植物组织培养 第一章 植物组织培养实验室的构建和操作技术
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植物组织培养—第一章
3
实验室设计
4
一、准备室
作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的 准备工作。
✓ 普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。 纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、 磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等 。 作用：配制培养基。
✓ 洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。 作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。
29
⑤ 马铃薯萃取液：多用于壮苗的培养，在使用时可将马铃薯 去皮、切碎、水煮20一30分钟，然后将滤液加入培养基中， 其用量通常为100—200g/L。当培养基中添加了马铃薯萃 取液后，可以对pH产生缓冲作用，试管苗也生长得更为健 壮。
⑥香蕉：多用于兰花的组织培养，将成熟香蕉果肉捣烂后， 添加到培养基中，用量150—200g/L。香蕉果泥可缓冲培 养基的pH，对外植体的分化有着较为明显的促进作用。
2. 继代培养基： 诱导出愈伤组织后，使愈伤组织 能不断地生长下去的培养基。
32
3. 分化培养： 由愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）
的培养基。
• ① 不加任何激素的基本培养基，即可诱导分化。 如水稻、珍珠粟、甘蔗等植物。
• ② 加较高浓度细胞分裂素和少量生长素培养基。 如烟草、矮牵牛、四季海棠、天竺葵、菊花、 倒挂金钟等组织的分化。
19
三、无菌操作：
1. 接种室以及工作台灭菌：紫外灯30分钟，用时一 定要关闭它。
实验室设计
4
一、准备室
作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的 准备工作。
✓ 普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。 纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、 磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等 。 作用：配制培养基。
✓ 洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。 作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。
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⑤ 马铃薯萃取液：多用于壮苗的培养，在使用时可将马铃薯 去皮、切碎、水煮20一30分钟，然后将滤液加入培养基中， 其用量通常为100—200g/L。当培养基中添加了马铃薯萃 取液后，可以对pH产生缓冲作用，试管苗也生长得更为健 壮。
⑥香蕉：多用于兰花的组织培养，将成熟香蕉果肉捣烂后， 添加到培养基中，用量150—200g/L。香蕉果泥可缓冲培 养基的pH，对外植体的分化有着较为明显的促进作用。
2. 继代培养基： 诱导出愈伤组织后，使愈伤组织 能不断地生长下去的培养基。
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3. 分化培养： 由愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）
的培养基。
• ① 不加任何激素的基本培养基，即可诱导分化。 如水稻、珍珠粟、甘蔗等植物。
• ② 加较高浓度细胞分裂素和少量生长素培养基。 如烟草、矮牵牛、四季海棠、天竺葵、菊花、 倒挂金钟等组织的分化。
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三、无菌操作：
1. 接种室以及工作台灭菌：紫外灯30分钟，用时一 定要关闭它。
植物生物技术-第一章植物组织培养实验室的构建与无菌操作技术
第—节
—,植物组织培养实验室设计
组织培养实验室主要包括：.器具的清洗 干燥和保存
■器具的清洗、干燥和保存
1、 准备室
・ .培养基的配制和灭
2、 无菌操作室（接种室）■生理生化测定等
3、 培养室
4、 温室
5
第—节
2、无菌操作室（接种室）
•是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所
■主要设备：空调、培养架、灯光、 除湿机、换气扇等
■ 作用：提供植物生长所需营养元素
34
（三）有机营养成分---糖类
■ 最常用的碳源是蔗糖和 ■ 使用浓度为2%-5% ■ 作为植物生长发育所需的营养物质 ■调节培养基中的渗透压
（三）有机营养成分-一维生素
♦硫胺素（VB1 ）—般认为是一种必需的成分 ♦毗哆醇（VB 6）,烟酸（VB 3 ）,泛酸钙（VB5 ）和肌醇也都
（二）无机盐类
■ 大量元素:氮（N）、磷（P ）、钾（K ）、硫（S ）、钙（Ca） 、镁（Mg）
■微量元素:铁（Fe）、锰（Mn ）、铜（Cu ）、锌（Zn）、硼 (B )和铝(Al )
■ 浓度大大于于0.0.5m5mmomlo/Ll的/元L 素为大量元素, 素为微微量量元元素素
小于 0.5mmol/L 的元
第一章植物组织培养实验室的构建 与 无菌操作技术
第一章
本章主要内容
植物组织培养实验室构建
植物组织培养实验室构建
概述
植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、愈伤组织培养、植物遗传转化等实验的重要场所。建立一个高效的植物组织培养实验室对于开展植物生物技术研究至关重要。本文将介绍植物组织培养实验室的构建步骤及相关设备和操作流程。
步骤
1. 确定实验室位置
植物组织培养实验室应设置在通风良好、光线充足的环境中，并且远离其他实验室以避免交叉污染。实验室的位置选择也应考虑到未来扩建或改造的可能性。
2. 设计实验室布局
实验室布局应合理，设备摆放应符合操作流程，同时要考虑实验室的通风、安全和卫生条件。实验台、培养室、设备间等区域的划分要清晰明了。
3. 购置必要设备
植物组织培养实验室需要配备必要的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、离心机、恒温培养箱等。设备的选择应考虑实验需求和预算。
4. 保障实验室安全
实验室安全是第一位的，必须确保实验室的电路、水源等设备安全可靠，设备操作人员应接受相关安全培训，并且定期进行检查和维护。
5. 制定实验操作规程
建立完善的实验操作规程是保证实验结果准确可靠的关键。制定实验操作规程时应考虑到每个操作步骤的细节，包括消毒步骤、培养条件控制等。
6. 建立实验室管理制度
建立实验室管理制度有利于实验室的日常管理和运行。管理制度包括实验室卫生、设备维护、实验记录等方面，确保实验室的正常运转。
操作流程
1.准备工作
–检查实验室设备是否正常运转。
–准备培养基、试剂和实验器具。
2.植物组织采集
–从健康植物中采集需要的组织。
–进行消毒处理。
3.组织培养
–将组织放入无菌条件下的培养基中进行培养。–控制培养条件，如温度、光照等。
1 植物组织培养实验室的构建
3. 中等无机盐含量的培养基 类型：Nitsch培养基、Miller 培养基和H 培养基。 特点：大量元素含量约为MS培养基的一 半，微量元素种类少但含量较 高，维生素种类较多。
4. 低无机盐含量培养基 类型：White培养基、WS培养基、HE培 养基。 特点：无机盐含量非常低，为MS培养基 的1/4左右，有机成分也很低。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
2、无菌操作室
也称接种室，是开展 组织培养研究包括接 种、继代、细胞融合 等的场所。 要求：干爽安静，清 洁明亮，墙壁光滑平 整不易积污灰尘，地 面平坦无缝便于清洗 和灭菌。
3、培养室
是将接种到培养瓶 等器皿中的植物材 料进行培养的场所。 主要设备：空调机、 培养架、灯光、除 湿机、换气扇等。
1. 含盐量较高的培养基：
种类：MS培养基、LS培养基、BL培养
基、ER培养基等。
特点：无机盐浓度高，特别是硝酸根离子、 钾离子和铵离子含量丰富。
2. 硝酸钾含量较高的培养基
第一章 植物组织培养实验室的构建和操作技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场
所，应能满足清洗、培养基制备、
储藏、无菌操作、培养、鉴定等多 方面的工作。
第一章 组培的基本条件及一般技术
1.构成与配置
基本实验室 实验室 组成
准备室
缓冲室 无菌操作室
培养室 细胞生物学实验室
辅助实验室 温 室
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
冰箱 无菌台 药 品 及 仪 器 柜
搁
拉 窗
培养架
搁 4.0 架 m
电 炉
实 验 台 准备室 4.5m
无菌台
培养架
无菌室 缓冲室 3.0m
架 培养室
培 养 架 培 养 架
门
3.5m
A Glimpse of Plant Tissue Culture
第一章 组培的基本条件及一般技术
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计
（三）观察分析仪器设备
显微镜 类型： 倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 体视显微镜
原生质体观察 染色体和叶片气孔观察 细胞活力观察 病毒检测、细胞器变化 形态分化的实体观察
（四）培养设备
1.空调
作用：控制培养温度 控制培养室内湿度状况
植物组织培养—第一章
三、无菌操作：
1. 接种室以及工作台灭菌：紫外灯30分钟，用时一 定要关闭它。
2. 工作台消毒：70%乙醇，用小型喷壶消毒或棉球 擦拭。
3. 点燃酒精灯，开启灭菌器,对使用器械进行烧烤 灭菌。器械冷却后方可使用。
第三节 培养基的配置
一、培养基成分
（ culture medium：维持离体细胞生存和生长的溶液）
细菌过滤器
二Leabharlann Baidu无菌操作室
作用： 进行植物材料分离接种的重要场所，需长时间的无菌操 作，对组织培养成功起关键作用。
试验设施： 超净工作台 紫外灯 固定式和移动式载物台 消毒器、广口瓶、酒精灯、酒精棉、机械支架 手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等
超净工作台 (a laminar flow hood)
工作原理:
利用鼓风机驱动空气 遁过高效过滤器除去 空气中的尘埃颗粒， 使空气得到净化。 净化空气徐徐通过工 作台面，使工作台内 构成无菌环境。
三、培养室
作用： 进行材料的培养的场所。 其大小、规模可根据工作性质设定。以充分利用空间和 节能为原则。
设备： 可调控光、温、湿度等设备。 还有固定式培养架、转床、摇床。 适用于器官（芽、茎、花药等）、愈伤组织、细胞和原 生质体的固体培养和液体培养。
自动双重纯水蒸馏器
灭菌室： ①高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。
第一章植物组织培养实验室构建
第一章植物组织培养实 验室构建
2020/12/1
第一章植物组织培养实验室构建
教学目标：
（1）理解组织培养实验室的设计原则； （2）掌握组织培养基本布局以及相应仪器设备； （3）了解组培苗生产规模与实验室组建经费预算； （3）能够根据需要和实际情况科学设计组织培养实
验室。 重点：组织培养实验室设计与经费预算 难点：组织培养实验室的设计
洗涤室 药品室 称量室 培养基制备室 灭菌室 无菌培养基储放室 无菌操作室（区） 培养室（区） 细胞学观察室 驯化移栽温室
•化学实验室 （准备室）
•▼
•可以根 据实际条 件进行合
并
第一章植物组织培养实验室构建
•三、组培实验室的设计
• 1、实验室选址要求
（1）地理位置要求：地形开阔，地势高燥，交通运输、水 电方便。环境清洁，空气清新，周围50米以内要 没有酱 醋作坊、牧场、畜禽圈舍及饲料库和“三废”排放的工厂。
••办办公公 室室
••培培养养 室室
第一章植物组织培养实验室构建
红河学院植物组织培养实验室平面图
第一章植物组织培养实验室构建
•第二节 实验室的功能及要求
一、准备室
1、功能：完成培养基配制所使用的各种药品的贮备、称量、 用品洗涤、培养基配制与分装等工作。
2、主要设备用具： 药品柜、冰箱、电子天平、蒸馏水器、酸 度计及常用的培养基配制用玻璃仪器。
2020/12/1
第一章植物组织培养实验室构建
教学目标：
（1）理解组织培养实验室的设计原则； （2）掌握组织培养基本布局以及相应仪器设备； （3）了解组培苗生产规模与实验室组建经费预算； （3）能够根据需要和实际情况科学设计组织培养实
验室。 重点：组织培养实验室设计与经费预算 难点：组织培养实验室的设计
洗涤室 药品室 称量室 培养基制备室 灭菌室 无菌培养基储放室 无菌操作室（区） 培养室（区） 细胞学观察室 驯化移栽温室
•化学实验室 （准备室）
•▼
•可以根 据实际条 件进行合
并
第一章植物组织培养实验室构建
•三、组培实验室的设计
• 1、实验室选址要求
（1）地理位置要求：地形开阔，地势高燥，交通运输、水 电方便。环境清洁，空气清新，周围50米以内要 没有酱 醋作坊、牧场、畜禽圈舍及饲料库和“三废”排放的工厂。
••办办公公 室室
••培培养养 室室
第一章植物组织培养实验室构建
红河学院植物组织培养实验室平面图
第一章植物组织培养实验室构建
•第二节 实验室的功能及要求
一、准备室
1、功能：完成培养基配制所使用的各种药品的贮备、称量、 用品洗涤、培养基配制与分装等工作。
2、主要设备用具： 药品柜、冰箱、电子天平、蒸馏水器、酸 度计及常用的培养基配制用玻璃仪器。
植物组织培养实验
实验一植物组织培养实验室的构造和功能
一、目的要求：
掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具
超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。
三、方法步骤
1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。
2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。
3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养室的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。
四、实验报告
1.将本次实验内容整理成实验报告
2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二MS培养基母液的配制与保存
一、目的要求
通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
二、材料与用具
配制MS培养基所需的药品（见附表）。植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、标签、冰箱等。
三、方法与步骤
1.母液的配制
（将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制）
2.植物生长调节物质母液的配制
①称量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。
②溶解：生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。
第一章植物组织培养的试验设建设和离体操作技术
组培实验室的建设和离体操作技术
G.Morel
1960年G.Morel采用兰花的茎尖 培养，实现了去病毒和快速繁殖两个 目的。这是经过茎尖—原球茎—小植 株的方式而再生的。
Morel提出的这种离体无性繁殖方 法，其繁殖系数极高，很快被兰花生 产者所采用，迅速建立起兰花工业。 植物离体微繁技术及脱毒技术得到了 迅速发展，实现了产业化。
器官 组织 细胞
低等植物
高等植物
原生质体
园艺植物生物技术课件
组培实验室的建设和离体操作技术
培养方法的逐渐改善
液体 液体振荡培养 液体悬浮培养 固体培养 看护培养 饲喂层培养
微室培养 小量 大量 试管 大罐 手工 自动化
园艺植物生物技术课件
组培实验室的建设和离体操作技术
培养基逐渐改善
White培养基、MS培养基、MT培养基等. 此外，现在各种培养基配方都以成品的方式 出售。
园艺植物生物技术课件
组培实验室的建设和离体操作技术
1962年Marshing和Skoog在烟草培养中筛选出至今 仍被广泛使用的MS培养基。
1964年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀 罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。
园艺植物生物技术课件
组培实验室的建设和离体操作技术
5. 组织培养在生产上广泛应用阶段
继代培养（Subculture） 经过初代培养的材料，转移到新鲜培养基上 进行培养的过程。
植物组织培养技术1-任务一 植物组织培养实验室的构建
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
植物组织培养技术
任务一、植物组织培养实验室的构建
主要内容
任务一、植物组织培养实验室的构建 任务二、培养基及其配制 任务三、植物组织培养快繁 任务四、植物脱毒技术
任务五、常见园林植物的脱毒与快速繁殖
《植物组织培养技术》教学课件
任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
子任务一 实验室的设计与要求 子任务二 主要仪器设备和器皿用具
或电炉、药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸 度计、封口膜及常用的培养基配制用玻璃仪器。
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
图片来源于互联网
子任务一 实验室的设计与要求
❖ 2、无菌接种室 ❖ 功能：无菌操作场所，外植体的消毒、无菌材料的继代、原生质体的分离
和培养物的转移； ❖ 组织培养的核心工作在此完成。 ❖ 要求：干爽安静、清洁明亮，宜小不宜大。 ❖ 设备：无菌操作室安装有紫外灯和空调，工作台和搁架，还有超净工作台
第一章-植物组织培养实验室的构建与操作技术
起日后工作混乱 • 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计，
达到严格无菌的条件
组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株
基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外 植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理 （脱分化、再分化、继代） →再生植株
标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、观察室 等 基本组培实验室 准备室（含配药室）、缓冲间、无菌操作室 、培养室
酒精灯、镊子、解剖刀，解剖刀片、剪刀、培养瓶，刀剪架等
４、培养室
• 功能
接种的材料进行培养生长的场所（其设计以充分 利用空间和节省能源为原则）。
• 要求：
• 能控制光照和温度 • 保持相对的无菌环境 • 有排风窗和换气扇等培养室的换气装置 • 有适宜的培养架，日光灯照明。
• 主要设备
• 培养架、培养箱、空调机、除湿机、换气扇、臭 氧发生器等。
第二章 植物组织培养实验室 的构建与操作技术
• 主要内容
组织培养实验仪器设备及使用方法 培养基的制备方法和步骤 外植体的灭菌方法 无菌操作技术 褐变和玻璃化原因及应对措施
第一节 植物组织培养实验室及主要设备
一、实验பைடு நூலகம்设计与设备
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工 作方便，防止污染。
• 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 • 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引
达到严格无菌的条件
组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株
基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外 植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理 （脱分化、再分化、继代） →再生植株
标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、观察室 等 基本组培实验室 准备室（含配药室）、缓冲间、无菌操作室 、培养室
酒精灯、镊子、解剖刀，解剖刀片、剪刀、培养瓶，刀剪架等
４、培养室
• 功能
接种的材料进行培养生长的场所（其设计以充分 利用空间和节省能源为原则）。
• 要求：
• 能控制光照和温度 • 保持相对的无菌环境 • 有排风窗和换气扇等培养室的换气装置 • 有适宜的培养架，日光灯照明。
• 主要设备
• 培养架、培养箱、空调机、除湿机、换气扇、臭 氧发生器等。
第二章 植物组织培养实验室 的构建与操作技术
• 主要内容
组织培养实验仪器设备及使用方法 培养基的制备方法和步骤 外植体的灭菌方法 无菌操作技术 褐变和玻璃化原因及应对措施
第一节 植物组织培养实验室及主要设备
一、实验பைடு நூலகம்设计与设备
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工 作方便，防止污染。
• 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 • 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引
植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作(精要)
常用的植物激素及生长调节物涉及五大 类植物激素： 1、生长素类： 2、细胞分裂类： 3、赤霉素类： 4、脱落酸： 5、多胺 6、乙烯：
1、生长素类：
组织培养中的功能是：促进细胞伸长 生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织， 促进生根。
常用的有NAA、IAA、IBA、2,4－D 等。
2、细胞分裂素类：
微量元素中，铁的用量较大，它对叶绿 素的合成起重要作用，由于在较高pH下， FeCl3极易形成Fe（OH）3沉淀，难以被 吸收，所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与 硫酸亚铁形成的螯合物，并且单独配制。
（二）有机成分：
主要包括各种维生素和氨基酸
常用的维生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇（VB6）、烟酸 （VB3）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶 酸等。
（三）植物生长调节物质：
植物激素是植物代谢中产生的天然化合物，它能 直接影响植物细胞的分化、分裂以及影响植物的形 态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌 发等生理活动。
在植物组织培养中，主要通过植物激素及生长调 节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。
包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根 芽的分化以及体细胞胚胎发生等。
体视显微镜、普通显微镜、倒 置显微镜、荧光显微镜、配套显 微照相装置、普通相机或数码相 机、切片机及配套制片及染色用
品等。
体视显微镜
植物组织培养 第一章 实验室的设计于基本操作
15 20 25 30 35 40
(2) 不耐热的物质将采用过滤灭菌
• 一些生长因子 ，如：生长素（ IAA ）、赤霉素 （GA3）、玉米素（ZT）、脱落酸（ABA）、尿素 和某些维生素是不耐热的，不能用高压灭菌处理。 • 通常采用过滤灭菌的方法。 • 防细菌滤膜其孔径尺寸小于或等于0.45微米。
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
4、鉴定室(细胞学观察室)
• 是观察和鉴定培养物的诱导、分化、遗 传物质转移的场所。 • 主要设备：高倍显微镜、倒置显微镜、 实体显微镜、恒温箱、以及做植物切片 全套设备等。
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
5、驯化移植室（温室、大棚等）
• 主要用于试管苗的移栽管理，以及实验 材料的准备。 • 主要设备：温室、大棚、荫棚、移植床、 钵、盆、各种基质、喷灌设施等。
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
移栽 苗床
陈传红 制作
www.ecit.edu.cn 2007 / 5
二、基本操作
• 1. 洗涤 • 2. 灭菌 植物组织培养中最致命的危害是污染，因 此，灭菌工作是极其重要的。 • 有菌的范畴：凡是暴露在（未经处理的）空气中 的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的 表面，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证 实之前，也应以有菌物休看待。 • 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体， 或经其它物理的或化学灭菌方法处理过后的物体， 是无菌的。
植物组织培养的基本技术
2. 主要仪器设备及用品：
冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、 水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电 炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧 杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装 用品等。
第4页，共77页。
百分之一天平
千分之一天平
第5页，共77页。
万分之一天平
度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用
糖浓度高低直接影响形态建成。
第24页，共77页。
元素名称
N
大量
P
元素
K
(≥0.5mmol/L) Ca
Mg
S
Fe 微量 B 元素 Mn
(≤ 0.5mmol/L) Cu
Mo
Cl
无机盐
添加形式
KNO3,NH4NO3
KH2PO4 NaH2PO4
KCl KNO3
CaCl2 ·2H2O
烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵
1.0 1.0 0.1 0.1－1.0 10
第42页，共77页。
表3 N6培养基的组成和配方
组成成分
数量(mg/l) 组成成分
(mg/l)
KNO3
2.3
Na2－EDTA
37.3
CaCl2·2H2O
166
FeSO4·7H2O
27.8
MgSO4·7H2O
冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、 水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电 炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧 杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装 用品等。
第4页，共77页。
百分之一天平
千分之一天平
第5页，共77页。
万分之一天平
度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用
糖浓度高低直接影响形态建成。
第24页，共77页。
元素名称
N
大量
P
元素
K
(≥0.5mmol/L) Ca
Mg
S
Fe 微量 B 元素 Mn
(≤ 0.5mmol/L) Cu
Mo
Cl
无机盐
添加形式
KNO3,NH4NO3
KH2PO4 NaH2PO4
KCl KNO3
CaCl2 ·2H2O
烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵
1.0 1.0 0.1 0.1－1.0 10
第42页，共77页。
表3 N6培养基的组成和配方
组成成分
数量(mg/l) 组成成分
(mg/l)
KNO3
2.3
Na2－EDTA
37.3
CaCl2·2H2O
166
FeSO4·7H2O
27.8
MgSO4·7H2O
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显微镜 类型： 倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 体视显微镜
原生质体观察 染色体和叶片气孔观察 细胞活力观察 病毒检测、细胞器变化 形态分化的实体观察
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（四）培养设备
1.空调 作用：控制培养温度 2.加湿器和去湿机 控制培养室内湿度状况
（2）温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备
１.烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌
测定培养物的干重时烘干培
养材料。
2.灭菌锅
类型：普通医用消毒锅
大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3.超净工作台
陈列于操作室（接种室）内 类型：垂直式和水平式 作用：无菌操作
室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种 接种器械等。
无菌室（一）
无菌室（二）
（4）培养室
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养 室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气 扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板 和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设， 一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养 室外应有一预备间或走廊。
第一章 组培的基本条件及一般技术
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所， 应能满足清洗、培养基制备、储藏、 无菌操作、培养、鉴定等多方面的 工作。
第一章 组培的基本条件及一般技术
1.构成与配置
准备室
缓冲室 基本实验室 无菌操作室
实验室 组成
培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
第一章 组培的基本条件及一般技术
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工 作方便，防止污染。 ▪ 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 ▪ 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒 排，引起日后工作混乱 ▪ 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结 构设计，达到严格无菌的条件
3） 消毒间
配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细 菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择 应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实 验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的 实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。
如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成 一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房 间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
2）培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器设 备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养 基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电 炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、 烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以 体积180-200L为宜，用于储存培养基母液、 激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保 存植物材料。天平应有不同感量。
（1）准备室
▪ 所需器具的清洗、干燥和保存 ▪ 培养基的配制和灭菌 ▪ 生理生化测定等
组织培养准备实验室
1）洗涤间
根据工作量的大小决定其大小，一般面 积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置 专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中 央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型 玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台 洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤 对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应 配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗 器等。地面应耐湿并排水良好。
（二）药品贮存和配制仪器设备
1.冰箱 作用：低温保存材料，存
放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2.天平
陈列于制备室中 作用：称取大量元素、微量
元素、酶制剂
3.酸度计
陈列于制备室中 作用：测定培养基及酶制剂的pH值
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计
（三）观察分析仪器设备
培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、 生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定 在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距 离在20cm，光照强度为2000-3000lx。
培养室
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
2．辅助实验室
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁 4.0 架 m
电 炉
门
实 验 台
准备室
4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 无菌台 仪
器 无菌室
柜
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
A Glimpse of Plant Tissue Culture
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一章植组物培组的基织本培条件养及一般技术
▪ 第一章 植物组织培养实验室的构建 和操作技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一节 实验室及主要设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
主要内容
植物组织培养的设计原则 组培室的组成及其功能 无菌操作设备 常用工具 常用仪器设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
（1）鉴定室
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定 和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器 不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系 统等。
生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室 中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养 物的有效成分随时进行取样检查。 离心机、酶联免 疫检测仪、天平、PCR仪等。
（2）缓冲室（注意门的朝向）
• 工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口 罩
• 功能 减少人体从外界带入的尘埃等污染物。
• 要求 缓冲间需3-5平方米，应保持清洁无菌； 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 1-2盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进 行灭菌。
（3） 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫 接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于 准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与 接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无 菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设 有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操 作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入 操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。