二章细菌感染实验诊断

二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。 脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培 养的标本保存时间不应超过24h。对环 境敏感的细菌应保温并立即送检。
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全 防护。切勿污染环境。对于烈性传染病 标本运送时更要由专人运送，严格按规 定包装。
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管 内运送，有时可直接用抽取标本的注射 器运送。
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的 动力及运动状况。可对某些病原 菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特 征，故多用不染色标本作暗视野 显微镜检查。
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复 合染料。 1．碱性染料 电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌 均带负电荷，易与染料结合而着色。常 用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
2．酸性染料 电离后显色离子带负电荷， 易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有 负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆， 而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料 有伊红、刚果红等。
第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
第二章细菌感染实验诊断
疾病的种类不断发生变迁，传染病如 鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌 引起的内源性感染却明显增多。同时，新 的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、 耐药等又重新流行。
目前，临床遇到主要是条件致病菌， 引起的感染。正常菌群与病原菌的致病 性是相对的，因此，既不要轻易认为分 离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易 认为所发现的细菌就是该感染的病原菌， 必须结合临床进行进一步的诊断。
（一）细菌室的符合条件
1．细菌室必须安装严密的门窗，以防室 内环境受到外界的污染。且室内禁用 风扇，避免细菌的播散。
到目的即可。
3.综合考虑试验的敏感性和特异性。 敏感性=阳性结果数/感染病人数， 越高假阴性就越少。 特异性=阴性结果数/未感染病人数， 越高假阳性就越少。
三、常用诊断流程
1.双歧索引
用于相互区别比较容 易,有特征的细菌， 如革兰阴性杆菌初步 分群；对于相互区别 较难的细菌，鉴定项 目较多,用起来不太 方便。
组别 1 2 3 4 5
试验项目
硫化氢 苯丙氨酸 葡萄酸盐 靛基质 甲基红 枸橼酸盐 尿素 动力 产气 赖氨酸 鸟氨酸 棉子糖 山梨醇 侧金花醇 木胶糖
代码
4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1
结果
+ + + + + + + + + + -
结果代码
0 0 1 0 2 1 4 2 1 4 2 0 4 2 0
2.表解法：
将各种细菌及其多种特性列成矩阵表 格，使相互的区别点十分明显，便于 分析比较。此法对于相互区别比较复 杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。
3.数字编码鉴定法
将所得生化反应模式转化成数学 模式，可把细菌生化反应结果转化 成数字，经检索手册又可将转化成 细菌名称。与电脑分析软件配套， 形成了半自动或全自动细菌分析系 统。
总值 1 3 7 6采集的一般原则
1.病程早期、急性期或症状典型时， 使用抗生素前。
2.无菌采集 应无污染，严格进行无 菌操作。
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 适量标本，采集量不应过少。
4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。
第三节 细菌形态学检查
一、显 微 镜
1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌 均能清 楚看到。
2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋 体的形态及运动观察。
3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态 及某些内部结构。
4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用 于免疫荧光技术中。
5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显 微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后 者适于对细菌表面结构及附件观察。
3．复合染料(中性染料)及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的 复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、 姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染 料如荧光标记的抗体，荧光素常用 异硫氢基荧光素。这些染色常用于 某些特殊的染色技术中。
（二）常用的染色方法
在细菌感染标本的检查中，临床上常 用的染色方法有革兰染色、抗酸染色 和荧光染色。
此外还有： 鞭毛染色可观察有无鞭毛、鞭毛的位置及数量， 在细菌鉴定中很重要。 异染颗粒染色镜检异染颗粒，为临床早期诊断 白喉提供依据。
第四节细菌分离培养与接种技术
绝大多数细菌在适宜的条件下可以生长， 细菌感染性患者标本只有经过细菌的分 离培养、鉴定和药物敏感试验，才可对 感染性疾病进行病原学诊断并指导临床 用药。因此，细菌培养对疾病的诊断、 预防和治疗具有重要的作用。
2．抗酸染色
将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两 大类。因为大多数病原菌为非抗酸性，所 以抗酸染色不作为常规检查项目。
只用于结核病等检查。抗酸染色的鉴 定结果。对疾病的诊断和治疗具有重要参 考价值。
3．荧光染色
敏感性强，效率高而且容易观察结果，在 临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌 及痢疾志贺菌等的检测。
1．革兰染色
最经典、最常用的染色方法。在分离 培养前都要进行革兰染色、镜检。通 过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G菌两大类，可初步识别细菌，有助于 进一步鉴定。
结合细菌特殊结构及排列方式，对病 原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断 及治疗提供了依据。
革兰染色可为临床选择用药提供参考， 帮助临床制订有针对性的治疗方案。因为 G+菌和G-菌对抗生素敏感性不同，且致病 物质 及其作用机理也不同。