初始污染菌检测作业指导书
产品初始污染菌检测作业指导书
文件名称编制/修订审核批准作业指导书编号No.版本页次生效日期第 1 页共4 页产品初始污染菌检测日期日期日期文件履历表时间版本编写/修订人员内容文件名称产品初始污染菌检测页次第 2 页共4 页生效日期：检测依据:ISO11737-1:2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定Normative Reference: ISO11737-1 2018 Sterilization of medical devices —Microbiological methods —Part 1: Determination of a population of microorganisms on products1仪器设备微生物限度检查仪、无菌滤杯（容积125ml，已安装0.45um无菌微孔滤膜）、500ml或1000ml三角瓶，无菌胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板、无菌沙氏琼脂（SAB）平板、恒温培养箱2采样方法2.1抽取灭菌前包装封口后的样品，按照随机抽样的原则，随机抽取要求的数量，抽样后标识样品的抽取时间。
2.2正常生产的产品，每个产品族每周抽样一次（可在净化区环境检测的同时抽样），抽取3 PCS样品作为平行样。
具体产品族的划分及抽样规则见下表。
产品族名称族产品清单生产区间代表产品一次性硅胶导尿管18FR一次性硅胶喉罩4# 测试样品备注按照产品的生产环境、生产工艺将产品划分为不同的产品族。
抽取族内生产量比较大，代表性强的产品，测试其初始污染菌。
硅胶产品硅胶导尿管硅胶喉罩普通气管插管带吸痰腔气管插管整个样品插管产品加强型气管插管双腔支气管插管带导丝气管插管带导丝加强型气管插管气管切开插管普通气管插管ID7.5 整个样品2.3新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS 的原则抽取）按照5测试初始污染菌和校正因子。
2.4其它的测试需要，按照预订的测试方案抽取样品。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书一、引言在日常生活和工业生产中，微生物污染是一个不可忽视的问题。
特别是在食品加工、制药、卫生保健和医疗设施等领域，微生物污染可能对人体健康造成严重影响。
因此，对于这些领域中的设施和设备进行初始污染菌检测至关重要。
本指导书旨在提供一份详细的指南，以帮助进行有效的初始污染菌检测。
二、定义1. 初始污染菌：指在设施和设备投入使用之前，存在于环境中的微生物菌群，可能对人体健康产生影响的细菌、真菌、病毒等。
2. 初始污染菌检测：是通过采集、分离和鉴定设施和设备表面的微生物来评估其是否受到初始污染的检测方法。
三、初始污染菌检测的步骤1. 准备工作在进行初始污染菌检测之前，需要做好以下准备工作：- 确定检测的目标区域：根据需要，确定需要检测的设施和设备区域。
- 收集必要的工具和材料：包括培养基、采样棉签、橡胶手套、消毒剂等。
- 清洁检测区域：确保待检测的区域清洁整齐，以减少外界污染的干扰。
2. 采样- 选择合适的采样方法：根据不同的设施和设备，选择合适的采样方法，常见的包括印迹法、刷子法、划线法等。
- 采样过程中的注意事项：确保采样过程中的卫生条件，佩戴橡胶手套，并在每个采样点上更换新的采样棉签，以避免交叉污染。
- 采样点的选择：根据设施和设备的特点，选择具有代表性的采样点，如接触频繁的表面、接口和难以清洁的区域。
3. 分离与鉴定- 样品处理：将采集到的样品，按照合适的程序进行处理，包括加入适量的培养基，进行可行菌总数的分析。
- 培养与鉴定：将样品在适当的温度和湿度条件下进行培养，待细菌或真菌生长形成菌落后，再通过各种常见鉴定方法（如形态学观察、生化试验、分子生物学技术等）来鉴定菌落的种类。
- 数据记录与分析：将分离鉴定得到的数据记录下来，进行统计和分析，了解初始污染的菌群组成和水平。
四、初始污染菌检测结果的评估与应对1. 结果评估根据初始污染菌检测结果，可以对设施和设备的初始污染情况进行评估。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书
一、引言
污染菌是指存在于环境中、能够引起食品、水、土壤等特定物质污染的微生物菌种。
这些污染菌对人类健康和环境质量构成潜在威胁。
为了保障公众健康和环境平安，进行初始污染菌检测是必要的。
二、目的
本指导书的目的是提供一个简明的初始污染菌检测流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。
通过采用合理的检测方法和技术，有助于及早发现并控制可能存在的污染源，以保护公众的健康和环境的可持续发展。
三、检测方法
1. 样品采集
a. 样品采集前，请确保操作者严格遵守个人卫生要求，包括洗手、穿戴一次性手套等，并准备好干净的采样容器。
b. 根据具体的检测目的和样品类型，选择合适的采集方法。
例如，对于食品样品，可以使用无菌勺子、无菌容器等进行采集。
c. 采集样品时，应避免污染，尽量避免触摸容器内壁，同时避免与外界环境接触。
2. 样品处理和制备
a. 样品采集后，尽快将样品送至实验室进行处理和制备。
b. 根据具体的检测要求，进行样品的预处理，如去除杂质、负离子等。
c. 样品制备过程中，请注意避免交叉污染，使用一次性无菌工具、器皿等进行操作。
3. 检测方法选择
a. 根据检测目标，选择适当的检测方法。
常见的初始污染菌检测方法包括培养法、荧光定量PCR法等。
b. 对于食品等需要进行快速检测的样品，可以选择快速检测方法，如基于抗原-抗体反应原理的快速检测方法等。
初始污染菌检验标准操作规程
初始污染菌检验标准操作规程1 目的:建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。
2 责任:质量检验人员负责执行此规程。
3 范围:适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。
4 内容:4.1 初始污染菌检测4.1.1 器材与试剂4.1.1.1 器材(1)生化培养箱、霉菌培养箱(2)立式灭菌柜(3)超净工作台(4)无菌过滤装置(5)无菌镊子、无菌剪子(6)电子天平(7)移液器(8)接种环4.1.1.2 稀释液、冲洗液pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液4.1.1.3 培养基营养琼脂培养基:按说明书方法保存配制。
4.1.2 检验方法:平皿法4.1.2.1 供试液的制备供试品是纱布可用无菌手续称取10g,放入100mlpH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
供试液10倍递减稀释。
供试品是液体取样10ml加至100mlpH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
供试液10倍递减稀释。
4.1.2.2 供试液操作方法每个稀释级各吸取1ml至直径90mm的无菌平皿中，注入15,20ml温度不超过45?的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
每个稀释级注2个平皿。
4.1.2.3 阴性对照取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。
4.1.2.6 培养条件将已经凝固的平板倒置于37?培养箱中，一般培养48?2h。
4.1.2.7 计数将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。
必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
4.1.2.7.1 菌落计数基本规则?选取平均菌落数在30,300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如只有1个稀释级平均菌落数在30,300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。
?如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30,300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。
菌检室作业指导书(MRCOI01-2004)
修正因子的确定1.主题内容与适用范围本作业指导书为污染菌修正因子确定的要领指南。
本作业指导书适用于本公司污染菌修正因子确定工序岗位。
2.引用文件ISO11737医疗器械的灭菌—微生物学方法第1部分产品上微生物总数量的测定MRC初始污染菌的测定3.关键指南内容3.1修正因子确定的步骤：3.1.1首次洗脱:取样品整件或部分，投入一定的无菌洗脱液（A）中，将含有样品的洗脱液置旋涡混合器（2800次/ min）振荡2min。
取洗脱液2ml，分别注入两个无菌平皿内，每平皿1 ml。
（注:洗脱液、操作方法与初始污染菌洗脱方法应保持一致）。
3.1.2再洗脱:将样品从洗脱液A中取出沥干。
移入另一定量的无菌洗脱液（B）中，再重复上述操作。
（注:当微生物数少时，从B洗脱液开始，即可用无菌滤膜过滤后直接放培养基中培养。
）3.1.3如此反复洗脱4次，即A、B、C和D，直至洗脱累积量（污染菌）不再增加，最后沥干样品，将其平铺于无菌平皿中（E），然后将溶化并冷至45~47℃的NA培养基，分别注入A~E各平皿每皿15 ml 中。
3.1.4待凝固后，放规定的培养条件下（30~35℃，48h）培养，进行活菌计数。
3.1.5计算每个产品的首次洗脱分离菌落数与总菌落的比值，以确定回收率，取其倒数为修正因子。
医用敷料的细菌检验规程1、目的：对本公司的医用敷料的细菌检验制定严格的控制程序2、主题内容与适用范围本作业指导书适用于本公司腹部垫、手术巾、纱布折片、ABD垫的细菌检查测定。
3、引用文件ISO11737医疗器械的灭菌—微生物学方法第1部分产品上微生物总数量的测定本标准依据药品卫生检方、中国药典2010年版二部附录XIJ及一部附录XIIIC制定MRC活菌计数操作规程MRC检测培养基的准备4、仪器与用具4.1无菌平皿直径90mm的硬质玻璃平皿，碟低厚薄均匀，水平透明，无色气泡。
4.2灭菌刻度吸管刻度吸管（1ml、10 ml）用于吸取稀释液和供试液。
初始污染菌检验规程
A.3.1接触板
A.3.1.1接触板或玻璃片可用于将凝固的培养基放在样品表面上，使存活微生物能附着在培养基表面，然后再培养接触板或玻璃片，至形成可以计数的菌落。
A.3.1.2该系统的优点在于易于使用，结果与凝固的培养基的接触表面直接相关。
A.3.1.3表面上天然集聚的细胞群、菌落在琼脂介面散布、琼脂干燥、可能存在的厌氧菌等都是潜在的不利因素。
A.2.1.6有些处理方法可能会分解待测产品(例如碎解、袋蠕动和涡旋)。分解的材料会给微生物计数造成困难，这时则需要进行其他处理，如将分解的材料从洗提液中分离出来。应注意保证所得到的计数具有代表性。
A.2.1.7应尽力尽快将试验样品移至试验室。如果必须要推迟转送，试验样品的保存条件应能避免微生物的丢失或改变。应规定贮存的最长时间。干燥可能是微生物数量减少的重要原因，所以在选择贮存条件和贮存时间时应加以考虑
A.4.2.2通常需要一真空或正压(有些情况下)源。应注意避免负压过大，这会引起滤膜变形或损坏。
A.4.2.3进行培养时，滤膜可以放在琼脂表面或放在浸泡了营养媒介的吸水纱布垫上。滤膜表面上形成的菌落可以计数，也可从滤器上分离出来进行定性。A.4.2.4膜过滤尤其适用于微生物浓度较低的悬液。
A.4.2.5从洗提液中取出微生物时，当怀疑液体基质中含有杀灭或抑制微生物时，膜过滤特别适用，先将洗提液中的微生物过滤出来，并可在培养前对滤膜上的微生物进行冲洗。但是有些类型的膜滤器可以吸收或释放抑制微生物生长的物质，所以只使用那些适于给微生物计数的滤膜是很重要的。滤膜和洗提液应相容。
0,1%蛋白胨peptone通用
林格氏溶液
Balgon Ringer1/4强度溶解藻酸钙棉拭
Dissolution of BalBium alginate swaAs
YH-QMS-WI-332-A 产品初始污染菌检测作业指导书
初始污染菌检测作业指导书版权所有，注意保密YH-QMS-WI-332Rev A第1页共4页版本号修改日期修改内容描述A2020.3.16 首次发布制定：签名审核：签名批准：签名初始污染菌检测作业指导书版权所有，注意保密YH-QMS-WI-332Rev A第2页共4页1.0 目的为了规范灭菌产品使用的原材料、产品初始污染菌的检验操作，确保原材料、产品灭菌前细菌数符合标准要求。
2.0 范围本检验规程只适用于本公司产品、原材料的初始污染菌的检验操作。
3.0 职责质量法规部：微生物检验员负责原材料及产品灭菌前初始污染菌的检测。
4.0 操作方法4.1 产品初始污染菌数：≤100cfu/件原材料初始污染菌：原材料外壳及导管、线材类：≤100cfu/件原材料包装袋类：≤10cfu/cm24.2培养基及洗脱液制备配制一定量的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）及沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA），0.9%Nacl洗脱液，高压灭菌后备用。
4.3操作流程4.3.1产品检验➢产品取样：1产品表面与患者直接接触或间接接触产品：取每批次样品10件，将样品浸入100ml0.9%Nacl洗脱液中；2 产品内部与患者直接接触或间接接触的产品：将100ml0.9%Nacl洗脱液注入产品内部；充分震荡，将滤液通过0.45μm膜，微生物限度过滤系统抽滤，将滤膜一剪二，菌面朝上，分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养表面，倒置培养。
➢空白对照：将100ml0.9%Nacl通过0.45μm膜，微生物限度过滤系统抽滤，将滤膜一剪二，菌面朝上，分别贴于1块TSA培养基和1块SDA培养基表面，倒置培养。
➢TSA培养基皿放在30-35℃培养箱倒置培养3天。
SDA培养基皿放在20℃-25℃培养箱倒置培养5 天。
➢将平板置于灯光下从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，仔细观察计数，必要时可借助放大镜、菌落计数器。
(空白对照应无菌生长)➢每件产品的初始污染菌总数=细菌平均数和霉菌平均数的总和初始污染菌检测作业指导书版权所有，注意保密YH-QMS-WI-332Rev A第3页共4页4.3.2原材料检验4.3.2.1原材料外壳及导管、线材类➢取每批次原材料样品10件，按照样品大小与无菌取样袋（大袋、小袋）匹配度，可选择将样品浸入100ml或200ml0.9%Nacl洗脱液中充分震荡，将滤液通过0.45μm膜，微生物限度过滤系统抽滤，将滤膜一剪二，菌面朝上，分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基表面，倒置培养。
产品初始污染菌检验规范.
产品初始污染菌检验规范1 目的本规范规定了产品初始污染菌的检验方法。
2 参考标准GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计》中华人民共和国药典ENISO11737:2006 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定》3 操作前准备3.1 主要仪器设备数个90mm双蝶平皿、三角烧瓶，电炉、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、蒸汽消毒器、0.9%氯化钠溶液、刻度吸管数支、超净工作台3.2 试剂0.9%氯化钠溶液、营养琼脂培养基。
3.3 试验前准备3.3.1 将Ф90mm的培养皿、试管等与试验接触的所有器具，放入棉布袋或用棉布包好，置压力蒸气灭菌器内121℃灭菌30min后备用排出蒸汽，稍微冷却，取出用具。
3.3.2 按脱水营养琼脂培养基说明书上的要求称取培养基，加纯化水加热溶解，加塞，和0.9%氯化钠溶液同置1210C灭菌30min后备用。
3.3.3 将消好的平皿、刻度吸管，放入电热干燥箱内1600C干燥2小时，当温度降低至70ºC以下时进行无菌存放。
3.3.4 打开超净工作台上的电源、照明、风机、紫外线灯30分钟开关。
3.3.5 将实验所需的物品通过传递窗紫外线灯消毒，然后进入洁净室内，开启洁净室紫外线照射30min以上灭菌。
3.3.6 洗手、更衣后，进入无菌室，用消毒液对手进行消毒。
4 试验方法4.1 供试品数量灭菌前样品至少取3个。
4.2 供试液制备和接种4.2.1 把采取的样品送入无菌净化工作台内，用无菌操作法分别在每条产品上剪样5g，取样品至少3个（一份试验、一份留样、一份复测），将5g样品剪碎，放入100 ml灭菌0.9%NaCl的三角烧瓶中振荡80次，形成1次10倍稀释液。
4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。
另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml，如样品含菌量高，还可以再稀释1:1000、1:10000等，每个稀释度应换一支移液管。
初始污染菌测试作业指导书
1 目的建立产品的初始污染菌的检验规程，规范检验人员操作，确保产品质量。
2 范围适用于本公司产品灭菌前和非灭菌产品的初始污染菌检测。
3 职责质量部负责作业指导书的制定及执行。
4 检验依据4.1 ISO11737.1-2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定4.2 中华人民共和国药典(2015年版)1105非无菌产品微生物限度检查法:微生物计数法。
4.3 中华人民共和国药典(2015年版)1106非无菌产品微生物限度检查法:控制菌检查法5 作业内容5.1试验前准备事先准备好试验指导书、记录本等。
5.2主要仪器、器具及用品微生物限度检查仪、无菌滤杯、0.45um无菌滤膜、无菌锥形瓶、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、恒温培养箱恒温培养箱、90mm培养皿、无菌生理盐水。
5.3培养基的配置TSA：取40g胰蛋白胨大豆琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。
SAB：取65g沙氏葡萄糖琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。
0.9%生理盐水：9gNaCl溶解于1000ml纯化水，每份250ml分装于锥形瓶中，灭菌后备用。
5.4取样5.4.1同一批次产品数<50件，抽取3件；同一批次产品数为50~100件，抽取5件；同一批次产品数>100件，抽取10件。
5.4.2新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS的原则抽取）按照测试初始污染菌和校正因子。
5.5试验5.5.1每瓶一份样品，按无菌操作原则剪成2～5cm的碎片，移入装有250ml生理盐水的无菌锥形瓶中,充分震荡后备用。
5.5.2滤膜和滤杯安装好在微生物限度仪上，将5.4.3的洗脱液分别加入两个滤杯中，开启微生物限度仪过滤。
5.5.3过滤完成后无菌操作取下滤杯将两张滤膜载菌面分别放入TSA皿和SAB皿中，并做好标识。
产品初始污染菌检测操作规程
产品初始污染菌检测操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部一、目的规范产品初始污染菌数检验标准操作。
二、适用范围适用于产品初始污染菌检验。
三、职责微生物实验员对此规程负责。
四、参考资料1. 参考2020版《中国药典》四部非无菌微生物限度检查法；2. GB/T 19973.1-2015《医疗器械灭菌-微生物学方法-第一部分：产品中微生物数量的估计》；3. GB15979-2002 《一次性使用医疗用品卫生标准》五、内容1.设备与材料：薄膜过滤器、恒温培养箱、霉菌培养箱、培养皿、锥形瓶、蓝盖瓶、量筒、烧杯、镊子、剪子、橡皮塞、纱布、灭菌棉球、酒精灯，超净工作台，高压灭菌锅，电子称，0.45um滤膜等、无菌取样袋、无菌手套。
2.稀释液及培养基0.9%无菌氯化钠溶液、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基3.取样规则a、PMC配合质管部每月月初计划多生产6套产品；b、等生产完成后取样员戴无菌手套，将随批量同等条件生产的6套产品装进无菌自封袋后将封条密封；c、做好记录d、送至实验室e、暂时处：冷藏箱规定样品暂存区，存放时间最迟两个小时。
4.检验方法4.1 取8个灭菌平皿分别倒入胰酪大豆胨琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基15—20ml 晾干。
4.2 将每批送至实验室的产品样品，分为编号：1、2、3、4、5、6，再将每个编号的样品分别投入灭菌后的均质袋中，再倒入灭菌生理盐水浸没整个样品，生理盐水的位置应能完全浸没整套样品，根据样品体积的大小适量倒入灭菌生理盐水，充分混匀，使微生物尽可能洗脱后将无菌镊子把样品取出，剩下样液待过滤集菌。
4.3 检测一般细菌，将编号1、2、3混匀后的样液倒入滤杯中，开启滤器过滤后将滤膜取出，正面贴于胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）平皿中，同时做阴性对照，检测一般需氧菌。
初始污染菌试验操作指导书
初始污染菌、车间工作台面及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数试验操作指导书文件编号: XX/JG-002版本：A修改状态：0受控状态：发布日期：实施日期：编写: 校对: 核准:1. 引用标准：GB15980-1995，GB7918.2，2010版药典2. 技术指标：一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包等非管道类、敷料：≤100cfu/g；一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路等管道类：内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数≤10cfu/cm2，生产工人手细菌总数≤300cfu/每只手。
3. 检测环境要求：环境洁净度10000级下的局部洁净度100级单向流空气域内进行。
4. 测试数量及频率：产品每批随机抽取10件；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数每周检测一次。
5 试验设备：培养皿、镊子、5×5cm的灭菌规格板等采用干热灭菌205℃，4h；移液管、棉拭子、注射器等用牛皮纸包好，采用高压蒸汽灭菌，121℃，20min。
6. 试验试剂：6.1 生理盐水：NaCl:8.5g + 蒸馏水：1000mL，溶解后，去分装到试管中，锥形瓶中，每瓶90mL,121℃,20min高压灭菌；6.2 营养琼脂培养基制备：①溶化：按照说明书称取溶解培养基；②校正酸碱度：调节PH指到7.1-7.4；③灭菌：采用高压灭菌，121℃，30min。
7 试验步骤：7.1 供试液的制备：7.1.1 供试品是一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包时，用无菌手续取样品10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分振荡后得到1：10的供试液；7.1.2 供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做内腔时，取10mL灭菌生理盐水，注入到产品中，得到的洗脱液即为供试液。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。
产品初始污染菌检测作业指导书
作业指导书编号No.版本页次第 1 页共4 页文件名称产品初始污染菌检测编制/修订日期审核日期批准日期生效日期文件履历表时间版本编写/修订人员内容页次第 2 页共4 页文件名称产品初始污染菌检测生效日期：检测依据:ISO11737-1:2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定Normative Reference: ISO11737-1 2018 Sterilization of medical devices —Microbiological methods —Part 1: Determination of a population of microorganisms on products1仪器设备微生物限度检查仪、无菌滤杯（容积125ml，已安装0.45um无菌微孔滤膜）、500ml或1000ml三角瓶，无菌胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板、无菌沙氏琼脂（SAB）平板、恒温培养箱2采样方法2.1抽取灭菌前包装封口后的样品，按照随机抽样的原则，随机抽取要求的数量，抽样后标识样品的抽取时间。
2.2正常生产的产品，每个产品族每周抽样一次（可在净化区环境检测的同时抽样），抽取3 PCS样品作为平行样。
具体产品族的划分及抽样规则见下表。
产品族名称族产品清单生产区间代表产品测试样品备注硅胶产品硅胶导尿管一次性硅胶导尿管18FR整个样品按照产品的生产环境、生产工艺将产品划分为不同的产品族。
抽取族内生产量比较大，代表性强的产品，测试其初始污染菌。
硅胶喉罩一次性硅胶喉罩4#插管产品普通气管插管普通气管插管ID7.5 整个样品带吸痰腔气管插管加强型气管插管双腔支气管插管带导丝气管插管带导丝加强型气管插管气管切开插管2.3新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS 的原则抽取）按照5测试初始污染菌和校正因子。
2.4其它的测试需要，按照预订的测试方案抽取样品。
(环境管理)初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检测操作规程精编版
4.5培养
将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。计算平板上的菌落数。
4.6结果与判定
4.6.1计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
4.6.3.3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4.6.3.4、如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最
接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4.6.3.5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平
释倍数报告。
4.6.3.2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。
高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
比值=————————————————————
低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
4.3.4供试液10倍递减稀释
4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。
制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。
4.4接种检验
4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书1. 目的检测成品初始污染菌是否符合要求2. 适用范围适用于未灭菌的成品检验3. 职责和权限检验员实施本操作规程，质量控制室主管负责监督本规程实施。
4. 内容微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
4．1 仪器、设备恒温水浴培养箱、洁净工作台、微生物限度检测仪、电子天平、压力蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、三角烧瓶、试管、无菌镊子、无菌剪刀、试管架、培养皿4.2 培养基的配制营养琼脂培养基：称取本品32g,加1L纯化水，加热溶解，121 T高压蒸汽灭菌15min，将灭菌后的营养琼脂培养基冷至50±5°C,在层流净化台上倒入已灭菌的培养皿中，15-20ml/皿，备用。
4.3 计数培养基的适用性检查细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的均应检查。
4.3.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过 5 代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
(1) 大肠埃希菌( Escherichia coli )〔CMCC(B) 44 102 〕(2) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )〔CMCC(B) 26 003 〕(3) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ) 〔CMCC(B) 63 501 〕(4) 白色念珠菌(Candida albicans )〔CMCC(F) 98 001 〕⑸黑曲霉(Aspergillus niger ) 〔CMCC(F)98 003〕4.3.2 菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24〜48小时。
初始污染菌检测作业指导书.docx
1.2.3. 4.稳健医疗集团有限公司初始污染菌检测作业指导书文件编号WN-QM-P28-SOP05版次A/0生效日期2009-9-29页次1/3目的检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。
适用范围适用于本集团产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。
职责由品管部负责执行实施。
检测程序4. 1检验频次：车间生产的产品每周至少抽取12个批次进行检测，对不同车间和材质的产品进行轮流循环抽样（每种材质的产品每周至少抽取3个批次；每个车间每周至少抽取2个批次）。
标准作业规程4. 2取样方法4. 3试验方法4. 3.1配制洗脱液4. 3. 1. 1 称量4. 3. 1. 2 溶解4. 3. 1. 3洗脱液分装拟制拟制用灭菌银子于同一个批次三个大包装（三个以上员工的产品）中至少随机抽取90g或轴取12个長.J術Q包裝样品，1/3样舄用孑穆测.1/3样必用孑留样，另1/3样品（可就地封存）必要时用于复检。
装入无菌的塑料袋中，立即密封好（塑料袋上应标示产殆的生产日期、定单编号、规格、生产车间、员工姓名、产晶代号）并立即送检，送检中不得打开塑料袋，三分之一用于测试，三分Z—用于留样，三分Z—必要复试。
样品最小包装不应有破损，检验前不得开启。
原料、辅料抽样方法频次见《进料质量监控流程》。
用电子太平准确称取9gNaCl o将已称好9gNaCl溶于1000ml蒸徭水中，充分搅拌直至完全溶解。
蒸馅水屮，然后用锥形瓶分装，每瓶100ml （可以根据实验的需要分装不同体积的液体）。
称取9gNaCl溶于1000ml蒸饰水屮，然后用锥形瓶分装，每瓶100ml （可以根据实验的需要分装不同体积的液体）。
审核詡/审核批准批准稳健医疗集团有限公司初始污染菌检测作业指导书文件编号WN-QM-P28-SOP05版次A/0生效日期2009-9-29页次2/34. 3・1.4洗脱液灭菌用牛皮纸或医用透析纸密封，放入高压蒸汽灭菌器屮121°C灭菌，15分钟。
初始污染菌试验操作指导书教学内容
初始污染菌试验操作指导书初始污染菌、车间工作台面及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数试验操作指导书文件编号: XX/JG-002版本：A修改状态：0受控状态：发布日期：实施日期：编写: 校对: 核准:1. 引用标准：GB15980-1995，GB7918.2，2010版药典2. 技术指标：一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包等非管道类、敷料：≤100cfu/g；一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路等管道类：内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数≤10cfu/cm2，生产工人手细菌总数≤300cfu/每只手。
3. 检测环境要求：环境洁净度10000级下的局部洁净度100级单向流空气域内进行。
4. 测试数量及频率：产品每批随机抽取10件；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数每周检测一次。
5 试验设备：培养皿、镊子、5×5cm的灭菌规格板等采用干热灭菌205℃，4h；移液管、棉拭子、注射器等用牛皮纸包好，采用高压蒸汽灭菌，121℃，20min。
6. 试验试剂：6.1 生理盐水：NaCl:8.5g + 蒸馏水：1000mL，溶解后，去分装到试管中，锥形瓶中，每瓶90mL,121℃,20min高压灭菌；6.2 营养琼脂培养基制备：①溶化：按照说明书称取溶解培养基；②校正酸碱度：调节PH指到7.1-7.4；③灭菌：采用高压灭菌，121℃，30min。
7 试验步骤：7.1 供试液的制备：7.1.1 供试品是一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包时，用无菌手续取样品10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分振荡后得到1：10的供试液；7.1.2 供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做内腔时，取10mL灭菌生理盐水，注入到产品中，得到的洗脱液即为供试液。
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文件编号
版本初始污染菌检测作业指导书
1. 目的：
通过生物实验方法，检测未灭菌产品的微生物污染数量。
2. 主要设备：
3. 试剂：
pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
大豆酪蛋白琼脂
沙氏葡萄糖琼脂
4. 试验前准备：
试验前配制需要的培养基﹑pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液并灭菌，准备灭菌的培养皿和三角瓶等。
5. 试验步骤：
5.1. 样品数量:：同一批号产品5件。
5.2. 浸提液制备：
5.2.1 浸提介质为pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
5.2.2 已提前30 min开启净化工作台。
使用前用75%乙醇消毒净化工作台的
内表面。
5.2.3 用75%乙醇消毒受检样品的外包装。
5.2.4 本操作以无菌操作方式在净化工作台内进行。
打开样品的内包装，取
出样品，用己灭菌的剪刀剪切样品为3 ~5cm的小段（包括样品Hub段），
放入己灭菌的150ml的带盖三角瓶内。
加入20ml已灭菌的pH 7.0氯化钠
-蛋白胨缓冲液，盖好瓶塞。
5.2.5 依据上述方法，完成所有样品的处理。
5.2.6 提前30~60min开启超声波清洗机，设定温度为37℃。
如需快速达到
设定温度，可用温水注入超声波清洗机内。
确认达到设定温度后，将上述
完成的三角瓶放入超声波清洗器内（注意：不得打开瓶塞，否则弃之！），启
动超声波发生器，振荡样品10min，取出擦干三角瓶外表面。
5.2.7 再将上述盛有样品的三角瓶置于混匀器振荡1min。
此液体即为样品浸
提液。
此液体浸提液制取后1h内使用。
5.3. 使用75%乙醇消毒上述制备的浸提液的三角瓶外表面，并将其转入超净工作
台内。
5.4. 使用无菌吸管，吸取2ml浸提液，移入已灭菌的空培养皿内。
每一份浸提液制
备２份平行的培养皿。
将灭菌完毕，已冷至约45~50℃（水浴锅保温）的大豆
酪蛋白琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基逐一加入上述培养皿内，每种培养基分别
倾注2个平行的培养皿。
每一培养皿加入约15~20ml的培养基，盖上培养皿
外盖。
放置于净化工作台内表面，轻轻摇动使溶液与培养基充分混合。
静置净
化工作台内待其凝固。
5.5. 待培养基已完全凝固，取出培养皿。
并关闭净化工作台。
5.6. 将营养琼脂培养皿倒置于培养箱内，30~35℃（一般设置为32℃）培养3天，
玫瑰红钠琼脂培养皿倒置于培养箱内，20~25℃（一般设置为24℃）培养5
天。
培养结束后记录菌落数量。
5.7. 试验结果以培养完毕后菌落数据为准。
5.8. 判断试验结果合格标准为：不超过100cfu/unit.（参考标准：GB15980-1995: 一
次性使用医疗器械卫生标准）。
6. 报告：
6.1 在初始污染菌试验结果原始记录和检测报告中填写检测样品名称、检测样品数
量、检测样品批号、检测区域温度、湿度、培养基种类、菌落数、检测结果、
检测人、检测日期等相关项目。
6.2 填好初始污染菌试验结果原始记录和检测报告编号，编号分别以英文字母BR
和BF及检查完成日期组成，如初始污染菌试验完成日期为2012年03月10
日，则该次试验结果原始记录编号为BR120310，检测报告编号为BF120310。
如同一天完成多批产品初始污染菌测试，则在此编号后加阿拉伯数字序号，如
BR120310-1表示2012年03月10日完成的多批产品初始污染菌测试中的第
一次结果原始记录。
6.3 确认原始记录及报告完成后，在文控中心保存。
7. 附件：
7.1. 初始污染菌试验结果原始记录
7.2. 初始污染菌试验检测报。