HPLC法测定黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量

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UPLC_ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量

第26卷,第3期光　谱　实　验　室Vol.26,No.3 2009年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2009UPLC-ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量杨俊王文辉　王齐　孙晓东　朱艳琴(昆明理工大学分析测试研究中心　昆明市学府路253号　650093)摘　要　采用Waters A cquity U P L C BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7 m),流动相为乙腈-水(30∶70),流速为0.2mL·m in-1,柱温30℃,用U P LC-EL SD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

黄芪甲苷在0.10—0.50mg·mL-1范围内有良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率(n=6)为98.9%。

该方法快速、准确、重复性好,为黄芪的质量控制提供了一种快速准确的检测方法。

关键词　超高效液相色谱-蒸发光散射;黄芪;黄芪甲苷中图分类号:O657.7+2 文献标识码:B 文章编号:1004-8138(2009)03-0484-031　前言黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.V ar.mongholicus(Bunge.)H siao或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)B unge.的干燥根,具有补气升阳、固表止汗、托疮生肌、利水消肿的作用,为许多中成药的组成成分[1]。

黄芪中的主要化学成分包括皂苷类、黄酮类及多糖类等[2]。

黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分,是其质量控制的主要指标,其分析方法已有比色法、UV 法、荧光分光光度法、薄层扫描法、HPLC法、HPLC-M S等[3—8]。

其中比色法和薄层法存在定量不够准确的缺点,HPLC-MS虽然有较高的准确性和灵敏度,但使用仪器昂贵,操作复杂,故不适合常规分析,目前高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法是较为常用的黄芪甲苷的测定方法。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展摘要：黄芪是一种常见的中草药材，具有滋补养生、增强免疫力、抗疲劳等多种功效。

黄芪甲苷作为黄芪中的一种主要有效成分，对其含量的测定一直是研究的热点。

本文将对黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展进行综述，以期为黄芪的质量控制和药用价值的评价提供参考。

一、引言黄芪，又名黄芪、土黄芪，为豆科植物黄芪的根。

黄芪在我国的使用历史非常悠久，被誉为“草中之皇”，在中医药中具有益气健脾、祛痰利水、固表止血等功效。

现代研究表明，黄芪还具有增强免疫力、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种生物活性，因此在食品、保健品、药品等领域有广泛的应用价值。

1. HPLC法HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是目前测定黄芪甲苷含量常用的方法之一，其操作简便、分离效果好、重现性高。

常用的色谱柱有C18、C8、C4等，流动相常用乙腈-水、甲醇-水等。

检测波长一般为203nm。

HPLC法在分离和测定黄芪甲苷方面取得了一定的成果，但也存在一定的局限性，例如在样品的制备和前处理过程中易引起黄芪甲苷的流失，影响测定结果的准确性。

2. LC-MS法LC-MS（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry）是一种高灵敏度、高分辨率的分析方法，可对复杂样品进行快速、准确的分析。

LC-MS法结合了液相色谱和质谱分析的特点，可以直接测定样品中的黄芪甲苷含量，并能对其结构进行进一步的鉴定。

由于其分析灵敏度高、选择性好，因此在黄芪甲苷含量测定中得到了广泛的应用。

LC-MS法的仪器设备和操作技术要求较高，且成本较高，限制了其在一般实验室的应用。

3. UV法UV（Ultraviolet）法是通过样品对紫外光的吸收程度来测定样品中目标成分的含量。

黄芪甲苷在紫外光下有特定的吸收峰，可以通过检测其吸光度来测定其含量。

UV法操作简便、成本低，但其检测灵敏度不高，对样品的前处理要求较高，且容易受杂质的干扰。

HPLC测定保健食品中黄芪甲苷的含量

＝０９９９．ｈｖｒｇｃｖｒｓ９３．）Ｔｅａｅａｅｅｏｅｗａ．９ｒｙ９５％（Ｓ－．ＲＤ０９％）ｏｃｓｎＴｅｔｏｌｙｄｉｔｉａａｓ７．Ｃｎｌｉｈｈｄｅｏｅｓｎｌｉｕｏｍｅｍｐｎｈｙｓ
ＴｅｘｅｉｎａａｒｄｕｎＫｏｓ１（．ｍｍ×２０ｍｍ，．ｃｌｉｅｂｌｐａｅｏｓｔｇｈｐｒｅｍｅｔｓｒｅｔｒｍａｉＣ８４６ｗｃｉｏｏｌ５５ｔｍ）ｏｍｎｗｔｔｉｈｓｎｉｉｔｕｈｈｍｏｅｃｓｎｏｅｎｔｌｗｔ（２：８ａａｆｗｒｔｏ．ｍＬｍｉ一Ｔｅｅｃｏｖｌｇａ０ｍｎｅｃｌｍｎｆｃｔｉｉ — ａｅ３６）ｔｏａｆ０・ｎ．ｈｔｔｎｗａｅｎｔｗｓ５ｎａｄｔｏｕａｏｒｅｒｌｅ１ｄｅｉｅｈ２ｈ
ｉｉｐｅｐｅｉｅａｄｒｐｏｕｃｂｅｎｔｃｎｂｅｒｔｅｄｅｅｉａｉｎｏｓｒｇｌｓｄＶｎｐｏｌｓｒｇｌｓｓｍｌ，ｒｃｓｎｅｒｄｉｌ，ａｄｉａｅｕｓｄｆｈｔｒｎｔｏｆａｔａａｏｉｅＩｉｒｐｏｉａｔａａｕｓｏｍｓ
ｌ０２
食品与药品
ＦｏｎｒｇｏｄａｄＤｕ
２１年第１卷第０期０２４２
技术交流・
ＨＰＣ测定保健食品中黄芪甲苷的含量Ｌ
唐炜。，李学涛
（．１临沂市产品质量监督检验所，山东临沂２６０；２辽宁中医药大学药学院，辽宁大连１６０）７０１．１６０

HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

ＧｕｎＺｏｎｖｒｉｆＣＧａｇｈｕ５００）ａｇｈｕＵｉｅｓｙｏＭ，ｕｎｅｏｍｔｄｆｒｅｒｎｔｎｏｔｇｌｓｅｄｘｔｇｉｗｉＰＣ．ｔｏｓＴｅＨｐｒｌＤＳ８ｂｔｃ：ｊｃｉｏｖｌｐｅｈｔｍｉａｏｆｓａｏｏｉｉＲａｉＡｓａａｓｔＨＬＭｅｄｈｙｅｓｒＯｖｄａｏｏｄｅｉａｒｄＩｎＶｒｌｈｈｉＯ２Ｃ１
关键词：ＨＰＣ；黄芪甲苷；黄芪Ｌｄｉ１．６￣ｉｎ１７７９０９０．０ｏ：０３９．ｓ．２２７．０．０９ｓ６２３３文章编号：１７．７９（０９０１７０６２２７２０）．３０１—２
黄芪甲苷的进样量在２２１．范围内．～３２
ｃｌｍｎｗｓｓｄＴｅｍｏｉｈｓａｘｕｅｏｅｏｉｉ．ｔｒ２８．ｅｅｃｏｖｌｎｔａ０ｍｎｅｏｕｎｔｅａｒｓｏｕａｅ．ｂｌｐａｅｗｓｍｔｒｆｃｔｎｔｌｗａ（：）ｔｔｎｗａｅｇｗｓ３ｕｈｅａｉａｒｅａ３６Ｔｄｅｉｈｅｈ２ｎａｄｔｌｍｍｐｒｔｅｗａｈＣｅｕｒｏｅｐｒｔｒ．ｅｕｓＴｅｐｅｉｏｄｓｂｌｙｗｒｎ．ｅｌｅｒｒｎｅｏａｉｒｔｎｃｒｅｗａ－～１．ｔ（０９９）ｆｒＲｄｘｏｍｔｍｅａｕｅｓｌｈｒｃｓｎａｔｉｔｅｅｆｅＲｔｉｎａｉｉＴｉａａｇｆｃｂａｏｕｖｓ２ｈｎｌｉ２３￣ｒ．９ｏａ２ｇ＝９－ｉ

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪，是一种传统中药材，具有滋补养生、益气固表的功效，被广泛用于治疗疲乏无力、气虚乏力、脾胃虚弱等疾病。

黄芪甲苷是黄芪中的一种重要活性成分，具有抗氧化、免疫调节、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。

对黄芪中黄芪甲苷含量进行测定研究，对于黄芪的质量评价、产品开发及临床应用具有重要意义。

一、测定方法的研究进展针对黄芪中黄芪甲苷的测定，目前主要采用的方法包括高效液相色谱法、超高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法、酶联免疫吸附测定法等。

高效液相色谱法是目前应用较为广泛、准确性较高的一种测定方法，主要包括经典的反相色谱法、离子交换色谱法、手性色谱法等。

近年来，超高效液相色谱法的应用也逐渐得到了推广，其具有分离效率高、分析时间短、灵敏度高等优点，对于黄芪中黄芪甲苷的测定具有一定的优势。

二、影响因素的研究进展黄芪中黄芪甲苷含量受多种因素的影响，包括生长环境、采收季节、制备工艺等因素。

生长环境是影响黄芪中黄芪甲苷含量的重要因素之一。

有研究表明，黄芪生长的土壤类型、水分、温度等因素都会对黄芪中黄芪甲苷的含量产生一定的影响。

采收季节也是影响黄芪中黄芪甲苷含量的重要因素之一。

研究表明，黄芪的采收季节不同，其黄芪甲苷含量也会有所差异。

通过研究影响因素，可以更好地掌握黄芪中黄芪甲苷含量的变化规律，为其质量评价提供科学依据。

三、质量评价标准的研究进展针对黄芪中黄芪甲苷含量的质量评价，国家药典对其含量进行了规定，但是现有标准中存在一些不足之处，例如对于不同生长环境、不同采收季节的黄芪，其含量差异较大，当前的质量评价标准并不能完全覆盖。

建立更为科学、合理的质量评价标准，对于规范黄芪的生产加工、保障产品质量具有重要意义。

近年来，一些研究机构对此进行了系统研究，探讨了不同影响因素下的黄芪甲苷含量变化规律，并试图建立更为科学的质量评价标准，为黄芪的质量评价提供了更为系统的依据。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展取得了一定的成果，但仍存在一些挑战和机遇。

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较为黄芪的主要活性成分之一。

能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。

现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。

近年来，对的含量测定方法的研究很多。

本人就几种常用方法作一比较。

1高效液相色谱法(I-R_C法)HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。

1．1 HPLC—uv法属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收f max200．8 nm)。

紫外检测灵敏度低，干扰因素多，目前 HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。

苏瑞强Ⅲ等采用 HPLC法测定黄芪甲苷的含量，色谱柱为YWG—C18柱0．9 mm x250 mm，5 m)，流动相为乙腈一水(1：2．3)，检测波长为 203nm，结果线性范围为0．86—5．27 I,L g／mL，加样回收率为 97．52％，RSD为3．10％。

1．2 HPLC一示差折光检测法由于在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。

池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精 12I服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersi|ODS 2(4．6ram X 200ram，5 I,Lm)，流动相为甲醇一水(67：33)，结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g／ml，回收率为98．1％，RSD为2．02％。

该法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确、可靠。

1．3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中的含量。

色谱柱为Nova—PakC18柱0．9ram xl5Omm，4la,m)，流动相为乙腈一水一磷酸(1：2：O．1)，检测波长为203nm，柱温为40％。

实验中将样品蒸干，采用水饱和的正丁醇溶解，用氨试液洗涤后蒸干，残渣用甲醇溶解。

结果加样回收率为94．7％，RSD为2．6％。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是一种重要的中药材，被广泛用于中医药领域。

其中一种主要的活性成分是黄芪甲苷，它具有抗炎、抗疲劳、抗氧化等多种生物活性。

准确测定黄芪中黄芪甲苷的含量对于评价其药效和质量具有重要意义。

本文将综述近年来关于黄芪中黄芪甲苷含量测定研究的进展。

传统的黄芪甲苷含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）和紫外-可见分光光度法（UV-Vis）。

这些方法在黄芪甲苷的定性和定量上具有很好的精确性和准确性。

这些方法在操作步骤繁琐、时间耗时长、设备成本高等方面存在一定的不足。

近年来，一些新的测定方法被开发出来，以提高黄芪中黄芪甲苷含量的检测速度和准确性。

气相色谱-质谱联用法（GC-MS）可以通过蒸馏浓缩技术，直接从黄芪中提取黄芪甲苷，并通过质谱进行定性和定量分析。

这种方法具有操作简便、准确度高的优点，但对于样品准备的要求较高。

近年来还有一些基于免疫学原理的测定方法被提出。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）可以通过特异性抗体与黄芪甲苷结合，形成抗原-抗体复合物，再通过颜色反应测定黄芪甲苷的含量。

这种方法具有灵敏度高、操作简便的特点，但需要特异性抗体的制备，且可能存在交叉反应的问题。

近年来还有一些基于分子生物学技术的测定方法得到了发展。

实时荧光定量PCR（qPCR）可以通过黄芪甲苷特异性引物和探针进行扩增和检测，并通过标准曲线法计算黄芪甲苷的浓度。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性的优势，但需要标准品的制备和PCR仪器的支持。

近年来关于黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究主要集中在改进传统方法、开发新方法以及应用新技术。

这些研究不仅丰富了黄芪甲苷含量测定方法的选择，而且提高了检测的速度和准确性。

未来的研究还可以进一步探索其他的测定方法，并开展黄芪甲苷与其他成分之间的相互作用研究，以提高黄芪的药效和质量评价。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展引言黄芪，即中药材黄芪，是一种常用的中药材，被用于治疗肝肾不足、气虚乏力、风寒感冒等疾病。

黄芪中含有丰富的活性成分，其中黄芪甲苷是一种重要的化学成分，具有抗氧化、抗炎、免疫调节等多种生物活性。

测定黄芪中黄芪甲苷的含量对其药效和质量的评估具有重要的意义。

本文将介绍目前黄芪中黄芪甲苷含量测定研究的最新进展。

一、黄芪甲苷的药理作用二、黄芪中黄芪甲苷含量测定方法目前，研究人员已经开发出多种方法来测定黄芪中黄芪甲苷的含量，主要包括色谱法、质谱法和光谱法等。

（一）色谱法高效液相色谱(HPLC)是目前测定黄芪中黄芪甲苷含量最常用的方法之一。

该方法具有分离效果好、准确性高、重现性好的特点。

研究人员通常采用C18色谱柱，以乙腈-水为流动相，在不同波长下进行检测，可以实现对黄芪中黄芪甲苷的准确测定。

近年来，研究人员还开发了一种基于光谱技术的测定黄芪甲苷含量的方法。

该方法具有简便、快速的特点，可以实现对黄芪中黄芪甲苷的快速测定。

研究人员通常通过建立黄芪甲苷与特定试剂在特定波长下的光谱特征，来进行黄芪甲苷含量的测定。

近年来，研究人员对于黄芪中黄芪甲苷含量的测定方法进行了进一步的研究和改进，主要体现在以下几个方面：（一）方法的改进研究人员针对目前存在的色谱法、质谱法和光谱法的一些局限性，如检测灵敏度不够高、操作复杂等问题，进行了一系列的改进。

他们通过优化色谱柱、流动相组成、检测波长等条件，改进了色谱法和光谱法的分析方法，使其具有更高的分析灵敏度和准确性。

他们还通过改进萃取和预处理方法，提高了质谱法的检测灵敏度和准确性。

（二）新技术的应用随着科技的发展，研究人员还引入了一些新技术来测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

他们利用人工智能算法对色谱图谱进行分析和处理，提高了测定的准确性和稳定性。

他们还探索了一些新型的色谱柱和检测方法，提高了分析的效率和灵敏度。

（三）标准物质的建立为了提高测定方法的准确性和可靠性，研究人员建立了一套完善的黄芪甲苷标准物质体系。

含黄芪制剂中黄芪甲苷的含量测定

品１５ｍｇ置ｌ００ｍＬ量瓶中，加甲醇适量使
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱议；Ａｌｌｔｅｃｈ２０００蒸发光散射检测器；
ＡＢ２５０Ｄ十万分之一电子天平。
液在该位置上没有色谱峰（图３）。
２．２色谱条件的选择
图１对照品溶液
色谱柱ＤｉｓｃｏｖｅｒＣ１８柱（２５ｃｍｘ４．６ｍｍ，５ｕｍ），流动相甲醇一水（７５：２５），流速１．０ｉｎＬ／ｍｉｉ１，柱温４Ｏ ℃；ＥＬＳＤ：漂移管温度８３．８ ℃，载气（空气）流速２．０Ｌ／ａｉｒｎ，撞
甲苷３０ｇ）。２．１．２供试品溶液的制备精密称取样品液３ｇ，置蒸发皿中水浴
●Ｖ
２５
上蒸干，加水２０ｍＬ使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取４次，每次２０ＩｌｌＬ，合并正丁醇液，用氨试液洗涤２次，每次１０ｍＬ，
药渣加入黄芪，加８倍量水，加热回流提取溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量ｍＬ，置１０ｍＬ量瓶中，加甲ｌｈ，所得水提液过滤，保留待用；再加６倍取上述溶液２量水，加热回流提取０．５ｈ，水提液过滤，醇至刻度，摇匀，即得（每ｌＩＴ１Ｌ中含黄芪

高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

关键词：中药饮片黄芪黄芪甲苷 E800型蒸发光散射检测器高效液相色谱黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。

黄芪甲苷能增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。

黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。

黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。

其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。

黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。

由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。

图1 黄芪甲苷结构式2检测部分2.1仪器本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。

具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。

2.2 分析条件色谱柱：岛津WondaSil C18 Superb 5um流动相：乙腈：水=32:68（V/V）流速：1ml/min柱温：35℃气体流量：2.8L/min蒸发温度：75℃进样量：10μL等度洗脱2.3 标准品溶液的配制和样品处理标准品品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

样品溶液的制备取干燥的黄芪切片，粉碎后，取中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄芪样品溶液。

HPLC法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的研究

HPLC法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的研究目的：探讨采用高效液相色谱法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的价值。

方法：根据高效液相色谱法，色谱柱（150 mm ×4.4mm，5μm）；流动相：乙腈-水（32∶[KG-*3/5]68）；流速1 ml/min；柱温：25℃。

分别对黄芪与红芪中的黄芪甲苷进行含量测定。

结果：在2.024～10.120μg范围内，黄芪甲苷的线性关系良好。

结论：该方法具有准确、稳定、可重复的特点。

黄芪中明显含有黄芪甲苷，而红芪中黄芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鉴别黄芪与红芪。

标签：黄芪；红芪；黄芪甲苷；高效液相色谱法黄芪是临床常用的补益药，其味甘，性温，具有利尿排毒、敛疮生肌、补气固表的功效。

研究发现，黄芪所含的皂苷具有提高免疫的功能，而皂苷中的主要有效成分为黄芪甲苷，并具有降压、消炎镇痛的活性。

红芪具有补气升阳、固表止汗、敛疮生肌的功效。

与黄芪相比，红芪的抗菌、降压作用较强。

研究采用效液相色谱法对黄芪与红芪中黄芪甲苷进行鉴别，进而为黄芪、红芪中药制剂的质量控制提供实验依据。

1仪器与材料1.1仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（蒸发光散射检测器，美国安捷伦科技有限公司）；ABS135-S型分析天平（美国梅特勒-托利多公司）。

1.2[JP+1]材料黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品鉴定所）；红芪（购自郑州药材市场）；黄芪（购自甘肃兰州药材市场）；高纯氮气（纯度为99.999%，济南尧天仪器有限公司）。

甲醇、乙醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

[JP]2方法2.1色谱条件日本岛津C18色谱柱（150mm × 4.4mm，5μm）；流动相：乙腈-水（32∶68）；流速1ml/min；柱温：25℃。

理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。

见图1。

2.2供试品溶液的制备精密称取黄芪/红芪粉末4.0g，放入索氏提取器，加入甲醇40m1，冷浸后再加30 ml甲醇。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是中药中常用的一种药材，具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种药理作用。

其中黄芪甲苷是其主要活性成分之一，具有调节免疫系统、抗炎抗菌等作用。

准确测定黄芪中黄芪甲苷的含量对于评价黄芪的质量和疗效具有重要意义。

本文将综述黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展。

目前，常用的测定黄芪中黄芪甲苷含量的方法主要有色谱法、质谱法和光谱法等。

色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC），在测定黄芪甲苷含量方面应用较广。

HPLC法是目前最常用的分析方法之一。

该方法具有准确、灵敏、重复性好等优点。

研究者通常采用反向相色谱法，以C18柱作为固定相，甲醇和水作为流动相，在一定的温度下进行梯度洗脱。

通过测定黄芪甲苷的峰面积与标准品进行比较，可以定量测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

质谱法在测定黄芪甲苷含量方面也具有重要应用价值。

质谱法可以提供更准确的分子质量信息，对于复杂样品的分析具有优势。

研究者通常采用LC-MS/MS和GC-MS等方法进行黄芪甲苷的检测。

LC-MS/MS是目前应用最广的方法之一，通过在质谱分析仪上联结液相色谱仪，可以实现对黄芪甲苷的定性和定量测定。

GC-MS则是通过将样品进行气相色谱分离，再在质谱仪中进行检测，具有高分辨率和高灵敏度的优点。

光谱法主要包括紫外-可见光谱法和荧光光谱法。

紫外-可见光谱法是通过测量样品在特定波长下的吸光度来定量目标物质的含量。

研究者通常选择在300-340nm波长范围内进行测定。

荧光光谱法则是通过测量样品在激发波长下的荧光强度来定量目标物质的含量。

采用不同的激发波长和发射波长，可以实现对黄芪甲苷的灵敏测定。

还有一些其他方法也被应用于测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

比如高效毛细管电泳法（CE）可以通过在带荧光标记的铢离子束胶（PVA-COOH）基质中进行分析。

核磁共振（NMR）也被用于测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

测定黄芪中黄芪甲苷含量的研究进展丰富多样，不同的方法在不同的实验条件下具有各自的优势和适用范围。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪（Astragalus membranaceus）是一种重要的中草药材，被广泛应用于中医药领域。

黄芪甲苷（astragaloside IV）是黄芪的主要活性成分之一。

黄芪甲苷具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗心肌缺血、抗心肌纤维化等多种药理活性，因此成为黄芪药效的重要指标之一。

1. 简介黄芪甲苷的理化性质：黄芪甲苷是一种三萜甾醇类化合物，化学结构中含有多个糖苷键。

黄芪甲苷的糖基部分可以通过酶解反应裂解得到黄芪甲硷（astragaloside I）和黄芪甲醇（astragaloside II），因此研究黄芪甲苷的含量也间接反映了黄芪甲硷和黄芪甲醇的含量。

2. 提取和纯化方法黄芪甲苷的提取和纯化方法主要有溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、正相和反相SPE（固相萃取法）等。

溶剂提取是最常用的方法，可以使用水、乙醇、乙醚等溶剂进行提取。

超声波和微波辅助提取可以提高黄芪甲苷的提取效率。

SPE法则是通过固相吸附剂对样品进行富集和洗脱，进而得到纯化的黄芪甲苷。

3. 分析方法黄芪甲苷的含量测定方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、毛细管电泳法、液质联用法（LC-MS/MS）、红外光谱法等。

HPLC法是最常用的方法，可以使用紫外检测器、荧光检测器等进行检测。

GC法则适用于含量较低的黄芪甲苷的测定。

液质联用法结合了LC和MS的优势，可以提高黄芪甲苷的分析敏感性和准确性。

4. 含量测定影响因素黄芪甲苷的含量测定受到多种因素的影响，包括黄芪的生长环境、不同采收时间、存储条件等。

黄芪生长环境中土壤的pH值、养分含量和水分等对黄芪甲苷的生物合成和积累有一定影响。

采收时间对黄芪甲苷的含量也有重要影响，一般来说，黄芪的地上部分含量高于根部。

黄芪的存储条件也会导致黄芪甲苷的降低，因此在储存过程中需要注意保鲜处理。

5. 品种和产地差异黄芪的品种和产地对黄芪甲苷的含量也有一定影响。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是我国传统中药材之一，被广泛应用于治疗贫血、疲乏乏力、食欲不振等症状。

其中，黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一，具有抗菌、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。

因此，明确黄芪中黄芪甲苷的含量对于黄芪的质量控制和临床应用具有重要意义。

本文将综述黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展。

一、黄芪甲苷的生物学活性黄芪甲苷是黄芪中的一种单体化合物，其化学结构为3,6-二葡萄糖基芪苷-7-葡萄糖基芪苷，分子量为782。

研究表明，黄芪甲苷具有多种生物学活性，如抗菌、抗氧化、免疫调节、保护神经细胞等作用。

其中，黄芪甲苷的抗菌作用主要表现在对多种细菌、真菌和病毒的抑制作用。

抗氧化作用表现在黄芪甲苷能够清除自由基，降低氧化损伤。

免疫调节作用表现在黄芪甲苷能够激活巨噬细胞和自然杀伤细胞，增强免疫功能。

保护神经细胞的作用表现在黄芪甲苷能够减轻中枢神经系统的氧化损伤和炎症反应，防止神经细胞的死亡。

二、黄芪甲苷的含量测定方法黄芪甲苷的含量测定是对黄芪质量的评价和控制的重要手段，常用的测定方法包括高效液相色谱法、超高效液相色谱法、荧光法、紫外分光光度法、质谱法等。

1. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是目前最为常用的黄芪甲苷含量测定方法之一，该方法具有快速、灵敏、准确的优点。

其中，一般采用C18反相柱为分析柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（25:75，体积比），检测波长为254nm。

该方法能够实现对黄芪甲苷的同时定量，其检测限低至0.82ug/mL。

3. 荧光法荧光法是一种基于黄芪甲苷的分子结构与物理性质的检测方法，该方法具有高灵敏度、高选择性、快速等特点。

该方法采用黄芪甲苷在荧光素（FL）存在下，通过化学反应生成荧光产物，再利用荧光光谱仪检测荧光强度进行测定。

该方法的灵敏度高，能够检测到0.128ug/mL的黄芪甲苷。

4. 紫外分光光度法紫外分光光度法是一种简单、快速、准确的检测方法，该方法基于黄芪甲苷在紫外光下吸收特定波长的原理进行测定。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是一种传统的中药材，广泛用于中医临床实践中，具有很高的药用价值。

黄芪中的主要活性成分是黄芪甲苷，它被认为是其药效的主要来源之一。

对于黄芪中黄芪甲苷含量的测定研究一直备受关注。

本文将对黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展进行综述。

目前，测定黄芪中黄芪甲苷含量的方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法以及核磁共振波谱法（NMR）等。

HPLC是最常用的方法之一。

高效液相色谱法在实验室中应用广泛，它具有灵敏度高、分离效果好、操作简便等优点。

在测定黄芪中黄芪甲苷含量时，常常采用反相色谱柱，以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相，通过梯度洗脱的方式进行分离。

通过检测样品中黄芪甲苷的峰面积或峰高与标准品峰面积或峰高之比，可以得到黄芪样品中黄芪甲苷的含量。

除了HPLC方法，质谱法也被广泛应用于黄芪中黄芪甲苷含量的测定。

质谱法可以直接对样品中的化合物进行定性定量分析。

常用的质谱方法包括电喷雾质谱法（ESI-MS）和飞行时间质谱法（TOF-MS）等。

这些方法具有高灵敏度、分离效果好、分析速度快等优点，能够准确测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

近年来，核磁共振波谱法也被用于测定黄芪中黄芪甲苷含量。

核磁共振波谱法是一种非破坏性、无损和准确的分析方法。

通过核磁共振波谱法可以确定黄芪样品中黄芪甲苷的结构和含量。

与其他方法相比，核磁共振波谱法对样品处理要求较高，操作复杂，但具有高度准确性和重复性。

目前测定黄芪中黄芪甲苷含量的研究主要集中在高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法等方法。

这些方法在黄芪甲苷含量测定中具有较高的准确性和重复性。

由于样品的复杂性和分析条件的不同，不同的测定方法可能导致结果的差异。

在今后的研究中，需要进一步优化分析方法，并建立一种标准化的测定方法，以确保测定结果的准确性和可比性。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪，全名为黄芪，是一种被广泛用于中医药和保健品的植物。

其生长在中国北方的干燥地区，被认为具有益气补中、固表益肺的功效。

黄芪中含有多种活性成分，其中黄芪甲苷是其主要活性成分之一。

黄芪甲苷具有增强免疫功能、抗疲劳、抗氧化等功效，因此引起了广泛的研究和关注。

近年来，随着人们对中药药理学研究的深入，黄芪甲苷作为黄芪的主要活性成分，其含量测定研究也成为了研究的热点之一。

本文将对黄芪甲苷含量测定研究的进展进行综述，以期为相关研究提供参考和指导。

一、传统测定方法传统的黄芪甲苷含量测定方法主要包括高效液相色谱法、紫外分光光度法和高效液相色谱-质谱联用法等。

这些方法虽然在一定程度上能够准确测定黄芪甲苷的含量，但是存在操作复杂、耗时耗力、需要昂贵仪器等缺点，限制了其在实际生产中的应用。

二、近年来的研究进展为了解决传统测定方法存在的不足，近年来，研究人员提出了各种新的测定方法，使得黄芪甲苷含量测定变得更加简便、快捷、准确。

气相色谱-质谱联用法是一种新兴的测定方法，其具有操作简便、分析速度快、准确度高的优点，已经被广泛应用于黄芪甲苷含量的测定中。

近年来还出现了一些基于生物技术的新方法，如基于免疫学原理的黄芪甲苷ELISA检测法和基于生物传感技术的快速检测方法等，这些方法将黄芪甲苷的含量测定与生物技术相结合，不仅提高了测定的灵敏度和准确度，而且能够实现对大样本的高通量检测。

三、存在的问题和展望尽管近年来取得了一些进展，但是黄芪甲苷含量测定研究仍然面临一些问题。

目前的测定方法中仍然存在一定程度的操作复杂性和仪器昂贵的问题，限制了其在实际生产中的应用。

对于复杂的黄芪样品，测定方法的选择和优化仍然存在一定困难。

需要进一步提出新的测定方法，以解决现有方法存在的不足。

展望未来，随着科学技术的不断发展，相信黄芪甲苷含量测定研究将取得更大的突破。

可以预见的是，基于生物技术的新方法将会得到更多的应用，对于传统测定方法的改进和优化也将成为研究的重点之一。

HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量

HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量摘要：用HPLC法测定了黄芪甲苷含量.样品从东北黄芪中提取，用色谱纯甲醇溶解并稀释，采用YWG-C18柱，流动相为甲醇，在205 nm下检测，灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量.平均回收率为96.1%，RSD为2.15%，结果表明，样品浓度在0.01～0.2 mg/mL之间与峰面积成良好的线性关系.High-performance Liquid Chromatographic Determination ofAstragaloside in Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.Tian Feng，Deng Yingjie（Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015）Abstract：A sensitive method was developed to determine astragaloside by high-performance liquid chromatography with the C18column.The mobile phase was methanol and the UV absorbency was monitored at 205 nm.This assay demonstrated that astragaloside had adequate sensitivity and selectivity to measure the concentrations of astragaloside in Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.Key words：high performance liquid chromatography；astragaloside;Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge.▲黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一，其化学结构如图1所示，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆cAMP含量，促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能等多种作用〔1〕.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究.已有的测定方法多为薄层扫描法〔2〕和香草醛-硫酸比色法〔3〕，前者操作繁琐，背景干扰多，误差较大；后者空白吸收值高，受时间因素干扰大，均难以准确测定.本文试用HPLC法测定黄芪甲苷的含量.其样品浓度的范围在0.01～0.2 mg.mL之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定东北黄芪甲苷的含量.Fig.1 The formulation of astragaloside1 仪器与方法仪器：Waters高效液相色谱仪，510型泵，490E紫外检测仪.对照品黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所.样品黄芪饮片(生品)，购自沈阳京盛药店，本校许春泉教授鉴定为东北黄芪.试剂乙腈(色谱纯，天津四友生物医学公司)、甲醇(色谱纯，天津四友)、正丁醇(分析纯)、乙醚(分析纯)、水、重蒸馏水、去离子水、中性氧化铝(层析用)、轻质氧化镁(AR).2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：YWG18柱250 4.6 mm 10μL，大连依利特科学仪器XXX；流动相：甲醇(色谱纯)；流速：0.8 ml/min；检测波长：205 nm；灵敏度：0.1AUFS.2.2 标准曲线的绘制精密称取10.03 mg黄芪甲苷标准品，置于50 mL容量瓶中，加入色谱纯甲醇溶解并定容，分别精密吸取0.5、1.5、2.5、5、10 mL用甲醇稀释并定容于10 mL容量瓶中，用0.45 μ微孔滤膜过滤，进样20 μL，按上述色谱条件测定.在t R=3.375左右有唯一吸收峰，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得一工作曲线.回归方程为A=0.171 7C+0.465 7，r=0.999 6，线性范围0.01～0.2 mg/mL-1，如表1所示.Tab.1The concentration and peak area of the standard sample2.3 精密度实验精密称取黄芪甲苷对照品4.50 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，精密吸取20 μL进样，连续5次，测定峰面积，其RSD为2.14%.2.4 回收率试验取5 g已测定黄芪甲苷含量的生药提取水煎液平均分成10份，取5份，再分别准确加入1.447 mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液0.5 mL，按“样品测定”项下方法操作，结果见表2.Tab.2 The results of recoveryx=96.1%，RSD=2.15%2.5 稳定性实验样品溶液在室温下放置，每隔3h测定1次，12h内共测5次，含量分别是1.350、1.347、1.352、1.349 mg/g，RSD为2.45%，证明黄芪甲苷含量至少12h内稳定.2.6 样品测定将黄芪水提取液50mL(相当于含生药50g)加热浓缩至30mL，加大量甲醇至上清液再加甲醇无浑浊，醇沉多糖，抽滤，滤液用真空旋转薄膜蒸发器回收甲醇至干，残渣加少量H2O制成水溶液，用100mL乙醚振摇萃取脱脂3次，取水层加水饱和正丁醇的上层液萃取数次，合并正丁醇液，减压旋转蒸发正丁醇至干，残渣加少量95%乙醇溶解，然后均匀滩洒在装有干燥Al2O3∶MgO(36 g∶9g)混合物的G3漏斗中，并用75%洗脱3h，洗脱液回收乙醇后得残渣用95%乙醇溶解，得乙醇液加大量乙醚，抽滤，弃去滤液，滤渣附于滤纸上使其自然挥干乙醚，将滤纸浸于甲醇中使滤渣充分溶解，弃去滤纸，定容至50mL，备用，精密吸取1mL置50mL 容量瓶中，用色谱纯甲醇定容至刻度，振摇，过微孔滤膜，进样20μL，按上述色谱条件测定，并由回收方程计算含量，得图谱(图2、3)，结果如表3.Fig.2 The chromatogram of the sampleFig.3 The chromatogram of controlTab.3 The measuremental results of the sample contentn=5，RSD=0.694%，Ai=0.511 682×106，Ci=0.027 mg.mL-1则50 g药中黄芪甲苷为67.5 mg,相当于每克生药中含黄芪甲苷1.35 mg.3 讨论a.本实验考察了黄芪水提取液醇沉除多糖和蛋白质，乙醚除脂类物质，过Al2O3∶MgO滤层除黄酮，最后制得甲醇浸液的工艺，结果表明，此方法提取完全，损失少，分离度良好.b.日本的原田正敏〔4〕报道了用乙腈-水(1∶2)作为流动相测定黄芪皂苷(即黄芪甲苷〔1〕),我们经实验发现在此流动相下出现倒峰，峰形不好，且受流动相影响大，不易把握保留时间，我们也考察了(甲醇：水)不同比例作为流动相的实验结果，最终选择甲醇为流动相能得到最佳效果.c.鉴于黄芪皂苷种类较多，结构相近，紫外扫描只在200 nm有末端吸收〔1〕，原田正敏因此定在200 nm处检测〔4〕.我们实验表明，波长越长，噪音越小，但灵敏度越低；越靠近200 nm，灵敏度越高，但噪音越大.综合考察这两个因素，本实验选择205 nm为测定波长.d.黄芪中甲苷的含量很低，而且受产地、生长时间、采收季节等因素影响，具体差异有待于进一步研究.■整理单位：田丰（沈阳药科大学药学系，沈阳110015）邓英杰（沈阳药科大学药学系，沈阳110015）参考文献：［1］余灏，杨胜华.黄芪皂苷分析方法研究近况.华西药学杂志，1993，8(3)：163～166［2］鲁静，王宝琴.黄芪甲苷的薄层扫描法测定.中成药，1992，14(6)：34～35［3］俞家华,曹正中，张勤.膜荚黄芪中黄芪甲苷的含量测定.中药通报，1986，11(9)：38～39［4］原田正敏.日本常用生药的定量方法.国外医药.植物药分册，1990，5(5)：201～202收稿日期：1999-01-16[文档可能无法思考全面，请浏览后下载，另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意!]。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪，即黄芩，是一种传统中药材，被广泛用于治疗风寒感冒、脱肛、水肿等疾病。

其中的有效成分黄芪甲苷具有抗炎、免疫调节、抗氧化等多种药理活性。

对黄芪甲苷含量的测定研究具有重要意义。

本文将对黄芪甲苷含量测定的研究进展进行概述。

目前，黄芪甲苷含量的测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法（MS）等。

HPLC法是最常用的方法之一。

研究者通常使用反相色谱柱和紫外检测器进行测定，同时使用特定的流动相进行梯度洗脱。

近年来，也有研究者使用超高效液相色谱法（UPLC）进行测定，其优势在于提高了分离效果和分析速度。

一些研究者采用GC或GC-MS方法进行黄芪甲苷含量的测定。

GC法首先将样品提取得到的黄芪甲苷转化为易于挥发的衍生化物，然后使用柱温程序升高进行分离和检测。

对于含量较低的样品，可以使用MS进行灵敏度更高的定量分析。

除了上述的色谱方法，还有一些研究者尝试使用其他分析技术进行黄芪甲苷的含量测定。

有研究者使用荧光法和紫外可见光谱法进行定性和定量分析。

荧光法利用黄芪甲苷特征的荧光发射信号与内标物进行比较，从而实现对黄芪甲苷含量的测定。

紫外可见光谱法则利用黄芪甲苷在特定波长下的吸光度来定量测定。

在样品处理方面，黄芪甲苷含量的测定通常需要对样品进行提取和纯化。

提取常用的方法有超声波提取、温液提取和微波提取等。

而纯化则可以使用固相萃取和柱层析等技术来去除样品中的干扰物质。

黄芪甲苷含量的测定研究已经取得了一定的进展。

各种不同的分析方法被用于测定黄芪甲苷含量，其中HPLC法是最常用的方法。

在样品处理方面也有各种不同的方法可供选择。

目前对黄芪甲苷含量测定的研究还存在一些问题，如测定方法的灵敏度和准确性需要进一步提高，样品处理方法的优化也需要进一步研究。

对于黄芪甲苷含量测定的研究仍然有可以深入探索的空间。

黄芪甲苷含量测定的研究进展已经取得了一定的成果，但仍然需要进一步完善和改进。

黄芪含量测定实验报告

一、实验目的1. 掌握黄芪中有效成分的提取方法。

2. 学习并掌握高效液相色谱法（HPLC）测定黄芪中黄芪甲苷含量的原理和方法。

3. 通过实验，了解黄芪的质量控制方法。

二、实验原理黄芪为豆科植物Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，具有补气固表、利水消肿、托毒生肌的功效。

黄芪甲苷（Astragaloside IV）是黄芪中的主要有效成分，具有显著的抗炎、抗氧化、免疫调节等作用。

本实验采用高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

三、实验材料与仪器1. 试剂：黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供），甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2. 仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、离心机、恒温水浴锅等。

四、实验方法1. 样品前处理（1）样品制备：准确称取黄芪粉末0.1g，置于10ml容量瓶中，加入甲醇溶液（80%）5ml，超声提取30min，取出，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

（2）对照品溶液制备：准确称取黄芪甲苷对照品10mg，置于10ml容量瓶中，加入甲醇溶液（80%）溶解并定容至刻度，摇匀，过滤，作为对照品溶液。

2. 色谱条件（1）色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；（2）流动相：甲醇-水（80：20）；（3）流速：1.0ml/min；（4）检测波长：210nm；（5）柱温：30℃。

3. 实验步骤（1）将高效液相色谱仪开启，预热至色谱柱平衡；（2）将供试品溶液和对照品溶液分别进样，记录色谱图；（3）根据峰面积计算供试品中黄芪甲苷的含量。

五、结果与分析1. 色谱图供试品溶液和对照品溶液的色谱图如图1所示。

从图中可以看出，供试品溶液中黄芪甲苷峰与对照品峰保留时间一致，且峰形良好。

2. 结果计算根据色谱图，计算供试品中黄芪甲苷的含量为0.082mg/g。

3. 讨论本实验采用高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量，结果表明，本方法操作简便、准确可靠，适用于黄芪的质量控制。

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Sample
Astragaloside Ⅳ3 7 , 3′- dihydroxy 4′-
met hoxyisoflavone 7 - hydroxy - 4′-
met hoxyisoflavone
n
1
2
3
4
5
3
1. 054 ±0. 024 1. 862 ±0. 030 0. 889 ±0. 013 1. 083 ±0. 133 1. 155 ±0. 025
3 甘肃省省长基金项目 ( GS012 - A43 - 093) ,本实验在甘肃省中药新药临床前研究重点实验室完成. 作者简介 :胡芳弟 , 女 , 兰州医学院药学院硕士研究生 1 3 3 通讯联系人. 收稿日期 : 2003205212 ; 收到修改稿日期 : 2003206225.
174
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 600 E 高效液相色谱仪系列 : 在线脱气
机 ,四元泵 ,2996 二级管阵列检测器 ,Millennum 32 色谱管理工作站 , 自动进样器 , 柱温箱 , Kromasil ODS - 1 柱 (5 μm ,4. 6 ×250 mm) , Kromasil ODS 保护柱 (5μm ,4. 6 ×10 mm) , KQ3200DB 超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 1 1. 2 试药
met hoxyisoflavone 7 - hydroxy - 4′-
met hoxyisoflavone
3
0. 677 ±0. 004 0. 818 ±0. 044 0. 416 ±0. 038 2. 076 ±0. 002 0. 409 ±0. 005源自3 计量单位为 mg/ g.
2. 1. 4 精密度试验取 2 . 1 . 2 项 4 号标样溶液 , 1 0 μL 重复 5 次进样 , 测定峰面积 , RSD 为 1. 58 %. 2. 1. 5 稳定性和重复性试验稳定性 :取 9 号样品溶液分别在 0 d 、1 d 、2 d 、3 d 、4 d 、5 d 分别进样 ,记录峰面积 ,RSD 为 2. 815 %.
胡芳弟1 , 封士兰1 3 3 , 赵健雄1 , 张勇1 , 陈立仁2
(1. 兰州医学院药学院 , 甘肃兰州 730000 ; 2. 中国科学院兰州化学物理研究所 , 甘肃兰州 730000)
摘要 :比较黄芪对照药材和甘肃省近 20 个乡镇大面积种植的黄芪中黄芪甲苷和 2 个黄酮类化合物的含量 ,确定甘肃黄芪质量评价指标 1 采用 Kromasil ODS - 1 色谱柱 ,甲醇 - 水为流动相 ,梯度洗脱 ,流速为 1. 0 mL/ min ,检测波长 254 nm 测定黄酮类成分的含量 ;乙腈 - 水为流动相 ,等度洗脱 ,流速为 1. 0 mL/ min ,检测波长为 200 nm 测定黄芪甲苷的含量. 黄酮类成分毛蕊异黄酮的线性范围为 2. 350 ×10 - 3 ～4. 700 ×10 - 2μg ,平均回收率为 98. 34 % , RSD 为 2. 00 % ;芒柄花素线性范围为 :2. 325 ×10 - 3～4. 650 ×10 - 2μg ,平均回收率为 96. 53 % ,RSD 为 1. 63 % ; 黄芪甲苷线性范围为 1. 215～6. 075μg ,平均回收率为 101. 47 % ,RSD 为 2. 21 %. 该方法简便 ,可靠 ,准确 ,具有一定的实用性 ,可用于黄芪药材质量控制. 关键词 :黄芪 ;黄芪甲苷 ;黄酮类 ;高效液相色谱中图分类号 :O657132 文献标识码 :B 文章编号 :1006 - 3757 (2003) 03 - 0173 - 05
用四分法取样 ,精确称取黄芪样品 2. 5 g ,以甲醇 (30 mL) 为溶剂超声提取 3 次 (每次 20 min) ,提取液蒸去甲醇 ,用 30 mL 蒸馏水溶解 ,用水饱和的正丁醇 (30 mL 、30 mL 、20 mL 、15 mL) 萃取四次 ,合并正丁醇部分 ,减压蒸干 ,残渣用甲醇定容至 5 mL , 用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤 ,续滤液用 2. 1. 1 色谱条件分析 ,以外标法计算含量. 结果见表 2 ,色谱图见图 1.
分析测试技术与仪器第 9 卷
表 1 供试品编号及来源 Table 1 Source of different radix astragali samples
编号
采集地点
1 岷县城郊乡
2 岷县梅川乡
3
岷县 3
4 岷县梅川镇店子村
3 0. 971 3 ±0. 015 1. 569 ±0. 186 1. 724 ±0. 118 7. 891 ±0. 036 12. 125 ±0. 003
3 0. 770 2 ±0. 024 1. 001 ±0. 013 0. 935 1 ±0. 021 2. 909 ±0. 008 6. 188 ±0. 023
2 方法与结果
2. 1 黄芪甲苷的测定 2. 1. 1 色谱条件 KromasilODS - 1 (5μm ,4. 6 mm ×250 mm) 色谱柱 , Kromasil ODS 保护柱 ( 5 μm ,4. 6 mm ×10 mm) ,乙腈 - 水 (67 ∶33) 洗脱 ,进样量 10 μL ,流速为 1. 0 mL/ min ,检测波长为 200 nm ,柱温为 25 ℃1 2. 1. 2 标准曲线的绘制
Sample
Astragaloside Ⅳ 7 , 3′- dihydroxy 4′-
met hoxyisoflavone 7 - hydroxy - 4′-
met hoxyisoflavone
n
6
7
8
9
10
3
1. 019 ±0. 043 1. 675 ±0. 130 1. 496 ±0. 230 0. 472 ±0. 003 0. 934 ±0. 013
5 岷县梅川乡杏林村 (红土地)
6 岷县梅川乡杏林村 (黄土地)
7 岷县清水乡
8 陇西首阳镇罗家山 (一年生)
9 陇西首阳镇罗家山 (二年生)
10 黄芪对照药材
3 陇西县药品检验所提供
采集时间 2002 - 10 2002 - 10 2001 - 10 2002 - 07 2002 - 10 2002 - 10 2002 - 07 2002 - 07 2002 - 07
精确称取黄芪甲苷对照品 12. 15 mg ,以甲醇定容于 10 mL 容量瓶中 ,作为贮备液 ,精确吸取 0. 5 mL ,1. 0 mL ,1. 5 mL ,2. 0 mL ,2. 5 mL ,分别置于 5 mL 容量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,得系列浓度的标
样溶液 (1～5) ,按上述色谱条件测定 ,以峰面积 A 为纵坐标 ,以浓度 C 为横坐标绘制工作曲线 ,回归方程为 :A = 4. 52 ×104 C - 2. 11 ×104 ,r = 0. 999 3 , 线性范围为 1. 215～6. 075μg1 2. 1. 3 样品溶液的制备
Sample
n
11
12
13
14
15
Astragaloside Ⅳ
3
1. 623 ±0. 057 1. 162 ±0. 034 1. 401 ±0. 001 3 1. 381 ±0. 244 1. 862 ±0. 232
7 , 3′- dihydroxy -
4′-
3
1. 140 ±0. 010 0. 706 ±0. 005 1. 723 ±0. 018 1. 694 ±0. 072 3. 074 ±0. 054
编号
采集地点
11 陇西县渭河镇
12 陇西县首阳镇 3
13 佛慈药厂漳县三岔乡药材种植基地
14 漳县 3
15 漳县大草滩乡
16 渭源县会川镇
17 渭源县新寨乡
18 陇西农机中心 GAP 种植基地 (一年生)
19 陇西农机中心 GAP 种植基地 (二年生)
20 渭源县新寨乡 (茎杆)
采集时间 2002 - 07 2001 - 10 2001 - 10 2001 - 10 2002 - 10 2002 - 07 2002 - 07 2002 - 10 2002 - 10 2002 - 07
甲醇 (分析纯 ,上海建信化工有限公司) ,正丁醇 (分析醇 ,北京化工厂) ,乙腈 (色谱纯 ,山东禹王禹城化工厂) ,超纯水 (兰州医学院第一附属医院药剂科生产) ,黄芪甲苷对照品和黄芪对照药材 (Astragalus
memberanacenus ( Fisch ) Bge. var. mongholicus (Bge. ) Hsiao) (中国药品生物制品检定所) , 毛蕊异黄酮和芒柄花素对照品由上海中医药大学提供 ,根据原药材的不同来源 ,将其依次编为 1～20 号 ,原植物由兰州医学院药用植物室赵汝能教授鉴定为蒙古黄芪 ( Ast ragalus memberanacenus ( Fisch) Bge. var. mongholicus (Bge. ) Hsiao) 1 供试品来源详见表 11
3
2. 141 ±0. 032 9. 667 ±0. 009 13. 055 ±0. 051 3. 650 ±0. 020 0. 763 ±0. 006
3 0. 414 7 ±0. 001 0. 899 ±0. 007 9. 904 ±0. 041 2. 379 ±0. 020 0. 670 ±0. 005
图 1 黄芪样品 (A) 和黄芪甲苷 (B) 的 HPL C 图 Fig. 1 Chromatogram of sample (A) and standard (B)
第 3 期胡芳弟等 : HPL C 法测定黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量 175