚;张寿;刘亦恒;吴多庆;韩贵宾;王琮仁3.骨髓间充质干细胞联合促红细胞生成素对脊髓损伤大鼠的保护作用 [J], 谢鹏;阮文辉4.重组人促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠心肌损伤 [J], 滕金龙;李丹;于海初;蔡尚郎;潘新亭5.重组人促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠心肌损伤 [J], 滕金龙;李丹;于海初;蔡尚郎;潘新亭;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后脑源性神经营养因子和酪氨酸受体激酶B表达的影响
促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后脑源性神经营养因子和酪氨酸受体激酶B表达的影响金宝;张育才;崔云【摘要】目的探讨促红细胞生成素(EPO)对鹅膏蕈氨酸(Ibo)致不同发育期小鼠脑损伤后脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸受体激酶B(Trk B)mRNA及蛋白表达的影响.方法以120只昆明白小鼠作为实验动物,其中7日龄(P7)、21日龄(P21)和42日龄(P42)小鼠各40只；再将同日龄小鼠随机分为Ibo组(n=15)、Ibo+ EPO 组(n=15)和对照组(n=10).Ibo组采用微量注射法向左侧海马注射Ibo 1 μL;Ibo+ EPO组注射Ibo 1 μL后,腹腔注射5 000 U/( kg·d)EPO,连续5d;对照组注射等体积生理盐水.各组小鼠在建模后第5天进行Y-电迷宫测试；Cresyl Violet染色观察海马神经元病理学变化；Real-Time PCR检测海马BDNF mRNA和TAB mRNA 的表达；ELISA法检测BDNF和TrkB蛋白的表达.结果术后Ibo组小鼠寻找安全区的正确率明显低于对照组(P＜0.05),而EPO +Ibo组小鼠寻找安全区的正确率明显高于Ibo组(P＜0.05).光学显微镜观察结果显示:Ibo组小鼠海马组织神经元发生明显变性和细胞死亡.Ibo+ EPO组和Ibo组海马神经元死亡率明显高于对照组(P ＜0.05)；而Ibo+EPO组损伤较轻.Ibo组和Ibo+ EPO组海马组织BDNF和TrkB 的mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组(P＜0.05)；其中,Ibo+ EPO组BDNF 和TrkB的mRNA及蛋白表达量均显著高于Ibo组(P＜0.05).结论 Ibo致脑损伤时,海马组织BDNF和TrkB mRNA及蛋白表达均明显增强,可能是一种保护性反应.EPO可减轻Ibo所致脑损伤,其机制可能与上调BDNF和TrkB的mRNA及蛋白的表达有关.%Objective To investigate the effects of erythropoietin ( EPO) on expression of brain-derived neurotrophic factor ( BDNF) and tyrosine receptor kinase B ( TrkB) mRNA and protein after brain injury induced byibotenic acid (Ibo) in mice of different developmental stages. Methods One hundred and twenty KM mice aged 7 d (n = 40), 21 d ( n = 40) and 42 d (n =40) were selected, and those of the same age were randomly divided into Ibo group (n = 15), Ibo + EPO group (n = 13) and control group (n = 10), respectively. In Ibo group, 1 μL Ibo was injected into left hippocampus. In Ibo + EPO group, intraperitoneal injection of 5 000 U/( kg d) EPO was performed for 5 consecutive days after inject ion of 1 μL Ibo into left hippocampus. Mice in control group were treated with same amount of normal saline. Y-maze tests were carried out 5 d after model establishment in each group, the pathological changes of neurons in hippocampus were observed with Cresyl Violet staining, the expression of BDNF mRNA and TrkB mRNA in hippocampus was detected by Real-Time PCR, and the expression of BDNF protein and TrkB protein was determined by ELISA. Results After operation, the percentage of mice entering safe arm in Ibo group was significantly lower than that in control group (P <0.05), while the percentage of mice entering safe arm in EPO + Ibo group was significantly higher than that in Ibo group (P <0.05). Light microscopy revealed that degeneration and cell death of neurons in hippocampus occurred in Ibo group, and the death rates of neurons in hippocampus in Ibo + EPO group and Ibo group were significantly higher than that in control group (P <0. 05). However, the pathological changes of Ibo + EPO group were more moderate. The expression of BDNF and TrkB mRNA and protein in Ibo group and Ibo + EPO group was significantly higher than that in control group (P < 0.05), and the expression of BDNF and TrkBmRNA and protein in Ibo + EPO group was significantly higher than that in Ibo group (P <0.05). Conclusion The expression of BDNF and TrkB mRNA and protein is significantly up-regulated in hippocampus of mice with Ibo-induced brain injury, which may be a protective reaction. EPO mitigates brain injury induced by Ibo, the mechanism of which may be related to the up-regulation of expression of BDNF and TrkB mRNA and protein.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)001【总页数】7页(P14-20)【关键词】脑源性神经营养因子;酪氨酸受体激酶B;促红细胞生成素;鹅膏蕈氨酸;脑损伤;小鼠【作者】金宝;张育才;崔云【作者单位】上海交通大学附属儿童医院重症医学科上海交通大学儿科危重病研究所,上海200040;上海交通大学附属儿童医院重症医学科上海交通大学儿科危重病研究所,上海200040;上海交通大学附属儿童医院重症医学科上海交通大学儿科危重病研究所,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R741.02脑损伤是儿科常见的危重症，也是导致儿童死亡及脑瘫、癫、智力障碍等神经系统疾病的重要原因。
不同剂量促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响
不同剂量促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响娄季宇;曾志磊;杨霄鹏【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(041)002【摘要】目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:32只雄性SD大鼠随机分成Epo低、中、高剂量组和缺血再灌注组,4组大鼠均采用线栓法阻断一侧大脑中动脉血流2 h再灌注24 h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型.缺血开始时Epo低、中、高剂量组分别腹腔注射Epo 1000 U/kg、3000U/kg、5000U/kg,缺血再灌注组注射等量生理盐水.再灌注24 h后断头取脑,制作石蜡切片,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与缺血再灌注组比较,Epo各剂量组凋亡细胞均少,Bcl-2表达较高,Bax表达较少,Bcl-2/Bax比值变大.Epo各剂量组间Bax的表达差异无统计学意义;高剂量Epo组对Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值影响最大;中剂量Epo对细胞凋亡的影响最为显著;低剂量Epo对Bcl-2表达和细胞凋亡的影响最小,对Bcl-2/Bax 比值的影响与中剂量相同.结论:不同剂量的Epo对大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层神经细胞凋亡的影响不完全相同,3000 U/kg可能最接近最佳应用剂量.【总页数】3页(P316-318)【作者】娄季宇;曾志磊;杨霄鹏【作者单位】郑州大学第二附属医院神经内科,郑州,450014;郑州大学第二附属医院神经内科,郑州,450014;郑州大学第二附属医院神经内科,郑州,450014【正文语种】中文【中图分类】R742【相关文献】1.促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血侧皮层神经元凋亡和Bcl-2表达的影响 [J], 曾志磊;娄季宇;苗旺2.黄芪、尼莫地平对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响 [J], 王国瑞3.补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3基因表达的影响 [J], 任岩;曹余恒;李杰萍4.大鼠脑缺血再灌注损伤后尼莫地平对神经细胞凋亡影响的研究 [J], 程景丽;和姬苓;耿红;孙洪英;杨国安;吴丽娥;马俊兵5.炎性介质阻断剂对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响 [J], 谢惠芳;徐如祥;魏继鹏;姜晓丹;刘振华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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１０３的酸性糖蛋白。近年来
研究结果证实，ＥＰＯ可以促进骨髓间充质干细胞 （ＢＭＳＣｓ）表达脑源性神经营养因子和神经生长因子， 通过抑制神经元损伤后的凋亡和坏死，促进神经元的 修复、轴突再生、调节突触可塑性和神经递质传递等机 制来促进神经元的存活和再生¨１。本研究旨在观察 ＥＰＯ在脑红蛋白（Ｎ曲）基因修饰的骨髓间充质干细胞 向大鼠脊髓损伤部位迁移中的作用。 材料与方法 １．材料：重组促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ，美国Ｓｉｇｍａ 公司）、１６４０培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司）、胎牛血清（美国
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ；Ｎｓｂ；Ｂｏｎｅ
ｍａｌＴｏｗ
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇａｌｌｅｒｙ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ
ｉｎｊｕｒｙ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（Ｂ２０１５４７０）
促红细胞生成素（ＥＰＯ）又称为红细胞生长因子， 为相对分子质量为３４
万方数据
・１８６・
生垡塞坠生｝登盘查垫！！生！月箜！！鲞箜！翅垦丛！』垦翌！！垡：』塑！型垫！！：！亟三玉堂』
Ｄ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｎｇｂ ｄａｙ．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｃ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｂ ａｔ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ Ｄｏｉｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃ‘
ｐｒｅｓｓｉｏｎ
（ＴＵＮＥＬ）ｋｉｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｔ ７ｔｈ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ，ＢＢＢ ｓｃｏｒｅｓ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｂ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｃ ａｔ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）． ＢＢＢ ｓｃｏｒｅｓ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜ ０．０１）．ＢＢＢ ｓｃｏｒｅｓ ｉｎ ｇｒｏｕｐｓ Ａ，Ｂ，Ｃ ａｎｄ Ｄ ｗｅｒｅ ５．１４±０．６３，８．３６±０．３７，８．４５±０．５２，９．９２±０．７３
ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｂ，１ ｍｌ Ｎｇｂ ｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＢＭＳＣｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｃ， ｒｈＥＰＯ ａｎｄ Ｎｇｂ ｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＢＭＳＣｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ．Ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｅ— ａｎｄ ｖａｌｕａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｂａｓｓｏ—Ｂｅａｔｔｉ—Ｂｒｅｓｎａｈａｎ（ＢＢＢ）ｓｃｏｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｄａｙ １，７，１４，２１．Ｔｈｅ ｅｘ—
ｉｎｊｅｃｔｅｄ
ｏｆ Ｎｇｂ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ １．Ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＴｄＴ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰ ｎｉｃｋ ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ
ＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＹＧＣＴＧＴＡ－３’。
ｇ，由湖北医药学院实验动物中心提供。 ２．大鼠急性脊髓损伤模型的建立：腹腔内注射
１０％水合氯醛麻醉大鼠，每只大鼠０．２ ＩＩｌｌ，背部备皮后 俯卧位固定大鼠，活力碘常规消毒３次，使用无菌粘贴 敷料覆盖小鼠，手术切口为脊柱正中，小心分离椎旁肌 肉，暴露出椎骨，使用文氏钳咬断棘突后在水平方向小 心打开椎管，暴露所需节段脊髓，从背侧正中沟插人尖 刀，刀刃转向右侧脊髓缘迅速切开，明胶止血海绵轻压 止血。先将肌肉缝合以封闭椎管缺损，后缝合皮肤、活 力碘擦去皮肤血迹，脊髓损伤模型完成。手术期间保 证室温维持２８℃，术后大鼠亦放置于３７℃至苏醒。 术后给大鼠腹腔注射庆大霉素防止感染，每天轻轻挤 压膀胱人工排尿至恢复自身排尿反射。 ３．Ｎ曲重组慢病毒感染ＢＭＳＣｓ：取第３代ＢＭＳＣｓ 生长７０％一８０％融合时，０．２５％胰蛋白酶消化１— ｍｉｎ，以含１０％胎牛血清（ＦＢＳ）的ＤＭＥＭ低糖培养 基调整细胞密度为以６×１０４／孔，种植于６孔细胞培
２００～２５０
射Ｎｇｂ基因修饰的ＢＭＳＣｓ悬液１ １１１ｌ，Ｄ组肌肉注射 ｒｈＥＰＯ（５ ０００ Ｕ／ｋｇ）及静脉注射Ｎｇｂ基因修饰的
ＢＭＳＣｓ悬液１
ｍｌ。
５．实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ）实验： Ｔｒｉｏｌ提取法收取细胞总ＲＮＡ，后立即用反转录试剂盒 进行反转录，接着进行Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ体系配置体系并 上机。具体的引物序列如下：Ｎｇｂ上游引物：５’一ＣＧ． ＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＴ．３’，Ｎ曲下游引物：５’一ＡＧＧＴ－ ＣＡＴＣＣＡＣＧＴＣＡＣＡＧ－３’；ＧＡＰＤＨ上游引物：５’一ＡＣＣＡ— ＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＣＡＴＣＡＣ－３’，ＧＡＰＤＨ下游引物：５’．ＴＣ．
ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，Ｄｏｎｆｆｅｎｇ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｉｙａｎ
４４２００８，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｘｉｏｎｇ Ｍｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｘｉｏｎｇｍｉｎｌ９６４＠１６３．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＥＰＯ）ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｇｂ ｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂｏｎｅ ｍａ！Ｔｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｔｏ ｔｈｅ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎｉｎｅｔｙ—ｓｉｘ ａｄｕｌｔ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ４ ｇｒｏｕｐｓ：Ａ：ＤＭＥＭ ｇｒｏｕｐ；Ｂ：ＥＰＯ ｇｒｏｕｐ；Ｃ： Ｎｇｂ ｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＢＭＳＣｓ ｇｒｏｕｐ；Ｄ：ＥＰＯ＋Ｎｇｂ ｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＢＭＳＣｓ ｇｒｏｕｐ．Ａｆｔｅｒ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕ— ｒｙ，１ ｍｌ ＤＭＥＭ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ，ｒｈＥＰＯ（５ ０００ Ｕ／ｋｇ）ｗａｓ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｌｙ
Ｄ（Ｐ＞０．０５）．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ Ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｂ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｃ ａｔ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ Ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｃａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｇｂ
ｓｅｐｅｒａｔｅｌｙ ｏｎ ｔｈｅ ７ｔｈ ｄａｙ ｐｏｓｔ—ｉｎｊｕｒｙ，７．５８ ４－０．９４，１０．３９±０．８９，１１．１２±０．７８，１４．２１±１．０６ ｓｅｐｅｒ— ａｔｅｌｙ ｏｎ ｔｈｅ １４ｔｈ ｄａｙ ａｎｄ ８．５９±０．７７，１４．１２±０．９９，１４．３３±１．６ｌ，１８．０２±１．７８ ｓｅｐｅｒａｔｅｌｙ ｏｎ ｔｈｅ ２８ｔｈ
ＥＰＯ＋Ｎｇｂ／ＢＭＳＣｓ组。Ａ组静脉内注射生理盐水
１
ｍｌ，Ｂ组肌肉注射ｒｈＥＰＯ（５ ０００ Ｕ／ｋｇ），Ｃ组静脉注
Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）、Ｎ曲、甘油醛－３＿磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）引
物（美国Ｌｉｆｅ公司）、脂质过氧化物（ＭＤＡ）试剂盒（南 京建成公司）、原位缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）试剂盒 （美国Ｒｏｃｈｅ公司）、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（美国Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ 公司）。实验动物：成年雌性ＳＤ大鼠１００只，体质量
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６促红细胞生成素（ＥＰＯ）在脑红蛋白（Ｎ曲）基因修饰的骨髓间充质干细胞
（ＢＭＳＣｓ）向脊髓损伤部位迁移中的作用。方法将９６只成年ｓＤ大鼠随机分为４组：Ａ：培养基组；
Ｂ：ＥＰＯ组；Ｃ：Ｎｇｂ基因修饰的ＢＭＳＣｓ组；Ｄ：ＥＰＯ＋Ｎｇｂ基因修饰的ＢＭＳＣｓ组。脊髓损伤后Ａ组静脉 内注射ＤＭＥＭ培养基１ ｒｎｌ，Ｂ组肌肉注射ｒｈＥＰＯ（５ ０００ Ｕ／ｋｇ），Ｃ组静脉注射Ｎ曲基因修饰的ＢＭＳＣｓ
Ｘ
同ＭＯＩ值分别加入Ｎ曲慢病毒液；培养８ ｈ后换为正 常培养基继续培养，感染后每天用荧光显微镜观察荧 光表达。随机取５个２００倍视野，计数绿色荧光表达 细胞的百分数，求其平均值为感染率，每１个ＭＯＩ值 测３个感染率，计算细胞感染率在８０％以上时需要的 病毒量来确定最适感染ＭＯＩ值。以最佳ＭＯＩ值的 Ｎ曲重组慢病毒感染第１代ＢＭＳＣｓ，并制备浓度为１× １０９／Ｌ的ＢＭＳＣｓ悬液，备用。 ４．分组给药：将９６只成年雌性ＳＤ大鼠随机分为
空堡塞坠处型盘查！！！！生！旦箜！！鲞箜！塑鱼！堡』垦狸坠疆：』塑！！竖！Ｑ！！：ｙ！！：！！：盟！：！
・１８５・
・实验研究・
促红细胞生成素在脑红蛋白基因修饰的 骨髓间充质干细胞向大鼠脊髓损伤部位 迁移中的作用