冬虫夏草及虫草制品中活性成分检测方法的建立及含量测定
高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量
ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ ａｎｄ ｃｏｒｄｙｃｅｐ ａｃｉｄ（ ｎ ＝ ７）
平均值／ｍｇ·ｇ－１ ＳＤ／ｍｇ·ｇ－１ ＲＳＤ／％
日内 虫草素
０．２５８
０．００４
１．５５
虫草酸
７７．２
４．４６
５．７７
日间 虫草素
０．２５１
０．００７
２．７８
虫草酸
７８．４
５．６３
７．１９
ＮＨ２
Ｎ Ｎ
ＨＯＣＨ２
Ｎ
Ｎ
Ｏ
ＯＨ
图 １ 虫草素结构式 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｆ ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ
ＣＨ２ＯＨ
ＨＯ
Ｈ
ＨＯ
Ｈ
Ｈ
ＯＨ
Ｈ
ＯＨ
ＣＨ２ＯＨ
图 ２ 虫草酸（ Ｄ－ 甘露醇） 结构式 Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｆ ｃｏｒｄｙｃｅｐ ａｃｉｄ（ Ｄ－ ｍａｎｎｉｔｏｌ）
关键词 高效液相色谱 冬虫夏草 虫草素 虫草酸
文章编号 １００９－ ７８４８（ ２００７） ０３－ ０１４４－ ０５
冬虫夏草是真菌寄生在蝙蝠类昆虫上的结合 体［１］， 属于子囊菌纲， 肉座菌目（ Ｈｙｐｏｃｒｅ．ａｌｅｓ） ， 麦角 菌 科 （ Ｃｌａｖｉｃｉｐｉｔａｃｅｕｅ） ， 虫 草 属 （ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ） ， 生 长 于高寒山区， 常见于海拔 ４ ｋｍ 以上的高山上， 主 要分布于我国四川、西藏、青海、云南等地［１～２］， 为我 国特有的名贵药用真菌［３］。冬虫夏草内含有丰富的 虫草酸、虫草素以及各类氨基酸等营养物质， 具有 扩张气管、镇静、抗心律失常、降血压、抗病原微生 物 、抗 恶 性 肿 瘤 等 功 效［４］。 目 前 已 有 不 少 以 虫 草 提 取物为主要成分的保健品、化妆品、药品投放市 场［５］。
HPLC-ESI-MS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量
溶剂 采用选择性离子检测 ≥ 和电喷雾离子化 ∞≥ 色谱条件 ≥
∏ ∂ °2 ⁄≥ 色谱柱 流动相水2甲醇2甲酸
Β Β 以 2氯腺苷为内标 ∀ 结果 腺苷回归方程 Ψ
Ξ
ρ
线性范围 ∗
#
虫草素回归方程 Ψ
Ξ
ρ
线性范围 ∗
# 腺苷和虫草素加样回收率
分别为
及
∀ 结论 方法灵敏 !快速和选择性好 可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的分析及
虫草素平
∀ 证明此方法重现性良
2 8 选择性和检测限 由图 知 腺苷 !虫草素
和 ≥ 分离良好 由于使用选择性离子检测模式 在
腺苷和虫草素保留时间区域内没有干扰 故本法有
很高的专属性 ∀ 当信噪比为 Β 时 腺苷和虫草素
的检测限 ⁄ 均为
#∀
2 9 回收率实验 精密称取蚕蛹虫草 样品
份 分别加入与试样含量相当的腺苷和虫草素
# 腺苷和虫草素
对照品溶液 按上述 ° ≤2∞≥ 2 ≥ 条件连续测定
次 得腺苷和虫草素与 2氯腺苷峰面积比的平均值
和
≥⁄ 分别为
和
表明精
密度良好 ∀
2 7 重现性试验 以拟定提取方法平行提取 份
蚕蛹虫草 在拟定 ° ≤2∞≥ 2 ≥ 条件下测定 ∀ 结果
腺苷的平均值为
均值 Λ # 好∀
Λ# ≥⁄
≥⁄
ελεχτροπηορεσισ . Ελεχτροπηορεσισ
∆ετερµινατιον οφ αδενοσινε ανδ χορδψχεπιν ιν Χορδψχεπσ σινενσισ ανδ Χ . µιλιταρρισ ωιτη ΗΠΛΧ2ΕΣΙ2 ΜΣ
2
HPLCESIMS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量
第２９卷第８期２００４年８月中国中药杂志ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎ雠ＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｅａＶ０１．２９，Ｉｓｓｕｅ８Ａｕｇｕｓｔ，２００４ｍｅｔｈａｎ０１．ＳｅｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｌｌＯＤＳｃｏｈｎｍｗｉｔｈａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ（１８：８２），ｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ２３０ｎｎｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄａｐｐｌｉｃａｂｌｅ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｐｅｐａ捌ｓｌｉｃｅｓｏｆＰａｅｏｎｉａｌａｃｔｂｑｏｎ；ｑｕａｌｉｔｙｃｒｉｔｅｒｉａ；ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ；ＨＰＬＣ［责任编辑李禾］ＨＰＬＣ—ＥＳＩ—ＭＳ测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量黄兰芳１，郭方遒１，梁逸曾Ｈ，陈本美２（１．中南大学化学化工学院中药现代化研究中心，湖南长沙４１００８３；２．中南大学湘雅医学院分析测试中心，湖南长沙４１００８３）［摘要】目的：建立测定冬虫夏草及蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的方法。
方法：ＨＰＬＣ．ＥＳＩ－ＭＳ法，用甲醇为提取溶剂，采用选择性离子检测（ｓ珈）和电喷雾离子化（ＥＳＩ）；色谱条件：Ｓｈｉ瑚ｄ刁ｌＶＰ－ＯＤＳ色谱柱；流动相水．甲醇．甲酸（９４：５：１），以２－氯腺苷为内标。
结果：腺苷回归方程Ｙ＝０．１３４６Ｘ＋０．０１２９，ｒ＝０．９９８４，线性范围０．５—１２４．５ｍｇ・Ｌ。
１；虫草素回归方程Ｙ＝０．２１６４Ｘ＋０．０２１５，ｒ＝０．９９９１，线性范围０．５—１３６．５ｎａｇ・Ｌ－１；腺苷和虫草素加样回收率分别为９５．８％及９８．１％。
结论：方法灵敏、快速和选择性好，可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的分析及质量控制。
［关键词］Ⅲ伐；ＥＳＩ；ＭＳ；冬虫夏草；蚕蛹虫草；核苷类［中图分类号］Ｒ２８４．１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００１．５３０２（２００４）０８．ｃｒ７６２．０３冬虫夏草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ是我国传统名贵中药材之一，由于自然条件的限制，来源紧缺、价格昂贵，现多采用人工深层发酵培养虫草菌丝体，以满足市场的需求。
LC_ESI-MS分离和测定冬虫夏草及其代用品的有效成分
收稿日期:2004-05-25通讯联系人:黄兰芳第21卷第2期Vol .21No .2分析科学学报J OURNAL OF ANALYT I CAL SC I ENCE 2005年4月A p —————————————————————————————————————————————————r .2005文章编号:1006-6144(2005)02-0194-03LC !ES I-M S 分离和测定冬虫夏草及其代用品的有效成分周菊峰1929周芸19郭方遒29黄兰芳。
2(1.湘南学院化生系9湖南郴州423000;2.中南大学化学化工学院9长沙410083)摘要:本文报道采用电喷雾离子化(ES I )9用高效液相色谱-质谱联用法同时分离和测定冬虫夏草及其代用品中主要活性成分尿苷和腺苷的方法 本法使用Shi m adzu VP -ODS 色谱柱9以水-甲醇-甲酸(90=9.0=1.09V !V )为流动相92-氯腺苷为内标9选择性离子检测(S I M )模式作定量分析 结果表明:尿苷和腺苷线性范围分别为2.0～110.0卜g "mL -1和1.0～120.0卜g "mL -19检出限分别为0.3卜g "mL -1和0.2卜g "mL -19标准加入回收率为97.0%～103.3% 该法已成功地用于冬虫夏草及其代用品中尿苷和腺苷的分析 关键词:高效液相色谱;电喷雾离子化;质谱;冬虫夏草;核苷中图分类号:O 657.63;R284文献标识码:A冬虫夏草是我国名贵中药9可用于治疗高血糖症~肝脏疾病~肾功能紊乱和肾衰竭 1＼n研究表明9核苷类化合物为其主要活性成分9其中尿苷和腺苷具有许多生理活性9而腺苷含量是评价冬虫夏草及其替代物的质量指标 2I 由于其稀缺9已有很多研究以寻找它的替代物 394I测定冬虫夏草及其代用品中核苷类物质的方法主要有分光光度法 5I ~薄层色谱法(TLC ) 6I ~高效液相色谱法(HPLC ) 798I 和毛细管电泳法 9910I 目前还未见高效液相色谱-质谱法(LC M S )测定尿苷和腺苷的报道本文采用选择性离子检测(S I M )和电喷雾离子化(ES I )9以水-甲醇-甲酸(90.0=9.0=1.09V V )为流动相9在Shi m adzu VP -ODS 色谱柱上分离9以2-氯腺苷为内标9建立了定量分析冬虫夏草和蚕蛹虫草中尿苷和腺苷的等度LC ES I-M S 法 方法简单9灵敏度高且重现性好9可用于测定各种天然冬虫夏草及其代用品中的核苷类活性物质l 实验部分l .l 仪器与试剂Shi m adzu M odel LC -10A 液相色谱仪;Shi m adzu LC M S -2010四极杆质谱仪 尿苷~腺苷~2-氯腺苷购于S i g m a 公司9各化合物的储备液(0.1m g mL -1)用甲醇配制并保存于冰箱中9工作液(2.0卜g mL -1)用甲醇稀释储备液配制;甲酸为分析纯9甲醇为色谱纯(江苏汉邦科学技术有限公司) 实验用水为M illi- 超纯水 所有溶液均用0.45卜m 滤膜过滤并经超声脱气处理l .2色谱-质谱分析条件色谱柱:Shi m adzu VP -ODS 9W at ers C 18小柱(W at ers 9M ilf or d 9MA 9美国);流动相:水-甲醇-甲酸(90=9.0=109V V )9使用前超声脱气9流动相中的每一组分均用0.22卜m 微孔滤膜过滤;温度:室温9流速:0.2mL m i n ;检测波长范围:200～300n m 9进样量为5卜L Shi m adzu LC M S -2010四极杆质谱仪用电喷雾离子化接口与Shi m adzu M odel LC -10A 联接 离子化方式:电喷雾离子化(ES I );离子极性:正离子;选择性离子检测:腺苷m z :268 M +H I +;尿苷m z :267 M+Na I +;2-氯腺苷(I S )m z :302 M +H I +;ES I 源温度:380 ;脱溶剂和加热块温度分别为250 和200 ;源电压:+4.0k V ;检测电压:1.5k V ;脱溶剂电压:-18V ; -阵列偏转电压:45V ;雾化气(N 2)流速为4.5L m i n491第2期分析科学学报第21卷l.3样品制备冬虫夏草及其替代品购于药店将烘干后的冬虫夏草或其替代品研为粉末状约20目然后准确称取约1.000g样品置于索氏提取器中用100mL甲醇索氏提取4h将甲醇提取物过滤并将滤液真空干燥残渣用10mL M illi-超纯水溶解然用0.45卜m滤膜过滤后备用2结果与讨论2.l色谱条件的优化缓冲液A和由于尿苷腺苷和2-氯腺苷有着相似的结构因此它们难于分离采用包含K H2PO4M e OH B的流动相及梯度淋洗系统8]分离效果也不佳本文优化了色谱条件以水甲醇和甲酸为流动相使用Shi m adzu VP-ODS柱可使尿苷腺苷和2-氯腺苷良好分离研究发现流动相的p H值和有机修饰剂的含量对分离影响最大当流动相中甲酸的浓度在0.2%～2.0%范围时这三种物质能被完全分离但当甲酸的浓度低于0.8%时离子化效果比较差考虑到分离和离子化两因素选择甲酸为1.0% 2.l ES I-M S条件的优化在m/z50～350之间扫描时可得尿苷腺苷标准物质及I S的质谱由其质谱知腺苷以其分子离子M+H]+为基峰而尿苷以分子离子M+Na]+为基峰M+H]+为第三强峰选m/z268的M+H]+峰和m/z267的M+Na]+峰定量分析尿苷和腺苷用腺苷标准溶液和I S注入LC/M S用S I M模式监测这些化合物从而得其LC/ES I-M S总离子流图T I C如图1A从图1A可知各组分达到了基线分离分离效果优于高效液相色谱和毛细管电泳等方法F i g.l LC/ES I-M S T I C w it h P Os itive S I M m OdeA S t andar ds of uri di ne10卜g mL-1adenosi ne10卜g mL-1and I S10卜g mL-1B M et hanol eXtract of Cor d y ce p s si nen-si s f r o m S i chuan p r ovi nce1uri di ne2.adenosi ne32-chl or oadenosi ne2.3方法的准确度和精密度每一组分配制七个非零标准以绘制标准曲线其中尿苷的浓度为2.0～110.0卜g mL-1腺苷的浓度为1.0～120.0卜g mL-1以尿苷或腺苷和IS的峰面积比Y对各组分浓度X卜g mL-1线性回归线性方程和线性范围分别为尿苷Y=0.07854X+0.00627和2.0～110.0卜g mL-1腺苷Y=0.1461X+0.0124和1.0～120.0卜g mL-1尿苷和腺苷检出限信噪比为3分别为0.3卜g mL-1和0.2卜g mL-1尿苷腺苷内标的保留时间分别为2.143.624.75m i n加入150卜g和200卜g尿苷150卜g和200卜g腺苷标准液物质于藏产冬虫夏草中按~1.3样品制备~方法提取样液重复六次测定尿苷和腺苷含量结果列于表1Table l S u mm ar y Of P recis iOn and accurac y Of uri di ne and adenOs i neS a m p le Added卜g mL-1Found卜g mL-1RSD%n=6Recover y%U ri di ne15.014.62.897.420.019.42.297.0Adenosi ne15.0015.52.6103.320.0019.71.998.52.4样品分析利用本法同时分离和测定冬虫夏草和替代物中活性成分图1B为川产冬虫夏草甲醇提取物的LC/591第2期周菊峰等=LC!ES I-M S分离和测定冬虫夏草及其代用品的有效成分第21卷ES I-M S T I C样品的定量分析结果列入表2结果表明天然冬虫夏草和替代物中各组分的含量有差异天然冬虫夏草尿苷和腺苷的含量明显低于其替代物中不同产地天然冬虫夏草和蚕蛹虫草中尿苷和腺苷的含量也有一定差别Table2Results f Or t he deter m i natiOn Of uri di ne and adenOs i ne i n COrd y ce P s s i nens is and COrd y ce P s m ilit arrisSource U ri di ne<卜g mL-1>Adenosi ne<卜g mL-1>Nat ural Cor d y ce p sT i bet441168i n g hai316147S ichuan187117Cult ured Cor d y ce p sJi an g Xi m y celi a8922236Yunnan Cor d y ce p s m ilitarris11871240Hebei m y celi a6741385参考文献=[1]Zhu J S Hal p er n G M Jones K.J.A lter n Co m p l e m ent M ed.[J] 19984<3>=289.[2]郑虎占董则宏余靖等.中药现代研究与应用[M].北京=学苍出版社1999=699.[3]吴洪臻董新红马德恩颜春华孟舒姜泓刘珂.中草药[J] 20003l<8>=576.[4]李绍平李萍季晖张平等.药学学报[J] 200136<6>=436.[5]李雪芹包天桐王雁.中草药[J] 1995l7<4>=40.[6]陈明张荣.中成药[J] 1995l7<4>=40.[7]郭澄朱杰张纯等.中国中药杂志[J] 199823<4>=236.[8]吴春敏叶榕平.中草药[J] 199930<9=>658.[9]L is S P L i P T i na T X et al.E l ectr o p horesis[J] 200122=144.[10]杨更亮李海鹰刘海燕王德先李保会陈义.分析化学[J] 200230<9>=1081.S e P arati On and D eter m i nati On Of Acti ve CO m P Onents i nCOrd y ce P s S i nens is and Its S ubstit utes w it h LC/ES I-M SZ HOU Ju-f en g12Z HOU Yun1GUO Fan g-C i u2HUANG Lan-f an g。
比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量
比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量应用苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水杨酸法和高碘酸钠氧化法建立虫草多糖和甘露醇的定量分析方法，并比较市售天然冬虫夏草和人工栽培蛹虫草在多糖和甘露醇含量上的差异。
结果发现，用比色法测定三种天然虫草和六种蛹虫草中多糖和甘露醇的含量，其多糖平均加样回收率分别为：94.7％(RSD为2.29％)，甘露醇的含量平均加样回收率为98.8％(RSD为1.79％)。
实验表明，本研究方法可用于虫草多糖和甘露醇的定量分析。
冬虫夏草；蛹虫草；虫草多糖；甘露醇；比色法S567.35A冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，为我国名贵的滋补强壮中药。
近代医学认为，冬虫夏草能治劳咳痰血、盗汗、阳痿、遗精、黄疸病、肺结核及老人衰弱慢性咳喘等，有强壮而兼收镇静之效果。
所含的冬虫夏草多糖能提高机体的免疫功能，并提高血清的皮质酮含量，促进机体核酸及蛋白质的代谢，具有抑瘤作用［1、2］。
所含的D-甘露醇具有利尿脱水、镇咳、祛痰和平喘之功效［3］［4］。
目前由于过度挖掘，导致了生态环境的严重破坏，因此其替代品人工栽培的的蛹虫草（Cordyceps militaris）日益受到人们的重视。
本实验用比色法测定了冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量，为冬虫夏草和蛹虫草质量品质的评价研究提供了科学依据。
1 仪器和试剂1.1仪器万分之一分析天平Spectrophotometer DU 640，Mettler ae200，十万分之一分析天平Sartorius BP211D，XW-80A 涡旋混合器购自上海医科大学仪器厂产品。
1.2试剂醋酸胺、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸钠、3,5-二硝基水杨酸、重蒸苯酚、亚硫酸钠、氢氧化钠和酒石酸钾钠等均为国产分析纯试剂。
标准品葡萄糖为美国Sigma公司产品，甘露醇(分析纯)为国药集团化学试剂有限公司产品，L（+）-鼠李糖为中国医药（集团）上海试剂公司产品。
虫草素、虫草酸、腺苷提取及含量测定实验方案
虫草素及虫草酸提取及含量测定实验方案一，实验目的虫草素、腺苷是蛹虫草的重要活性成分，虫草酸也是虫草的重要组成成分。
对大米培养基培养出的虫草子实体，和活体蚕蛹培养出的虫草子实体在加热干燥和冷冻干燥两种条件下，进行虫草素、虫草酸及腺苷的提取及含量测定。
分析大米培养基是否与活体蚕蛹在培养虫草方面有差异，检验干燥的方式是否对虫草素、腺苷、虫草酸的提取有影响。
二，实验材料两种虫草子实体（大米培养基，蚕蛹）三，实验3.1仪器与药品甲醇色谱纯、乙氰色谱纯、虫草酸标准品、腺苷标准品、虫草酸标准品；HPLC相关仪器。
水为超纯水。
3.2提取方法虫草素、腺苷、虫草酸均采用水超声提取法3.2 提取过程精确称取干燥至恒重的两种虫草子实体（粉碎过0.25mm 筛）各0.2g，加水20ml超声提取50min，过滤，滤液经冷冻干燥后定容至5ml，最后过0.22μm滤膜，保存备用。
3.3标准工作液配制精密称取虫草素、腺苷、虫草酸对照品适量,加超纯水,超声波震荡溶解,最后定容分别配制成0.1、0.2g/L，虫草酸1.0 g/L的标准储备液备用．3.4 测定方法采用高效液相色谱法（HPLC法）测定3.5 色谱条件虫草素、腺苷：流动相为甲醇（A）与水（B），采用梯度洗脱，洗脱程序：O-5min ，2%A；5-10min，2-12%A；1O-12min，12-15%A； 12-30min，15%A。
色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×250mm，5μm), 检测波长为260nm,柱温为30℃，流速1mL/min，进样量20μL。
虫草酸：色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×250mm, 5μm) , 柱温30℃。
流动相: 乙腈∶水(体积比80∶20) , 等度洗脱, 流速0.8mL/min, 柱温30 ℃。
检测器为waters2414示差折光检测器(RID) , 进样量20μL。
四，实验结果4.1 虫草素、虫草酸、腺苷等的标准曲线精密量取虫草素标准品1,2,5,10,20，40μL进样分析；量取腺苷标准品0.5,1，2.5,5,10,30μL；量取虫草酸标准品12,18,24,30,36,40μL通过计算获得虫草素、腺苷、虫草酸标样的进样量与峰面积的线性回归方程。
冬虫夏草中各种化学成分的检测方法
侯芳菲（天津生物工程职业技术学院 天津 300400）冬虫夏草中各种化学成分的检测方法冬虫夏草具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、免疫调节、保护受损肝肾、镇静和抗疲劳等作用，冬虫夏草的化学成分复杂,近五年有关冬虫夏草化学成分测定方法的研究对象主要为核苷类、甘露醇、多种氨基酸、甾醇类及无机元素等。
1 核苷类物质的测定核苷类物质为冬虫夏草的主要活性成分之一,具有广泛的生理功能,其中以虫草素、腺苷等具有明显的药理作用。
近五年的测定方法主要为高效液相色谱法和毛细管电泳法。
1.1 HPLC方法测定中药成分非常复杂,H P L C因其具有各种分析柱、高选择性和高灵敏度的检测器，所以具备分离效能高、分析速度快、灵敏度高和适用范围广等优点，所以成为中药研究的最重要的分析方法。
郑永彪[1]等建立了冷冻保鲜冬虫夏草中尿苷和腺苷的HPLC测定方法。
采用Waters sunfire色谱柱(4.6mm×250mm，4.6μm),流动相系统为乙腈和水的比例和体积流量的梯度洗脱程序,柱温35℃,检测波长260nm。
结果尿苷和腺苷的线性范围分别为0.0340～0.340μg,0.00494～0.0494μg,平均加样回收率分别为98.70%(RSD为0.48%)、97.39%(RSD为1.6%)。
该方法简便快捷、准确精密、重复性好，能用于冷冻保鲜冬虫夏草中腺苷和尿苷的同时测定。
周伟平[2]等建立了采用Agilent EclipseXDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱摘 要：阐述近五年来冬虫夏草中核苷类、甘露醇、多种氨基酸等成分的检测方法，其中包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法等方法。
关键词：冬虫夏草 化学成分 检测同时测定西藏产冬虫夏草中尿苷及腺苷的含量的方法，检测波长为260nm，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温33℃。
尿苷及腺苷的线性范围为32.95～439.3μg/mL(r=0.9999)和3.486～46.48μg/mL(r=0.9999)，平均回收率分别为98.5%、95.6%，RSD值分别为1.8%和2.4%(n=6)。
冬虫夏草中各种化学成分的检测方法
冬虫夏草中各种化学成分的检测方法作者：侯芳菲来源：《农业工程技术·农产品加工》2013年第03期摘要：阐述近五年来冬虫夏草中核苷类、甘露醇、多种氨基酸等成分的检测方法，其中包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法等方法。
关键词：冬虫夏草化学成分检测冬虫夏草具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、免疫调节、保护受损肝肾、镇静和抗疲劳等作用，冬虫夏草的化学成分复杂，近五年有关冬虫夏草化学成分测定方法的研究对象主要为核苷类、甘露醇、多种氨基酸、甾醇类及无机元素等。
1 核苷类物质的测定核苷类物质为冬虫夏草的主要活性成分之一，具有广泛的生理功能，其中以虫草素、腺苷等具有明显的药理作用。
近五年的测定方法主要为高效液相色谱法和毛细管电泳法。
1.1 HPLC方法测定中药成分非常复杂，HPLC因其具有各种分析柱、高选择性和高灵敏度的检测器，所以具备分离效能高、分析速度快、灵敏度高和适用范围广等优点，所以成为中药研究的最重要的分析方法。
郑永彪[1]等建立了冷冻保鲜冬虫夏草中尿苷和腺苷的HPLC测定方法。
采用Waters sunfire色谱柱（4.6mm×250mm，4.6μm），流动相系统为乙腈和水的比例和体积流量的梯度洗脱程序，柱温35℃，检测波长260nm。
结果尿苷和腺苷的线性范围分别为0.0340～0.340μg，0.00494～0.0494μg，平均加样回收率分别为98.70%（RSD为0.48%）、97.39%（RSD为1.6%）。
该方法简便快捷、准确精密、重复性好，能用于冷冻保鲜冬虫夏草中腺苷和尿苷的同时测定。
周伟平[2]等建立了采用Agilent EclipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱同时测定西藏产冬虫夏草中尿苷及腺苷的含量的方法，检测波长为260nm，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温33℃。
尿苷及腺苷的线性范围为32.95～439.3μg/mL（r=0.9999）和3.486～46.48μg/mL（r=0.9999），平均回收率分别为98.5%、95.6%，RSD值分别为1.8%和2.4%（n=6）。
一种虫草类药材中虫草酸的检测方法
一种虫草类药材中虫草酸的检测方法虫草酸是一种重要的生物活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。
因此，准确、快速地测定虫草酸含量对虫草类药材的质量控制具有重要意义。
本文将介绍一种用于虫草类药材中虫草酸含量测定的方法。
一、样品准备首先，需要将虫草样品粉碎成细粉，以增加提取效率。
然后，取适量的细粉样品，加入适量的乙醇进行浸泡提取。
提取条件包括浸泡时间、浸泡温度和乙醇浓度等，需根据实际情况进行优化。
二、虫草酸的定量分析1.高效液相色谱法将提取得到的虫草样品溶液进行滤过，然后取适量的滤液注入高效液相色谱仪中进行分析。
色谱条件一般为：流动相为甲醇-水，梯度洗脱；检测波长为254nm；色谱柱温度为25℃；流速为1mL/min等。
通过测定峰面积，结合外标法，可以计算出虫草样品中虫草酸的含量。
需要注意的是，色谱条件和外标的选择要根据实际情况进行优化。
2.红外光谱法将提取得到的虫草样品溶液干燥，然后制备成样品片。
利用红外光谱仪对虫草样品进行扫描测试，记录虫草酸的吸收峰。
通过比对样品的光谱图与标准库中虫草酸的光谱图，可以确定虫草样品中虫草酸的含量。
红外光谱法具有快速、简便的特点，适用于虫草样品中虫草酸含量的初步检测。
三、质量控制1.确保仪器的稳定性和准确性，定期进行校准和维护。
2.样品制备过程中要避免样品受到杂质的污染，确保测定结果的准确性。
3.重复测定样品以确保结果的可靠性，同时建立质控图表，及时发现异常数据。
四、结论虫草酸是虫草类药材中的重要成分，对其含量进行准确测定具有重要意义。
本文介绍了一种适用于虫草类药材中虫草酸含量测定的方法，包括高效液相色谱法和红外光谱法。
通过合理的样品制备和测定条件，可以获得准确、可靠的结果，为虫草类药材的质量控制提供科学依据。
希望这些内容对您有所帮助。
谢谢阅读！。
冬虫夏草活性成分的含量研究概况
2001 ,20 (4) :31 19 余晓斌 ,罗长才 ,缪静. 冬虫夏草多糖提取工艺的优化[J ] . 中草
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究[J ] . 九江医学 ,1999 ,14 (1) :25 9 董钰明 ,刘晖 ,张军 ,等. 比色法测定复方虫草颗粒中甘露醇的含
4 虫草多糖
虫草多糖的研究[18] 由来已久 ,早在 50 年代即 已有虫草多糖的分子结构和药理作用的研究报道 。 日本和台湾对此有较系统的研究 , 并已申请专利 (WO 9943698 ;US 5 ,582 ,828) 。国内的一些大专院 校 ,如中国药科大学 、上海中医药大学 、北京大学及 中国中医研究院等 ,也做了大量的虫草多糖研究 。 其药理作用主要是抗肿瘤 、降糖 、抗免疫损伤性大鼠 肝纤维化 、提高免疫等 。虫草多糖的提取常用乙醇 沉析法 。余晓斌等[19] 对虫草多糖的提取工艺进行 了优化实验 ,经 SAS - RSREG程序计算出回归方程 , 以虫草多糖沉析量回归模型进行数学分析 ,得出乙 醇沉析法的优化条件为 :乙醇Π发酵液 (3. 8∶1) ;醇析
冬虫夏草实验报告
一、实验目的1. 了解冬虫夏草的药用价值和活性成分；2. 掌握冬虫夏草的提取方法；3. 分析冬虫夏草中的主要活性成分。
二、实验原理冬虫夏草（Cordyceps sinensis）是一种珍贵的药用真菌，具有滋补强壮、补肾填精、抗疲劳、抗衰老等功效。
其主要活性成分包括虫草素、虫草多糖、虫草酸等。
本实验通过提取冬虫夏草中的活性成分，并对其进行分析，以期为冬虫夏草的开发和应用提供理论依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：冬虫夏草、甲醇、正己烷、无水乙醇、水、硫酸钠、活性炭、硅胶、薄层色谱板、紫外分光光度计等；2. 实验仪器：电子天平、旋转蒸发仪、恒温水浴锅、电热恒温干燥箱、紫外-可见分光光度计、薄层色谱仪等。
四、实验方法1. 冬虫夏草的预处理将冬虫夏草剪成小段，用甲醇浸泡24小时，然后置于60℃恒温干燥箱中干燥，备用。
2. 冬虫夏草的提取取干燥的冬虫夏草，加入甲醇，在超声条件下提取2小时。
提取液过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的水，用正己烷萃取3次，弃去正己烷层。
水层中加入适量的活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的硫酸钠，搅拌静置，过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的无水乙醇，搅拌静置，过滤，滤液浓缩至一定体积，得到冬虫夏草提取液。
3. 活性成分分析（1）虫草素含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草素含量。
（2）虫草多糖含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草多糖含量。
（3）虫草酸含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草酸含量。
五、实验结果与分析1. 虫草素含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草素含量为0.5mg/g。
2. 虫草多糖含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草多糖含量为1.2mg/g。
3. 虫草酸含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草酸含量为0.3mg/g。
HPLC法测定冬虫夏草中核苷类成分的含量
HPLC法测定冬虫夏草中核苷类成分的含量陈亚丽;洪妍;李继平;师志强;陈宇;薛志远;刘慧彬;封士兰【摘要】Objective To determine the content of nucleosides (adenosine, uridine, inosine, guanosine and thymidine) in Cordyceps sinensis samples processed using different methods (smoked dry, fresh, dried) by HPLC.Methods The samples were extracted with purified water.The mobile phase was methanol-water, the column temperature was 30 ℃ and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results The calibration curves for the 5 nucleosides in Cordyceps sinensis displayed a good linear relationship with correlation coefficients above 0.999 0.The precision relative standard deviations (RSD) and the repeatability RSD of 5 standards were 0.31%-1.95%(n=5), 0.50%-2.56%(n=5), respectively.The recovery rate was in the range of 99.46%-100.11%.Conclusion This method is sensitive, simple, rapid, accurate and with good reproducibility so it can be used for the determination of the nucleosides in Cordyceps sinensis and provided an experimental basis for evaluating different Cordyceps sinensis more comprehensively.%目的建立用HPLC法测定不同方法(熏干、新鲜和阴干) 处理冬虫夏草样品中核苷类成分(腺苷、尿苷、肌苷、鸟苷和胸苷)含量的方法.方法样品用纯化水超声提取,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温:30 ℃,流速:1.0 mL·min-1.结果虫草中含有的5种核苷标准曲线的相关系数均在0.999 0以上,精密度检测RSD 值为0.31%~1.95%(n=5),重复性检测RSD值为0.50%~2.56%(n=5),回收率在99.46%~100.11%之间.结论该方法灵敏、简便、快速、准确、重复性好,能有效测定虫草中核苷类成分的含量,可为评价虫草的质量提供依据.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2017(032)004【总页数】4页(P403-406)【关键词】冬虫夏草;腺苷;尿苷;高效液相色谱法;含量测定【作者】陈亚丽;洪妍;李继平;师志强;陈宇;薛志远;刘慧彬;封士兰【作者单位】兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州730000;兰州大学药学院,兰州 730000;甘肃原野农庄农牧科技开发有限公司,兰州730000;兰州大学药学院,兰州 730000【正文语种】中文【中图分类】R927.2冬虫夏草(Cordyceps sinensis)简称虫草，系麦角菌科虫草属真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的真菌子座及幼虫尸体的复合体[1]。
冬虫夏草含量测定方法的改进
冬虫夏草含量测定方法的改进罗霄;代琪;永盛【摘要】改进了冬虫夏草药材中腺苷的含量测定方法。
采用Welchrom C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；以0.1％磷酸溶液（调pH 2.8）－甲醇（95：5）为流动相；流速：1.0 mL／min；柱温：25℃；检测波长：260 nm。
结果表明：腺苷在0.08432～0.42160μg（ r＝0.9998）范围内呈良好的线性关系；腺苷回收率为97.57％（ RSD＝0.83％）。
本法简便、准确、重现性好，可用于冬虫夏草的含量测定。
%To improve the method for the determination of adenosine in Aweto by RP -HPLC, the samples were separated on Welchrom C 18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with methanol and0.1%phosphoric acid at a flow rate of 1.0 mL/min.The detections were done at 260 nm and 25 ℃.The results showed that adenosine presented a good linear correlation in range of 0.08432 ~0.42160 μg ( r=0.9998 ) .The average recoveries was 97.57% ( RSD=0.83%) .This method was simple , precious and reproducible , could be used to determine adenosine in Aweto.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2015(000)016【总页数】3页(P149-150,225)【关键词】冬虫夏草;腺苷;含量测定【作者】罗霄;代琪;永盛【作者单位】成都市食品药品检验研究院，四川成都 610045;成都市食品药品检验研究院，四川成都 610045;成都市食品药品检验研究院，四川成都 610045【正文语种】中文【中图分类】R284.1冬虫夏草是我国名贵中药，为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠娥科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。
HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量
HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量俞青芬【摘要】采用Kromasil-C18(4.6 min×250 mm,5 μm)色谱柱,以0.05 mol/L磷酸二氢钾-甲醇(90 : 10)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温为35℃,建立HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量.实验结果表明,腺苷含量在0.005～0.2μg(r=0.999 3)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为101.19%,RSD=1.45%(n=3).该方法准确可靠、结果稳定、重现性好,可有效控制制剂的质量.【期刊名称】《广西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(028)002【总页数】4页(P65-68)【关键词】冬虫夏草菌粉;含片;腺苷;HPLC【作者】俞青芬【作者单位】青海民族大学,化学系,青海,西宁810007【正文语种】中文【中图分类】O652冬虫夏草［C o rdy cep s sinensic（Berk.）Sacc.］为麦角菌科真菌冬虫夏草菌在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是中国特有的虫生真菌，是传统的名贵药材，它能补肾壮阳、易肺平喘、止血化痰，可用于治疗多种疾病，如病后体虚、阳痿遗精、肾虚腰疼、健忘、肺虚咳喘等［1］。
现代医学研究也证实，虫草有祛痰平喘、改善肾功能、提高免疫能力、降血脂、调节性功能、抗衰老、抗癌［2-3］等作用。
冬虫夏草的主要成份为腺苷，2000版中国药典［4］及文献［5］均采用高效液相色谱法测定腺苷的含量。
但在实验中采用上述2种方法检测，峰形对称性不好，严重拖尾且有一干扰峰。
反相HPLC色谱法具有快速、准确、简单、精密度高、重复性好、检出限低等优点，在中药材及其制剂有效成份分析检测方面有一定的应用潜力［6-8］。
我们采用RP-HPLC［9-10］分离技术测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量，方法具有快速、准确、重现性好及样品前处理方法简单易行、回收率高等优点［11］，为其质量鉴定和制剂质量控制提供了理论依据，并可为含上述藏药的制剂提供新的定量方法。
GC-YL-80040冬虫夏草检验操作规程
题目： 冬虫夏草检验操作规程
编号：TS-GC-YL-80040-02
制定人：
制定日期：2020年月日
版本：2
页数：1/3
审核人：
审核日期：2020年月日
颁发部门：质 量 部
批准人：
批准日期：2020年月日
生效日期：2020 年 月 日
目的：规范冬虫夏草原药材检验操作
范围：冬虫夏草原药材检验
标准曲线的制备分别精密量取砷标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分别精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml，摇匀，加10%抗坏血酸溶液（临用前配制）1ml，摇匀，用盐酸溶液（20→100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置80℃水浴中加热3分钟，取出，放冷。取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
C法取供试品粗粉0.5g，精密称定，置瓷坩埚中，于电热板上先低温炭化至无烟，移入高温炉中，于500℃灰化5～6小时（若个别灰化不完全，加硝酸适量，于电热板上低温加热，反复多次直至灰化完全），取出冷却，加10%硝酸溶液5ml使溶解，转入25ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
镉标准贮备液的制备精密量取镉单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含镉（Cd）1μg的溶液，即得（0～5℃贮存）。
标准曲线的制备分别精密量取镉标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含镉Ong、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分别精密吸取10μl，注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
虫草中虫草素和虫草酸含量的测定 汪陈才
HPLC测定祁连产冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量汪陈才（2008 B,青海师范大学，化学系）摘要为建立一种有效的利用高效液相色谱法（HPLC）测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量的方法，用甲醇超声提取虫草素、水超声提取虫草酸，再利用高效液相色谱、示差折光检测器和紫外检测器分别测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量。
通过对样品进行预处理，色谱条件和方法指标的验证，建立了定量检测虫草中虫草素和虫草酸的一种有效方法，二者精密度( RSD) ≤1.77% 。
虫草素、虫草酸检出限为50 ng/mL 和1.5 μg/mL。
测得样品中虫草素和虫草酸的平均组分含量为0.258mg·g-1和79.7mg·g-1二者回收率在93.7%～98.4%之间。
该方法具有快速、准确、简便的特点。
关键字: 高效液相色谱虫草虫草素虫草酸Abstract:A high performance liquid chromatographic (HPLC) with diode- array detector (DAD) and refractive index detector ( RID) method for the determination of cordycepin and cordycep acid in cordyceps sinensis was studied. Both of it were extracted by Methanol and water with Ultrasonic wave. Then by using high performance liquid chromatography, refractive index detector and a UV detector were measured in Cordyceps and cordycepic acid content. Based on the sample pretreatment, chromatographic conditions and method validation, establishes the quantitative detection of cordycepin and cordycepic acid is an effective method. Their precision (RSD) were lower than 1.77%. The samples of cordycepin and cordycep acid content averages are 0.258 mg•g1and 79.7mg•g-1. Their recovery were between 91.9% and 93.7%. The method is rapid, accurate and simple features.Key words HPLC; Cordyceps sinensis; Cordycepin; Cordycep acid冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)与人参、鹿茸齐名，为中国三宝之一。
虫草品质测评方案
虫草品质测评方案1. 背景虫草是一种珍贵的中药材，其主要产地在中国南方的云贵高原和四川地区。
越来越多的消费者开始关注虫草的品质，因此虫草的品质测评也变得非常重要。
经过市场调研和对虫草的了解，我们建议使用以下方式对虫草进行品质测评。
2. 方案2.1 采样为了保证测评结果的可靠性和代表性，我们需要在虫草的产地和销售渠道中随机采集样本。
在采样时，我们需要注意以下几点：•随机采集：在产地中选择一定数量的虫草株进行采集，并避免选择同一地点的虫草进行采集，以保证样本的代表性。
•样本数量：样本数量需要根据实际情况来确定，在保证可靠性和代表性的基础上，可以适当控制样本数量，以降低测评的成本和时间。
•样本保存：在采集完成后，需要将样品保存在密封的袋子或容器中，并标注好采集时间、地点和编号等信息，以便后期的处理和测评。
2.2 外观评价在虫草的品质测评中，外观评价是一项非常重要的指标。
虫草的外观主要包括虫草的大小、形状、色泽、气味等方面。
在进行外观评价时，我们需要注意以下几点：•样品准备：从采集来的样品中，挑选出完整、无病虫害的虫草样品进行评价。
•评价指标：考虑到虫草的特殊性，我们需要制定适合虫草的外观评价指标。
可以考虑依据虫草的大小、形状、色泽、气味等方面来制定评价指标。
•评价方法：评价方法需要在评价指标的基础上进行制定。
通常可以使用几何平均值、平均分、分级评价等方法进行评价。
2.3 化学成分分析虫草的化学成分对虫草的品质至关重要。
虫草中主要含有的化学成分有多糖、三萜类化合物、蛋白质和氨基酸等。
在进行化学成分分析时，我们需要注意以下几点：•样品准备：从采集来的样品中，挑选出较为典型的样品进行化学成分分析。
•方法选择：针对不同的化学成分，需要选择不同的分析方法。
例如，可以使用高效液相色谱法对多糖进行分析，使用气质联用法对三萜类化合物进行分析。
•分析结果：化学成分分析的结果需要进行分析和解释。
例如，可以将化学成分的浓度进行比较和统计，制定化学成分的指标和标准。
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冬虫夏草及虫草制品中活性成分检测方法的建立及含量测定
韩贵香
青海珠峰虫草药业有限公司810001
冬虫夏草的药用价值主要来源于其中的活性成分，而劣质的虫草制品中，这些活性成分的含量非常低，部分假冒产品中甚至完全不含活性成分。
这些劣质、假冒的虫草制品的药用价值非常低下，有些甚至含有有毒成分，对使用者的健康危害很大。
因此，对冬虫夏草相关产品的质量检测必须从活性成分的检测入手，一方面检测其是否有虫草特有的多种活性成分，另一方面测定这些活性成分的具体含量，以保证产品的能效和药用价值。
一、冬虫夏草和虫草制品概述
虫草是一种特殊的药用真菌，其中最主要的一种就是冬虫夏草，由于其产生方式非常奇妙，而且药用价值很高，所以在我国具有很高的知名度。
从生理功效上来看，这种药物对高血脂、动脉硬化、免疫力低下、心脑血管疾病等都有很好的疗效。
遗憾的是，冬虫夏草的生长地域极其有限，人工培育技术也还未成熟，因此目前人们往往使用蛹虫草代替冬虫夏草作为虫草制品的原料。
以超临界萃取、水提法、醇提法等分离方式将冬虫夏草或蛹虫草中的活性成分提取出来，制作成丸剂、胶囊、口服液等虫草制品，不仅服用方便，而且由于提取精制时去除了虫草中的部分有害成分，所以毒副作用更小，这使得虫草制品在近些年的市场愈发火爆。
二、冬虫夏草和虫草制品的活性成分检测方法
冬虫夏草有多种活性成分，其中最主要的是虫草酸、核苷类物质、氨基酸、虫草多糖。
这些成分中以虫草酸和核苷类物质对虫草制品的药用价值影响最大，因此这里将主要针对这两种活性成分讨论其种类与含量的检测方法。
（一）虫草酸的检测方法
虫草酸又被称为D-甘露醇，对抗自由基和机体免疫能力都有很好的提升效果，而且能补肺益肾、抑制病菌，因此其含量的检测对虫草质量具有决定性意义。
针对虫草酸的检测方法可以分为定性检测和定量检测，其中定性检测的机理是虫草酸和三氯化铁的反应，这种反应只能在碱性溶液中发生，反应结果会生成无法通过振荡消失的棕黄色沉淀，但只需再添加过量碱液，沉淀就会溶解，令整个溶液呈现棕黄色。
不过该检测方法的局限性较强，只能检测高纯度甘露醇，一旦样品中的杂质增多，检测精度会大大下降，所以在检测成分较为复杂的虫草时，我们往往使用定量检测。
定量检测的方法很多，常用的有比色法、碘量法、折光率法、旋光度法、薄层层析法、气相色谱法、高效液相色谱法等，这些方法的共同特点是，检测复杂成分虫草时，能较为精确地检测出其中的甘露醇含量。
目前以比色法在实际检测中的应用最多。
（二）核苷物质的检测方法
冬虫夏草中的核苷类物质种类非常多，其中最主要的是虫草素，其余还有腺苷酸、鸟苷酸、次黄嘌呤核苷酸、腺嘌呤、尿嘧啶等。
这些物质都对人体的生理调节有重要作用，有多种生物活性，而且对人体必须的核酸来说，核苷类物质是前体物质，因此对人体免疫力也有促进作用。
核苷物质检测的方法有两种，分别是光谱法与色谱法，但光谱法的应用较少。
色谱法则又可具体分为多种，常见的有紫外光分光度法、高液相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱扫描法等。
其中紫外光分光度法和薄层色谱扫描法往往配合使用，但即使二者结合，检测效果也不甚理想，不仅检测步骤繁琐复杂，而且重现性不高，误差也很大，所以这两种方法应用不多。
毛细管电泳法虽然检测精度高，检测效果好，但对仪器条件的要求很高，相当一部分实验室无法达成检测条件，因此普及性也不高。
高效液相色谱法由于其效果好、操作简便、分析速度快、灵敏度高、应用范围广泛的特点而为人们所青睐，在现阶段的应用最广。
该方法通过高压输液系统向色谱柱中高速输入各种流动的液相试剂，这些试剂会因为极性各不相同而在其中分离开来，之后只要检测分离的各种成分，就能确定出各类核苷物质的含量。
三、冬虫夏草和虫草制品的有害物质检测
需要注意的是，原始的冬虫夏草中，并非全是有益成分，也有部分成分对人体有害，而劣质虫草制品中有时也会因为人为掺杂而混入有害成分。
这些有害物质有些也具有活性化特征，会与有益活性成分混杂在一起，增加检测的难度。
因此在实际针对虫草制品进行活性成分检测时，应注意将这类物质单独提取和检测，避免其对检测结果和检测质量造成影响。
四、结语
人们对健康的重视程度越来越高，毒副作用较小的中医药由此获得了更好的发展，冬虫夏草的相关制品在这种背景下必将获得更好的发展契机。
在这种情况下，对其质量的检测显得尤为重要，如果不能强化相关检测方法，导致劣质产品流入市场，对相关产业会造成很严重的负面影响。
因此，针对活性成分的检测方法仍需不断改良，使其更加简便化、精确化，争取令相关检测技术在实验室之外也能实现实际应用，为虫草制品的质量和市场的良性发展提供保障。
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