梅花鹿鹿茸_鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白比较研究

溃疡性结肠炎是一种主要累及直肠 、结肠黏膜 的慢性非特异性炎症 ,以腹痛 、腹泻 、黏液血便 、里急 后重为主要临床表现 ,病程迁延不愈 ,可长达十几年 甚至几十年 ,亦有生癌变的可能性 。该病属于中医 “肠僻”“泄泻”“痢疾”范畴 。目前国内中医药治疗溃 疡性结肠炎取得了较好的效果 ,对于控制症状 、减少
3 结果 311 梅花鹿鹿茸 、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白含量 测定 各取 100 g 梅花鹿鹿茸粉 、鹿托盘粉及鹿骨粉 得到水溶性蛋白粗品分别为 1711g、810 g、011 g ,使用 PIERCE 公司生产的 BCATM 蛋白试剂盒测定浓度 ,粗 品蛋白中蛋白含量分别为 93 %、88 %、73 %。 312 SDS2PAGE 电泳 可见鹿茸水溶性总蛋白明显 可见有 8 条带 ,其分子量大约分别为 110KD 、100KD 、 66KD 、51KD 、43KD 、35KD 、30KD 、14KD 。从带上看 ,含 量最高的是分子量为 66KD 的蛋白 ; 其次分子量为 14KD 的蛋白 。
难区别开来 ,大量存在以劣充好 ,相互掺杂的现象 ,很 难用性状鉴别 、薄层鉴别 、理化鉴别 、粉末显微鉴别[4]
3 通讯作者 : 曲晓波 (1955 - ) ,女 ,教授 , E2mail : cnzhaoyu @
yahoo. com. cn。
(收稿日期 :2008 - 01 - 14)
基金项目 :天津市科委资助课题 (编号 :05YFJMJCO8600)
相对分子量 10KD
14 K
16 KD
17 KD
23 KD
30 KD
35 KD
43 KD
51 KD
66KD 100KD 110KD
鹿 茸
M
W
W
W
W
S
W
W
鹿托盘
W
W
W
W
W
W
W
M
S
W
W
鹿 骨
W
注 :S :strong ;M :medium ;W :weak 。
蛋白质研究几乎没有文献报道 。蛋白质是生命的物
等方法鉴别 。由研究结果可见 ,SDS2聚丙烯酰铵凝胶
质基础 ,每一种蛋白质都有特定的生物学功能[3] 。经 电泳是鉴别鹿茸粉 ,鹿托盘粉 ,鹿骨粉的快速 ,有效方
SDS2聚丙烯酰铵凝胶电泳比较鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨蛋 法 ,更为以后的指纹图谱鉴定提供一个很好的依据 。
白差异发现 :鹿骨里几乎无明显可见的蛋白谱带 ,鹿
51. [4 ]范 青 ,刘 辉 ,王萍萍 ,等. 聚丙烯酰铵凝胶电泳在鹿血
与其他动物血鉴别中的应用[J ] . 中医药学报 ,2000 ,28 (5) :
39240.
发研究奠定很好的基础 。
作者简介 : 唐任能 (1976 - ) ,男 ,湖南资兴人 ,硕士研究
目前在市场上 ,鹿茸粉 、鹿托盘粉 、鹿骨粉几乎很 生 ,研究方向 :中药分子药理学与新药开发研究 。
副作用显示出了其独特的优势 。 据《伤寒论》338 条原文可见本方“又主久利”,久
利为慢性长期泻利 。故国内临床上运用乌梅丸及其 加减方治疗溃疡性结肠炎的临床随机对照试验日渐 增多 ,本研究依托市科委课题“伤寒论方的循证医学 研究”运用循证医学对其进行评价 , 为临床应用提供
表 1 鹿茸 、鹿托盘和鹿骨的蛋白谱带分布
参考文献 :
[1 ]黄兆胜. 中药学[M] . 北京 :人民卫生出版社 ,2002 :6. [2 ]杨璐璐 ,迟 程 ,秦 非 ,等. 鹿茸的化学成分与药理作用
[J ] . 云南中医学院学报 ,1995 ,18 (4) :19. [3 ]王继峰. 生物化学[M] . 北京 :中国中医药出版社 ,2002 :292
鹿托盘水溶性总蛋白明显可见有 11 条带 ,其分 子量大约分别为 110KD 、100KD 、66KD 、51KD 、43 KD 、 30KD 、23KD 、17KD 、16KD 、14KD ,10KD 。从带上看 ,含 量最高的是分子量为 66KD 的蛋白 ; 其次分子量为 51KD 的蛋白 。鹿骨水溶性总蛋白几乎无明显可见的 蛋白带 (见表 1) 。 4 讨论
梅花鹿为我国珍贵的药用动物 ,其用药始载于 《神农本草经》。鹿茸 、鹿托盘和鹿骨是梅花鹿常用的 入药部位 ,它们被广泛应用于临床 ,但差别大[1] 。鹿 茸为雄鹿未骨化密生茸毛的幼角 。《本草纲目》谓鹿
茸能够生精补髓 ,益血益阳 ,强筋健骨 ,治一切虚损 、 耳聋 、目暗 、眩晕虚痢 。鹿托盘是雄鹿额骨上的角根 与由此而生的鹿茸之间的平环状突起物。 它具有补 肝肾 、益脾胃 、强筋壮骨 、镇痛肿 、软坚散结 、消除乳房 痞块之功效 ,用于阳痿遗精 、腰脊冷痛 、阴疽疮疡 、乳 痈突起 、癖血肿痛 。鹿骨为雄鹿剔去肉的骨头 。鹿骨 具有补虚祛风 ,强筋健骨 ,安胎下气的功能 。鹿茸 、鹿 托盘和鹿骨主要富含无机矿物质 、蛋白质 、多糖 、激 素 、多肽 、微量元素等成分 。到目前为止 ,对鹿茸 、鹿 托盘和鹿骨研究主要集中在矿物质 、激素及氨基酸等
清 ;沉淀用上述缓冲液反复浸提 3 次 , 离心 (100 20 rpm ×5 min) , 合并上清 , 用 80 %硫 酸 铵 沉 淀 , 静 置 (4 ℃×24 h) ,离心 (100 20 rpm ×5 min) ,将沉淀用蒸馏 水透析 ,冻干即得鹿茸水溶性总蛋白 ,鹿托盘水溶性 总蛋白和鹿骨水溶性总蛋白粗品 。
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托盘具有与鹿茸相同的 7 条蛋白带 ,其分子量分别约 为 110KD ,100KD ,66KD ,51KD ,43KD ,30KD ,14KD 。同 时鹿托盘存在 4 条特异性蛋白带 ,其分子量分别为 10KD ,16KD ,17KD ,23KD ; 鹿茸本身也具有它独有的 蛋白 ,其分子量为 35KD 。研究结果显示鹿茸 、鹿托盘 和鹿骨的蛋白成分差异大 。由于鹿茸 、鹿托盘和鹿骨 的应用差别很大 ,因此这种差别可能就是由于它们所 含蛋白差别所致 。因此我们的这一工作 ,为以后进一 步深入研究鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨的作用机理及新药开
小分子类物质 ,对大分子蛋白质研究文献报道较少 。 本文利用 SDS2聚丙烯酰铵凝胶电泳法和 BCATM 蛋白 含量测定法 ,比较它们水溶性蛋白成分的差异性 ,为 进一步研究它们的药效物质基础提供支撑 。
1 材料仪器 111 材料 梅花鹿茸 、鹿托盘和鹿骨均由吉林东丰 药业提供 。低分子量标准蛋白质 ,购于中国科学院上 海生物化学研究所 ;BCATM (二辛可宁酸或二羧基喹 啉) 蛋白浓度试剂盒 ,购于美国 Pierce 公司 ;其他试剂 均为分析纯 。 112 仪器 Heto LL3000 型冻干机 ,瑞典 Jouna Nordic 公司 ;电泳仪 ,北京六一仪器厂 ;垂直板电泳槽 ,北京 六一仪器厂 ;高速离心机 ,Eppendorf 公司 。 2 实验方法 211 总蛋白的提取 取等量干品鹿茸 、鹿托盘和鹿 骨用车床机粉粹成细粉 (120 目) 即可 。分别取鹿茸 粉 ,鹿托盘粉 ,鹿骨粉 100 g ,用 20mM Tris2HCl pH810 (含 011 mol NaCl 、1 mmol EDTA 、1 mmol PMSF) 缓冲液 浸提 (4 ℃×24 h) ,离心 (10020 rpm ×5 min) ,即得上
熊 俊1 ,董文军1 ,宋俊生1 ,商铁刚2 ,袁 安1 ,徐 阳3 (1. 天津中医药大学 ,天津 300193 ;2. 天津中医药大学第一附属医院 ,天津 300193 ;
3. 中国协和医科大学放射医学研究所 ,天津 300192)
[ 摘 要 ]目的 :系统评价国内乌梅丸及其加减方治疗溃疡性结肠炎的临床随机对照试验的疗效 。方法 :根 据纳入标准搜集相关文献 ,筛选合格研究 ,应用 Jadad 评分法进行质量评价 ,运用异质性检验 、Meta2分析 、漏斗 图分析等方法统计相关数据 。结果 :检索到符合纳入标准文献 10 篇 。Jadad 评分结果普遍分数不高 。纳入研 究的总有效率和治愈率分析均显示乌梅丸及其加减方治疗溃疡性结肠炎相对对照组 (西药组) 而言有效 。交代 半年复发率的文献太少 。漏斗图分析存在发表偏倚 。结论 :在今后临床研究中应加大该方对照以柳氮磺吡啶 为主治疗该病的临床随机对照试验 。进一步完善治愈率指标 、半年复发率 、不良反应等的报道 。 [ 关键词 ]乌梅丸 ;溃疡性结肠炎 ;临床随机对照试验 ;系统评价 [ 中图分类号 ]R25613 [ 文献标识码 ]A [ 文章编号 ]1003 - 5699 (2008) 04 - 0296 - 04
目前 ,对鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨临床疗效物质作用基 础研究较少 ,特别是对于鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨中大分子
基金项目 :国家科技部支撑计划“鹿茸胶原胶囊的研究”(编号 :2006BAI06A20 - 12)
吉林中医药 2008 年第 28 卷第 4 期 ·295 ·
方药园地
乌梅丸及其加减方治疗溃疡性结肠炎 临床随机对照试验的系统评价
中药现代化
梅花鹿鹿茸 、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白比较研究
唐任能 ,赵 雨 ,孙晓迪 ,曲晓波 3 (长春中医药大学 中医药与生物工程研发中心 ,吉林 长春 130117)
[ 摘 要 ] 目的 : 比较鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨水溶性总蛋白差异 。方法 : 采用 SDS2聚丙烯酰铵凝胶电泳和 BCATM 蛋白含量测定法比较鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨水溶性总蛋白差异 。结果 :鹿茸水溶性总蛋白 、鹿托盘水溶性 总蛋白和鹿骨水溶性总蛋白的相对含量及组成差异极其明显 ,SDS2聚丙烯酰铵凝胶电泳法及 BCATM 蛋白含量 测定法是鉴别鹿茸 、鹿托盘及鹿骨有效方法 。结论 :本研究对鉴别鹿茸 、鹿托盘 、鹿骨粉具有一定的意义 。 [ 关键词 ]鹿茸 ;鹿托盘 ;鹿骨 ;水溶性总蛋白质 [ 中图分类号 ]R25613 [ 文献标识码 ]A [ 文章编号 ]1003 - 5699 (2008) 04 - 0295 - 02
212 蛋 白 含 量 测 定 使 用 PIERCE 公 司 生 产 的 BCATM 蛋白试剂盒测定浓度 。 213 SDS2聚丙烯酰铵凝胶电泳 按文献方法[2] ,采 用溶度为 10 %的分离胶和溶度为 5 %的溶缩胶 ,溶缩 胶电压为 70 mV ,分离胶Fra Baidu bibliotek压为 140 mV 。采用考马斯 亮蓝 R2250 进行染色 ,最后用脱色液 (甲醇∶冰醋酸∶ 蒸馏水 = 415∶415∶1) 脱色 ,至背景清楚 ,观测分子量 范围 。