铜绿假单胞菌的耐药演示文稿
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◆ DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ位点改变
◆ 此外，二氢叶酸合成酶发生结构改变，可使磺胺类 药物的亲和力降低，从而引起对磺胺类药物耐药；
◆ 氨基糖苷类抗生素的作用靶位16SrRNA发生基因突变 也可导致PA对氨基糖苷类抗生素耐药。
普通平板
MAC平板
血平板
生化实验
• 该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖和木糖，产酸不产气 ，但不分解乳糖和蔗糖。液化明胶、可分解尿素，还原硝 酸盐为亚硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐， 精氨酸双水解酶阳性。
• 生长实验：该菌在4℃不生长而在42℃可以生长
分型 • （1）噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。
铜绿假单胞菌的耐药演示文稿
主要内容
1.铜绿假单胞菌的流行病学、病原学、临床意义 2.铜绿假单胞菌的实验室检查 3.铜绿假单胞菌感染的治疗方案 4.铜绿假单胞菌的耐药机制 5.研究进展
流行病学
本菌为条件致病菌，广泛存在于自然界、土壤、水、空气， 在正常人皮肤（如腋下、会阴部和耳道内）、呼吸道和肠 道均存在。
1. 外膜通透性障碍
抗生素通过两种途径进入细菌外膜，亲水性抗生素的孔蛋 白通道和疏水性抗生素的脂质介导通道。如果这些通道改 变或缺失，抗生素将不能进入细菌到达作用靶位，从而使 细菌产生耐药性。
PA的外膜通透性极低，仅为大肠埃希菌的1%-8%，这是 PA对多种抗生素天然耐药的重要原因之一。β内酰胺类、 四环素、氯霉素、喹诺酮类只能通过孔蛋白提供的水通道 跨越外膜。
肉汤增菌
血平板、MAC
37 ℃18-24h
可疑菌落（金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味）
初步鉴定
最后鉴定
菌落 色素
非发酵菌鉴定系统鉴定
革兰阴性杆菌 氧化酶(+)
血清分型
检验程序
直接检镜
为革兰阴性菌，菌体大小（1.5～5.0)um×宽(0.5～1)um，细长且长短不 一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无 芽胞
1. 外膜通透性障碍
氨基糖苷类和多粘菌素E并不通过外膜孔蛋白进入细 胞内，而是先粘附在外膜的脂多糖上，再促进自身被 细菌摄入，干涉细菌核糖体蛋白质的合成，进而产生 抗菌作用。OprH的过度表达可防碍氨基糖苷类和多 粘菌素E的粘附作用，从而导致耐药，但是这种耐药 形式尚未在临床菌株中广泛发现。
2.主动外排泵系统
多利培南（Doripenem） 西他沙（sitafloxacin） 比阿培南（Biapenem）
铜绿假单胞菌对以下药物具有天然耐药性： 氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、第一、 二代头孢菌素、头孢噻肟、头孢曲松、萘啶酸和甲 氧嘧啶等。
耐药机制
耐药机制
1.外膜通透性减低 2.主动外排泵系统 3.抗菌药物作用的靶位的改变 4.产生灭活酶 5.生物膜（BF）的形成
外排泵由三部分组成： ①外膜蛋白：形成门通道，有利于底物通过外膜； ②膜融合蛋白或连结蛋白，连接内、外膜蛋白； ③内膜蛋白，为主要的泵出蛋白，具有识别底物的作用，
但不具特异性。
3.药物作用靶位的改变
青霉素结合蛋白（penicilin binding proteins,PBPs） PBPs数量、结构的改变导致其与抗生素亲和力降低，产生缓 慢结合的PBPs或者诱导性PBPs增多均能导致PA对β内酰胺 类抗生素产生耐药。
1. 外膜通透性障碍
PA外膜蛋白中的OprC、OprD、OprE是小分子亲水性 抗生素进入细菌的通道，OprF形成大孔通道。孔蛋白 数量的减少或基因突变影响外膜对抗生素的通透性。
孔蛋白形成的通道部分具有特异性，如OprD2孔道是亚 胺培南选择性快速进入菌体的特异性通道，如果OprD2 蛋白缺失或者表达减少是导致PA对亚胺培南耐药的机 制之一，但对美罗培南却无影响。
动力
+
MAC平板生长 +
-
+++
O/-
- O/F -
-
+ --
+
+ +/- -
鉴定
• 初步鉴定 菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶
• 最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条
注意：实验室诊断应与临床表现相结合
药物治疗
• 传统药物治疗
新研发的抗假单胞菌药物
哌拉西林，替卡西林 头孢他啶，头孢哌酮 哌拉西林/他唑巴坦 替卡西林/克拉维酸 头孢哌酮舒巴坦 环丙沙星，左氧氟沙星 多粘菌素类（多粘菌素类B、E）
其生存的重要条件是潮湿环境，对外界环境抵抗力较强， 湿热55℃ 、1h方能杀灭，对紫外线不敏感。
儿童带菌率比成人高,应用抗生素治疗者带菌率增高。 住院病人，特别是使用抗生素、糖皮质激素或免疫抑制剂
治疗的病人，呼吸道内该菌的寄植增多。
流行病学
感染途径：
内源性：自身上呼吸道、肠道、皮肤、生殖道等 外源性：其他病人或带菌的健康工作人员，经手、飞沫或
革兰染色
电镜
分离培养
• 专性需氧、营养要求不高 • 普通培养基： 18-24h圆形 、大小不一、 边缘不整 扁平、 湿
润 、金属光泽常呈融合态， 琼脂被染成绿或黄绿 。 • MAC：微小无光泽半透明 48h后菌落呈棕色 • 血平版：扁平 湿润 有金属光泽 琼脂被染成蓝绿或灰绿 有透
明溶血环 • 有特殊生姜气味
污染的医疗器械而传播。
病原学
革兰氏阴性杆菌，单个、成对或短链状排列。 多数菌株分泌绿脓菌素和荧光素，呈蓝绿色，故名绿脓杆菌
。 菌体一端有1～3根鞭毛，故有动力，较活泼，无荚膜或芽胞
。 专性需氧菌，生长要求不高，在普通培养基上生长良好，最
适宜温度为35℃。 有很强的蛋白分解能力，但发酵糖类能力低。
致病性
临床意义
• 经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎 等。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败 血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。
• 本菌所致感染的临床表现取决于受累部位。
化脓性内 眼炎
继发性铜 绿假单胞 菌感染
脓液 痰 尿液等
血液 环境用品
分离培养 直接涂片染色
• （2）血清学分型：利用O抗原进行分型，可分20个血清型。
• （3）核酸检测：质粒指纹图谱分型、脉冲场凝胶电泳分型、其他快 速分子生物学（基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型）鉴定
常见非发酵菌初步分群鉴定
试验
假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉 菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属
氧化酶
Байду номын сангаас
+
葡萄糖O/F O/-
◆ 此外，二氢叶酸合成酶发生结构改变，可使磺胺类 药物的亲和力降低，从而引起对磺胺类药物耐药；
◆ 氨基糖苷类抗生素的作用靶位16SrRNA发生基因突变 也可导致PA对氨基糖苷类抗生素耐药。
普通平板
MAC平板
血平板
生化实验
• 该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖和木糖，产酸不产气 ，但不分解乳糖和蔗糖。液化明胶、可分解尿素，还原硝 酸盐为亚硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐， 精氨酸双水解酶阳性。
• 生长实验：该菌在4℃不生长而在42℃可以生长
分型 • （1）噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。
铜绿假单胞菌的耐药演示文稿
主要内容
1.铜绿假单胞菌的流行病学、病原学、临床意义 2.铜绿假单胞菌的实验室检查 3.铜绿假单胞菌感染的治疗方案 4.铜绿假单胞菌的耐药机制 5.研究进展
流行病学
本菌为条件致病菌，广泛存在于自然界、土壤、水、空气， 在正常人皮肤（如腋下、会阴部和耳道内）、呼吸道和肠 道均存在。
1. 外膜通透性障碍
抗生素通过两种途径进入细菌外膜，亲水性抗生素的孔蛋 白通道和疏水性抗生素的脂质介导通道。如果这些通道改 变或缺失，抗生素将不能进入细菌到达作用靶位，从而使 细菌产生耐药性。
PA的外膜通透性极低，仅为大肠埃希菌的1%-8%，这是 PA对多种抗生素天然耐药的重要原因之一。β内酰胺类、 四环素、氯霉素、喹诺酮类只能通过孔蛋白提供的水通道 跨越外膜。
肉汤增菌
血平板、MAC
37 ℃18-24h
可疑菌落（金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味）
初步鉴定
最后鉴定
菌落 色素
非发酵菌鉴定系统鉴定
革兰阴性杆菌 氧化酶(+)
血清分型
检验程序
直接检镜
为革兰阴性菌，菌体大小（1.5～5.0)um×宽(0.5～1)um，细长且长短不 一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无 芽胞
1. 外膜通透性障碍
氨基糖苷类和多粘菌素E并不通过外膜孔蛋白进入细 胞内，而是先粘附在外膜的脂多糖上，再促进自身被 细菌摄入，干涉细菌核糖体蛋白质的合成，进而产生 抗菌作用。OprH的过度表达可防碍氨基糖苷类和多 粘菌素E的粘附作用，从而导致耐药，但是这种耐药 形式尚未在临床菌株中广泛发现。
2.主动外排泵系统
多利培南（Doripenem） 西他沙（sitafloxacin） 比阿培南（Biapenem）
铜绿假单胞菌对以下药物具有天然耐药性： 氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、第一、 二代头孢菌素、头孢噻肟、头孢曲松、萘啶酸和甲 氧嘧啶等。
耐药机制
耐药机制
1.外膜通透性减低 2.主动外排泵系统 3.抗菌药物作用的靶位的改变 4.产生灭活酶 5.生物膜（BF）的形成
外排泵由三部分组成： ①外膜蛋白：形成门通道，有利于底物通过外膜； ②膜融合蛋白或连结蛋白，连接内、外膜蛋白； ③内膜蛋白，为主要的泵出蛋白，具有识别底物的作用，
但不具特异性。
3.药物作用靶位的改变
青霉素结合蛋白（penicilin binding proteins,PBPs） PBPs数量、结构的改变导致其与抗生素亲和力降低，产生缓 慢结合的PBPs或者诱导性PBPs增多均能导致PA对β内酰胺 类抗生素产生耐药。
1. 外膜通透性障碍
PA外膜蛋白中的OprC、OprD、OprE是小分子亲水性 抗生素进入细菌的通道，OprF形成大孔通道。孔蛋白 数量的减少或基因突变影响外膜对抗生素的通透性。
孔蛋白形成的通道部分具有特异性，如OprD2孔道是亚 胺培南选择性快速进入菌体的特异性通道，如果OprD2 蛋白缺失或者表达减少是导致PA对亚胺培南耐药的机 制之一，但对美罗培南却无影响。
动力
+
MAC平板生长 +
-
+++
O/-
- O/F -
-
+ --
+
+ +/- -
鉴定
• 初步鉴定 菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶
• 最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条
注意：实验室诊断应与临床表现相结合
药物治疗
• 传统药物治疗
新研发的抗假单胞菌药物
哌拉西林，替卡西林 头孢他啶，头孢哌酮 哌拉西林/他唑巴坦 替卡西林/克拉维酸 头孢哌酮舒巴坦 环丙沙星，左氧氟沙星 多粘菌素类（多粘菌素类B、E）
其生存的重要条件是潮湿环境，对外界环境抵抗力较强， 湿热55℃ 、1h方能杀灭，对紫外线不敏感。
儿童带菌率比成人高,应用抗生素治疗者带菌率增高。 住院病人，特别是使用抗生素、糖皮质激素或免疫抑制剂
治疗的病人，呼吸道内该菌的寄植增多。
流行病学
感染途径：
内源性：自身上呼吸道、肠道、皮肤、生殖道等 外源性：其他病人或带菌的健康工作人员，经手、飞沫或
革兰染色
电镜
分离培养
• 专性需氧、营养要求不高 • 普通培养基： 18-24h圆形 、大小不一、 边缘不整 扁平、 湿
润 、金属光泽常呈融合态， 琼脂被染成绿或黄绿 。 • MAC：微小无光泽半透明 48h后菌落呈棕色 • 血平版：扁平 湿润 有金属光泽 琼脂被染成蓝绿或灰绿 有透
明溶血环 • 有特殊生姜气味
污染的医疗器械而传播。
病原学
革兰氏阴性杆菌，单个、成对或短链状排列。 多数菌株分泌绿脓菌素和荧光素，呈蓝绿色，故名绿脓杆菌
。 菌体一端有1～3根鞭毛，故有动力，较活泼，无荚膜或芽胞
。 专性需氧菌，生长要求不高，在普通培养基上生长良好，最
适宜温度为35℃。 有很强的蛋白分解能力，但发酵糖类能力低。
致病性
临床意义
• 经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎 等。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败 血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。
• 本菌所致感染的临床表现取决于受累部位。
化脓性内 眼炎
继发性铜 绿假单胞 菌感染
脓液 痰 尿液等
血液 环境用品
分离培养 直接涂片染色
• （2）血清学分型：利用O抗原进行分型，可分20个血清型。
• （3）核酸检测：质粒指纹图谱分型、脉冲场凝胶电泳分型、其他快 速分子生物学（基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型）鉴定
常见非发酵菌初步分群鉴定
试验
假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉 菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属
氧化酶
Байду номын сангаас
+
葡萄糖O/F O/-