白芍提取物实验方案设计

白芍提取物实验方案设计

白芍的有效成分为芍药苷、白芍苷、氧化芍药苷和苯甲酰芍药苷等单萜类化合物, 简称白芍总苷。根据文献报道, 在实际生产中常用一定浓度的乙醇或水提取, 通过对芍药苷的溶出率进行比较, 发现以70%乙醇提取白芍测得芍药苷含量最高。采用大孔吸附树脂对白芍提取物进行分离、纯化,其中对白芍提取物中苷类成分分离纯化效果良好, 可除去淀粉等杂质。本研究通过正交试验设计和单因素考察相结合的方法, 以主要有效成分的含量作为评价指标,探讨了白芍总苷提取和纯化的工艺。

工艺流程：

一、药材的选择

白芍为2005年版药典收载的药材，为了选择含量稳定、收率高的适宜药材，分别对同仁、吉深、修正、吉林大药房四家药店的药材进行了比较和选择，芍药苷含量测定方法参照05年版药典。

二、提取工艺优选

1、提取溶剂比较

70%乙醇回流提取和水煎煮的比较。

2、醇提工艺优选

主要考察提取时加醇量, 提取时间及提取次数作为考察因素, 每个因素设计三个水平, 试验方案见表1。

表1 L9 (34 )正交试验设计因素水平表

水平加醇量A(倍) 提取时间B(h) 提取次数C(次)

1 2 3 4

6

8

1

2

3

1

2

3

实验结果以出膏率和芍药总苷含量作为评价指标, 并对试验结果进行方差分析，确定最佳提取工艺条件。

3、大孔树脂纯化工艺的选择

（1）吸附容量的确定

量取待上液, 分次通过预先处理好的大孔树脂柱。确定柱床体积, 分段收集流出液, 用薄层层析法对流出液进行鉴别，确定最大吸附量。

（2）乙醇洗脱溶剂的选择

分别选择10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%乙醇洗脱大孔树脂柱，用薄层法对流出液进行鉴别。

（3）氨水洗脱体积和乙醇洗脱体积的确定

分段收集流出液, 对流出液进行薄层鉴别，确定洗脱体积。

（4）流速的确定

选择适宜的流速，确定每分钟流量。

三、白芍提取工艺的确证

按照拟定的制备工艺制备三批样品, 对样品中芍药苷和总苷进行含量测定, 根据白芍材料及成品中芍药苷含量和成品得率, 计算提取物样品芍药苷转移率。

四、含量测定方法

芍药苷含量测定方法参照05年版药典。

总苷采用碱水解法，参照文献以高效液相来测，通过系统适应性实验确定提取物总苷含量的测定方法：

色谱条件色谱柱:C

(250 mm ×4.6 mm, 5μm) ;柱温30℃;流动相:乙腈-

18

0.1%磷酸(25∶75) ;检测波长: 230 nm; 流速:1.0 ml/min。

对照品的制备精密称取苯甲酸对照品，加水制成浓度为每1mL含10μg的苯甲酸对照品溶液。

样品的制备精密称取白芍总苷提取液相当于0.2g药材,置蒸发皿中蒸干残渣加1%NaOH溶液10 ml,溶解，精密量取0.5 ml至10 ml容量瓶中,加入乙腈-0.1%磷酸(25∶75)8 ml, 摇匀，再加1 mol/L的盐酸调节PH值为3~6,用流动相定容至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。

五、白芍提取物质量标准研究

1、芍药苷的含量测定

2、方法学考察

（1）线性范围考察

（2）精密度考察

（3）重现性试验

（4）稳定性实验

（5）加样回收率实验