常见猪病的检测引物汇总

田小艳猪流行性腹泻病毒( Porcine epidemic diarrhea virus ,PEDV) 、猪传染性胃肠炎病毒( Porcine t rans2 missible gast roenteritis virus , TGEV) 和猪轮状病毒( Porcine rotavirus , PRV) 是3 种引起猪病毒性腹泻的重要病原

引物设计与合成根据GenBank 中PRV、TGEV 和PEDV 核酸序列分别设计引物: 上游P1 : 5′-AAAGATGCTAGGGACAAAATTG-3′;下游P2 :

5′-TTCAGATTGTGGAGCTATTCCA -3′。

P1/ P2 为PRV 检测引物,扩增VP6 基因片段的309bp 。

上游P3 : 5′-GATGGCGACCAGATAGAAGT -3′

下游P4 : 5′-GCAATAGGGTTGCTTGTACC -3′。P3/P4 为TGEV 检测引物,扩增N 基因保守片段的612bp 。

上游P5 : 5′-GAAA TAACCA GGGTCGTGGA-3′; 下游P6 : 5′- GCTCACGAACA GCCACA TTA -3′。P5/ P6 为PEDV 检测引物,扩增N 基因保守片段的492 bp 。

张坤,本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒( PEDV) 、猪传染性胃肠炎病毒( T GEV) 和猪A群轮状病毒( GAR) 的多重RT PCR 检测方法

PEDV

P1 5-TTCGGTTCTATTCCCGTTGATG-3

P2 5-CCCATGAAGCACTTTCTCACTATC-3

扩增长度663

TGEV

P3 5 TT ACAAACTCGCT AT CGCAT GG3

P4 5 TCTT GTCACAT CACCTTT ACCTGC3

扩增长度528

GAR

P5 5 CCCCGGT AT TGAATATACCACAGT3

P6 5 TTT CTGT TGGCCACCCTT TAGT3

扩增长度333

李敬双猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因序列及其相关的RT-PCR检测方法

TGEV P1：5′-TTGTCAACACACAAGGGCAAGC-3′

TGEV P2：5′-CAAGTCCAAAAGTGCGATCA CC-3′

PEDV P1：5′- TCGTTTTGGGTGGTTACCTAC-3′

PEDV P2：5′- AGTGGCAAATACATTGGCAGCG-3′

扩增片段长度TGEV 为426 bp，PEDV 为584 bp。

由大连宝生物公司合成。

何玲,JXA1 变异野毒与JXA1-R 疫苗毒的快速鉴别体系, 其目的片段大小分别为400、290 bp,

根据PRRSV 经典毒株CH1a( GenBank 登录号: AY032626) 、VR2332 ( GenBank

登录号: EF536003) 与变异毒株GD ( GenBank 登录号: EU109503) 、HuN4( GenBank 登录: 号EF635006) 、PJX143 ( GenBank 登录号: EF488048)、JXA1 ( GenBank 登录号: EF112445) 的序列差异设计了针对变异毒株的特异性引物, BYFP: 5-GTCCTAACGGTTCGGAAGAAAC-3; BYRP: 5-GAGCTGAGTATTTTGGGCGTGT-3。根据疫苗毒JXA1R ( GenBank 登录号: FJ548853) 与野毒株的序列差异设计了PRRSV 疫苗毒的特异性引物, H MFP: 5-GAATGTTCGCACGGTCTC-3; HMRP:5-TCAAGGAAATGGCTGGT-3。

PRRSV JXA1 与JXA1-R 目的基因大小分别为400、290 bp, 与预期大小相符。疫苗毒JXA1-R 用BYFP/ BYRP 也能扩增出大小为400 bp 的目的条带, 但是变异野毒JXA1不能扩增出引物对HMFP/ HMRP 的目的片段( 图1)

王鑫,参考VR2332 ( AY150564) 、CH1a ( AY032626) 、JXA1 ( EF112445) 及

HUN4( EF635006) 等毒株的ORF5 基因序列, 设计1 对引物。P1:

5-TCTTTTTGGCATACTGTTGGCA,P2: 5-GCCGTGCTATCAAGACAGAAGT。在美洲株VR2332 的位置分

别为13 750~ 13 772, 14 394~14 416跨越整个ORF5 区域, 扩增片段长666 bp。引物送长春联星生物制品公司合成。

猪瘟诊断：

扩增CSFV NS5B 区599 bp 目的片段。

P1 TRACCAYGCAYATGWCAGAAGTACC 11053 － 11077

P2 AGTCGACTTCCCTGGTTTCACTTG 11628 － 11651