专题一、基因工程知识点归纳
基因工程知识点总结归纳(更新版)
基因工程绪论1、克隆(clone):作名词:含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。
作动词:基因的分离和重组的过程。
2、基因工程(gene engineering):体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中,构成遗传物质的新组合,并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内,且能稳定的遗传。
供体、受体和载体是基因工程的三大要素。
3、基因工程诞生的基础三大理论基础:40年代发现了生物的遗传物质是DNA;50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理;60年代确定遗传信息的遗传方式。
以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。
三大技术基础:限制性内切酶的发现;DNA连接酶的发现;载体的发现3、基因工程的技术路线:切:DNA片段的获得;接:DNA片段与载体的连接;转:外源DNA片段进出受体细胞;选:选择基因;表达:目的基因的表达;基因工程的工具酶1、限制性内切酶(restriction enzymes):主要是从原核生物中分离纯化出来的,是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链的核酸内切酶。
2、限制酶的命名:属名(斜体)+种名+株系+序数3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割4、同裂酶:来源不同,其识别位点与切割位点均相同的限制酶。
5、同尾酶:来源不同,识别的靶序列不同,但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。
6、限制性内切酶的活性:在适当反应条件下,1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物,所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。
7、星号活性:改变反应条件,导致限制酶的专一性和酶活力的改变。
8、DNA连接酶的特点:具有双链特异性,不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA,连接反应是吸能反应,最适反应温度是4至15度,最常用的是T4连接酶。
9、S1核酸酶:特异性降解单链DNA或RNA。
10、RNAH降解与DNA杂交的RNA,用于cDNA文库建立时除去RNA以进行第二链的合成。
专题一基因工程知识点汇总
专题一基因工程知识点汇总1.1 DNA重组技术的基本工具一、基因工程的原理:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外和,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在水平上进行设计和施工的,因此又叫做。
1.“分子手术刀”——(1)来源:主要是从中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开,因此具有性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:和。
(4)这类酶在生物体内能将外来的DNA切断,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保持细胞原有的遗传信息。
2.“分子缝合针”——(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:①相同点:都缝合。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于,只能将双链DNA片段互补的末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合,但连接的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接的末端,形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体(1)基因操作过程中使用载体两个目的:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。
(2)现在通常使用的载体是,它是一种相对分子质量较小、独立于之外,并具有自我复制能力的 DNA分子的环状DNA,有的细菌中有一个,有的细菌中有多个。
(3)质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以复制,也可整合细菌拟核DNA中,随着拟核DNA的复制而复制。
(4)其他载体还有和等。
(5)作为载体必须具备以下条件:①能够在宿主细胞中;②具有多个,以便与外源基因连接;③具有某些,便于进行筛选,如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。
高中生物选修三专题一基因工程知识点
高中生物选修三专题一基因工程知识点专题一基因工程基因工程的概念基因工程就是指按照人们的心愿,展开严苛的设计,通过体外dna重组和转基因技术,剥夺生物以代莱遗传特性,缔造出以合乎人们须要的代莱生物类型和生物产品。
基因工程就是在dna分子水平上展开设计和施工的,又叫作dna重组技术。
(一)基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内乌酶(管制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能辨识双链dna分子的某种特定的核苷酸序列,并且并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
(3)结果:经管制酶研磨产生的dna片段末端通常存有两种形式:黏性末端和平末端。
黏性末端:当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时,被限制酶切开的dna两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。
平末端:当管制酶从辨识序列的中心轴线处剖开时,剖开的dna两条单链的切口,就是平坦的,这样的切口叫做元显恭末端。
2.“分子缝合针”——dna连接酶(1)两种dna连接酶(e·colidna连接酶和t4-dna连接酶)的比较:①相同点:都缝合磷酸二酯键。
②区别:e·colidna连接酶源于大肠杆菌,就可以将双链dna片段优势互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而t4dna连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与dna聚合酶促进作用的优劣:dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。
dna连接酶是(1)载体具有的条件:①能够在受到体细胞中激活并平衡留存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源dna片段插入。
③具备标记基因,可供重组dna的鉴别和挑选。
④对受体细胞无害。
(2)最常用的载体就是质粒,它就是一种外露的、结构直观的、单一制于细菌染色体之外,并具备自我复制能力的双链环状dna分子。
高中生物选修专题一基因工程
• 什么叫黏性末端?
被限制酶切开的DNA两条单链的切口, 带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互 补配对,这样的切口叫黏性末端。
什么叫平末端?
当限制酶从识别序列的中心轴线处 切开时,切开的DNA两条单链的切口,是 平整的,这样的切口叫平末端。
限制性内切酶
特点:特异性,即识别特定核苷酸序列, 在特定的切点切割。 举例:大肠杆菌的一种限制酶( EcoRⅠ) 能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开形 成黏性末端,SmaⅠ能识别CCCGGG序列, 并在C和G之间切割形成平末端 。
②DNA连接酶——分子缝合针:
E.coliDNA连接酶:只能连黏性末端。
T4DNA连接酶:还能连平末端,但效率较低。
来源:前者源于大肠杆菌;后者源于T4噬菌 体。 大 肠 杆 菌
T4 噬 菌 体
EcoRI切割
双链断开
不同来源DNA片断结合
3、分子运输车—运载体
要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在 乙生物体内进行表达,首先得将这个基因送到 乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的 工具就是运载体。
新式的基因 枪靠高压氦气 为动力,将微 粒载片上的D NA送出,成 功率在15% 左右。小图为 微粒载片和阻 挡网。
手提式基因抢
花粉管通道法: 将目的基因导入植物细胞 ①操作方法: 在植物花受粉后,花粉形成花粉管还末愈合前 期,剪去柱头,然后,滴入DNA(含目的基因)使 目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ②特点:十分简便经济 ③例:转基因抗虫棉
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 基因
操作对象
操作水平 基本过程 结果
DNA分子水平
剪切 → 拼接 → 导入 → 表达
基因工程知识总结 好
选修三专题一基因工程1基因工程的工具1.1几种酶的比较被修饰。
②限制酶是一类酶,而不是一种酶。
③DNA连接酶发挥作用时,不需要模板,而DNA聚合酶则需要模板,二者不同。
1.2确定限制酶种类的方法1.2.1单酶切及筛选若用同一种限制酶切割质粒和目的基因形成相同的四个黏性末端,因而可能出现多种连接方式。
如:①质粒和质粒;②目的基因和目的基因;③质粒的自身环化,目的基因的自身连接;④质粒与目的基因的连接。
质粒与目的基因的连接又会出现正向连接和反向连接两种,目的基因与质粒的反向连接则导致目的基因不能成功表达。
1.2.2双酶切及筛选因为用单酶切会出现质粒与目的基因的任意连接,所以在实际操作中多使用双酶切。
双酶切可以避免质粒的自身环化,目的基因的自身连接和目的基因和质粒的反向连接,而目的基因与目的基因的连接因为没有抗生素抗性基因(标记基因)所以可以在含有该抗生素的培养基上去除,故只剩下质粒与质粒,以及质粒与目的基因的重组质粒。
1.2.3具体方法(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类①应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ。
②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。
③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致,以确保具有相同的黏性末端。
②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;如果所选酶的切点不止一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制原点,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
【例题】图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。
现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。
高二基因工程知识点总结
高二基因工程知识点总结基因工程是一门重要的生物学领域,它研究如何改变生物体的遗传组成,以创造新的生物体或改变现有生物体的性状。
在高二生物学学习中,掌握基因工程的知识点是非常重要的。
本文将总结高二基因工程的知识点,帮助同学们复习和理解相关内容。
一、基因工程的基础知识1. DNA的结构和功能DNA是生物体内存储遗传信息的分子,由两条互补的链组成的双螺旋结构。
DNA的功能主要包括遗传信息的传递和蛋白质合成的控制。
2. 基因的概念基因是DNA分子上特定位置的一段序列,它携带着生物体的遗传信息,决定个体的性状和功能。
3. 基因突变基因突变是指DNA序列发生改变的现象,可以包括点突变、缺失、插入等多种形式。
基因突变是基因工程研究中的重要基础。
二、基因工程方法1. 限制性内切酶限制性内切酶是一类能够特异性切割DNA分子的酶,通过识别特定的DNA序列,将DNA切割成特定的片段。
限制性内切酶在基因工程中常用于DNA分子的切割和重组。
2. DNA连接酶DNA连接酶是一类能够将DNA片段连接起来的酶,通过加入适当的连接酶,可以实现不同DNA片段的拼接。
DNA连接酶在基因工程实验中起到重要的作用。
3. DNA电泳DNA电泳是一种利用电场作用分离DNA片段的技术。
通过将DNA样品放置在聚丙烯酰胺凝胶上,施加电场后,DNA片段根据大小和电荷迁移速度的差异进行分离。
4. PCR技术PCR技术(聚合酶链反应)是一种通过体外复制DNA片段的方法。
通过PCR反应,可以高效地扩增特定的DNA序列,为基因工程研究提供了重要的工具。
5. 基因克隆基因克隆是指将目标基因从一个生物体中提取,并插入到另一个生物体中的过程。
通过基因克隆,可以实现对目标基因的研究和应用。
三、基因工程的应用1. 转基因植物转基因植物是指通过基因工程方法将外源基因导入植物细胞中,从而使植物具有特定的性状。
转基因植物在农业生产中具有广泛应用,可以增加作物的产量和抗病虫害能力。
专题1 基因工程-2021年高考生物选修3知识点归纳(解析版)
专题 1 基因工程基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过___基因拼接_和_DNA重组_等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在_DNA 分子_水平上进行设计和施工的,因此又叫做_转基因技术_。
科技探索之路基础理论和技术的发展催生了基因工程。
20 世纪中叶,基础理论取得了重大突破●DNA 是遗传物质的证明1944 年,艾弗里等人通过不同类型肺炎双球菌的转化实验,不仅证明了生物的遗传物质是DNA,还证明了___DNA是主要遗传物质_。
●DNA 双螺旋结构和中心法则的确立1953 年,沃森和克里克建立了___DNA双螺旋结构___模型。
1958 年,梅塞尔松和斯塔尔用实验证明_DNA复制的方式-----半保留复制原则。
随后不久确立的中心法则,解开了 DNA 复制、转录和翻译过程之谜,阐明了遗传信息流动的方向。
●遗传密码的破译1963 年,尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码。
1966 年,霍拉纳用实验证实了尼伦伯格提出的遗传密码的存在。
这些成果不仅使人们认识到,自然界中从微生物到人类共用一套遗传密码_,而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。
技术发明使基因工程的实施成为可能。
●基因转移载体的发现1967 年,罗思和赫林斯基发现细菌拟核 DNA 之外的质粒有_自我复制_能力,并可以在_细菌细胞间转移,这一发现为基因转移找到了一种运载工具。
●工具酶的发现1970 年,阿尔伯、内森斯,史密斯在细菌中发现了第一个限制性内切酶(简称限制酶)后,20 世纪 70 年代初相继发现了多种限制酶和连接酶,以及逆转录酶,这些发现为 DNA 的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
●DNA 合成和测序技术的发明自 1965 年,桑格发明氨基酸序列分析技术后,1977 年,科学家又发明了 DNA 序列分析的方法,为基因序列图的绘制提供了可能,之后,DNA 合成仪的问世又为引物、探针和小分子DNA基因的获得提供了方便。
生物 选修三 知识点
高中生物选修3基础知识总结专题一基因工程原理:基因重组基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。
定向改造生物的遗传性状。
(一)基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列(回文序列),并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
(注意“酯”的写法)(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:①相同点:都缝合磷酸二酯键。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体,能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)DNA聚合酶、RNA聚合酶和DNA连接酶的比较:3.“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA 片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
④安全无毒⑤大小合适(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
(3)其它载体:λ噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1.目的基因是指:编码蛋白质的结构基因或具有调控作用的因子。
2.目的基因的获取有三种方法:从基因文库中获取;PCR扩增目的基因;人工化学法合成。
原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。
基因工程知识点总结
基因工程知识点总结一、基因工程的概念基因工程,又称基因拼接技术或 DNA 重组技术,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外 DNA 重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
简单来说,基因工程就是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。
二、基因工程的工具(一)“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)1、来源:主要从原核生物中分离纯化出来。
2、特点:能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
3、作用结果:产生黏性末端或平末端。
(二)“分子缝合针”——DNA 连接酶1、分类:E·coli DNA 连接酶和 T4DNA 连接酶。
2、作用:将两个具有相同末端的 DNA 片段连接起来。
(三)“分子运输车”——载体1、作用:将目的基因送入受体细胞。
2、具备条件:能在受体细胞中复制并稳定保存。
具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA 片段插入。
具有标记基因,便于筛选。
3、种类:质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
其中质粒是基因工程中最常用的载体。
三、基因工程的基本操作程序(一)目的基因的获取1、从基因文库中获取基因文库包括基因组文库和部分基因文库(如 cDNA 文库)。
基因组文库包含了一种生物的全部基因;cDNA 文库只包含了一种生物的部分基因,是由 mRNA 反转录得到的 DNA 组成。
2、利用 PCR 技术扩增目的基因PCR 是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。
原理:DNA 双链复制。
条件:模板 DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定 DNA 聚合酶(Taq 酶)等。
3、人工合成如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可以通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成。
(二)基因表达载体的构建(核心步骤)1、目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。
高中生物基因工程知识点总结
高中生物基因工程知识点总结基因工程,作为现代生物技术的核心领域之一,在高中生物课程中占据着重要的地位。
它不仅具有深刻的理论意义,还在农业、医药等众多领域有着广泛的实际应用。
下面我们就来详细梳理一下高中生物中基因工程的相关知识点。
一、基因工程的概念基因工程,又叫基因拼接技术或 DNA 重组技术,是指按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的遗传性状。
二、基因工程的基本工具1、限制性核酸内切酶(限制酶)限制酶能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
它具有特异性,即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割 DNA 分子。
2、 DNA 连接酶DNA 连接酶的作用是将两个具有相同末端的 DNA 片段连接起来,形成磷酸二酯键。
3、运载体常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等。
运载体需要具备的条件有:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA 片段插入;具有标记基因,便于筛选。
三、基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来,也可以用人工的方法合成。
常用的方法有:从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增目的基因、通过化学方法人工合成。
2、基因表达载体的构建这是基因工程的核心步骤。
基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出 mRNA;终止子是转录终止的信号;标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
3、将目的基因导入受体细胞将目的基因导入植物细胞常用的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;导入动物细胞常用的方法是显微注射法;导入微生物细胞常用感受态细胞法。
4、目的基因的检测与鉴定检测目的基因是否导入受体细胞可以采用 DNA 分子杂交技术;检测目的基因是否转录出 mRNA 可以采用分子杂交技术;检测目的基因是否翻译成蛋白质可以采用抗原抗体杂交技术;还可以进行个体生物学水平的鉴定,比如抗虫或抗病的接种实验。
生物选修三 专题一 基因工程
基因工程的操作工具
基因的“剪刀”──限制性核酸内切酶
大肠杆菌的一种ECORI限制酶识别GAATTC序列,
并在G和A之间切开)。
基因工程的操作工具
基因的“剪刀”──限制性核酸内切酶
酶切位点:特定序列核苷酸的磷酸二酯键
基因工程的操作工具
黏性末端:
被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个 伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口 叫黏性末端。 酶切位点
黏性末端
酶切位点
不同的限制性内切酶得到的黏性末端不同
SmaI限制酶的作用
SmaI只能识别CCCGGG序列,并在C和G之间切开。 在G与C之 间切割
中轴线
SmaI限制酶的作用
平末端:当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时 ,切开的DNA两条单链的切口是平整的,这样的切 口叫平末端。
平末端
平末端
SmaⅠ
G AA T T C
G AA T T C C T T AA G
C T T AA G
G
AA T T C G
G
AA T T C G
C T T AA
C T T AA
GA A T T C
C T T A AG
基因工程的操作工具
基因的针线──DNA连接酶
DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起 来,即把梯子两边扶手的断口连接起来(形成磷酸二酯 键),这样一个重组的DNA分子就形成了。
种生物上并成功表达?
1、大多数生物的遗传物质都是DNA,且主要为双螺 旋结构,即不同生物的DNA分子基本结构是相同的, 都遵循碱基互补配对原则 。所以不同的生物DNA可
以嫁接。
2、地球上的所有生物共用一套遗传密码,所以,一
基因工程知识点-导学案
于和被切开的磷酸二酯键。
注意:比较有关的酶(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成。
(2)DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解旋成长链,作用的部位是碱基和碱基之间的。
注意:使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的、重金属盐的作用下,也可使DNA解旋。
(3)DNA聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链,需要有。
(4)DNA连接酶:是通过键连接双链DNA的缺口,不需要。
(5)限制性酶:使DNA分子上的特定位点的断开。
3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”(1)分子运载车的分类:①质粒:常存在于细胞和酵母菌中,是一种分子质量的状的裸露的DNA 分子,独立于拟核之外。
②病毒:常用的病毒有、等。
(2)运载体使用的目的:①是用它做运载工具,将转运到宿主细胞中去。
②是利用它在受体细胞内对进行大量复制。
(3)作为运载体必须具备的条件:①在宿主细胞中保存下来并②有一个或多个切点。
目的是使插入。
③有一定的,便于筛选目的基因。
【知识点三】基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作步骤主要包括:;;;。
1.目的基因的获取:①方法:、、。
②PCR技术:原理。
条件:;;;过程:①DNA高温(℃)受热解旋为单链、②冷却(℃)后与单链相应互补序列结合、③中温(℃)在DNA聚合酶作用下互补链。
或简述为高温,低温,中温三个阶段。
2.基因表达载体:①功能:使目的基因在受体细胞中;可以给下一代;使目的基因能够和发挥作用。
②基因表达的载体的组成: + + +3.转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内和的过程。
(1)导入植物细胞:①法(表达载体导入农杆菌,再让农杆菌感染植物细胞。
是植物基因工程中的常用方法)这是双子叶植物和裸子植物中常用的基因转化方法,原因是:这些植物在受到伤害时,细胞能产生物质,该物质能吸引,使侵入这种植物细胞。
②法,这是单子叶植物中常用的基因转化方法;但成本高。
③法,这种方法十分简便经济,我国的转基因抗虫棉就是用这种方法得到的。
高中生物专题一基因工程详细知识点人教版选修
1.基因工程〔DNA重组技巧/基因拼接技巧〕基因工程是指依照人们的欲望,进展严厉的计划,并经过体外DNA重组跟转基因等技巧,给予生物以新的遗传特征,从而制造出更契合人们需求的新的生物范例跟生物产品。
因为基因工程是在DNA分子程度长进展计划跟施工的,因而又叫做DNA重组技巧或基因拼接技巧。
2.DNA重组技巧的根本东西①、“分子手术刀〞——限度性核酸内切酶〔限度酶〕A、感化——限度性核酸内切酶能识不双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并在使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开B、限度性内切酶的切割方法:①在核心轴线两侧将DNA切开,瘦语是黏性末了。
②沿着核心轴线切开DNA,瘦语是平末了。
年夜肠杆菌的一种限度酶〔EcoRⅠ)能识不GAATTC序列,SmaI识不CCCGGG序列:他们识不的核苷酸序列差别,然而切点基本上在G↓C之间。
C、比拟有关的DNA酶〔1〕DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,完全水解成膦酸、脱氧核糖跟含氮碱基〔2〕DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,感化的部位是碱基跟碱基之间的氢键。
留意:使DNA解成两条长链的办法除用解旋酶以外,在恰当的高温〔如94℃〕、重金属盐的感化下,也可使DNA解旋。
〔3〕DNA聚合酶:能将单个的核苷酸经过磷酸二酯键衔接成DNA长链。
〔4〕DNA衔接酶:是经过磷酸二酯键衔接双链DNA的缺口。
留意比拟DNA聚合酶跟DNA衔接酶的异同点。
②.DNA衔接酶——“分子缝合针〞〔1〕DNA衔接酶的分类:E.coliDNA〔年夜肠杆菌〕衔接酶跟T4DNA〔T4噬菌体〕连接酶。
〔2〕感化及感化部位:E.coliDNA衔接酶感化于黏性末了被切开的磷酸二酯键,T4DNA衔接酶感化于黏性末了战争末了被切开的磷酸二酯键〔平末了较弱〕。
③.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车〞〔1〕分子运载车的分类:①质粒:常存在于原核细胞跟酵母菌中,是一种分子品质较小的环状的暴露的DNA分子,独破于拟核之外。
专题一、基因工程知识点归纳
专题一基因工程【高考目标定位】1、专题重点:DNA重组技术所需的三种基本工具;基因工程的基本操作程序四个步骤;基因工程在农业和医疗等方面的应用;蛋白质工程的原理。
2、专题难点:基因工程载体需要具备的条件;从基因文库中获取目的基因;利用PCR技术扩增目的基因;基因治疗;蛋白质工程的原理。
二【课时安排】2课时三【考纲知识梳理】第1节DNA重组技术的基本工具教材梳理:知识点一基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA 重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做DNA重组技术。
注意:对本概念应从以下几个方面理解:知识点二基因工程的基本工具1•限制性核酸内切酶一一“分子手术刀”(1 )限制性内切酶的来源:主要是从原核生物中分离纯化来的。
(2)限制性内切酶的作用:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。
(3)限制性内切酶的切割方式及结果:①在中心轴线两侧将DNA切开,切口是黏性末端。
②沿着中心轴线切开DNA切口是平末端。
2.DNA连接酶一一“分子缝合针”(1)来源:大肠杆菌、T4噬菌体(2)D NA连接酶的种类:E.coliDNA 连接酶和T4DNA连接酶。
(3)作用及作用部位:E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键,T4DNA1接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。
注意:比较有关的DNA酶(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基(2)DNA军旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。
注意:使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温(如94C)、重金属盐的作用下,也可使DNA解旋。
高中生物基因工程知识点总结
高中生物基因工程知识点总结一、基因工程的概念基因工程,又称为重组 DNA 技术,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外 DNA 重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在 DNA 分子水平上进行的操作,它打破了物种之间的界限,实现了不同物种之间基因的重新组合。
二、基因工程的工具1、限制性核酸内切酶(简称限制酶)限制酶能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。
2、 DNA 连接酶DNA 连接酶的作用是将两个具有相同末端的 DNA 片段连接起来,形成磷酸二酯键。
根据来源不同,DNA 连接酶可以分为两类:E·coli DNA 连接酶和 T4DNA 连接酶。
3、运载体常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等。
运载体需要具备的条件有:能够在宿主细胞中复制并稳定保存;具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;具有标记基因,便于进行筛选。
三、基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取目的基因是指人们所需要的编码蛋白质的结构基因。
获取目的基因的方法主要有:从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增目的基因以及通过化学方法人工合成。
2、基因表达载体的构建基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。
一个基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等。
启动子是一段有特殊结构的 DNA 片段,位于基因的首端,是 RNA 聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出 mRNA。
终止子位于基因的尾端,也是一段有特殊结构的 DNA 片段,能终止转录。
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
3、将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞是基因工程的关键步骤。
根据受体细胞的不同,导入的方法也有所不同。
基因工程知识点全
第一章第二章第三章基因工程概述1.什么是基因工程,基因工程的基本流程?基因工程(Genetic engineering)原称遗传工程。
从狭义上讲,基因工程是指将一种或多种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。
因此,供体、受体和载体称为基因工程的三大要素。
1.分离目的基因2.限制酶切目的基因与载体3.目的基因和载体DNA在体外连接4.将重组DNA分子转入合适的宿主细胞,进行扩增培养5.选择、筛选含目的基因的克隆6.培养、观察目的基因的表达第四章基因工程的载体和工具酶1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件?具有对受体细胞的可转移性或亲和性。
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点。
具有合适的筛选标记。
分子量小,拷贝数多。
具有安全性。
2. 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型?1、自主复制性2、可扩增性3、可转移性4、不相容性主要类型有1.克隆质粒2.测序质粒3.整合质粒4.穿梭质粒5.探针质粒6.表达质粒3. 质粒的构建(1)删除不必要的DNA 区域,尽量缩小质粒的分子量,以提高外源DNA 片段的装载量。
一般来说,大于20Kb 的质粒很难导入受体细胞,而且极不稳定。
(2)灭活某些质粒的编码基因,如促进质粒在细菌种间转移的mob 基因,杜绝重组质粒扩散污染环境,保证DNA 重组实验的安全,同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应的基因,提高质粒的拷贝数(3)加入易于识别的选择标记基因,最好是双重或多重标记,便于检测含有重组质粒的受体细胞。
(4)在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割位点的DNA序列,即多克隆接头(Polylinker),便于多种外源基因的重组,同时删除重复的酶切位点,使其单一化,以便环状质粒分子经酶处理后,只在一处断裂,保证外源基因的准确插入。
(5)根据外源基因克隆的不同要求,分别加装特殊的基因表达调控元件。
高考生物基因工程知识点归纳总结
高考生物基因工程知识点归纳总结基因工程是一门应用领域广泛的生物学技术,涉及到基因的操作、复制、修饰和转移等过程。
在高考生物考试中,基因工程是一个重要的考点,掌握相关知识点对于提高成绩至关重要。
本文将对高考生物基因工程的知识点进行归纳总结,以帮助考生高效备考。
1. 基因工程的概念和意义基因工程是指通过对生物体的基因进行操作,改变其遗传信息,达到某种特定目的的技术手段。
其意义在于解决人类与生活相关的问题,如农业、医学、环保等领域。
2. DNA技术2.1 DNA提取和纯化DNA提取可通过溶解、离心、沉淀等步骤获得纯净的DNA。
纯化DNA时,可通过酚-氯仿提取法或凝胶电泳分离法来除去杂质。
2.2 DNA限制酶切割DNA限制酶是能切割特定DNA序列的一类酶。
常用的限制酶有EcoRI、BamHI等。
限制酶切割后得到的DNA片段可通过凝胶电泳分离。
2.3 DNA连接和重组DNA连接可使用DNA连接酶将不同来源的DNA片段连接成一个完整的DNA序列,从而实现DNA的重组。
2.4 DNA克隆技术DNA克隆是指将特定DNA片段复制成大量相同的DNA分子。
常用的DNA克隆方法有质粒载体法和核酸杂交法。
3. 基因组学和蛋白质组学3.1 基因组学基因组学是研究生物所有基因组的学科。
通过对基因组的测序和分析,可以了解生物的基因组结构和功能。
3.2 蛋白质组学蛋白质组学是研究生物体内全部蛋白质的学科。
通过对蛋白质组的分析,可以了解生物体内蛋白质的种类、结构和功能。
4. 基因工程在农业领域的应用4.1 转基因作物转基因作物是通过基因工程手段向作物中导入外源基因,使其具有抗虫、抗病、耐旱等性状,提高作物的产量和质量。
4.2 基因治理和基因编辑基因治理是通过基因工程手段修复作物中的功能缺陷基因,提高其抗性和适应性。
基因编辑则是通过CRISPR-Cas9等技术对作物的基因进行精确修饰,使其具有更好的性状和抗性。
5. 基因工程在医学领域的应用5.1 基因诊断和基因治疗基因诊断通过检测和分析个体的基因组,用于疾病的诊断和预测。
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专题一基因工程一【高考目标定位】1、专题重点:DNA重组技术所需的三种基本工具;基因工程的基本操作程序四个步骤;基因工程在农业和医疗等方面的应用;蛋白质工程的原理。
2、专题难点:基因工程载体需要具备的条件;从基因文库中获取目的基因;利用PCR技术扩增目的基因;基因治疗;蛋白质工程的原理。
二【课时安排】2课时三【考纲知识梳理】第1节DNA重组技术的基本工具教材梳理:知识点一基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做DNA重组技术。
注意:对本概念应从以下几个方面理解:知识点二基因工程的基本工具1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”(1)限制性内切酶的来源:主要是从原核生物中分离纯化来的。
(2)限制性内切酶的作用:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。
(3)限制性内切酶的切割方式及结果:①在中心轴线两侧将DNA切开,切口是黏性末端。
②沿着中心轴线切开DNA,切口是平末端。
2.DNA连接酶——“分子缝合针”(1)来源:大肠杆菌、T4噬菌体(2)DNA连接酶的种类:E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。
(3)作用及作用部位:E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键,T4DNA连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。
注意:比较有关的DNA酶(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基(2)DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。
注意:使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温(如94℃)、重金属盐的作用下,也可使DNA解旋。
(3)DNA聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。
(4)DNA连接酶:是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。
注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。
3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”(1)分子运载车的种类:①质粒:常存在于原核细胞和酵母菌中,是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子,独立于拟核之外。
②病毒:常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。
(2)运载体作用:①是用它做运载工具,将目的基因转运到宿主细胞中去。
②是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
(3)作为运载体必须具备的条件:①在宿主细胞中保存下来并大量复制②有多个限制性内切酶切点③有一定的标记基因,便于筛选。
思维探究:知识点3、4、5主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。
限制酶──“分子手术刀”,主要是介绍限制酶的作用,切割后产生的结果。
在这部分内容学习时,应关心的问题之一是:限制酶从哪里寻找?我们可以联想从前学过的内容──噬菌体侵染细菌的实验,进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。
那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭,有何保护机制?进而联想到可能是有什么酶来切割外源DNA,而使之失效,达到保护自身的目的”。
这样就对“限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。
基因进入受体细胞的载体──“分子运输车”的学习内容,不能仅仅着眼于记住这几个条件,而应该深入思考每一个条件的内涵,通过深思熟虑,才能真正明确为什么要有这些条件才能充当载体。
教材拓展:拓展点一限制酶所识别序列的特点限制酶所识别的序列的特点是:呈现碱基互补对称,无论是奇数个碱基还是偶数个碱基,都可以找到一条中心轴线,如图,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。
如:以中心线为轴,两侧碱基互补对称;以为轴,两侧碱基互补对称。
拓展点二DNA连接酶连接的是什么部位?DNA连接酶是将一段DNA片段3′端的羟基与另一DNA片段5′端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键,而不是连接互补碱基之间的氢键。
第2节基因工程的基本操作程序教材梳理:基因工程的基本操作步骤为四步曲:目的基因的获取;基因表达载体的构建;将目的基因导入受体细胞;目的基因的检测与鉴定。
一.目的基因的获取1.目的基因:主要是指编码蛋白质的结构基因。
2.目的基因的获取方法:基因组文库从基因文库中获取cDNA文库人工合成逆转录法、根据已知的氨基酸序列推测脱氧核苷(真核生物)序列、PCR技术扩增目的基因、DNA合成仪合成等。
注:需要重点复习的内容有:a基因组文库与部分基因文库的含义及区别(教材P10表格),建立基因文库的目的?如何从基因文库中获取目的基因?b逆转录法的过程cPCR技术(原理、场所、条件、过程、特点)DNA复制与PCR技术列表比较。
如下所示:(1)从基因文库中获取基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。
构建基因文库的目的:为了在不知目的基因序列的情况下,便于获得所需的目的基因。
基因组文库:含有一种生物的所有基因。
部分基因文库(如cDNA文库):含部分基因,可由mRNA反转录而来。
(2)利用PCR技术扩增目的基因PCR:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
原理:DNA双链复制原料:模板DNA;RNA引物;四种脱氧核苷酸;热稳定DNA聚合酶(Taq酶);方法:DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。
过程:热变性(90-95)、退火(55-60)、延伸(70-75)。
特点:指数形式扩增二.基因表达载体的构建(基因工程的核心—体外进行)1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在;可以遗传给下一代;使目的基因能够表达和发挥作用。
目的基因:根据需要来选择。
2.基因表达启动子:位于基因首端,RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动转录基因。
载体的组成终止子:位于基因尾端,使转录在所需要的地方停下来。
标记基因:鉴别受体细胞中是否含有目的基因。
3.方法:同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接。
目的基因与运载体结合(以质粒为运载体)4.条件:同种限制酶、DNA连接酶、(目的基因、启动子、终止子、标记基因)三.将目的基因导入受体细胞转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
①导入植物细胞:常用农杆菌转化法(将构建的载体导入农杆菌,再让农杆菌感染植物细胞),基因枪法、花粉管通道法。
(过程重点介绍)②导入动物细胞:显微注射法(将基因表达载体提纯,用显微仪注射到受精卵中)(过程重点介绍)③导入微生物细胞:Ca2+处理受体细胞成为感受态细胞,再进行混合。
提示:农杆菌转化法的原理是利用农杆菌(胞内寄生菌)对植物的感染而把目的基因导入受体细胞。
四.目的基因的检测和鉴定分子检测:导入检测+表达检测①导入检测:利用DNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的DNA杂交,看是否有杂交带。
②表达检测:目的为了检测是否转录出了mRNA,利用DNA-mRNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的mRNA 杂交,看是否有杂交带。
③表达检测:目的为了检测目的基因是否翻译成蛋白质。
抗体与蛋白质进行抗原-抗体杂交,看是否有杂交带。
个体水平的鉴定:进行抗虫、抗病的接种实验,根据其性状判断是否表达。
提示:①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA,然后高温解成单链,再与同位素标记的DNA探针杂交;②抗原-抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫,产生相应的抗体,并提取出而来的第3节基因工程的应用教材梳理:知识点一植物基因工程的应用植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力(如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等)以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。
1.提高抗逆性(1)常用抗虫基因:用于抗虫(杀虫)的基因主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。
(2)常用抗病基因:a.抗病毒基因有:病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因;b.抗真菌基因有:几丁质酶基因和抗毒素合成基因(3)其他抗逆基因:环境条件对农作物的生产会造成很大影响,并且这些影响是多方面的,因此,抗逆性基因也有多种多样,如:抗盐碱和干旱的调节细胞渗透压基因、抗冻基因、抗除草剂基因等等。
2.改良植物品质由于人们的食品含有的营养不平衡,不能满足人们对食品的要求,这样,可以通过转基因技术,使植物能够合成某些本来不能合成的物质。
如科学家将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中,或者改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性,以提高氨基酸的含量。
知识点二动物基因工程的应用1.用于提高动物生长速度:由于外援生长激素基因的表达可以使转基因动物生长得更快,将这类基因导入动物体内,以提高动物的生长速率。
如:转基因绵羊和转基因鲤鱼。
2.用于改善畜产品的品质:基因工程可用于改善畜产品的品质。
如:有些人对牛奶中的乳糖不能完全消化或食用后会出现过敏、腹泻、恶心等不适症状,科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组,这样所获得的牛奶其成分不受影响,但乳糖的含量大大减低。
3. 生产药物基因工程不但促进了传统技术的变革,也为人类提供了传统产业难以得到的许多昂贵药品,并已形成基因工程制药业的雏形。
目前诸如人胰岛素、人生长激素、人脑激素、α-干扰素、乙肝疫苗、蛋白C、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂等数十种基因工程药物已实现商品化。
此外,还有促红细胞生成素、白细胞介素-2、肾素、心钠素等一大批珍贵药品正处于试用或临床试验阶段。
4.用转基因动物做器官移植的供体:目前,人体移植器官短缺是一个世界性的难题,用其它动物的器官替代,又会出现免疫排斥现象,现在,科学家正试图利用基因工程方法对一些动物的器官进行改造,培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官。
知识点三基因治疗1.概念:基因治疗是把正常基因导入病人体内,使该基因的表达产物发挥功能,从而达到治疗疾病的目的,这是治疗遗传病的最有效的手段。
2.方法:体外基因治疗和体内基因治疗体外基因治疗:先从病人体内获得某种相关细胞,进行培养,然后在体外完成基因转移,再筛选成功转移的细胞扩增培养,最后重新输入患者体内,这种方法叫做体外基因治疗。
体内基因治疗:直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因治疗。
说明:对于遗传病的治疗最根本的方法是进行基因替换或修复。
基因治疗的最佳时期理论上是受精卵时期,这样可以使个体的每个细胞都含有正常基因,但在现实生活中是不可能的,因为不可能人人在受精卵时期进行基因检查。
其次是对患者进行相关细胞的基因替换,如:对于遗传性糖尿病患者,只对胰腺的B细胞进行基因替换,该个体就能正常分泌胰岛素,糖尿病得以治疗;但这种局部细胞的基因替换,并没有改变其它部位细胞的基因,如精原细胞,其后代很大可能还会患遗传性糖尿病。