DNA Induced FePt Bimetallic Nanoparticles on Reduced Graphene Oxide for Electrochemical De
棕榈酸诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞M1 型极化
doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.20.001㊃基础免疫学㊃棕榈酸诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞M1型极化①张焱皓 刘芊伊 冯继红② 李 茂 刘利萍 秦 欢 罗军敏(遵义医科大学免疫学教研室,贵州省免疫分子应用研究工程中心,遵义563003) 中图分类号 R392.9 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2020)20⁃2433⁃05①本文为国家自然科学基金地区项目(No.81860291)和浙江省中医药管理局课题项目(2020ZB292)㊂②丽水市人民医院肿瘤科,丽水323000㊂作者简介:张焱皓,男,在读硕士,主要从事感染免疫学方面的研究,E⁃mail:zyh_777163@㊂通讯作者及指导教师:罗军敏,女,硕士,教授,硕士生导师,主要从事感染免疫学方面的研究,E⁃mail:luojm 16128@㊂[摘 要] 目的:探讨棕榈酸(PA)对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)极化的影响及机制㊂方法:提取BALB /c 小鼠骨髓细胞,于含有10%胎牛血清和20ng /ml GM⁃CSF 的DMEM 低糖培养基中诱导7d 后得到BMDM,给予不同浓度PA,CCK8检测巨噬细胞活性变化,确定最佳诱导浓度㊂倒置显微镜观察诱导后巨噬细胞形态㊂RT⁃PCR 检测TNF⁃α㊁IL⁃6㊁IL⁃12㊁诱导型一氧化氮合酶(iNOS)㊁转化生长因子⁃β(TGF⁃β)㊁IL⁃10㊁Fizz1及YM⁃1mRNA 表达,流式细胞术检测NOS2㊁CD206表达,Western blot 检测MAPK 信号通路相关蛋白表达㊂结果:PA 诱导巨噬细胞的最佳浓度为400μmol /ml,巨噬细胞呈现M1型极化样的长梭形,与未处理组相比,PA 诱导组炎症细胞因子TNF⁃α㊁IL⁃6㊁IL⁃12及iNOS mRNA 水平在诱导后12~72h 表达升高,而抑炎细胞因子TGF⁃β㊁IL⁃10㊁Fizz1及YM⁃1的转录水平受到抑制,48h 时,巨噬细胞高表达NOS2,而CD206表达一直处于较低水平㊂PA 诱导巨噬细胞MAPK 信号通路相关蛋白p⁃ERK㊁p⁃JNK 及p⁃p38高表达,p⁃65入核㊂结论:PA 可诱导小鼠BMDM M1型极化,可能通过MAPK 信号通路传导信号给NF⁃κB 影响巨噬细胞极化㊂[关键词] 巨噬细胞;棕榈酸;极化;MAPK 信号通路Palmitic acid induces mouse bone marrow⁃derived macrophages M1polarizationZHANG Yan⁃Hao ,LIU Qian⁃Yi ,FENG Ji⁃Hong ,LI Mao ,LIU Li⁃Ping ,QIN Huan ,LUO Jun⁃Min .Department of Im⁃munology ,Zunyi Medical University ,Immune Molecules Application Research Center of Guizhou Province ,Zunyi 563003,China[Abstract ] Objective :To investigate effect of palmitic acid(PA)on polarization of mouse bone marrow⁃derived macrophages (BMDM)and its mechanism.Methods :Mouse BMDM were harvested and cultured in DMEM low glucose medium containing 10%fetal bovine serum with 20ng /ml GM⁃CSF for 7d to obtain BMDM.BMDMs were treated with different concentrations of PA and CCK8was used to detect cell viability of macrophages and determined optimal concentration for induction.Morphology of macrophages was observed after induction by inverted microscope.Relative mRNA expression levels of TNF⁃α,IL⁃6,IL⁃12,inducible nitric oxide synthase (iNOS),transforming growth factor⁃β(TGF⁃β),IL⁃10,Fizz1,YM⁃1were determined by RT⁃PCR.Expression levels of NOS2and CD206were determined by flow cytometry.MAPK signaling pathway⁃related proteins were detected by Western blot.Results :Optimal concentration of PA⁃induced macrophages was 400μmol /ml.Macrophages showed a long fusiform shape like pared with untreated group,PA induced groups mRNA expression levels of flammatory cytokines TNF⁃α,IL⁃6,IL⁃12and iNOS were increased at 12-72h,while transcription levels of anti⁃inflammatory cytokines TGF⁃β,IL⁃10,Fizz1,YM⁃1were inhibited;macrophage incubated with PA expressed NOS2at 48h,while expression of CD206was always at a low level.PA induced high expressions of p⁃ERK,p⁃JNK,p⁃p38that related to JNK /P38MAPK signaling pathway,and p⁃65was transferred to nucleus.Conclusion :PA induces expressions of macrophage inflammatory cytokines and signals to NF⁃κB via MAPK signaling pathway,which induces M1polarization of BMDM.[Key words ] Macrophages;Palmitic acid;Polarization;MAPK signaling pathway 巨噬细胞是组织动态平衡和炎症反应中的关键细胞,发挥基本的组织特异性功能并保护机体免受感染㊂巨噬细胞因所处微环境中细胞因子㊁微生物及其产物和其他刺激物极化为特定表型,根据刺激物的不同,IFN⁃γ激活的巨噬细胞被定义为经典激活型巨噬细胞(M1),IL⁃4激活为替代激活型巨噬细胞(M2),且M2型巨噬细胞可细分为M2a㊁b㊁c [1⁃3]㊂M1型巨噬细胞具有促炎特性,高表达炎症细胞因子如TNF⁃α㊁IL⁃6㊁IL⁃12㊁诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase2,iNOS或NOS2)等,具有杀灭病原体及抗肿瘤功能;而M2型巨噬细胞膜表面高表达CD206,分泌大量转化生长因子⁃β(transforming growth factor⁃β,TGF⁃β)㊁IL⁃10㊁炎症区域分子1(found in inflammatory zone1,Fizz1)㊁类几丁质酶3样分子3(chitinase3⁃like3,Chi3L3或YM⁃1)等细胞因子,可促进细胞增殖和组织修复[4]㊂受病原体及肿瘤微环境影响,巨噬细胞以M2型为主,分泌抑炎细胞因子,发挥免疫抑制作用,导致病原菌感染或肿瘤进展㊂因此,调控免疫抑制状态下巨噬细胞的极化表型尤其重要㊂棕榈酸(palmitic acid, PA)是脂肪生成过程中产生的脂肪酸㊂研究表明中草药中也含有PA,在昆仑雪菊花中PA占比达9.71%,在黄蜀葵子中占比约为5.88%,在猫爪草中占比为2.64%[5⁃7]㊂陈冬梅等[8]发现党参中提取的PA具有免疫活性,作用于TNF及IL⁃10发挥免疫调节作用㊂大量研究表明,PA是一种致炎能力极强的脂肪酸,常用于构建体外脂毒性损伤模型[9⁃11]㊂因此作为中草药中常见的单体成分,有必要了解PA 对机体免疫细胞的功能影响,明确其作用机制㊂本研究通过将PA配制为水溶液,将其直接加入细胞培养基中,检测巨噬细胞极化相关标志物的动态变化,观察BMDM受诱导后的极化表型,并探讨PA诱导巨噬细胞M1型极化的机制㊂1 材料与方法1.1 材料 6~10周龄雌性BALB/c小鼠购于重庆市第三军医大学医学实验动物中心,并饲养于本实验室清洁级动物房㊂PA购于Sigma公司,纯度≥99%㊂小鼠重组GM⁃CSF购于NOVUS㊂RNAiso TM Plus㊁PrimeScript TM RT Reagent Kit(RR037A)㊁SYBR Premix Ex Taq Real⁃time PCR购于TaKaRa㊂Cell Counting Kit⁃8购于东仁化学科技(上海)有限公司㊂分析纯氯仿㊁异丙醇㊁无水乙醇等购于重庆川东化工公司㊂DMEM低糖培养基购于Gibco,胎牛血清购于MRC㊂引物购于上海生物工程有限公司㊂APC 标记的抗小鼠CD11b抗体(cat.no.17⁃0112⁃82, eBioscience)㊁FITC标记的抗小鼠F4/80抗体(cat.no.11⁃4801⁃82,eBioscience)㊁APC标记的抗小鼠CD206抗体(cat.no.17⁃2061⁃82,eBioscience)和PE标记的抗小鼠Nos2抗体(cat.no.25⁃5920⁃82, eBioscience)购于赛默飞㊂Anti⁃JNK(No.9252s)㊁Anti⁃p⁃JNK(No.4668s)㊁Anti⁃NF⁃κB(No.8242s)㊁Anti⁃p⁃NF⁃κB(No.3033s)一抗购于CST㊂anti⁃p38 MAPK(No.ab197348)㊁anti⁃ERK(No.196883)㊁anti⁃AKT(No.ab8805)㊁anti⁃phospho ERK(No. ab50011)㊁anti⁃phospho AKT(No.ab81283)㊁anti⁃phospho p38⁃MAPK(No.ab47363)㊁anti⁃GAPDH(No. ab181602)㊁Anti⁃Lamin B1(No.ab16048)及anti⁃IKBα(No.ab32518)一抗购于Abcam㊂Anti⁃rabbit Ab conjugated to HRP(No.7074s)二抗购于CST㊂1.2 方法1.2.1 小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)的获取 无菌条件下取BALB/c小鼠胫骨和腓骨细胞置于含有10%胎牛血清㊁20ng/ml GM⁃CSF的DMEM低糖培养基中,37℃㊁5%CO2条件下培养7d,流式细胞术检测骨髓细胞F4/80和CD11b双阳性比率㊂1.2.2 PA脂性培养基配置 称取0.04g NaOH溶于10ml ddH2O配置成浓度为0.1mol/ml的NaOH 溶液用于后续实验,称取0.1g PA置于9ml NaOH溶液中,75℃水浴加热30min㊂称取1.2g BSA于55℃预热的3ml PBS中,8000r/min离心20min㊂向75℃的PA㊁NaOH混合液中加入BSA溶液,摇匀后55℃助溶30min㊂细菌过滤器过滤后紫外照射30min灭菌㊂1.2.3 CCK8检测巨噬细胞活性 将PA以100㊁300㊁400和500μmol/ml刺激小鼠BMDM24h后,收集培育7d的BMDM于离心管,计数,以1∶2比例依次采用DMEM等比稀释为至少3个细胞浓度梯度,接种于96孔板,每组设3~6个复孔㊂孵育箱培养24h使细胞贴壁,10μl/孔加入CCK8试剂,孵育4h 后于450nm处测定OD值,并绘制标准曲线㊂1.2.4 RT⁃PCR检测细胞因子表达 收集样品, TRIzol提取RNA,按照TaKaRa说明书构建10μl逆转录体系,反应条件为37℃15min,85℃5s,逆转录为cDNA㊂构建20μl反应体系,95℃10min,95℃15s;60℃30s,39个循环㊂引物序列见表1㊂1.2.5 流式细胞术检测巨噬细胞NOS2和CD206表达 收集细胞于EP管,加入流式抗体4℃避光孵育30min㊂洗去未结合的抗体后流式细胞术检测㊂1.2.6 Western blot检测MAPK通路相关蛋白表达 提取细胞核蛋白㊂全蛋白提取按照如下操作:加入含有蛋白酶抑制剂㊁磷酸酶抑制剂和PMSF的Lysis Buffer于细胞培养板中,细胞刮刀刮取细胞并制备蛋白;测定各组总蛋白浓度后,加入上样缓冲液制备样品,电泳㊁转膜㊁脱脂奶粉封闭㊁洗膜,加入一抗孵育过夜,加入二抗,ECL化学发光试剂曝光㊂1.3 统计学处理 采用Garphpad进行数据正态性检验,正态性分布样本行t检验,非态分布样本采用秩和检验,数据以x±s表示,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 PA对小鼠BMDM的影响 与未处理组相比,当PA浓度为400μmol/ml时,对小鼠BMDM活性无影响,且为诱导巨噬细胞的最大浓度㊂以此浓度作为诱导巨噬细胞极化的浓度进行后续实验,见图1㊂2.2 PA对小鼠BMDM形态的影响 M0细胞呈椭圆形,400μmol/L PA诱导24h后,细胞呈长梭形且伪足细长,与M1巨噬细胞形态一致㊂表明PA可能诱导巨噬细胞M1型极化,见图2㊂2.3 PA对小鼠BMDM细胞因子表达的影响 与未处理组相比,PA诱导巨噬细胞后,M1型相关细胞因子mRNA水平在0~72h上调,其中IL⁃6mRNA水平在诱导36h后达到峰值,IL⁃12mRNA水平在12h后达到峰值,iNOS mRNA水平在48h后达到峰值,而TNF⁃αmRNA水平在24h后达到峰值㊂PA诱导后M2型相关细胞因子表达下调,且YM⁃1㊁IL⁃10在被诱导后12h出现低转录状态,TGF⁃β出现于24h,而Fizz1出现于36h㊂表明在PA诱导后,小鼠BMDM 上调M1型相关细胞因子转录,同时下调M2型相关细胞因子转录,提示PA可能具有诱导巨噬细胞M1型极化的作用,见图3㊂2.4 PA对小鼠BMDM NOS2及CD206表达的影响 PA诱导后,F4/80+NOS2+细胞占比明显上升,且于36h达到峰值㊂PA诱导组F4/80+CD206+细胞比表1 引物序列Tab.1 Primer sequencesGenes Primer sequences(5′⁃3′) GAPDH F:GAGCCAAACGGGTCATCATCTR:GAGGGGCCATCCACAGTCTT TNF⁃αF:CAGGGGCCACCACG CTCTTCR:TTTGTGAGTGTGAGGGTCTGGIL⁃10F:TACAGCCGGGAAGACAATAAR:AGGAGTCGGTTAGCAGTATG TGF⁃βF:GGCGGTGCTCGCTTTGTAR:TCCCGAATGTCTGACGTATTGA iNOS F:CTGCAGCACTTGGATCAGGAACCTGR:GGAGT AGCCTGTGTGTGCACCTGGAA Arg⁃1F:CAGAAGAATGGAAGAGTCAGR:CAGATATGCAGGGAGTCACCYM⁃1F:GCAGAAGCTCTCCAATCCTGR:ATTGGCCTGTCCTTAGCCCAACTG Fizz1F:GCTGATGGTCCCAGTGAATACR:CCAGTAGCAGTCATCCCAGC 例虽然在24h时显著上升,但诱导48h后,CD206表达恢复至未处理组水平,表明在PA诱导后,巨噬细胞向M1型极化,见图4㊂图1 PA对小鼠BMDM活性的影响Fig.1 Effect of PA on mice BMDM viability Note:Compared with control group,*.P<0.05.图2 PA对小鼠BMDM形态的影响Fig.2 Effect of PA on BMDM morphology ofmice图3 PA对小鼠BMDM促炎细胞因子和抑炎细胞因子转录水平的影响Fig.3 Effect of PA on transcriptional levels of pro⁃inflammatory cytokines and anti⁃inflammatorycytokines in BMDM of miceNote:Compared with control group,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001.图4 PA对小鼠BMDM NOS2和CD206表达的影响Fig.4 Effect of PA on expression of NOS2and CD206in BMDM of miceNote:Compared with untreated group,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001.2.5 Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白的表达 诱导后15min胞质中呈现p⁃ERK㊁p⁃JNK及p⁃p38表达,胞核中呈现p⁃NF⁃κB表达,30min时达到峰值,而IKBα相比于其15min时表达降低, 60min时p⁃ERK㊁p⁃JNK㊁p⁃p38及p⁃NF⁃κB有少量表达,而无IKBα表达㊂说明PA通过MAPK信号通路诱导巨噬细胞M1型极化,见图5㊂3 讨论巨噬细胞具有极强的可塑性,可极化为不同表型㊂M1型巨噬细胞可产生促炎细胞因子,促进炎症发展,杀伤病原体及肿瘤细胞㊂而M2型巨噬细胞释放抑炎细胞因子,抑制炎症反应,参与组织修复,介导肿瘤免疫逃逸㊂因此调控巨噬细胞极化在疾病防治中具有重要意义㊂近年大量研究报道了中草药对巨噬细胞极化的影响,中草药活性成分通过诱导巨噬细胞极化治疗疾病㊂PA是大部分中草药的主要成分㊂虽然已有研究报道PA可作为巨噬细胞TLR4的配体诱导机体产生炎症细胞因子,但其诱导巨噬细胞极化后表型的鉴定及相关机制研究尚未明确[12]㊂本研究从形态学出发观察到PA诱导后巨噬细胞形状呈梭型,形似M1型巨噬细胞㊂为验证其表型变化,检测巨噬细胞极化相关标志物的表达情况,发现相较于未处理组,PA诱导后M1型相关细胞因子TNF⁃α㊁IL⁃6㊁IL⁃12和iNOS在0~72h的转录水平升高数十倍,而M2型相关细胞因子TGF⁃β㊁IL⁃图5 PA对小鼠BMDM JNK/P38MAPK信号通路的影响Fig.5 Effect of PA on JNK/P38MAPK signaling pathway in mouse BMDMNote:Compared with0min group,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001.10㊁Fizz1和YM⁃1的转录表达受到抑制,说明巨噬细胞转变为促炎表型㊂研究表明NOS2可作为巨噬细胞M1型极化的标志物[13]㊂本研究检测F4/80+ NOS2+巨噬细胞双阳性细胞比例结果显示,相较于未处理组,PA诱导6h后,NOS2表达上调,72h时F4/80+NOS2+双阳性细胞比例为16.3%,处于较高水平㊂为进一步验证巨噬细胞的极化表型,本研究检测了M2型极化标志物CD206表达[14]㊂结果显示,虽然F4/80+CD206+双阳性细胞比例在PA诱导24㊁36h时明显上升,但随着诱导时间推移,F4/80+ CD206+双阳性比例下降至未处理组水平,因此推测CD206表达上调的原因可能是在PA的刺激下所激活的通路引发CD206表达,但随着PA诱导时间推移,引发促炎细胞因子的正反馈刺激,巨噬细胞逐渐向M1型转化,CD206表达也随之下降,说明PA具有诱导巨噬细胞M1型极化的能力㊂巨噬细胞的极化过程涉及多种经典的信号通路,而MAPK信号通路尤其重要[15]㊂MAPK信号通路可将信号传导给核因子κB(nuclear factor⁃κB,NF⁃κB),导致巨噬细胞M1型极化[16]㊂本研究检测了PA对该信号通路的影响,加入PA后15min,检测到p⁃ERK㊁p⁃JNK,p⁃p⁃38表达,并通过提取核蛋白发现p⁃65入核㊂在诱导后30min,p⁃ERK㊁p⁃JNK及p⁃p⁃38表达明显上调,p⁃65在核蛋白中高表达㊂诱导后60min仍然可观察到MAPK信号通路的信号传递㊂大量研究表明只有当NF⁃κB和IKBα解聚后,其核定位序列暴露,才能被转运至细胞核内促进NF⁃κB依赖的基因转录,因此检测IKBα表达作为验证,结果显示IKBα的表达与NF⁃κB相反,进一步证明PA通过MAPK信号通路导致p⁃65入核,激活NF⁃κB,诱导巨噬细胞M1型极化㊂PA是中草药中的主要组成部分,但其对机体细胞功能的影响常常被忽略㊂目前研究发现,PA可通过激活库普弗细胞炎症小体导致非酒精性脂肪性肝炎进展[17]㊂此外,PA可作用于迁移抑制因子导致胰岛细胞功能紊乱和凋亡[18,19]㊂但Boubaker等[20]发现PA可阻碍可移植肿瘤发展,并提高荷瘤小鼠的脾细胞增殖率及宿主巨噬细胞溶酶体活性,发挥抗肿瘤作用㊂总之,在不同疾病中PA可能对疾病的转归发挥不同的作用㊂近年来中草药的活性成分在疾病治疗中发挥重要作用,而巨噬细胞的极化是疾病治疗的切入点,因此了解PA对巨噬细胞极化的影响将有助于中草药的开发和利用㊂参考文献:[1] Nathan CF,Murray HW,Wiebe ME,et al.Identification of interfer⁃ongamma as the lymphokine that activates human macrophage oxi⁃dativemetabolism and antimicrobial activity[J].J Exp Med,1983, 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固体脂质纳米粒名词解释
固体脂质纳米粒名词解释
固体脂质纳米粒（Solid Lipid Nanoparticles，SLN）是一种新型的纳米载体，通常由脂质材料和药物组成。
它的平均粒径在10-1000nm 之间，具有良好的生物相容性、生物可降解性和较长的体内循环时
间。
SLN 的脂质材料通常是由磷脂、胆固醇等脂质分子组成，这些脂质分子在水性环境中能够自组装形成纳米级别的脂质体。
药物可以通
过包裹、镶嵌或吸附等方式负载在脂质纳米粒内部或表面。
SLN 具有良好的稳定性和可控的药物释放性能，可以实现药物的持续释放和靶
向输送。
SLN 在药物传递、基因治疗、疫苗接种等领域具有广泛的应用前景。
它可以提高药物的生物利用度、降低药物的毒副作用，同时还可以实现药物的靶向输送和控释释放。
山东事业单位专业技术二级岗位申报推荐人选基本情况一览表
负责人
负责人
负责人
负责人
1.pH-Responsive, Self-Sacrificial Nanotheranostic Agent for PotentialIn Vivo and In Vitro Dual Modal MRI/CT Imaging, Real-Time, and In Situ Monitoring of Cancer Therapy
2、针对循环肿瘤细胞捕获、检测及其原位诱导凋亡的个性化“抗转移”纳米诊疗探针的构建及其临床应用探索
3、FePt@MOFs_金属有机框架纳米结构的制备及其在循环肿瘤细胞富集、诱导凋亡方面的应用研究
4、具有靶向诊断和治疗双功能FePt/CNTs纳米复合材料：选控合成和抗肿瘤活性研究
5、具有诊断和治疗双功能的FePt/CNTs纳米复合材料:选控合成和抗肿瘤活性研究
山东省事业单位专业技术二级岗位申报推荐人选基本情况一览表
推荐单位（盖章）：2017年7月6日
姓名
郑秀文
性别
男
出生
日期
1976年5月6日
现专业技术职务
教授三级
学历
研究生
学位
博士
工作单位
临沂大学
现聘专业
技术岗位
教授
是否兼职
否
符合申报评审专业技术二级岗位条件（如果符合多项，请分别填写）
国内外同行业公认的高层次专业技术人才
graphene oxide platform for genosensing application
7."One-pot synthesis of carbon-decorated FePt nanopartices and their application
dna复制的主要酶及作用
dna复制的主要酶及作用DNA复制的主要酶有以下几种。
1. DNA 聚合酶：分为主要负责复制作用的DNA 聚合酶α（α 型）、负责修复作用的DNA 聚合酶δ（δ 型）和DNA 聚合酶ε（ε 型）。
DNA 聚合酶α 起始 DNA 合成，但其所合成的DNA 通常为短小片断。
DNA 聚合酶δ 和 DNA 聚合酶ε 则在这个 DNA 片断上进行进一步延伸。
DNA聚合酶δ 和 DNA 聚合酶ε 在DNA 复制过程中，分别与 PCNA 和 FEN1 结合起来，以构成修复机器。
2. DNA helicase：解旋酶，能够解开 DNA 链的双螺旋结构，从而使 DNA 链可被 DNA 聚合酶使用。
它能够解开双链 DNA，并将两个单链朝相反方向分离出来，以形成复制叉。
3. DNA 顶点酶（topoisomerase）：为了解决 DNA 复制时出现的超螺旋（supercoiling）问题，DNA 顶点酶能够切割 DNA单链，并缠绕 DNA 单链以减小其张力。
4. DNA 脱氧核糖核酸连接酶（DNA ligase）：能够将 DNA 链上的断裂连接在一起，形成连续的 DNA 链。
在 DNA 复制过程中，DNA 聚合酶在复制 DNA 链时会在 DNA 末端合成一个短的 RNA 片段，而 DNA ligase 负责将这些 RNA 片段与 DNA 链连接在一起。
这些酶在 DNA 复制过程中相互配合，完成 DNA 的复制与修复。
除了以上提到的酶之外，还有其他一些在DNA复制中起到重要作用的酶：5. DNA 核苷酸内切酶（endonuclease）：它们是一类能够切断DNA链的酶，用于移除可能在复制过程中产生的错误配对或损伤的DNA碱基。
6. DNA 平移酶（DNA primase）：该酶负责为DNA聚合酶提供一个RNA或DNA的引物，以便开始DNA链的合成。
7. DNA 合成调节酶：如PCNA（蛋白质偏离但不独立脱氧核糖核酸C中介因子）、RFC（PCNA开关因子）等，它们能够协助DNA聚合酶的活性，并确保DNA的正确复制。
新一代测序技术的原理
新一代测序技术的原理新一代测序技术（Next Generation Sequencing, NGS）是一种高通量、高效、低成本的基因组测序技术，能够同时获取大量DNA片段的序列信息。
它的原理基于DNA的放大和分离，并使用特殊的荧光探针来测定每个碱基的序列。
首先是DNA放大和分离。
新一代测序技术使用PCR（聚合酶链式反应）方法，将原始DNA样品放大成大量的DNA片段。
PCR是一种体外体系中，利用DNA聚合酶的反复扩增特异性DNA序列的技术。
首先，在PCR反应中加入二个特异性引物，引物的碱基序列对应着待扩增片段的两个端点。
然后，在PCR反应中引入DNA聚合酶，该酶能够在适当的温度下，在引物的作用下，将DNA双链分离，并在两个引物的作用下，在新合成的DNA链上进行反复扩增，使DNA片段增加到成千上万倍的数量。
这样，DNA样品就得到了充分的扩增。
其次是碱基识别和测定。
新一代测序技术使用的碱基识别方法主要包括荧光ddNTP法和合成法。
荧光ddNTP法是通过不同颜色的荧光标记的氧化型二脱氧核苷酸（ddNTP）来识别碱基。
在合成DNA链的过程中，当酶到达一些位置时，会加入带有不同颜色荧光标记的ddNTP，并且会在末尾加上一个磷酸二酯键，阻止DNA链的进一步延伸。
这样，就可以根据不同的荧光信号来推断碱基的序列。
合成法则是一种体外合成DNA片段的方法。
通过在玻璃基底上逐渐加上碱基和荧光标记组成的碱基盖片，合成整个DNA片段。
合成的过程中，每加一个碱基，会检测并记录下其含有的荧光信号，从而推断出该位置上的碱基。
无论是荧光ddNTP法还是合成法，都需要将片段放入专用仪器中，通过激光器和荧光探测器测定每个碱基的信号。
这些信号通过计算机软件进行处理，最终得到DNA片段的完整序列信息。
新一代测序技术的优势在于其高通量、高效和低成本的特点。
相比传统的Sanger测序技术，新一代测序技术能够一次性测序数以百万计的DNA片段，大大提高了测序效率，缩短了测序周期，并且降低了测序成本。
源于人诱导多能干细胞并表达脑啡肽酶2的巨噬细胞可降解β淀粉样蛋白
源于人诱导多能干细胞并表达脑啡肽酶2的巨噬细胞可降解
β淀粉样蛋白
黄翠芹
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】2015(000)004
【摘要】近日,日本科学家发现人诱导多能干细胞（iP S细胞）衍生的巨噬细胞在阿尔茨海默病（AD）的治疗中具有应用前景。
在前期研究中,他们建立了从人iP S 细胞生成具有增殖活性的巨噬细胞样髓系细胞（iP S-ML）的技术,并发现iP S-ML 能降低加入到培养基中的Aβ水平,且iP S-ML的培养上清液能减轻Aβ的神经毒性。
在该研究中,他们又构建了表达Aβ特异性单链抗体Fc受体融合形式（anti-AβscF v）的iP S-ML;此外,还让iP S-ML表达脑啡肽酶2（NEP2;一种能够降解Aβ的蛋白酶）。
【总页数】1页(P614-614)
【作者】黄翠芹
【作者单位】
【正文语种】中文
【相关文献】
1.人参皂苷Rg1对脂多糖诱导的C6细胞株淀粉样前体蛋白和脑啡肽酶表达的影响
2.SCD-1在β淀粉样蛋白1-40诱导的巨噬细胞中表达的初步研究
3.人参皂苷Rg1对脂多糖抑制的U251细胞株脑啡肽酶表达的影响
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荧光纳米级显微镜揭示HIV-1病毒成熟过程中表面蛋白结构重排
荧光纳米级显微镜揭示HIV-1病毒成熟过程中表面蛋白结构重排泛瑞翻译人类免疫缺陷病毒I型（Human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）从宿主细胞出芽后依然是未成熟的粒子，其主要结构蛋白Gag经过后续的酶解后才能形成成熟的病毒粒子且具有侵染能力。
10月26日的科学杂志刊发了德国海德堡大学一个团队的研究文章，他们利用超高倍成像技术直观观察了HIV病毒粒子成熟的关键步骤。
Chojnacki等通过利用受激发射湮灭超高分辨率荧光显微镜观察HIV-1病毒外层包膜糖蛋白在病毒颗粒上的分布，发现成熟过程诱发的包膜蛋白聚集依赖于包膜蛋白尾端和Gag蛋白互作。
他们把糖蛋白在表面的聚集程度和病毒的侵染效率关联分析后发现，病毒内部和外部有着巧妙的耦合作用：内部蛋白结构的酶解后结构重排促使病毒表面结构改变，为侵染做准备。
Chojnacki等认为Gag酶解诱发的稀少的包膜蛋白二聚体在病毒表面聚集可能是HIV-1成熟的一个基本方面。
这一运用直观的高倍成像技术揭示的HIV成熟的过程和机制，有利于改善人们研发临床HIV疫苗的操作和技术，具有重要的理论和指导意义。
Chojnacki, J., T. Staudt, et al. (2012). "Maturation-Dependent HIV-1 Surface Protein Redistribution Revealed by Fluorescence Nanoscopy." Science 338(6106): 524-528.Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) buds from the cell as an immature particle requiring subsequent proteolysis of the main structural polyprotein Gag for morphological maturation and infectivity. Visualization of the viral envelope (Env) glycoprotein distribution on the surface of individual HIV-1 particles with stimulated emission depletion (STED) superresolution fluorescence microscopy revealed maturation-induced clustering of Env proteins that depended on the Gag-interacting Env tail. Correlation of Env surface clustering with the viral entry efficiency revealed coupling between the viral interior and exterior: Rearrangements of the inner protein lattice facilitated the alteration of the virus surface in preparation for productive entry. We propose that Gag proteolysis-dependent clustering of the sparse Env trimers on the viral surface may be an essential aspect of HIV-1 maturation.。
【高中生物】近代物理所揭示高LET射线诱导肿瘤细胞凋亡分子机理
【高中生物】近代物理所揭示高LET射线诱导肿瘤细胞凋亡分子机理碳离子将恶性肿瘤细胞周期阻滞于g2/m期，抑制其生长，并明显诱导了肿瘤细胞凋亡。
中国科学院现代物理研究所放射医学系的研究人员利用兰州重离子研究所（HIRFL）提供的碳离子束，研究了高能线能量转移（let）射线诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制，并获得了新发现。
细胞凋亡是电离辐射所致细胞死亡的主要形式。
p73是p53家族蛋白成员之一，在人类肿瘤细胞中很少发生缺失或突变，反而呈现出很高量的表达。
p73是抑制凋亡基因还是促进凋亡基因这个问题仍处于争论之中。
p73有两组蛋白异构体：tap73和np73。
tap73和δnp73被誉为肿瘤生死存亡的“开关”。
目前对于p73异构体在高let射线诱导的肿瘤细胞凋亡中的作用机制尚未见报道。
现代物理研究所放射医学系的研究人员发现，碳离子辐射诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞，抑制其生长和增殖，并显著促进肿瘤细胞凋亡（如图1所示）。
其机制是电离辐射激活p73基因选择性剪接，启动p73介导的死亡受体和线粒体凋亡信号通路，进而促进肿瘤细胞凋亡的发生（如图2所示）。
此外，大蒜的天然活性产物二烯丙基二硫（DADS）不仅可以提高肿瘤细胞的放射敏感性，而且对正常细胞具有辐射防护作用。
进一步的实验证实，dads通过上调癌细胞TAp73/δNp73激活凋亡信号通路，促进癌细胞凋亡，与碳离子协同作用；对于正常细胞，TAp73下调/δNp73抑制其凋亡信号通路并促进DNA损伤的修复。
这些发现首次揭示了高LET辐射诱导肿瘤细胞凋亡的新分子机制，为提高重离子放射治疗的疗效和阐明其安全机制提供了新思路。
该研究得到国家自然科学基金委员会?中国科学院大科学装置联合基金重点项目和国家自然科学基金的资助。
研究结果发表在科学报告（，5:16020）和细胞周期（，DOI:10.1080/15384101..1104438）中。
铁死亡诱导剂在结直肠癌中的研究进展
- 180 -end-expiratory pressure alone minimizes atelectasis formation in nonabdominal surgery：a randomized controlled trial[J].Anesthesiology，2018，128（6）：1117-1124.[39] KIM N，LEE S H，CHOI K W，et al.Effects of positive end-expiratory pressure on pulmonary oxygenation and biventricular function during one-lung ventilation：a randomized crossover study[J].J Clin Med，2019，8（5）：740.[40] KATZ J A，LAVERNE R G，FAIRLEY H B，et al.Pulmonaryoxygen exchange during endobronchial anesthesia：effect of tidal volume and PEEP[J].Anesthesiology，1982，56（3）：164-171.[41] SENT ÜRK N M，DILEK A，CAMCI E，et al.Effects ofpositive end-expiratory pressure on ventilatory and oxygenation parameters during pressure-controlled one-lung ventilation[J]. J Cardiothorac Vasc Anesth，2005，19（1）：71-75.[42] KANG W S，KIM S H，CHUNG J parison of pulmonarygas exchange according to intraoperative ventilation modes for mitral valve repair surgery via thoracotomy with one-lung ventilation：a randomized controlled trial[J].J Cardiothorac Vasc Anesth，2014，28（4）：908-913.（收稿日期：2023-03-03） （本文编辑：田婧）*基金项目：安溪县科技计划项目（2022S002）①福建省安溪县医院 福建 安溪 362400通信作者：许永鹏铁死亡诱导剂在结直肠癌中的研究进展*陈伟鸿① 苏小苹① 苏宇超① 黄栋钦① 许永鹏① 【摘要】 结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是全球第三大常见癌症，传统治疗方案对CRC 晚期患者的疗效不佳，因此，发现新的治疗策略可能有助于改善CRC 患者的治疗和预后。
发现新细胞器可用于治疗阿尔茨海默病
发现新细胞器可用于治疗阿尔茨海默病2022-06-19 01:04·日月明尊除了许多已知的细胞器（细胞的成分或“器官”），科学家们刚刚发现了另一种。
这些就是所谓的BAG2——在细胞质中响应某种压力而形成的无膜颗粒。
或许，BAG2 可以成为神经退行性疾病新疗法的基础。
荧光染料标记的应力颗粒除了几十甚至几百年前发现的细胞核、线粒体、网状细胞等，细胞中还有许多其他的细胞器。
通常，它们较小并执行特定的特定工作。
在《自然通讯》杂志最近的一篇文章中，来自美国和巴西的科学家描述了BAG2（Bcl2 相关的athanogene 2），这是一种新型细胞器，它没有膜，但通过内含物与细胞质很好地分离。
在这方面，BAG2 类似于所谓的应激颗粒和处理体（P-体），但新的细胞器既不包含RNA，也不包含专门的“死亡标记”泛素。
泛素残基通常附着在那些蛋白质上，然后细胞在蛋白酶体的帮助下有目的地破坏这些蛋白质- 执行“垃圾处理”工作的分子机器。
人们已经知道很长一段时间以来，有几种类型的无膜物体在细胞中来回浮动。
然而，直到最近，人们才知道它们如何保持完整性、它们是什么以及为什么需要它们。
现在，由于先进的分子成像技术，科学家们终于能够很好地观察这些动态细胞器。
这些非膜结构与通常的大型细胞器的区别在于缺乏脂质双层的包装，这也将细胞的内容物与其环境分开。
相反，像 BAG2 或 P 体这样的内含物是通过将两种流体（它们的内容物和细胞的基本环境）分离成相而存在的，就像水面上的一滴油一样。
科学家们发现，新发现的细胞成分在某些压力条件下（包括渗透压增加）会被激活（即，它们会变成浓缩形式）。
压力颗粒的工作方式大致相同，当它被激活时，会停止蛋白质合成并保留RNA。
然而，BAG2 负责处理那些已经合成的蛋白质。
事实是，在不利条件下，它们可以获得不正确的三维结构并损坏细胞。
几乎同样的事情也发生在神经退行性疾病身上。
BAG2 不仅破坏了有问题的蛋白质，而且还促进了伴侣的工作——其他帮助蛋白质保持正确结构的分子。
组合生物合成
1、Ⅰ型PKS
Ⅰ型PKS 研究最为透彻, 主要由酮基合成酶(ketosynthase, KS) 、酰基 转移酶(acyltransferase, AT)、酰基载体蛋白(acyl-carrier protein, ACP)、 脱氢酶(dehydratase, DH)、烯酰还原酶(enoyl reductase, ER)和酮基还 原酶(ketoreductase, KR) 等功能域（结构域）组成。这些结构域组成 模块化结构。KS、AT、ACP是链延伸反应的“最小PKS”，由AT选择 一个延伸单元，通常是乙酸或丙酸，连接到链上，由KS催化缩合反 应，ACP吸住链并接受从AT来的延伸单元以备下一步缩合反应。 如合成红霉素的PKS由3 条多肽链(DEBS1、DEBS2 和DEBS3)7 个模块 组成; 合成雷帕霉素的PKS 由3 条多肽链(RAPS1、RAPS 2 和RAPS 3)14 个模块组成。
CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
acyltransferase (AT) , acyl carrier protein(ACP) , ketosynthase (KS) , dehydratase (DH), enoyl reductase(ER), and ketoreductase (KR)
美国加州高新技术产业公司研制的埃波霉素(epothilone) 作为抗肿 瘤药物于2007年上市。霉素原来由纤维堆囊黏细菌产生, 其产量低, 繁殖时间长, 产品无法进行产业化生产。该公司利用基因组合技术 使纤维堆囊黏细菌的埃波霉素生物合成基因在链霉菌中得到表达, 并通过酰基转移酶功能域替换及羟基化酶基因的阻断, 获得了主要 产生埃波霉素中抗肿瘤活性最好组分的epothilone D 的基因工程菌。
链霉亲和素修饰的银纳米粒子
链霉亲和素修饰的银纳米粒子
链霉亲和素修饰的银纳米粒子是一种生物分子纳米粒子，其表面基团为链霉亲和素（SA）。
这种纳米粒子可以结合生物素化的蛋白（如免疫球蛋白和血清蛋白）或寡聚核苷酸。
链霉亲和素-生物素体系具有灵敏度高、特异性好、稳定性高、适用广泛等特点，一个链霉亲和素蛋白可以结合多个生物素分子，因此链霉亲和素修饰的银纳米粒子-生物素化蛋白放大体系可结合检测微量的蛋白及寡聚核苷酸。
这种银纳米粒子还具有高比表面积和高负载量的特点，可以作为生物传感、靶向药物及基因运送、光热治疗和生物材料成像的基础构建元。
此外，它还可以通过静电修饰或共价偶联被抗体、寡核苷酸、生物素、蛋白A、外源凝集素、酶等关键探针分子功能化。
生物化学核酸nanopore测序技术
生物化学核酸nanopore测序技术随着人们对DNA和RNA的研究不断深入，越来越多的测序技术被开发出来。
其中，生物化学核酸nanopore测序技术是一种相对新颖的测序技术，它的出现颠覆了传统的核酸测序方法，被认为是下一代DNA测序的新方向。
什么是nanopore测序技术?nanopore测序技术是利用生物纳米通道测序单个核酸分子的技术。
通过将单个核酸分子引入纳米孔中，并在纳米孔两端加上电势差，利用电势差促使核酸分子从一个端口流入，经过纳米孔时，会产生一系列的电信号差异，这些差异可以被检测和记录下来，最终以高精度的方式决定核酸序列。
为什么要使用nanopore测序技术？nanopore测序技术受到研究人员的青睐，主要有以下原因:1.快速检测：nanopore测序技术具有非常快的检测速度，可在几个小时内获得数百万条序列。
2.能够检测长序列：相对于其他测序技术而言，nanopore测序技术可以检测到更长的DNA和RNA序列。
3.结构灵活：利用nanopore测序技术可以检测到许多类型的小分子和大分子，包括DNA、RNA甚至蛋白质等大分子。
这种灵活性使nanopore测序技术成为一个强大的分析工具。
应用领域和前景nanopore测序技术的应用领域非常广泛，包括基因组学、转录组学、表观遗传学以及癌症研究等。
由于其检测速度快、精度高和样品准备过程简单等优点，nanopore测序技术已经被广泛应用于生命科学的许多领域。
例如，在癌症研究领域，nanopore测序技术已被用于研究实体瘤样本和血液中的循环肿瘤DNA。
这项技术可以检测出肿瘤的遗传改变，并帮助医生做出预测和治疗选择。
在实际应用中，nanopore测序技术仍面临一些挑战。
例如，纳米孔的设计和制造仍然需要进一步优化，以提高靶向检测的精度和检测速度。
由于数据处理的复杂性和存储方式的困难，该方法也需要更多的算法和硬件支持。
结论总的来说，生物化学核酸nanopore测序技术已经成为了RNA和DNA测序的一种重要工具。
不同物种的双链dba分子,嘌呤碱 -回复
不同物种的双链dba分子,嘌呤碱-回复什么是不同物种的双链DNA分子？DNA(Deoxyribonucleic Acid)，即脱氧核糖核酸，是构成生物体遗传物质的重要分子之一。
DNA分子以双链的形式存在，由嘌呤碱和嘧啶碱组成的碱基通过氢键连接起来，形成DNA的具体结构。
双链DNA分子是由两条互补的链拧成螺旋状的结构。
其中，嘌呤碱(Adenine，A)和鸟嘌呤碱(Guanine，G)相互配对，嘧啶碱(Thymine，T)和胸腺嘧啶碱(Cytosine，C)相互配对。
通过这样的碱基配对规则，双链DNA分子得以保持稳定且精确地携带生物的遗传信息。
然而，在不同的物种中，DNA分子的序列会存在一定的差异，形成了不同物种的特征性DNA分子。
这些差异部分源自于进化过程中的遗传突变，部分来自于物种间基因的重组和突变。
这些特征性的DNA序列差异为不同物种的生存和适应提供了手段。
嘌呤碱是DNA分子的重要构成单元之一，其在DNA分子中与嘧啶碱形成稳定的碱基配对。
嘌呤碱分为两类：腺嘌呤、鸟嘌呤。
腺嘌呤的化学式为C5H5N5，其分子结构有两个氮原子构成的双环结构。
鸟嘌呤的化学式为C5H4N4O，其分子结构为一个由两个六元循环芳香烃相交交错构成的双环结构。
不同物种的嘌呤碱分子在结构上可能会有细微的差异。
在DNA分子中，嘌呤碱以碱基的形式存在，与嘧啶碱相互配对，形成稳定的碱基对。
这种碱基配对是通过氢键在两条DNA链之间进行的。
具体来说，腺嘌呤与胸腺嘧啶形成两个氢键，鸟嘌呤与胸腺嘧啶形成三个氢键。
这种碱基配对规则保证了DNA分子的稳定性和可重复性，同时也是基因复制和DNA修复的基础。
然而，由于不同物种之间的遗传差异，可能会导致DNA分子的嘌呤碱序列发生改变。
这些序列改变可能会对物种的遗传信息和表型产生重要影响。
例如，在人类与其他物种的比较中，嘌呤碱序列的差异可以解释一些人类特有的生理和疾病特征。
通过对不同物种的DNA分子进行比较和研究，科学家们可以更好地理解不同物种的进化历程和生物特征。
DNA纳米技术的原理与应用研究
DNA纳米技术的原理与应用研究DNA纳米技术：从概念到实践DNA是生命的基础，它不仅是所有生物的遗传物质，也是一种材料上的精品。
DNA纳米技术是基于DNA自组装性质的一种新兴的技术，其主要利用DNA分子之间的特定相互作用来进行设计、组装和操作。
该技术在生物医学、计算机科学、物理学等众多领域中都有着广泛的应用。
DNA纳米技术的原理是将DNA序列设计成能够自组装形成特定形状的分子，这些分子构成了一种新的材料，具有类似于纳米颗粒的特性。
DNA纳米技术的制备方法有多种，包括PCR扩增、化学合成和酶切反应等。
这些方法可以产生特定的DNA序列，然后通过设计特定序列的DNA互补配对，进行自组装形成所需的纳米粒子和纳米结构。
DNA纳米技术的应用：解决生物医学问题DNA纳米技术在生物医学领域中的应用主要分为四个方面：分子诊断、靶向治疗、药物递送和组织工程。
其中最广泛使用的是药物递送系统。
DNA纳米技术可以利用自身的特定性质，将药物有效地递送到人体内的目标位置，以获得更好的治疗效果。
例如，人们可以利用DNA纳米技术将药物导入癌细胞，抑制癌细胞的生长，避免对健康细胞的损害。
另外，DNA纳米技术还可以实现局部治疗和系统性治疗的多模式药物递送。
通过这些方法，可以更好地控制药物的释放、降低副作用和提高药物的生物利用度。
同时，DNA纳米技术还可以用于组织工程，其原理是利用DNA一次序列的互补性和自组装性质来设计和构建功能纳米模板和纳米结构。
具体应用包括纳米多肽和纳米蛋白质的设计和制造。
这些材料可以用于人造器官、神经修复和再生医学等领域。
DNA纳米技术的应用：解决计算机科学问题DNA纳米技术还在计算机科学领域中有着广泛的应用。
该技术主要利用DNA分子之间的配对规律，来实现信息存储、信息处理和数据传输等功能。
DNA分子的高密度和高并行性质使得其在计算机科学领域中具有一定的优势。
例如，DNA纳米技术可以实现DNA分子中的逻辑运算，利用DNA分子之间的特殊相互作用实现信息交换。
Nano. Lett 超声增强线粒体钙离子超载以诱导免疫原性细胞死亡
Nano. Lett | 超声增强线粒体钙离子超载以诱导免疫原性细胞死亡
免疫原性细胞死亡(ICD)是一种能够触发抗肿瘤免疫响应的肿瘤细胞死亡方式，作为肿瘤免疫治疗的一种潜在的有效协同方式而受到了广泛关注。
尽管已经开发了许多钙离子(Ca2+)纳米调节剂，可通过线粒体Ca2+超载来进行肿瘤治疗，但尚未探索其诱导ICD的特性。
近日，中科院长春应化所陈学思院士和丁建勋副研究员在《Nano Letters》上发表了题为“Ultrasound-Augmented Mitochondrial Calcium Ion Overload by Calcium Nanomodulator to Induce Immunogenic Cell Death”的文章，该研究利用一锅法制备了一种对酸敏感、聚乙二醇修饰的、含有姜黄素(CUR;Ca2+增强剂)的碳酸钙(CaCO3)纳米颗粒PEG CaCUR。
本文要点：
（1）PEG CaCUR不仅作为Ca2+纳米调节剂诱导有效的线粒体Ca2+超载，而且可在改善协同肿瘤治疗过程中作为ICD诱导剂。
（2）实验结果表明，将PEG CaCUR与超声(US)相结合后可增强ICD效应，这归因于线粒体Ca2+超载以及随后活性氧水平的上调。
同时，PEG CaCUR还可有助于光声/荧光双模态成
像，有效抑制肿瘤的生长和转移，具有良好的治疗性能。
Nanomodulator to Induce Immunogenic Cell Death. Nano Letters. 2021.Doi: 10.1021/acs.nanolett.0c04778.。
DNA测序技术的名词解释材料意义
DNA测序技术的名词解释|材料|意义DNA测序技术的名词解释DNA测序技术，即测定DNA序列的技术。
在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。
目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam 和Gilbert(1977)发明的化学降解法。
这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DNA序列。
目前Sanger 测序法得到了广泛的应用。
DNA测序技术的材料待测已提纯的DNA，可为单链，也可为双链。
科学家在一个蚀刻有纳米结构的微阵列芯片上放置了数以千计的波导管。
这是一种微型、中空的金属管，直径大约20纳米，体积大约是1毫微微微升，一个DNA分子外加一个DNA多聚酶分子便可将管内空间占满。
这样一来，仅在一块小小的芯片上，就能同时进行数千个测序反应。
尤其可贵的是，在这种微型波导管中进行测序反应时，干扰会显著减少，也就是说可以大幅提高精确度。
目前的产品中，每个芯片上的波导管大约有3000个，太平洋生物科学公司打算2010年推出这一级别的产品。
据公司创始人特纳预计，到2013年，将实现每张芯片放置一百万个波导管，届时将能在半小时内测完人类基因组全序列，精确度达到99.999%，花费低于1000美元。
尽管美国得克萨斯州贝勒医学院的迈克尔·梅兹克博士表示特纳的展望过于乐观，但这样惊人的速度让我们仿佛看到了计算机CPU曾经的前进步伐——集成电路上容纳的晶体管数目，每18个月就会增加一倍，性能也将提升一倍。
有人评论道，DNA测序技术将跟随计算机技术和通讯技术成为第三个“摩尔定律化”的学科产业。
DNA测序技术的意义快速测序造福人类DNA测序方法的飞速发展让我们不仅知晓了人类的全基因组序列，小麦、水稻、家蚕以及很多细菌的序列也都尽在掌握，这时探明一段序列所代表的生物学意义成了科学家的新目标。
共价固定亲和素的磁性纳米粒子用于快速测定蛋白A含量
共价固定亲和素的磁性纳米粒子用于快速测定蛋白A含量孙术国;马美湖;覃芳;徐娅茹;余文珍;罗章【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2012(33)7【摘要】采用溶剂热法制备了Fe3O4磁性纳米粒子(MNPs),以戊二醛为交联剂,将亲和素共价固定于MNPs表面.用透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和荧光光谱等手段对蛋白固定过程进行了监控和表征.采用荧光光谱法评价了固定亲和素的磁性纳米粒子( Avi-MNPs)的活性,并将Avi-MNPs应用于分光光度法测定蛋白A的含量.TEM结果表明,功能化前后MNPs的粒度分布均匀,粒径大小分别约为30和50 nm.XRD分析结果表明,MNPs与Fe3O4的特征衍射峰完全一致,晶体纯度良好.UV-Vis,FTIR和荧光光谱结果表明,亲和素已固定在MNPs表面.Avi-MNPs活性评价结果表明,其结合生物素的活力为4.706 U/mg Avi-MNPs,低于游离的亲和素活力(14.1 U/mg D-biotin).该方法用于检测蛋白A含量比传统酶联免疫法省时、省力,且对检测仪器要求低.%Covalent immobilization of avidin onto Fe,O4 magnetic nanoparticales( MNPs) via a facile sol-vethermal synthetic method was carried out using glutaraldehyde as a crosslinking agent. Immobilization process was monitored and avidin immobilized magnetic nanoparticles ( Avi-MNPs) were characterized by TEM, XRD, UV-Vis, FTIR and fluorescence spectroscopy. Evaluation of Avi-MNPs activity and its application for the determination of the concentration of protein A were also performed. TEM images show the average particle diameters of thenon-functional MNPs and Avi-MNPs are approximately 30 and 50 nm, respectively, and all the nanoparticles have a uniform distribution. XRD analysis indicates that the characteristic diffraction peaks of MNPs are the same as Fe3O4 and MNPs are high purity. Firstly glutaraldehyde was linked to MNPs and then avidin was immobilized onto the surface of the functional MNPs, which were verified by UV-Vis, FTIR and fluorescence spectroscopy. The activity evaluation of Avi-MNPs shows that the activity is 4. 706 U/mg of D-biotin bound/mg Avi-MNPs and lower than 14. 1 U/mg D-biotin bound/mg free avidin. The Avi-MNPs were applied to the determination of the concentration of protein A, the results indicated that this method has an advantage of saving time and effort compared to the traditional enzyme-linked immunosorbent assay and can be carried out with a simple UV-Vis spectrophotometer.【总页数】6页(P1426-1431)【作者】孙术国;马美湖;覃芳;徐娅茹;余文珍;罗章【作者单位】华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070;吉首大学化学化工学院,吉首416000;华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070;华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070;华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070;华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070;华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心,武汉430070【正文语种】中文【中图分类】O657【相关文献】1.大豆分离蛋白与花青素非共价及共价作用对蛋白构象变化的影响 [J], 孙红波;李杨;王立敏;董济萱;隋晓楠;齐宝坤;王中江;江连洲2.三维荧光二阶校正方法用于体液和细胞培养基中五味子甲素含量的快速测定 [J], 张晓华;吴海龙;王建瑶;俞汝勤3.固定化血红蛋白氧载体的研究(Ⅱ)——氧化纤维素共价键联血红蛋白 [J], 孔德领;贾永会;俞耀庭;童明容;王子晖4.蛋白 A 高效亲和膜色谱法测定人血浆中免疫球蛋白 G 的含量 [J], 周冬梅;邹汉法;杨利5.生物素链霉亲和素联合免疫层析用于快速检测NT-proBNP [J], 孙宏浩;梁玉芬;赵晓双;黄玲;廖天作因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。