紫外分光光度法测定蛋白质含量

化学2班李永亮41007061

【实验目的】

（1）学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；

（2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；

（3）掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。【实验原理】

本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。该测定法具有简单、灵敏、快速高、选择性，且稳定性好，干扰易消除，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定等优点。

利用紫外吸收法测定蛋白质含量准确度较差，其主要原因有两个：其一对于测定那些与标准蛋白质中赖氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；其二若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。

【实验仪器与试剂】

仪器：TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管，胶头滴管

试剂：标准蛋白质溶液（3.00mg/mL）,0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液

【实验步骤】

一、准备工作

1、启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。

2、在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测

量，设置测量条件（测量波长等）。

3、将空白放入测量池中，点击开始扫描空白，点击基线校零。

4、标准曲线的绘制

二、测量工作

1、吸收曲线的绘制

紫外分光光度计测蛋白质含量

紫外分光光度法测定蛋白质含量

1仪器与试剂

TU-1 9 01紫外一可见分光光度计，比色管,吸量管

标准蛋白质溶液：5、00 mg、mL-l溶液

0、9% NaCl洛液，待测蛋白质溶液

2实验方法与原理

本实验采用紫外分光光度法测定蛋口质含量。紫外一可见吸收光谱法乂称紫外一可见分光光度法,它就是研究分子吸收19 0 nm〜750nm波长范围内得吸收光谱，就是以溶液中物质分子对光得选择性吸收为基础而建立起来得一类分析方法.紫外-可见吸收光谱得产生就是山于分子得外层价电子跃迁得结果，其吸收光谱为分子光谱，就是带光谱。

蛋口质中酪氨酸与色氨酸残基得苯环含有共轨双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光得性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同得蛋白质吸收波长略有差别）•在最大吸收波长处，吸光度与蛋口质溶液得浓度得关系服从朗伯一比耳定律。该测定法具有简单灵敬快速高选择性,且稳定性好，干扰易消除不消耗样品，低浓度得

盐类不干扰测定等优点。

3实验步骤

3、1准备工作

3、3、1启动计•算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。

3、3、2在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量,设置测量条件（测量波长等）。

3、3、3将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。

3、3、4标准曲线得制作。

3、2测量工作

3、2、1吸收曲线得绘制

用吸量管吸取2mL5、00m g/mL标准蛋白质溶液于1 0 mL比色管中，用 0、9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0、9% N&C1溶液为参比，在190 nm〜40 0 nm区间，q全波段扫描。

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)

2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)

(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)

反应（1）、(2)在凯氏瓶完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白

氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。

二、双缩脲法（biuret法）

（一）实验原理

双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量

一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

nh2ch2cooh+3h2so---- 2co2+3so2+4h2o+nh3 ⑴

2nh3+h2so4 --- （n h4）2so4 （2）

（nh4）2so4+2nao- 2h2o+na2so4+2 nh3 ⑶

反应（1）、（2）在凯氏瓶完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去

非蛋白

氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6.25 即得。

二、双缩脲法（biuret法）

（一）实验原理

双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180°C左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

nh2ch2cooh+3h2so42co2+3so2+4h2o+nh3（1）

2nh3+h2so4（nh4）2so4（2）

（nh4）2so4+2naoh2h2o+na2so4+2nh3（3）

反应（1）、（2）在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以625即得。

二、双缩脲法（biuret法）

（一）实验原理

双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经1800c左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

实验3 紫外分光光度法测定蛋白质含量

6 2.5 1.5 0.62 5
7 3.0 1.0
8 4.0 0
0.75 1.0
（2）样品测定：样品测定：配制待测蛋白质溶液1ml 加入蒸馏水3ml 1ml， 3ml，配制待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，测定A280，从标准曲线中查出蛋白质浓度。测定A280，从标准曲线中查出蛋白质浓度。 A280 2. 直接测定法在紫外分光光度计上，在紫外分光光度计上，将待测蛋白质溶液加入比色皿，以生理盐水为对照，测定280nm 280nm和比色皿，以生理盐水为对照，测定280nm和260nm 波长吸光度。按一下公式计算蛋白质浓度：波长吸光度。按一下公式计算蛋白质浓度：蛋白质浓度（mg/mL）=1.45A280蛋白质浓度（mg/mL）=1.45A280-0.74A260 (C为蛋白质浓度，mg/ml,A280和A260分别为 (C为蛋白质浓度，mg/ml,A280和A260分别为为蛋白质浓度蛋白质溶液在280nm 260nm处测得的吸光度值 280nm和处测得的吸光度值) 蛋白质溶液在280nm和260nm处测得的吸光度值)。
表1-2 紫外分光光度法测定蛋白质浓度---标准曲线的绘制紫外分光光度法测定蛋白质浓度标准曲线的绘制
项目标准蛋白液/ml 蒸馏水/ml 蛋白质浓度/ml A280
1 0 4.0 0
2 0.5 3.5 0.12 5

紫外分光光度法测定蛋白质含量

紫外分光光度法测定蛋白质含量
学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。
实验目的
掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。掌握TU-1901紫外掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了紫外解此仪器的主要构造。解此仪器的主要构造。
实验原理
本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质
280nm
含量。含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于 280 nm 附近于280 （不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最不同的蛋白质吸收波长略有差别）大吸收波长处，大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。的关系服从朗伯-比耳定律。
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仪器与试剂
TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管 TU-1901紫外可见分光光度计，比色管，紫外标准蛋白质溶液：5.00 mg.mL-1溶液标准蛋白质溶液： 0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液 NaCl溶液溶液，
基本操作
1. 启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。 2. 在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量）光度测量，设置测量条件（测量波长等）光度测量，设置测量条件（测量波长等）。 3. 将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。将空白放入测量池中，点击START扫描空白点击ZERO校零扫描空白，校零。 4. 标准曲线的制作。标准曲线的制作。

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告

紫外分光光度法测定蛋白质含量

一、实验目的

1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；

2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。

二、实验原理

1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。

2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。

利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。

三、仪器与试剂

TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。

10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。

四、实验步骤

1.绘制吸收曲线

用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。

2.绘制标准曲线

用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)

2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)

(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)

反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白

氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。

二、双缩脲法（biuret法）

（一）实验原理

双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为

双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

蛋白质类药物含量测定的方法

蛋白质类药物含量测定有多种方法，以下是其中几种常用的方法：

1. 紫外分光光度法：蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸，它们在紫外光

280nm处有最大吸收峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液的吸光度值与其

浓度成正比，可以用于定量测定。此方法操作简单、快捷，且样品可回收。然而，此方法不适用于酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，且易受其他在280nm有吸收的物质（如核酸）干扰。

2. Bradford法：该法基于染料与蛋白质结合后改变最大吸收光，从465nm 变为595nm。蛋白质-染料复合物具有高消光系数，提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。染料与蛋白质结合迅速，颜色在1小时内稳定。一些阳离子、(NH4)2SO4、乙醇等物质不干扰测定，但大量去污剂如TritonX-100、SDS等会严重干扰测定。

3. 双缩脲法：具有两个或两个以上肽键的化合物都有双缩脲反应，蛋白质在碱性溶液中能与Cu2+络合呈紫红色，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用比色法进行测定，根据标准曲线进行计算可以确定蛋白质浓度。

除上述方法外，还有酚试剂法、考马斯亮蓝法、免疫分析法等测定蛋白质含量的方法。在实际操作中，应根据具体药物选择合适的测定方法。

紫外分光光度法测蛋白质的含量

一、实验目的

1、学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。

2、掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。

3、掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理

本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。该测定方法简单、灵敏、快速，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定。

1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。

紫外光：10-400 nm

可见光：400-780 nm

特点：带光谱、分子光谱

应用：定性分析-最大吸收波长；

定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）

a.定性分析原理：

吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.

b.定量分析原理：

根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

c.仪器组成部件:

各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。

国标紫外分光光度法测定蛋白质含量

蛋白质是构成生物体内各种细胞、器官和组织的主要物质之一，

其含量的测定对于科学研究和工业生产具有重要意义。目前国际上常

用的测定蛋白质含量的方法有比色法、低力荧光素法和生物素-四硫化

物法等，而国家标准推荐使用紫外分光光度法测定蛋白质含量，因其

准确性和可靠性较高，具有广泛适用性。

一、实验原理

国标紫外分光光度法利用蛋白质分子内含有色氨酸（W）、酪氨酸（T）和苯丙氨酸（F）等氨基酸团的紫外吸收特性，即在近220nm处有吸收峰。通过分析样品在220nm处的吸光度值，就可以计算出其蛋白质含量。

二、实验步骤

1. 样品的制备

将所需测定的物质按照预定比例溶解在适量的缓冲溶液中，混合均匀，离心沉淀物质后，称取上清液并记录其质量，得到样品洗脱液。

2. 样品的测定

(1)制备含有对照蛋白质的样品洗脱液。将已知浓度的蛋白质按需求浓

度稀释后，制成一系列的对照样品，称取适量的对照样品，经过与样

品液的处理过程相同的操作后，得到对照样品洗脱液。

(2)利用紫外分光光度计测量样品洗脱液和对照样品洗脱液在220nm处

的吸光度，记录数据。

(3)计算样品洗脱液中蛋白质的含量。根据统计学方法，将同一浓度蛋

白质的对照样品的吸光度取平均值，并绘制标准曲线。根据样品洗脱

液的吸光度值和标准曲线，计算出样品中蛋白质的含量。

三、实验注意事项

1. 操作时需严格按照实验指导书的规定操作。

2. 紫外分光光度计在对样品洗脱液进行吸光度测定时，应使用二元芳

香胺半波长试管作为样品池。

3. 为防止各种最终洗涤液误差的影响，应利用含有NaHCO3 or Na2CO3的去离子水作为纯化洗涤液。

请简述紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。

紫外分光光度法是一种常用的蛋白质含量测定方法。其原理是利用蛋白质中芳香族氨基酸如色氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸等在紫外区域（200-400nm）的吸收特性来计算蛋白质的含量。

在紫外区域，蛋白质中的芳香族氨基酸会吸收电磁波，并转化为激发态。根据比贝尔-朗伯定律（Beer-Lambert Law），吸光度与物质浓度呈线性关系。因此，可以通过测量样品在280nm处的吸光度值，进而计算出蛋白质的浓度。

需要注意的是，该方法只适用于含有较高浓度的蛋白质样品，且不受其它成分影响的情况下，如血清、细胞提取液等。对于含有干扰物的复杂样品或低浓度蛋白质的测定，应选择其他适当的测定方法。

紫外分光光度法测定DNA蛋白质含量美析仪器-紫外可见分光光度计

紫外分光光度法测定DNA蛋白质含量

美析仪器有限公司

一、实验目的

学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；

掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；

掌握UV-1700紫外可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理

紫外可见吸收光谱法又称紫外可见分光光度法,它是研究分子吸收190nm～750nm 波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱.

定性分析:利用紫外可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。即将未知纯化合物的吸收光谱特征，如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。

定量分析: 紫外可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比，即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。因此，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，就可求出溶液中物质浓度和含量。由于最大吸收波长λmax处的摩尔吸收系数最大，通常都是测量λmax的吸光度，以获得最大灵敏度。

光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b的两个吸收池中，让一束一定波长的平行单色光非别照射空白和待测溶液，以通过空白溶液的透光强度为I0，通过待测溶液的透光强度为I，根据上式，由仪器直接给出I0与I之比的对数值即吸光度。

紫外可见分光光度计:紫外可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器、信号显示器；

紫外分光光度法快速测定液体奶、奶粉中蛋白质含量

紫外分光光度法快速测定液体奶、奶粉中蛋白质含

量

一、本文概述

本文旨在探讨紫外分光光度法在快速测定液体奶和奶粉中蛋白

质含量方面的应用。紫外分光光度法是一种基于物质对紫外光的吸收特性进行定量分析的方法，具有操作简便、快速准确、适用范围广等优点，因此在食品营养成分分析中得到了广泛应用。本文将详细介绍紫外分光光度法的基本原理、实验步骤及注意事项，并通过实例分析验证该方法在液体奶和奶粉中蛋白质含量测定中的准确性和可靠性。本文还将讨论该方法相较于传统蛋白质测定方法的优势，以及在实际应用中的潜力和局限性。通过本文的研究，旨在为液体奶和奶粉生产的质量控制、食品安全监管以及营养学研究提供有力支持。

二、紫外分光光度法原理

紫外分光光度法是一种基于物质在紫外光区（通常指波长范围在200-400纳米）对光的吸收性质进行分析的方法。在液体奶和奶粉中蛋白质含量的测定中，该方法主要利用蛋白质分子中的芳香族氨基酸（如色氨酸和酪氨酸）以及某些特定的肽键在紫外光区具有吸收峰的特性。当紫外光通过这些含有蛋白质的样品时，部分光能被蛋白质分

子吸收，导致光的强度减弱。根据朗伯-比尔定律，光强度的减少与样品中蛋白质的浓度成正比。因此，通过测量紫外光通过样品前后的强度变化，可以计算出样品中蛋白质的浓度。

在紫外分光光度法中，常用的波长通常为280纳米，因为这是大多数蛋白质在紫外光区的主要吸收峰。为了消除其他可能干扰测定的物质（如核酸）的影响，通常还会使用多个波长（如260纳米）进行校正。通过比较不同波长下的吸光度值，可以更加准确地计算出蛋白质含量。

紫外分光光度法测蛋白质含量UV-4802

紫外分光光度法测定蛋白质含量

1、学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；

2、掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；

3、掌握UV-4802紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理：

紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外光波长在10-400nm之间，可见光波长在400-780nm之间，可被人们的眼睛所感觉。紫外-可见吸收光谱的特点：带光谱、分子光谱。

紫外分光光度法根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。

a.定性分析原理：根据吸收曲线可以判断吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状。

b.定量分析原理：

根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

（5）仪器组成部件:

各种类型的紫外-可见分光光度计，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。

2. 本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。

（1）蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。