转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式PCR技术检测
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
玉米转基因检测工作总结
玉米转基因检测工作总结
近年来，随着生物技术的发展，转基因作物的种植越来越普遍。
而玉米作为世
界上种植面积最大的转基因作物之一，其转基因检测工作也变得愈发重要。
本文将对玉米转基因检测工作进行总结，以期为相关领域的研究和实践提供参考。
首先，玉米转基因检测工作的目的是为了确保市场上销售的玉米产品符合相关
的法律法规和标准。
通过检测玉米中是否含有转基因成分，可以保障消费者的权益，同时也有助于监管部门对市场上的玉米产品进行有效管理。
其次，玉米转基因检测工作通常包括样品收集、DNA提取、PCR扩增、基因
分型和数据分析等环节。
样品收集是整个检测工作的第一步，必须确保样品的来源真实可靠。
DNA提取是提取玉米样品中的基因组DNA，为后续的PCR扩增提供
原料。
PCR扩增是通过特定引物扩增目标基因片段，从而检测玉米中是否含有转
基因成分。
基因分型和数据分析则是对PCR扩增产物进行分析和鉴定，最终确定
样品中是否含有转基因成分。
最后，玉米转基因检测工作还需要关注一些问题。
例如，样品收集的时机和方法、DNA提取的纯度和质量、PCR扩增的引物设计和反应条件、基因分型的准确
性和灵敏度等都需要认真考虑和解决。
同时，检测结果的解读和报告也需要准确和详尽，避免因为技术误差或其他原因导致的错误判断。
总的来说，玉米转基因检测工作是一项复杂而重要的工作，涉及到多个环节和
技术。
只有严格按照标准操作流程，确保每个环节的准确性和可靠性，才能够得到真实有效的检测结果。
希望本文的总结能够为相关领域的研究和实践提供一定的参考和借鉴。
转基因植物及产品成分检测等17项标准2019年6月实施
2/864要闻聚焦转基因植物及产品成分检测等17项标准2019年6月实施 农业农村部25日发布第111号公告，《转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质制备技术规范》等17项标准业经专家审定通过，现批准发布为中华人民共和国国家标准，自2019年6月1日起实施。
17项标准如下：序号标准名称标准代号1 转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质制备技术规范农业农村部公告第111号-1-20182 转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质定值技术规范农业农村部公告第111号-2-20183 转基因植物及其产品成分检测 抗虫耐除草剂棉花GHB119及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-3-20184 转基因植物及其产品成分检测 抗虫耐除草剂棉花T304-40及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-4-20185 转基因植物及其产品成分检测 抗虫水稻T2A-1及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-5-20186 转基因植物及其产品成分检测 抗病番木瓜55-1及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-6-20187 转基因植物及其产品成分检测 抗虫玉米Bt506及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-7-20188 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂玉米C0010.1.1及其行生品种定性PCR 方农业农村部公告第111号-8-20189 转基因植物及其产品成分检测 抗虫大豆DAS-81419-2及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-9-201810 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆 SYHTOH2及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-10-201811 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆DAS-444Ø6-6及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-11-201812 转基因动物及其产品成分检测 合成的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-l)定性PCR 方法农业农村部公告第111号-12-201813 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第1部分：日本通草蛉幼虫 农业农村部公告第111号-13-201814 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第2部分：日木通草蛉成虫农业农村部公告第111号-14-201815 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第3部分：龟纹瓢虫幼虫农业农村部公告第111号-15-201816 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第4部分：龟纹瓢虫成虫农业农材部公告第111号-16-201817 转基因生物良好实验室操作规范 第2部分：环境安全检测农业农村部公告第111号-17-2018经营许可、市场监管、使用指导等职责任务落到实处。
转基因大豆检测方法及标准概述
转 基 因 大 豆 是 商 品 化 最 早、 推 广 应用速度最快、种植面积最广的转基 因粮食作物。由于转基因大豆产品可 能存在潜在的环境污染、食用安全及 生态风险，对人类健康和自然环境带 来不利影响 [1]，因此需要加强对转基 因大豆产品的有效监督、监测和管理。
1 转基因大豆检测技术研究进展
农业农村部公告第 111 号 -9-2018
SN/T 3767.16-2014
SN/T 3767.17-2014
SN/T 3767.18-2014
SN/T 3767.19-2014
3 讨论与建议
目 前， 我 国 转 基 因 大 豆 的 检 测 方 法主要以 PCR 方法为主。PCR 实验成 败的关键在于模板 DNA 的提取质量， 对于不同加工过程的产品，应选择不 同 的 DNA 提 取 方 法， 同 时 采 用 紫 外 分光光度计给出 DNA 的浓度及 A260 nm/A280 nm 的比值，以判断其是否 适合进行 PCR 检测。实验中还应该注 意污染问题，建议实验过程中注意添 加阴性和空白对照。实验室的布局以
及检测工作应严格遵循国家标准中转
基因通用标准的规定。
参考文献 [1] 王南 , 李海燕 . 转基因大豆概况
及其安全性 [J]. 吉林农业 ,2016(19):118. [2] 王颢潜 , 陈锐 , 李夏莹 , 等 . 转基
因产品成分检测技术研究进展 [J]. 生物 技术通报 ,2018,34(3):31-38.
农业部 1485 号公告 -8-2010
GB/T 19495.4-2018
农业部 1782 号公告 -1-2012
GB/T 19495.5-2018
农业部 1782 号公告 -4-2012
基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定及应用研究
基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定及应用研究随着人们对高质量生活的追求，优质农产品也成为了人们越来越关注的话题。
而水稻作为我国的重要粮食作物，其品质的高低也直接关系到我国的粮食安全。
然而，在实际生产中，水稻优质染色体的鉴定仍然是一个相对困难的问题。
本文将介绍一种基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定方法及其应用研究。
1. PCR扩增技术简介PCR全称为聚合酶链反应，是一种基于DNA聚合酶的体外DNA扩增技术。
PCR扩增技术的发明者Kary Mullis在1983年首次提出了该技术，他因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR扩增技术是一种高灵敏、高特异和高效率的DNA扩增技术，已经广泛应用于生物学研究、医学诊断、法医学和基因工程等领域。
2. PCR扩增技术在水稻优质染色体鉴定中的应用PCR扩增技术已经成为一种有效的鉴定水稻优质染色体的方法。
通过对水稻栽培品种的遗传分析和核型分析，人们已经确定了许多与水稻优质染色体相关的DNA标记。
其中，GBSSR（Genotyping-by-sequencing derived SSR markers）是一种快速、经济和高效的基因标记技术，可以在很短的时间内鉴定水稻的优质染色体。
3. 水稻优质染色体鉴定的PCR扩增方法（1）提取样本DNA首先，需要提取水稻样本的基因组DNA。
可以使用各种不同的提取方法，如CTAB法、SDS法和膨胀法等。
（2）PCR扩增操作PCR扩增操作一般包括以下步骤：1.将所需试剂加入PCR反应管中，包括模板DNA、引物（primers）、酶和反应缓冲液等；2.将反应管放在热循环仪中，进行不同的温度处理，包括变性、退火和延伸等；3.重复以上步骤多次，通常可进行20-40个循环，每个循环的时间一般为30秒到2分钟不等；4.最后，将PCR产物分离并进行电泳分析，以确定DNA扩增是否成功。
（3）结果分析PCR扩增反应成功后，可以对扩增产物进行分析，以鉴定与水稻优质染色体相关的DNA标记。
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS 转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA, 并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R 的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 0倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
转基因大豆检测技术研究进展
转基因大豆检测技术研究进展[摘要]大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。
转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。
由于转基因产品的安全性在世界范围内引起广泛关注，对转基因检测技术的要求也越来越高，因此,对转基因大豆检测技术的研究成为近年来研究的热点。
重点介绍以蛋白质和核酸为目标的检测技术，如EI。
ISA、PCR和基因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行比较，为转基因大豆快速检测方法的选择、改进和后续研究提供参考。
[关键词]转基因大豆；检测技术；蛋白质；核酸Abstract：Soybean transformation research is a/hot spot0in the area of plant molecular genetics. Transgenic soybean has become the important power of soybeans industry development in the worlds' major producers of soybean. The different points on potential ecological risks and the impact of transgenic products on human health attracted worldwide attention． With the increase of transgenic products， the transgenic detection technology requirements should be established and perfected． The advance in detection techniques of transgenic soybean were summarized focusing on the protein and nucleic acid for target detection technology，such as new research on ELISA，PCR and gene chip techn0109y，and their characteristic were compared to provide references for transgenic soybean fast detection selection，improvement and subsequent research．Key words：transgenosis soybean；detection technology；protein；nucleic acid.转基因大豆，是指利用转基因技术，通过基因工程方法导入外源基因所培育的具有特定性状的大豆品种。
玉米转基因检测工作总结
玉米转基因检测工作总结近年来，随着转基因技术的不断发展，转基因作物在农业生产中的应用也越来越广泛。
其中，转基因玉米作为重要的农作物之一，其安全性和品质问题备受关注。
为了确保转基因玉米产品的质量和安全，转基因检测工作显得尤为重要。
转基因玉米检测工作主要包括样品采集、DNA提取、PCR扩增、基因分析和结果判读等环节。
首先，进行样品采集时需要注意采样点的选择和采样方法的规范，以确保样品的代表性和可靠性。
接着，对样品中的DNA进行提取和纯化，以获取高质量的DNA模板。
随后，利用PCR技术对目标基因进行扩增和检测，通过比对转基因和非转基因玉米的特定基因序列，来判断样品中是否存在转基因成分。
最后，根据PCR结果进行基因分析和结果判读，以确定样品中的转基因含量和种类。
在实际工作中，玉米转基因检测工作面临着许多挑战和困难。
首先，样品来源的多样性和复杂性使得样品采集和处理工作较为繁琐和耗时。
其次，PCR扩增和基因分析过程中，需要严格控制实验条件和操作流程，以避免外源污染和假阳性结果的产生。
此外，不同转基因玉米品种的基因序列差异和检测方法的局限性也给检测工作带来了一定的难度。
然而，通过不懈努力和技术创新，玉米转基因检测工作取得了一系列成果和进展。
现在，已经建立了一套完善的转基因玉米检测体系和方法，可以对不同来源和类型的玉米样品进行准确和快速的检测。
同时，一些先进的检测技术和设备的引入，也为玉米转基因检测工作提供了更多的技术支持和保障。
总的来说，玉米转基因检测工作是一项重要且复杂的工作，需要多方合作和共同努力。
随着转基因技术的不断发展和应用，玉米转基因检测工作也将继续深化和完善，为转基因玉米产品的质量和安全保驾护航。
转基因大豆安全检测技术探讨
转基因大豆安全检测技术探讨
□ 张宇辰 周 晴 郑 智 盖 森 翟自成 河北农业大学
摘 要：近年来，转基因大豆已成为人们关注的焦点之一，这是因为转基因大豆可能存在安全问题，进而影响人类的 健康，因此转基因大豆在商业化种植前的安全性检测是十分有必要的。本文主要分析转基因大豆可能存在的危害性，并概 括转基因大豆安全检测技术，以期提供参考和借鉴。
[1] 刘 绘 景． 转 基 因 食 品 分 析 检 测 技 术 研 究 进 展 [J]. 食 品 安 全 导 刊 ,2017(3):68.
作 者 简 介： 张 宇 辰（1998—）， 男，河北沧州人ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ本科在读。研究方向： 生物科学。
周 晴（1997—）， 女， 河 北 秦 皇 岛人，本科在读。研究方向：制药工程。
一 般 来 说， 外 源 蛋 白 是 转 基 因 大 豆检测中的重点，运用的检测方法是 免疫学检测法。这种检测因为检测的 外源蛋白质大多具有水溶性，故样品 经过简单的粗提之后就能直接检测， 另外抗体具有高度专一的特性，因此 该方法灵敏度高且使用广泛。目前市 场上常见的免疫检测法较多，例如如 试纸条法、酶联免疫吸附法、“测流”
关键词：转基因大豆；检测技术
1 转基因大豆的安全问题
转基因大豆安全问题主要包括环 境安全和食用性安全两个方面。 1.1 转基因大豆环境安全性问题
① 超 级 杂 草 的 产 生。 通 常 来 说， 常规转基因大豆会因转基因载体携带 某些抗性基因（尤其是抗除草剂基因） 而对除草剂产生抗性，如果这些抗性 基因通过基因漂移而重组到杂草中， 那么杂草的除草剂抗性将会增强，从 而更难消灭。②新病毒或超级病毒的 产生。自然界中，植物与病毒之间能 够进行遗传交流，如若转基因大豆体 内的病毒与抗病毒转基因大豆的 RNA 发生重组，新病毒的产生也并非不可 能 [1]。另一方面，如果其他病毒或病毒 产物与转基因大豆中的病毒发生协同作 用，加速病毒的遗传变异，进而产生新 的具有相应抗性的超级病毒。③对生物 多样性以的影响。转基因技术的出现， 打破了生殖隔离机制，使得外源基因可 以插入重组到不同物种，而这些转基因 作物的遗传信息又可能会重组到近缘野 生种中去，造成基因污染。而转基因大 豆相对于非转基因大豆而言有较大的 优势，在经济效应下，它们能够很快 地进行商业释放，并得到大面积种植， 这无疑会对其他物种的生存造成威胁， 使得物种多样性减少。 1.2 转基因大豆食用安全性问题
玉米的非转基因检测标准
玉米的非转基因检测标准
1. PCR检测，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可以用于检测玉米基因组中是否存在转基因DNA序列。
非转基因检测标准通常规定了PCR检测的方法和条件，以确保检测结果的准确性和可靠性。
2. 抗性检测，有些转基因玉米品种具有特定的抗性标记基因，非转基因检测标准可能要求对玉米样品进行抗性检测，以排除转基因玉米的可能性。
3. 核酸序列分析，非转基因检测标准可能要求对玉米样品进行核酸序列分析，以确定其基因组序列是否与已知的转基因玉米品种相符。
4. 样品采集和处理，非转基因检测标准还可能规定了玉米样品的采集和处理方法，以确保样品的代表性和检测过程的可追溯性。
总的来说，非转基因检测标准旨在通过科学严谨的检测方法和流程，确保玉米产品的质量和安全，保障消费者的权益，促进农产品市场的健康发展。
这些标准通常由相关的农业部门或者食品安全
监管机构制定和发布，并且会根据技术和市场的发展不断进行更新和完善。
转基因食品成分检测技术研究进展
转基因食品成分检测技术研究进展转基因食品成分检测技术是一种用于确定食品中是否存在转基因成分的分析方法。
转基因食品是指通过现代生物技术手段将外源基因导入食品作物中，使其具有新的特性或优势的食品产品。
转基因食品在食品安全和公众健康方面引起了广泛关注，因此开发准确、快速、可靠的转基因食品成分检测技术非常重要。
目前，转基因食品成分检测技术的研究进展主要包括以下几个方面。
1.PCR法：聚合酶链反应(PCR)法是最常用的转基因食品检测方法之一、它可以特异性地扩增转基因植物中的特定DNA序列，并通过电泳分离和检测扩增产物来确定食品中是否存在转基因成分。
2.即时PCR法：即时PCR法是PCR技术的一种改进，可以在PCR反应过程中实时监测扩增产物的积累。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速分析的优势，适用于大规模的转基因食品筛查。
3.数字PCR法：数字PCR法是一种新的转基因食品检测方法，可以实现对样品中转基因成分的绝对定量。
与传统PCR方法相比，数字PCR法具有更高的准确性和灵敏度，能够在低转基因成分水平下检测到微量的转基因成分。
4.荧光定量PCR法：荧光定量PCR法是一种利用荧光染料标记的探针对转基因成分进行定量分析的方法。
与传统PCR法相比，这种方法可以减少误判概率，提高检测灵敏度和可靠性。
5.下一代测序技术：下一代测序技术是目前最先进的基因测序技术之一，可以对DNA样品进行高通量的测序分析。
利用这种技术，可以对转基因食品样品中的整个基因组进行测序，并确定是否存在转基因成分。
总体来说，转基因食品成分检测技术在过去几十年取得了显著的进展。
这些技术不断提高着转基因食品检测的效率和准确性，为监管机构和消费者提供了更可靠的食品安全保障。
然而，由于不断涌现的新的转基因食品和转基因成分，还需要进一步研究和改进转基因食品检测技术，以满足市场需求并确保食品安全。
抗虫转基因水稻检测技术研究综述
抗虫转基因水稻检测技术研究综述抗虫转基因水稻是通过将特定的抗虫基因导入水稻，使其具有抵抗虫害的能力。
为了确保转基因水稻的安全性和环境友好性，对其进行检测是非常重要的。
本文综述了目前常用的抗虫转基因水稻检测技术。
一、抗虫鉴定技术抗虫鉴定是通过观察转基因水稻对虫害的抵抗性来确认其是否为抗虫转基因水稻的方法。
这是最直观的检测方法，但需要大量的时间和劳动力。
二、基因组学方法1. PCR技术PCR技术是一种常用的转基因水稻检测方法。
通过特异性引物，可以扩增出抗虫基因在转基因水稻中的片段。
这种方法能够准确快速地检测出转基因水稻的存在。
2. Southern blottingSouthern blotting是一种基于DNA的电泳分离和转移的技术。
通过使用与抗虫基因相应的DNA探针，可以检测出转基因水稻中抗虫基因在基因组中的存在。
2. ELISA技术ELISA技术是一种常用的免疫学检测方法。
通过使用与抗虫蛋白相应的抗体，可以检测出转基因水稻中抗虫蛋白的含量。
四、转录组学方法转录组学是研究一个细胞或组织中基因转录过程的一种方法。
通过分析转基因水稻和野生型水稻的RNA序列差异，可以检测出转基因水稻中抗虫基因是否被表达和转录。
抗虫转基因水稻的检测技术主要包括抗虫鉴定、基因组学方法、蛋白质组学方法和转录组学方法。
这些方法在检测抗虫转基因水稻中起到了重要的作用，并且随着科技的不断发展和进步，这些方法也在不断完善和优化，提高了检测的准确性和效率。
我们也需要加强对转基因水稻检测技术的研究，以满足抗虫转基因水稻的安全性和环境友好性要求。
转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状
转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状转基因大豆及其制品日益增多，己经直接或间接地影响到人们的生活。
也正因如此，转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响引起人们的广泛关注。
为满足消费者选择权和知情权以及出于国际贸易的需要，转基因食品的检测手段也越来越引起各国政府和有关食品监督机构的重视。
随着各国有关转基因各种法规的建立和不断完善，这就要求各国不仅能使定性检测技术日趋简捷和准确，更要求能探索出更加适合检测需要的定量手段。
1转基因大豆及其制品的安全性问题从理论上说，转基因技术和常规杂交育种都是通过优良基因重组获得新品种的，但常规育种的安全性并未受到人们的质疑。
其主要理由是常规育种是模拟自然现象进行的，基因重组和交流的范围很有限，仅限于种内或近缘种间。
并且，在长期的育种实践中并未发现什么灾难性的结果。
而转基因技术则不同，它可以把任何生物甚至人工合成的基因转入植物，因为这种事件在自然界是不可能发生的，所以人们无法预测将基因转入一个新的遗传背景中会产生什么样的作用，故而对其后果存在着疑虑口。
目前被国际上广为接受的转基因食品安全性评价原则是“实质等同性”原则。
按照实质等同性原则，孟山都公司对培育抗草甘膦转基因大豆品种进行食品安全评价，结果表明，转基因大豆品种所有氨基酸含量与普通大豆品种没有明显差异；内源蛋白过敏原及其含量与普通大豆品种没有差异。
研究结果还表明CP4一EPSPS和已知的毒蛋白结构没有相似性，急性老鼠管饲法实验也表明CP4一EPSPS 无毒。
但是，由于转基因技术仍处于发展过程中，国际上生物安全方面评估技术尚不成熟，现有知识仍不足以评估转基因生物的利益与风险。
目前对转基因大豆安全性仍在争论中，尚无定论。
从目前研究成果看，转基因大豆可能造成的安全隐患不容忽视。
2转基因大豆及其制品的检测技术由于越来越多的国家要求对转基因产品进行标识，我国农业部颁布的《农业转基因生物标识管理办法》也规定，从2002年3月20日开始要求对五大类中17种产品进行标识。
大豆转基因检测标准
大豆转基因检测标准
大豆转基因检测标准是指用于检测大豆中转基因的方法和要求的规定。
以下是常见的大豆转基因检测标准：
1. 法规标准：不同国家和地区的法规要求可能有所不同。
例如，欧盟对转基因食品有严格的标识和审批要求，而中国国家标准规定了大豆转基因检测的方法和限量要求。
2. PCR法检测：PCR法是一种常用的转基因检测方法，能够检测到外源基因或转基因组分。
检测方法需要明确指明所要检测的外源基因或转基因。
3. 高通量测序检测：近年来，高通量测序技术的应用逐渐增多。
通过对大豆基因组的测序，可以检测到其中的转基因成分。
4. 限量要求：标准中通常规定了转基因成分的限量要求，即检测出来的转基因成分不能超过某个阈值。
不同国家和地区对于转基因成分的限量要求可能有所不同。
5. 检测方法的验证：标准通常要求检测方法的验证，包括准确性、可靠性和精确度等方面的评估。
总的来说，大豆转基因检测标准涵盖了检测方法、限量要求和方法的验证等方面的规定，以确保转基因大豆产品的质量和安全。
不同国家和地区的标准可能有所不同，但都致力于保护消费者的权益和健康。
大豆卵磷脂DNA的提取方法及应用
大 豆 卵 磷 脂 （ soybean lecithin，又 称 大 豆 蛋 黄 素） ，是精制大豆油过程中的副产品。大豆卵磷脂中 含有卵磷脂、脑磷脂、心磷脂等，具有延缓衰老、预防 心脑血管疾病等作用。根据我国的转基因食品标识 管理规定，当大豆卵磷脂原料来自转基因大豆时，需 要进行转基因标识。深加工食品的检测中，DNA 的 提取是难点之一［1 － 2］。由于深度加工使原料 DNA 在 加工过程中遭到严重破坏，加工中出现的某些物理、 化学变化或酶因子变化也会影响 DNA 质量［3］，因此， 如何从深加工食品中提取高质量的 DNA，成为转基 因食品检测成功与否的关键所在。
核酸蛋白分析仪du640beckman粒软胶囊中的卵磷脂至一洁净的50ml液于摇床xhz3shaker300min20min加入mlprecipitationsolution剧烈振荡30s800015min去除上层油相小心将下层水相约ml转移至一洁净的50ml离心管中加入20095ml异丙醇室温静置h期间不断混匀上磁力架去除水相后加入ml70乙醇振荡混匀30力架去除液相加入50070乙醇振荡混匀30s上磁力架去除液相于65烘箱中烘干加入200孵育10min间期不断混匀上磁力架转移水相至一洁净的ml离心管中加入50倍体积异丙醇静置10min间期不断混匀上磁力架去除液相后加入50070乙醇振荡混匀30s上磁力架去除液相于65烘箱中烘干加入12010min间期不断混匀上磁力架转移水相约100abi7700realtimepcrsystemappliedusa
深加工食品 DNA 的提取方法包括经典的 CTAB 法、SDS 法 以 及 试 剂 盒 方 法，常 用 的 试 剂 盒 如 Promega、Sigma、Invitrogen、TaKaRa 、Whatman 等。近 年 来国内外许多研究者针对不同种类的加工食品和不 同的方法进行了比较。例如陈文炳［4］等利用异丙醇 浓缩提取法从贝奇野菜汁、统一鲜橙多与超浓缩橙汁 提取 DNA。沈夏艳［5］等比较了简易法、试剂盒法以 及改良试 剂 盒 法，发 现 改 良 试 剂 盒 法 提 取 的 苹 果 汁 DNA 质量较高，可用于 RAPD 技术分析。韩建勋［6］ 等采 用 多 种 CTAB 法 和 磁 珠 试 剂 盒 法 提 取 果 汁 DNA，并对 DNA 的纯度、浓度及 PCR 扩增情况进行 比较。白立群［7］等建立了大豆油的冷冻干燥 － 丙烯 酰胺 DNA 提取法。黄昆仑［9］等利用 LH-Smart DNA 试剂盒提取大豆原料及其产品 DNA，用巢式和半巢 式 PCR 进行检测，可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA,并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异的引物和探针,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度<001%,是国际上设定的转基因最低限量的100倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
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转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式PCR技术检测近年主要转基因粮食作物大豆、玉米和水稻加工产品已应用于食品制造业，为此，食品中转基因成分的安全性受到广泛关注。
当前，国际贸易和各国食品工业等部门对转基因产品逐步实施IP(Identity Preservation)管理，加强检测监控。
深加工品经过若干道加工程序，理化性质变化、DNA断裂，转基因成分检测的难度大大增加。
目前，国际上没有统一的针对转基因粮食作物深加工产品的检测标准，而我国也没有建立有效的检测标准对市场上常见的转基因大豆、玉米和水稻深加工产品中的主要外源CrylA (B)、BAR、CP4 EPSPS和PAT基因进行检测。
五重巢式PCR是近几年出现的检测技术，它结合了巢式PCR的高灵敏度和多重PCR的快速、简单和高特异性特点，可以减少假阳性，可以同时检测多个基因片段，可以使检测灵敏度的下限提高几千倍…3]。
五重巢式PCR方法快速、灵敏度高，在人和动物疾病检测和病毒鉴定中应用较多。
目前该技术在转基因检测中的应用还较少，仅在转基因大豆深加工制品和转基因水稻种子的检测中有半巢式PCR应用的报道。
但这些技术仅能对转基因大豆或水稻单一品种进行检测，在做不同品种或品系转基因成分检测时，需要分别试验，比较繁琐。
迄今为止，还没有快速、高通量同时检测不同品种和不同品系的转基因大豆、玉米和水稻外源基因的报道。
本研究旨在建立五重巢式PCR体系，探索粮食深加工产品中的转基因成分，实现不同品种和不同品系粮食作物转基因成分的高通量检测，为转基因深加工产品检测标准的建立提供理论基础。
1 材料与方法1.1材料1.1.1 试验材料转基因RR大豆购自美国孟山都公司；转基因玉米Bt11、Bt176由吉林农科院惠赠；转基因水稻由农业部转基因生物安全管理办公室提供；转基因玉米MON810、TC1507、T25和CBH-351购自香港基因芯片公司，作为阳性对照。
非转基因大豆、玉米和水稻由东北农业大学农学院提供，作为阴性对照。
待检深加工产品大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉、大豆卵磷脂、大豆油、大豆色拉油、玉米油、玉米淀粉、玉米蛋白粉、营养麦片（含有稻米成分）和玉米泥均购自超市，均未注明是否含有转基因成分。
1.1.2试验试剂Wizard@试剂盒，Promega公司(Madison，USA)；Taq DNA聚合酶、dNTP、10×PCR缓冲液（含MgC12）、DL DNA2000分子质量标准，大连宝生物工程有限公司；特异引物，上海英俊生物公司。
1.1.3仪器设备高速离心机（上海安亭公司，TDL-40B型）、PCR仪（德国Biometra，Biometra Tgradient 型）、核酸电泳仪（杭州托普仪器有限公司，GE-100型）、紫外分光光度仪（美国BECKMAN，DU@ 640型）、凝胶成像系统（美国UVP，G8000型）。
1.2方法1.2.1 DNA提取将转基因大豆、玉米、水稻和非转基因转基因大豆、玉米、水稻分别按不同质量比混合成标准品，取标准品和待测样品（按操作说明要求的质量）分别根据Wizard@试剂盒操作说明进行DNA提取，并用紫外分光光度计将DNA溶液稀释至同一质量浓度(50 ng/uL)。
1.2.2 引物设计利用Primer Premier V5.0软件进行五重巢式PCR的引物设计，用Oligo V6.22软件筛选出引物之间互相干扰最小的引物，引物所扩增目的片段及扩增产物大小见表1。
1.2.3 五重巢式PCR反应体系1)第1轮五重PCR反应体系及反应条件。
在第1轮五重PCR反应体系中，加DNA模板1uL(50 ng)，dNTP各0.4 mmol/L，2×PCR缓冲液，引物混合液工（CP4 WF/ CP4 WR，0.8umol/L;Rbcl WF/Rbcl WR,0.3 umol/L;CryWF/Cry WR,0.25 umol/L;BAR WF/BAR WR,0.4umol/L; Pat WF/Pat WR，0.4 ptmol/L;)10 uL，DNA聚合酶4 U，补去离子水至50 uL。
扩增条件为：95℃预变性10 min; 95℃30 s，65℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，62℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，60℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，58℃60 s，72℃60 s，10个循环：72℃，10 min。
2)第2轮五重PCR反应体系及反应条件。
取第1轮五重PCR产物1_uL作为模板，进行五重巢式PCR第2轮扩增。
反应体系中加引物混合液Ⅱ(CP4 NF/ CP4 NR,0.6umol/L; Rbcl NF/Rbcl NR,0. 25 umol/L; CryNF/Cry NR,0.5umol/L; BAR NF/BAR NR,0.3 umol/L;Pat NF/Pat NR,0.6umol/L;)10 uL，DNA聚合酶4U，其余步骤同前。
扩增条件同上。
3)检测方法的灵敏度分析。
将转基因大豆、玉米、水稻和非转基因大豆、玉米、水稻分别按不同质量比混合，使样品转基因成分的含量分别达到5%、1%、5×10-1%、5×10_2%、5×10_3%、10-3%、5×10_4%和10-4%。
用上述PCR方法对含混合DNA样品进行灵敏度测试。
4)扩增产物检测。
两轮多重PCR扩增产物用琼脂糖电泳检测，琼脂糖胶质量分数为3%，胶中溴化乙锭质量浓度为0.5ug/mL，电泳缓冲液为1× TAE，以DL-2000 DNA做分子质量标准，电泳条件为10 V/cm电压，电泳lh。
2 结果与分析2.1 DNA提取本研究所选材料均是深加工制品，测量所提取DNA样品的OD260值小于0.1以及OD260/OD280也小于1.5，进行电泳检测时也观察不到DNA条带（图1），说明所提取DNA样品浓度很低。
用普通PCR扩增是检测不出结果的，但用随后的五重巢式PCR进行扩增却可以检测到清楚的目的带，说明使用Wizard@试剂盒提取的DNA可以满足五重巢式PCR扩增的需要。
2.2 五重巢式PCR样品检测第1轮扩增结果见图2(a)，该体系扩增出阳性对照的CP4-EPSPS基因、RBCL基因、CrylA (B)基因、BAR基因和PAT基因，扩增片段大小分别为498、433、321、201和160 bp及阴性对照的RBCL 基因。
阳性对照结果说明扩增体系正常，可以扩增出目的基因；阴性对照结果表明实验过程中无假阳性结果，排除转基因成分污染的可能；空白对照无扩增条带说明无污染。
但其他泳道未看到扩增结果，表明深加工制品中DNA含量非常低，普通的PCR反应无法进行转基因检测。
第2轮扩增结果(图2(b))显示，卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉扩增出RBCL基因和CP4-EPSPS基因片段，即以上4种样品含有转CP4-EPSPS基因成分；玉米淀粉和玉米泥中扩增出RBCL基因、CrylA (B)基因和PAT基因片段，即以上2种样品含有转CrylA (B)基因和PAT基因成分；玉米蛋白粉扩增出RBCL基因、CrylA(B)基因和BAR基因片段，即含有转CrSA (B)基因和BAR 基因成分；营养麦片扩增出RBCL基因和CrylA (B)基因片段，即含有转CrylA (B)基因成分；大豆精炼油大豆色拉油和玉米油未检出任何条带，即未从这3种样品中提取出DNA。
表明经过第2轮的巢式PCR扩增，可以检测出除精炼油外的深加工制品的转基因成分。
2.3 五重巢式PCR灵敏度分析在第1轮五重PCR灵敏度分析实验中，5× lO_1%的阳性混合标准品中利用5对外引物能够同时扩增出5个目的基因片段，在5×10-2G的阳性t昆合标准品中只能扩增出RBCL基因、CrylA (B)和PAT基因，说明第1轮五重PCR的灵敏度为0.5%（图3）。
在第2轮五重PCR灵敏度分析实验中，5×10-3%的阳样性混合标准品中能够同时扩增出较为清晰的5个目的基因，1×10-3%的阳性混合标准品中只能扩增出RBCL基因、CP4-EPSPS基因和CrylA (B)基因，5×10_ 40的阳性混合标准品中只能扩增出RBCL基因和CrylA (B)基因，说明五重巢式PCR的灵敏度为5×10_3%（图4）。
3 结论与讨论1)本试验针对转基因市场上常见的转基因粮食作物大豆、玉米和水稻的主要外源CrylA (B)基因、BAR基因、CP4EPSPS基因、PAT基因及共同的内标准基因RBCL基因的特点设计了10对引物，建立了五重巢式PCR体系，其检测灵敏度达到0.005%，对11个大豆、玉米和水稻深加工制品进行了五重巢式PCR检测，检测出除大豆精炼油、色拉油和玉米油以外的所有深加工产品的主要外源CrylA(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因、PAT基因及共同的内标准基因RBCL基因，结果表明本研究建立的五重巢式PCR检测方法适用于主要转基因粮食作物深加工产品的定性检测。
深加工转基因产品中DNA提取需要大量的样品材料才能得到足够的DNA进行分析。
由于深加工食品中DNA模板含量少，需要利用高效的或特殊的DNA提取方法，以提取到其中微量的DNA。
使用普通的DNA和其他试剂盒进行DNA提取，不能扩增得到PCR产物，说明DNA提取失败。
利用Wizard@试剂盒，可有效提取到所选11种样品中8种样品的DNA模板。
实验表明，豆油和玉米油中的DNA在产品制备过程中已遭到极为严重的破坏和降解并且含量极低，对豆油和玉米油已无转基因检测的必要，而其他深加工产品均可使用此试剂盒进行DNA模板提取。
外源基因在转入植物中时，作了不同程度的修饰和改造，导致不同品种、品系的转基因植物中相同基因的DNA序列有很大差异。
如CrylA (B)基因在抗虫水稻和抗虫玉米中就不相同，并且在玉米的不同品系如BTll、BT176和MON810中也不相同，这样就给检测这些基因造成了很大麻烦，对于不同品种甚至不同品系转基因植物的检测都需要设计不同的引物进行PCR扩增。
本试验对同一目的基因在不同品种和不同品系中的序列进行分析，在保守区域设计多对引物，筛选出了可以在不同品种和不同品系中通用的引物进行检测，所设计的CrylA(B)基因引物可以同时扩增转基因玉米BT11、BT176、MON810和转基因水稻中的CrylA(B)基因；PAT基因引物可以同时扩增转基因玉米BT11、T25和TC1507中的PAT基因；BAR基因引物可以同时扩增转基因玉米BT176和CBH351中的BAR基因，大大提高了检测效率。