黄曲霉毒素B1检测试剂盒
黄曲霉毒素B1酶联免疫定量检测试剂盒 说明书
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
(整理)黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法
黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb一、样品的准备/萃取1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。
3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。
4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。
例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。
二、检测步骤1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。
2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。
3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。
从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。
使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。
4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。
用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。
每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。
注意确保最后将吸头中的液体排空。
5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。
室温下放置15分钟。
注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。
6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。
如此方式反复冲洗5次。
注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。
黄曲霉毒素B1试剂盒操作流程
稀释倍数计算公式：黄曲霉 B1 大概含量（或限量标准）/0.5/5
操作流程：
1. 取出试剂盒中板条，洗涤两次。每孔 中加入 250μl 洗涤液或滴管加洗涤液 超出板条 2/3 以上。
2. 标准品孔分别加入不同浓度的标准品 溶液（由低到高），样品孔加入相应的 样品稀释液，每孔分别加入 50μl 酶标 抗原稀释液，混匀后放入 37℃培养箱 进行 30 分钟温育。
3. 温育结束后，拍干孔中液体，用洗涤 液进行洗板，进行 5 次洗板
4. 洗板结束后，先后分别加入 50μl 底物 a、b，混匀后放入 37℃培养箱进行 15 分钟，反应孔变成黄色，上酶标仪 读数！
注：标准品的蓝色应为梯度的蓝色，即颜 色由深到浅的标准品浓度的顺序应为：0 ＞0.1＞0.25＞0.5＞1＞2（吸光度由大到 小）。
（D 试剂）进行稀释，充分混匀后备用。24 孔需配制 1 瓶 C 试剂，48 孔需配制 2 瓶 C 试剂。
3. 样品稀释
*根据样品的含量确定稀释倍数
*根据限量标准确定稀释倍数
例如玉米，在饲料卫生标准中的限量标准是≤50ppb，那么最佳的稀释倍数就是 100 倍，即
对样品提取液进行 20 倍（样品稀释液与样品提取液的体积比为 1：19）的稀释。
江苏省苏微微生物研究有限公司
黄曲霉毒素 B1 试剂盒操作简述
操作准备:
1. 板条洗涤液
将试剂盒中的 E 试剂（浓缩洗涤液）用蒸馏水进行 20 倍稀释待用！例如做一个 24 孔板条，
则最少取 3ml 浓缩洗涤液+57ml 蒸馏水，混匀后做洗涤液备用。
2. 酶标抗原溶液
取出试剂盒中的 C 试剂、D 试剂，每瓶酶标抗原（C 试剂）准确加入 1.5ml 酶标抗原稀释液
黄曲霉毒素AFB1_说明书
6. 浓缩洗涤液 （10×） …………………………… 40ml 7. 样品稀释液（10×） ……………………………… 20ml 8. 操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含 2M HCl， 需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备： ┅┅微孔板酶标仪 450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量 0.01g ┅┅微量移液器：单道 20μl～200μl、200μl～1000μl 多道 250μl ┅┅滤纸
【样本前处理步骤】
（一） 谷物（大、小米，玉米等脂肪含量少的谷物）（稀 释倍数：10）
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀；
┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取400μl 上清液，加入600μl 样品稀释液进行稀释， 充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （二） 花生（稀释倍数：10）
1
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 2.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇/水溶液混合均匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （三）食用油（稀释倍数：10） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇水溶液混合，振荡 1min； ┅┅静置 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （四）饲料（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取上层清液 2.0ml，加入 2.0ml 三氯甲烷用 1.5ml 样 品稀释液进行稀释； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入 750ul 样品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （五）面粉（稀释倍数：10） ┅┅取 1g 面粉样品，加入 4ml 50%甲醇/水溶液； ┅┅充分振荡 3min； ┅┅5000g 离心，10min； ┅┅取上层清液 500ul 并加入1ml 三氯甲烷，轻摇三分钟， 静置分层； ┅┅取 500ul 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入 375ul 样 品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （六）葡萄酒（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0ml 葡萄酒样品，加入 4.0ml 三氯甲烷； ┅┅轻摇三分钟，静置分层； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul50%甲醇/水溶液溶解，再加入 750ul 样品 稀释液，充分混匀；
黄曲霉毒素B1检测试剂盒
黄曲霉毒素B1检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）1 原理及用途本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。
检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素B1的残留量。
2 技术指标2.1 试剂盒灵敏度：0.01ppb(ng/ml)2.2 反应模式：25℃，30min～15min2.3 检测下限：谷物……………………………………0.05ppb配合饲料………………………………0.1ppb食用油、花生…………………………0.2ppb酱类、麦类等饲料……………………0.1ppb啤酒……………………………………0.1ppb葡萄酒、酱油、醋……………………0.05ppb2.4 交叉反应率：黄曲霉毒素B1…………………………100%2.5 样本回收率：谷物及配合饲料……………………85%±15%花生…………………………………82±15%食用油………………………………85±15%酱类、麦类等饲料………………83±15%啤酒………………………………84±15%葡萄酒、酱油、醋………………87±15%3 试剂盒组成酶标板……………………………96孔标准液（黑盖）：各1ml0ppb、0.01ppb、0.03ppb、0.09ppb、0.27ppb、0.81ppb高标准液：100ppb…………………1ml酶标记物（红盖）…………………5.5ml抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml底物液A（白盖）……………………6ml底物液B（黑盖）……………………6ml终止液（黄盖）………………………6ml20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml说明书………………………………1份4 需要的器材和试剂4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl4.3 试剂：甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷5 样本前处理5.1 样本处理前须知：实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
黄曲霉毒素试剂盒说明书
黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。
挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。
afb1试盒说明书
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）属于自然界最强烈的致癌物质之一，一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子等中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达1µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应终止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………………1块2、黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，1 ppb，5 ppb，10 ppb，20 ppb，40 ppb）……………1套4、酶标记物(稀释11X使用)…………………………………………………………………1瓶5、酶稀释液………………………………………………………………………………1瓶6、显色剂……………………………………………………………………………………1瓶7、终止液………………………………………………………………………………………1瓶8、浓缩洗涤液（20 X）…………………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
黄曲霉毒素B1 ELISA(国产)
黄曲霉毒素B1酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒1 概要黄曲霉毒素（Aflatoxin）是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉的某些产毒菌株产生的初级代谢产物，目前已经分离鉴定出十二种，在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究中心划定为I类致癌物，其作用的靶器官主要为肝脏。
本试剂盒可用于检测样品中的黄曲霉毒素B1。
适用于食品（酱油，食醋，发酵酒，婴儿代乳食品，发酵类豆制品），原粮及其制品（花生，花生油及其他食用油，玉米，玉米粉，玉米黄浆，玉米/酱豆混合物，小麦，大米，高粱）饲料及相关原料（豆粕，棉籽饼，猪配合饲料及浓缩饲料，混合饲料）中黄曲霉毒素B1的定量、定性检测。
2 原理本试剂盒采用直接竞争ELISA法检测样品中黄曲霉毒素B1。
在微孔板上预包被抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体，样品或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1和HRP标记的黄曲霉毒素B1竞争结合微孔板中抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样品吸光值与其所含黄曲霉毒素B1量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。
3 试剂盒组份每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份：包被有抗黄曲霉毒素B1抗体的微孔板------96孔（8孔/条×12条）黄曲霉毒素B1标准品溶液----------------------------6瓶(1.0 mL/瓶) 分别为0号：0 μg/L；1号：0.05 μg/L；2号：0.15 μg/L；3号：0.3 μg/L；4号：0.9 μg/L；5号：2.7 μg/L10×浓缩洗涤液----------------------------------------------1瓶(30 mL)黄曲霉毒素B1标记HRP溶液-------------------------------1瓶(6 mL) 底物溶液A-----------------------------------------------------1瓶(7 mL) 底物溶液B-----------------------------------------------------1瓶(7 m L) 终止液-----------------------------------------------------------1瓶(7 mL) 封板膜-------------------------------------------------------------------1张说明书-------------------------------------------------------------------1份4 另外所需仪器和试剂4.1试剂●甲醇（分析纯）●三氯甲烷（分析纯）●正己烷或石油醚（分析纯）●去离子水或蒸馏水●0.01M PBS（pH7.4）：称取8 g 氯化钠，2.9 g 十二水合磷酸氢二钠，0.2 g 氯化钾，0.2 g 磷酸二氢钾，加超纯水溶解，调pH至7.4，定容至1000 mL。
黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂说明书
黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂盒【产品概述】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性。
主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。
天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。
它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。
产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、储藏、运输等过程中、及时发现污染源是最好的预防黄曲霉毒素污染的方法。
【产品原理】本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。
具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。
结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于95% 。
适用于谷物、饲料等样板中的黄曲霉毒素的检测。
【产品特性】1）试剂盒灵敏度: 0.05ppb2）试剂盒变异系数：小于20%。
3）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
【试剂盒组成】1）包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）2）黄曲霉标准品：0 ppb 、0.05 ppb、0.12 ppb、0.25 ppb、0.5ppb、1 .0 ppb、2.0ppb1 瓶× 1.0ml3）200×黄曲霉抗体浓缩液： 1 瓶× 0.25ml4）60×酶标二抗浓缩液： 1 瓶× 0.25ml5）10×浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml6）稀释缓冲液： 2 瓶×40ml7）显色底物液 1 瓶×7ml8）反应终止液： 1 瓶× 7ml9) 试剂盒说明书【仪器试剂】仪器—酶标仪450nm—过滤漏斗—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl—刻度移液管—天平：感量0.01g—50ml离心管或25ml锥形瓶—定性滤纸试剂—甲醇—蒸馏水【样本的前期处理】1. 玉米、花生等谷物----称取10g样品，加入20ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为20倍2. 饲料（1）普通饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为50倍（2）浓缩饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，取2ml滤液，加入3ml三氯甲烷，振荡1分钟，静置1分钟，3500rpm离心5分钟。
黄曲霉毒素B1
黄曲霉毒素B1检测试剂Aflatoxin B1RIDASCREEN® Aflatoxin B1酶标免疫分析定量测定黄曲霉毒素B1试剂盒。
德国公司R-Biopharm制造（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15（产品编号：R1211）简介采用竞争酶标免疫法定量测定谷物，饲料，花生，干果及其它食品中的黄曲霉毒素B1。
试剂盒中包括了所有检测用的试剂。
该试剂盒有96个试验孔包括标准试验，如果进行定量分析，必须有微孔板酶标仪。
样品制备谷物/饲料：粉碎，甲醇/水提取，过滤，稀释时间要求：（以10个样品为例）谷物/饲料………………………………….……大约30分钟测试时间………………………………………….大约1小时（与样品数量多少无关）检测下限1ppb回收率 80-100%交叉反应Aflatoxin B1…………………………………………….100% Aflatoxin G1…………………………………………..大约29% Aflatoxin B2………………………………………….大约13%A flatoxin G2…………………………………………大约3.2% Aflatoxin M1…………………………………………大约1.5%1. 用途Aflatoxin B1 30/15竞争酶标免疫法定量测定谷物，饲料中的黄曲霉毒素B1。
2. 概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌Aspergillus flavus 及A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1属于自然最强烈的致癌物质。
黄曲霉毒素B1作为毒性最高的的分析物，它一般产生于玉米，花生，巴西坚果和棉花种子中。
鉴于这种霉菌毒素的毒性，欧洲国家做出了相近的限量，对黄曲霉毒素B1的限量为2ppb，对黄曲霉毒素总量的限量为4ppb。
使用RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15检测试剂盒，能够快速而准确的检测谷物，饲料和其他食品中的黄曲霉毒素B1。
黄曲霉毒素B1酶免检测试剂盒操作规程
黄曲霉毒素B1酶免检测试剂盒操作规程一、样品前处理1、稻谷：称取5 g待测样品（已粉碎）于100 mL具塞三角瓶中，准确加入25.0 mL甲醇水（1+1）溶液，加塞振荡30 min，静置后，用移液器取上层清液50 μL于反应孔中。
2、油：称取5 g油样于于100 mL具塞三角瓶中，准确加入25.0 mL甲醇水（1+1）溶液，和25 mL石油醚，加塞振荡30 min，静置后，用移液器取下层清液50 μL于反应孔中。
二、检测1、反应孔编号：取相应的包被反应条放在框架上，反应条横放，设定1～6号孔为AFB1 标准对照孔，其余孔为样品孔。
2、空白：在7号空白反应孔中加入50 μL酶标抗原稀释缓冲液。
3、AFB1标准对照：在1～6号孔中分别准确加入50 μL AFB1标准溶液（0、0.1、0.25、0.5、1、2ppb）。
4、样品检测：在8号孔以后（包括8号孔）的反应孔中准确加入50 μL待测样品提取液。
5、加酶标抗原：各孔均准确加入50μL酶标抗原溶液。
6、试剂混匀：轻轻振摇或敲击酶标板框架，使反应孔的试剂充分混匀。
（注意：试剂不得溅出、不得交叉滴加、不同试剂必须更换吸头）7、孵育：将反应板盖上盖子，放入37 ℃培养箱中孵育30 min。
（时间必须够）8、洗板：取出反应板，用力甩干3下，并在吸水纸上拍干3下，然后往每孔加入250 μL（5滴左右）洗涤液，放置2 min，用力甩干3下，并在吸水纸上拍干3下。
重复洗涤4次。
9、显色：反应板拍干后，每孔准确加入50 μL底物液和显色液。
轻轻振摇或敲击酶标板框架，使反应孔的试剂充分混匀。
将反应板盖上盖子，放入37 ℃培养箱中孵育15 min。
10、终止反应：取出反应板，每孔准确加入50 μL终止液。
轻轻振摇或敲击酶标板框架，使反应孔的试剂充分混匀。
11、仪器读数：放入450 nm酶标仪中读取各孔的吸光值。
（在30 min内完成，动作要快）。
黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法
黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb一、样品的准备/萃取1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。
3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。
4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。
例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。
二、检测步骤1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。
2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。
3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。
从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。
使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。
4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。
用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。
每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。
注意确保最后将吸头中的液体排空。
5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。
室温下放置15分钟。
注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。
6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。
如此方式反复冲洗5次。
注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。
黄曲霉毒素B1ELISA(国产)
黄曲霉毒素B1酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒1 概要黄曲霉毒素（Aflatoxin）是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉的某些产毒菌株产生的初级代谢产物，目前已经分离鉴定出十二种，在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究中心划定为I类致癌物，其作用的靶器官主要为肝脏。
本试剂盒可用于检测样品中的黄曲霉毒素B1。
适用于食品（酱油，食醋，发酵酒，婴儿代乳食品，发酵类豆制品），原粮及其制品（花生，花生油及其他食用油，玉米，玉米粉，玉米黄浆，玉米/酱豆混合物，小麦，大米，高粱）饲料及相关原料（豆粕，棉籽饼，猪配合饲料及浓缩饲料，混合饲料）中黄曲霉毒素B1的定量、定性检测。
2 原理本试剂盒采用直接竞争ELISA法检测样品中黄曲霉毒素B1。
在微孔板上预包被抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体，样品或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1和HRP标记的黄曲霉毒素B1竞争结合微孔板中抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样品吸光值与其所含黄曲霉毒素B1量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。
3 试剂盒组份每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份：包被有抗黄曲霉毒素B1抗体的微孔板------96孔（8孔/条×12条）黄曲霉毒素B1标准品溶液----------------------------6瓶(1.0 mL/瓶)分别为0号：0 μg/L；1号：0.05 μg/L；2号：0.15 μg/L；3号：0.3 μg/L；4号：0.9 μg/L；5号：2.7 μg/L10×浓缩洗涤液----------------------------------------------1瓶(30 mL)黄曲霉毒素B1标记HRP溶液-------------------------------1瓶(6 mL)底物溶液A-----------------------------------------------------1瓶(7 mL)底物溶液B-----------------------------------------------------1瓶(7 m L)终止液-----------------------------------------------------------1瓶(7 mL)封板膜-------------------------------------------------------------------1张说明书-------------------------------------------------------------------1份4 另外所需仪器和试剂4.1试剂● 甲醇（分析纯）● 三氯甲烷（分析纯）● 正己烷或石油醚（分析纯）● 去离子水或蒸馏水● 0.01M PBS（pH7.4）：称取8 g 氯化钠，2.9 g 十二水合磷酸氢二钠，0.2 g 氯化钾，0.2 g 磷酸二氢钾，加超纯水溶解，调pH至7.4，定容至1000 mL。
黄曲霉毒素B1试剂盒操作流程图
该操作是根据江苏省苏微微生物产品应用编制的，具体使用请参照产品附带说明书！黄曲霉毒素B1操作流程示意图
1.
；
2.1‐6号孔分别按次序由小到大加入浓度为0‐‐2ppb 标准品溶液各50ul ，剩余孔从7号开始分别加入要测定的样品的稀释液；然后从1号开始的所有孔分别加入50ul 稀释后的酶标抗原溶液，加盖后放入37℃培养箱，进行30分钟温育；
3.孵育完成后，倒掉孔内所有试剂，每孔加入约250ul 洗涤液，洗板5次；
4.5次洗板后拍干酶标孔（拍干后残留的气泡可用吸头戳破），按照先后顺序，所有孔先加入50ul 底物a ，然后所有孔再加入50ul 底物b ，加盖后放入37℃培养箱，进行15分钟温育；
显色反应后每个孔基本都会呈现出不同程度的蓝色，肉眼能明显的看到1‐6号孔的蓝色是由深到浅的（毒素含量越低，蓝色越深；反之亦然。
），样品孔则由于毒素含量的不同，呈现出
显色示意图
5.显色反应完成后，在每个孔中加入50ul 的终止液，蓝色变成黄色，混匀后上450nm 波长的酶标仪读取吸光度值。
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黄曲霉毒素B1检测试剂盒
商品分类：ToxinFast®ELISA试剂盒
产品编号：HE09004
产品规格：96T/48T
产品编码】HE09004
【产品简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。
其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。
薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。
而使用黄曲霉毒素B1 ELI SA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。
参考国家标准GB/T 5009.22-2003。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间短于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
【原理】本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素B1抗原，样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体，同时黄曲霉毒素B1抗体与酶标二抗相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B 1成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。
【适用范围】
可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、花生酱、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。
【规格】96孔/盒
【灵敏度】0.1ppb
【回收率】
花生、玉米等谷物：90±15%
曲奇饼干：90±15%
蜂蜜蛋糕：85±15%
饲料：85±15%
食用油：90±15%
酱油：85±15%
醋：90±15%
葡萄酒：90±15%
【精密度】试剂盒的变异系数均小于10%
【稀释倍数】
花生、花生酱；玉米、麦类等谷物；曲奇饼干、蜂蜜蛋糕处理方法：20
饲料稀释倍数：12.5
食用油稀释倍数：15
酱油、醋、葡萄酒 :10
【储存条件】保存试剂盒于2~8℃。
【有效期】12个月。