细胞计数及活力测定

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细胞活力检测实验报告

一、实验目的细胞活力是细胞生物学研究中非常重要的指标，能够反映细胞在特定条件下的生长、代谢和功能状态。

本实验旨在通过多种方法检测细胞活力，了解细胞在不同条件下的生长情况，为后续实验研究提供依据。

二、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 试剂：台盼蓝染色液、CCK-8试剂盒、Resazurin细胞活力检测试剂盒、ATP含量测定试剂盒、细胞培养液、培养基、PBS缓冲液等3. 仪器：显微镜、酶标仪、细胞计数板、细胞培养箱、超净工作台等三、实验方法1. 台盼蓝染色法（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）用PBS缓冲液洗涤细胞，加入适量的台盼蓝染色液，室温孵育5分钟。

（3）用PBS缓冲液洗涤细胞，观察细胞染色情况。

2. CCK-8试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。

（3）加入10μl CCK-8试剂，避光孵育2小时。

（4）用酶标仪检测450nm波长下的吸光度（OD值）。

3. Resazurin细胞活力检测试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。

（3）加入10μl Resazurin试剂，37℃孵育4小时。

（4）用酶标仪检测570nm和600nm波长下的吸光度（OD值）。

4. ATP含量测定法检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl ATP含量测定试剂盒，室温孵育10分钟。

（3）用酶标仪检测560nm波长下的吸光度（OD值）。

四、实验结果与分析1. 台盼蓝染色法通过显微镜观察，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色。

细胞增殖及细胞活力检测方法

细胞增殖及细胞活力检测方法1.细胞计数法细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一、该方法通过显微镜观察细胞密度和数量来判断细胞的增殖情况。

首先，将培养皿中的细胞样本取出，使用显微镜观察细胞的形态和数量，然后用显微镜同时观察已知数量的细胞，计算出单位面积或体积中的细胞数量，最后通过比较细胞数量的变化来评估细胞的增殖情况。

2.三(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑盐(MTT)法MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。

MTT是一种黄色噻唑盐，可以通过还原作用转化为紫色的甲氧基-4-硝基苯胺（formazan），这个转化过程是仅在活细胞中发生的。

首先，将MTT溶液加入细胞培养皿中，细胞内的活细胞色素（还原酶）可以将MTT转化为紫色的formazan。

然后，用溶剂将formazan溶解，测量溶液的吸光度，就可以通过测量吸光度的变化来评估细胞的活力。

3.荧光素酶体积法（ATP法）ATP法是一种用于检测细胞的能量代谢水平的方法。

ATP是细胞内的能量分子，在细胞进行代谢活动时会不断产生。

将细胞样品加入含有高能底物的反应溶液中，ATP酶将底物中的ATP转化为体积比较大的荧光素酶（luciferin）。

接下来，荧光素酶与荧光素生成一个反应产生的发光，发光强度与ATP浓度成正比。

通过测量发光强度来评估细胞的活力。

4.分子探针染色法分子探针是一种与特定分子结合的荧光标记物质，可以通过显微镜观察细胞中特定分子的分布和浓度。

常用的分子探针有细胞核染色剂（如DAPI），线粒体染色剂（如JC-1），胞质钙染色剂（如Fluo-3）等。

将细胞与特定分子探针共同孵育，根据分子探针的荧光强度和分布情况，可以评估细胞内特定分子的含量和活动水平，从而间接评估细胞的增殖和活力。

5.流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞的物理和化学性质，通过细胞悬浮液在液体流动中的传递和分析的技术。

通过染色、抗体标记、荧光探针等方法，可以区分和分析细胞的不同类型和状态。

细胞生物学细胞计数法和MTT法

实验题目：细胞增殖和活力的检测方法一、摘要：细胞增殖是生物体生长和繁殖的基础，当细胞增殖发生异常时往往会导致疾病的发生，比如肿瘤的发生就是细胞增殖失控的结果。

掌握细胞增殖和活力的检测是从事细胞生物学研究的一个重要方面。

针对细胞增殖和活力的检测方法有很多，这些方法除了能用于细胞本身增殖特性的研究、还能应用于药物毒副性检测，生长因子对细胞增殖和活力的影响等。

二、实验原理：〔1〕细胞计数法：最简单直接的方法：传统细胞计数的方法是用血球计数板，原理：将一定量的细胞悬液载入固定体积的玻片夹层中，在显微镜下数出细胞数量，然后换算出原始的细胞悬液浓度。

使用自动化细胞计数器，它通过拍下计数界面照片，利用软件程序设定去识别细胞，实现自动化计数。

好处:这种方法能兼容台盼蓝染色，染上蓝色的细胞视为死细胞，直接观察就能大致判断细胞的活力状态，计数后能定量分析细胞存活率。

缺点:①它的灵敏度低②线性范围太窄，细胞浓度低于 10 万个/ml 则计数不准确。

〔2〕 MTT 法MTT 称为噻唑蓝，是一种黄颜色染料。

定义：MTT 比色法是一种通过检测细胞代谢活性间接反映细胞增殖的方法。

原理：活细胞线粒体里的酶能够将外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，活细胞数量越多，形成的有色沉淀越多，通过测定颜色的深浅也就是吸光值来反映细胞代谢活性的强弱，而细胞代谢活性与细胞数量呈正比，从而反映细胞数量的多少。

缺点： MTT被还原形成的有色沉淀需要溶解后才能比色，检测用时较长，检测结果会受到沉淀溶解效果的影响。

三、实验材料和用品：细胞计数法：待测细胞悬液、细胞计数板、盖玻片、普通光学显微镜、微量移液器及枪头、酒精棉球、吸水纸、台盼蓝染液MTT法：贴壁细胞（A549 肺癌细胞株）酶标仪、酶标板振荡器、超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱、96 孔培养板，EP 管及管架，微量移液器及枪头、5mg/ml MTT 溶液，DMSO 溶液，1640 完全培养液四、实验操作（细胞计数法）：实验过程分为四个环节：（首先）清洁细胞计数板及盖玻片—（然后）镜检计数室—（接着）细胞加样—（最后）细胞计数具体操作细节如下：1、清洁细胞计数板及盖玻片：用 75%酒精棉球仔细擦拭细胞计数板的计数室区域，接着擦拭盖玻片，放置吸水纸上自然晾干；2、镜检计数室：1）细胞计数板和盖玻片干燥后，将盖玻片覆盖到细胞计数板的计数室部位；2）在显微镜下观察擦拭效果，确定计数室区域已擦拭干净、能清晰看到计数室的大方格及中方格3）直接平行移出计数板，平放在实验台上；3、待测细胞加样：1）将待测细胞悬液混匀后，吸取 10ul 细胞悬液加入 EP 管，然后再吸取10ul台盼蓝染液加入 EP，混匀，染色静置 2 分钟。

细胞活力研究检测指标

细胞活力研究检测指标细胞活力研究通常涉及多种检测指标，以评估细胞的生理状态、代谢活性和功能。

以下是一些常见的检测指标：1. 细胞增殖能力：1)MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物）试验：通过测量活细胞中线粒体脱氢酶的活性来评估细胞增殖。

2)CCK-8（Cell Counting Kit-8）试验：类似于MTT，但使用水溶性四唑盐WST-8，减少了实验步骤。

3)BrdU（5-溴脱氧尿苷）掺入试验：通过检测BrdU在DNA合成期的掺入来评估细胞增殖。

2. 细胞存活率：1)细胞计数：直接使用血球计数板或自动细胞计数器计算活细胞数量。

2)台盼蓝染色：排除法，活细胞不会吸收台盼蓝，死细胞会被染成蓝色。

3. 细胞凋亡检测：1)Annexin V/PI染色：通过流式细胞仪检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性来识别早期和晚期凋亡细胞。

2)TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记）试验：检测DNA断裂，是细胞凋亡的标志。

4. 细胞周期分析：流式细胞仪：使用PI或Hoechst染料对DNA进行染色，分析细胞周期分布。

5. 细胞代谢活性：1)ATP含量测定：ATP是细胞能量代谢的重要指标。

2)乳酸脱氢酶（LDH）释放：衡量细胞膜完整性和细胞损伤程度。

6. 氧化应激指标：1)ROS（活性氧物种）检测：使用荧光探针如DCFH-DA进行检测。

2)抗氧化酶活性：如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等。

7. 蛋白质和基因表达：1)Western blot：检测特定蛋白质的表达水平。

2)qPCR（实时定量聚合酶链反应）：检测特定基因的mRNA表达水平。

8. 细胞信号通路活性：磷酸化蛋白检测：通过Western blot检测特定蛋白的磷酸化状态来评估信号通路的激活。

9. 细胞粘附和迁移能力：1)划痕试验：评估细胞迁移能力。

2)侵袭和迁移试验：使用Transwell小室评估细胞的侵袭和迁移能力。

细胞功能检测

细胞功能检测细胞功能检测是指对生物样品中的细胞进行测试和分析，以评估其功能状态和活性水平。

这种检测可以用于研究细胞生理学、疾病诊断和治疗等领域。

下面介绍几种常见的细胞功能检测方法。

1. 细胞生存和增殖检测：这种检测方法可以评估细胞的生存能力和增殖速度。

常见的方法包括细胞计数、细胞活力和增殖指标的测定。

细胞计数可以用显微镜观察和细胞计数仪进行，细胞活力可以通过测定细胞色素c释放量、ATP产量等指标来评估，增殖指标包括细胞周期、有丝分裂指数等的测定。

2. 细胞凋亡检测：细胞凋亡是正常的细胞死亡过程，对维持组织结构和功能起着重要作用。

细胞凋亡的检测可以使用多种方法，如细胞凋亡标记物的染色、DNA片段化检测和细胞凋亡相关蛋白的测定等。

常用的染色方法有TUNEL法、AnnexinV染色法等，可以直接或间接地检测细胞凋亡的存在和程度。

3. 细胞分化检测：细胞分化是未分化细胞向特定细胞类型发育和成熟的过程。

细胞分化的检测可以通过测定特定分化标记物的表达来评估。

例如，神经细胞的分化可以通过检测神经元特异性标记物如神经元特异性聚糖、神经元特异性酶等的表达来判断。

4. 细胞迁移和侵袭检测：细胞迁移和侵袭是细胞在体内的基本生理过程，在肿瘤的发生和转移中具有重要的作用。

细胞迁移和侵袭能力的检测可以使用Transwell迁移实验、划痕愈合实验等方法，通过观察细胞通过细胞孔隙和划痕进入下一层细胞的能力来评估。

5. 细胞代谢功能检测：细胞代谢是维持细胞生命活动所必需的重要过程之一，包括能量代谢、蛋白质合成和降解、核酸代谢等。

细胞代谢功能的检测可以通过测定细胞中某些代谢产物的含量、酶活性的测定、氧化还原能力的测定等来评估。

细胞功能检测是实验生物学研究和临床医学诊断的重要手段之一。

通过细胞功能检测，人们可以了解细胞在不同条件下的功能状态和活性水平，从而更好地研究细胞生理学机制、发现新的疾病标记物和药物靶点，为疾病的诊断和治疗提供新的线索和方法。

细胞增殖及细胞活力检测方法1

细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖是指细胞数量的增加，是生物体生长和发育的基础过程。

细胞活力是指细胞代谢水平和功能状态的综合体现。

细胞增殖和细胞活力的检测方法在细胞生物学和生物医学研究中非常重要。

本文将介绍一些常用的细胞增殖和细胞活力检测方法。

一、细胞增殖检测方法1.平板计数法：平板计数法是一种直接计数方法，通过显微镜观察计数细胞数量。

首先，将细胞悬液均匀地涂布在显微镜滑片上。

然后，使用显微镜对细胞进行计数。

这种方法简单直接，但在大量细胞计数时比较耗时。

2.显微镜观察法：显微镜观察法是另一种直接计数方法。

通过显微镜观察细胞在培养皿中的覆盖度，以评估细胞增殖。

这种方法可以快速获得细胞增殖信息，但由于操作主观性较强，结果可能存在一定的误差。

3. MTT法：MTT法是一种间接计数方法，通过测定细胞代谢能力来估计细胞增殖。

首先，将MTT试剂加入细胞培养皿中，MTT会被活细胞还原成紫色的甲基化四氮唑盐（formazan）。

然后，通过比色法测定培养基中的甲基化四氮唑盐含量，从而间接反映细胞的增殖情况。

MTT法具有操作简便、结果可重复性好的优点。

4.WST-1法：WST-1法也是一种间接计数方法，通过测定细胞膜透过性来估计细胞增殖。

首先，将WST-1试剂加入细胞培养皿中，WST-1会被细胞色素P450酶一氧化还原成形成可溶性产物。

然后，通过光密度测定产生的产物浓度，从而间接反映细胞的增殖情况。

WST-1法灵敏度高，操作简单。

二、细胞活力检测方法1.ATP酶联反应法：ATP酶联反应法是一种直接测定细胞活力的方法。

ATP是细胞内的能量分子，可以反映细胞代谢水平。

通过酶联反应，将ATP转化为发光物质，然后使用发光仪测定发光强度，间接反映细胞活力。

这种方法灵敏度高，但样品处理复杂。

2.细胞膜透过性检测法：细胞膜透过性检测法是一种间接测定细胞活力的方法。

细胞在不同状态下，细胞膜透过性会发生变化。

实验报告细胞活力

一、实验目的1. 了解细胞活力的概念和测定方法。

2. 掌握MTT法和CCK-8法测定细胞活力的原理和操作步骤。

3. 通过实验验证细胞活力测定方法的有效性。

二、实验原理细胞活力是指细胞生长、增殖和代谢的能力。

细胞活力测定是细胞生物学和分子生物学实验中常用的技术，用于评估细胞增殖和细胞毒性。

常用的细胞活力测定方法有MTT法、CCK-8法等。

1. MTT法：MTT法是一种通过检测细胞代谢产物（如NADH）还原MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物）生成甲紫（Formazan）的量来间接反映细胞活力的一种方法。

在一定条件下，活细胞内的脱氢酶可以将MTT还原成甲紫，甲紫呈紫色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。

2. CCK-8法：CCK-8法是一种基于细胞代谢产生乳酸脱氢酶（LDH）的原理，通过检测LDH将CCK-8还原成水溶性甲偶氮盐的量来反映细胞活力的一种方法。

在一定条件下，活细胞内的LDH可以将CCK-8还原成甲偶氮盐，甲偶氮盐呈黄色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。

三、实验材料1. 细胞：待测细胞系2. MTT试剂：3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物3. DMSO（二甲基亚砜）：用于溶解MTT4. CCK-8试剂：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫唑基)-2H-四唑5. 96孔板：用于细胞培养和实验操作6. 细胞培养试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素7. 其他：移液器、吸头、酶标仪、水浴锅、恒温培养箱、超净工作台等四、实验方法1. 细胞培养：将待测细胞系按照一定密度接种于96孔板中，置于恒温培养箱中培养至细胞贴壁生长。

2. MTT法测定细胞活力：（1）将细胞培养至一定密度后，加入MTT试剂，置于恒温培养箱中继续培养；（2）待细胞代谢完成后，加入DMSO溶解甲紫；（3）使用酶标仪在490nm波长处检测吸光度值。

细胞活力检测方法

细胞活力检测方法细胞活力是指细胞内外环境稳定，细胞结构完整，代谢活跃，功能正常的状态。

细胞活力的高低直接影响着生物体的生长、发育、免疫功能等多个方面。

因此，准确、快速地检测细胞活力对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。

下面将介绍几种常见的细胞活力检测方法。

一、MTT法。

MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。

其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物）加入培养基中，MTT会被细胞内的还原酶还原为可溶性的紫色产物，然后用溶剂将产物溶解，最后用酶标仪测定其吸光值。

吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。

二、CCK-8法。

CCK-8法是一种新型的细胞活力检测方法，其原理是将CCK-8（Cell Counting Kit-8）溶液加入培养基中，CCK-8会被细胞内的还原酶还原为橙黄色的产物。

然后用酶标仪测定其吸光值，吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。

相比MTT法，CCK-8法更为灵敏和稳定。

三、荧光染料法。

荧光染料法是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用荧光染料（如FDA、PI等）染色活细胞和死细胞，然后观察染色情况来判断细胞的活力。

活细胞呈绿色荧光，而死细胞呈红色荧光。

通过计数活细胞和死细胞的比例，可以间接反映细胞的活力情况。

四、细胞代谢物测定法。

细胞代谢物测定法是一种直接反映细胞活力的方法。

通过测定细胞产生的代谢产物（如乳酸、ATP等）的含量，可以客观地评价细胞的活力情况。

这种方法不仅可以用于细胞培养液的检测，也可以用于组织样本的检测。

综上所述，细胞活力的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。

在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的方法来检测细胞活力，以便更好地开展生物学研究和临床诊断工作。

希望本文介绍的内容对您有所帮助。

细胞活性检测方法

细胞活性检测方法
细胞活性检测是观察和分析细胞在不同环境条件下生长和活动状态的常用方法，是细
胞生物学研究的重要工具。

下文重点讨论细胞活性检测方法。

细胞活性检测主要分为细胞增殖检测和细胞毒性检测两类。

细胞增殖检测是用于检测细胞增殖水平的一种常见方法，其方法可以分为物质检测法
和荧光检测法。

其中，物质检测包括以下几种方法：1. 细胞计数法：使用酶标仪或显微
镜统计细胞的数量和亚群分布；2.发光检测法：用苯乙烯（MTT）或朴素假单胞菌（XTT）
等试剂测定细胞代谢活力；3.生物量测定：用铜铋还原定氮法或硝酸还原法测定细胞原材
料和产物含量。

荧光检测包括以下几种：活性染色法：如酶原发光染色（ELISA）；假单
胞菌（xTT）荧光定量法等。

细胞毒性检测是研究细胞在有毒物质存在下的活性情况。

常见的细胞毒性检测方式有：
1.细胞实验系统和荧光染色：检测细胞内毒性物质产生变化前后细胞形态和蛋白组成等；
2.细胞能量测定法：检测细胞受有毒物质影响后ATP含量及其他代谢产物及表观遗传学变化；
3.细胞凋亡检测：通过检测细胞凋亡标志物TUNEL法以及流式细胞仪中染色体减数等
来检测细胞凋亡的发生。

细胞活性检测是生物学研究的重要工具，它不仅可以帮助我们更好地理解细胞在不同
环境条件下的活动，而且还可以用于预测细胞对外界刺激和毒素等的反应，进而帮助提高
细胞培养和药物研究的准确性和效率。

细胞活性检测方法

细胞活性检测方法细胞活性检测是生物学和药理学研究中非常重要的一项实验技术，它可以用来评估细胞的生存状态、增殖能力和代谢活性，对于药物筛选、毒性评价、细胞治疗等领域具有重要意义。

在实验室中，常用的细胞活性检测方法包括MTT法、CCK-8法、细胞计数法、流式细胞术等。

本文将对这些常用的细胞活性检测方法进行介绍和比较。

MTT法是一种常用的细胞活性检测方法，其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑）溶液加入细胞培养物中，MTT在活细胞内被还原成紫色的甲基四氮唑晶体，然后用溶解晶体的溶剂将其溶解，最后用酶标仪测定溶液的吸光度，吸光度值与细胞数量成正比。

MTT法操作简便，结果稳定可靠，但有些化合物可能会影响MTT还原反应，导致误差。

CCK-8法是一种基于细胞还原能力的细胞活性检测方法，其原理是将CCK-8试剂加入细胞培养物中，CCK-8在活细胞内被还原成橙黄色的水溶性甲酚偶氮甲烷盐（Formazan）晶体，然后用酶标仪测定溶液的吸光度，吸光度值与细胞数量成正比。

CCK-8法对化合物的影响较小，操作简便，结果稳定可靠，但CCK-8试剂价格较高。

细胞计数法是一种直接统计细胞数量的细胞活性检测方法，可以通过显微镜观察细胞数量或者用自动细胞计数仪进行计数。

这种方法直观、准确，但操作繁琐，耗时较长，适用于对细胞数量要求不高的实验。

流式细胞术是一种通过检测细胞内荧光标记物来评估细胞活性的方法，可以同时对数以万计的细胞进行分析，具有高通量、高灵敏度和高精度的优点，但设备昂贵，操作复杂，不适用于一般实验室。

综上所述，不同的细胞活性检测方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实验目的、实验条件和预算来综合考虑。

在进行细胞活性检测时，我们还应该注意实验操作的标准化和重复性，以确保实验结果的可靠性和准确性。

希望本文对您有所帮助，谢谢阅读！。

MTT法测定细胞相对数和相对活力

MTT法测定细胞相对数和相对活力一、原理噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。

二、试剂材料准备与实验仪器1）对数生长期细胞2）受试因素（药物）3）MTT：以PBS配制成5mg /ml，抽滤除菌，保存在4˚C4）DMSO（二甲基亚砜）5）96孔板6）酶联免疫检测仪7）细胞培养箱三、实验步骤（适用于贴壁细胞）1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，1×104/孔，细胞浓度可以调整。

2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁。

3）加入不同浓度的药物，如1、5、10、40、50、80、160、320mg/ml的药物，时间依据实验需要，一般3天。

4）小心吸去上清，PBS轻轻洗涤，再次离心，弃上清。

5）每孔加入180 ul新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。

6）终止培养（可离心，1000 rpm，10 min），小心吸去孔内培养液。

7）每孔加入150 ul二甲基亚砜（也可以用酸化异丙醇，10%SDS代替），置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。

在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。

8）同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。

三、结果统计学处理所有数值以x±s表示，应用SPSS软件进行方差分析，p<0.05时为相差显著，p<0.01时为相差非常显著。

可以以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线，专门公式求IC50。

或计算抑制率。

四、注意事项与常见问题1）实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。

细胞活力测定实验报告

细胞活力测定实验报告细胞活力测定实验报告细胞活力是评估细胞生命力和功能状态的重要指标之一。

在现代生物学研究中，细胞活力测定实验被广泛应用于药物筛选、毒性评估、细胞增殖和凋亡研究等领域。

本文将介绍一种常用的细胞活力测定方法——MTT法，并结合实验结果进行分析和讨论。

MTT法是一种基于细胞还原酶活性的颜色反应原理，可用于测定细胞的代谢活性和细胞数量。

实验中，我们选取了人类肺癌细胞株A549作为研究对象，通过MTT法测定细胞在不同处理条件下的活力变化。

首先，我们将A549细胞均匀地分配到96孔板中，每孔约含有1×10^4个细胞。

然后，根据实验设计，对细胞进行不同的处理。

我们选择了三个处理组：阳性对照组、阴性对照组和实验组。

阳性对照组是指给予细胞一种已知能够促进细胞增殖的药物，以验证实验方法的可行性；阴性对照组是指未给予任何处理的细胞，作为对照组；实验组是指给予待测药物处理的细胞。

接下来，我们在每个孔中加入一定浓度的MTT试剂，并孵育细胞一段时间，使细胞摄取MTT并还原为紫色的甲基咪唑溴化物。

然后，通过加入溶解剂将细胞内的甲基咪唑溴化物溶解出来，形成蓝色的溶液。

最后，利用酶标仪测定吸光度，即可得到细胞活力的定量结果。

实验结果显示，阳性对照组的细胞活力明显高于阴性对照组，验证了MTT法的可靠性。

而实验组的细胞活力则与阳性对照组相比有所降低，表明待测药物对细胞的增殖能力有一定的抑制作用。

进一步的数据分析发现，待测药物的抑制效果呈剂量依赖性，即随着药物浓度的增加，细胞活力的降低程度也随之增加。

通过以上实验结果，我们可以得出结论：MTT法是一种简便、可靠的细胞活力测定方法，适用于药物筛选和毒性评估等研究领域。

同时，该实验结果也提示了待测药物对A549细胞增殖的抑制作用，为进一步研究该药物的抗癌潜力提供了重要线索。

除了MTT法，还有许多其他常用的细胞活力测定方法，如CCK-8法、LDH释放法等。

这些方法在原理和操作上有所不同，但都能够提供有关细胞代谢活性和生命力的信息。

6-传六孔板、活力测定、细胞计数

• 用泡在新洁尔灭消毒液中的毛巾擦超净台面
• 将用过的瓶子、吸管、废液缸、牛皮纸、绳子放在篮子中拿到对应的普通教室，按照指定位置分类放好。其中瓶子、瓶盖和吸管（镊子取出棉球）冲洗后泡在对应的盆里，废液缸冲洗后倒扣于对应篮筐里，牛皮纸折叠一起，用绳子包扎好放置于对应箱子里，绳子整理成一缕放于对应篮筐里。
六、细胞计数
滴加一滴细胞悬液
N1
N2
滴加一滴细胞悬液
N3 四个格子平均数
N4
稀释倍数
数N1-4格，压边界的只数两条边
计算：10000 *1*（N1+N2+N3+N4）/4=___________个/ml 4*4格，0.1mm*1mm=0.1mm3 计数板用后用酒精棉球擦拭干净
七、实验后清理台面
• 值日生需做： • 1. 待各组均完成实验后，检查各超净台内灯和风机是否已关闭、该清出的物品是否已清出、不该移出的是否有缺漏、酒精灯是否需要补充酒精（少于容积的3/4需补）；
• 2.收捡本组大储槽和各小组小储槽于室内纸箱或者边台，摆放下一组实验用品：下一组大储槽摆在室内中台，各组超净台内摆放： 6孔板一个，盖玻片2-3包，吸管筒两个，废液缸一个，下一组的小储槽；
• 3. 凳子收于超净台下，收捡中台、边台和地面垃圾于垃圾桶； • 4. 值日完毕离开时，将室内和室外垃圾袋带走。
请按小组号对应的超净台号坐（两侧对坐）
动物细胞培养技术
—传代、活力测定与细胞计数
细胞生物学教研室 2017
一、细胞传代
• 原代培养细胞在瓶壁汇合后，需进行分离再培养，否则会因细胞密度过大，或生存空间不足、营养不够导致细胞衰老、停止生长甚至死亡。细胞的再培养，即将原代培养瓶内的细胞分离、稀释、接种到新的培养瓶内继续扩大培养。 • 首次传代时，细胞接种数量要多，使细胞尽快适应新环境，有利于细胞的生存和增殖。通常，原代细胞按1:2 分种传代。

细胞计数及活力测定

【实验材料】
一、材料：细胞悬液。二、器材：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分光光度计）三、试剂：0.4％台盼兰，0.5％四甲基偶氮唑盐（MTT）、酸化异丙醇（1）0.4%台盼兰染液配制：台盼兰 0.4克加双蒸水至100 ml。（2）MTT配制：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。（3）酸化异丙醇配制：异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。
Experiment 18
细胞计数及活力测定
【实验目的】
1．练习进行细胞计数，并的方法
【实验目的】
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
【实验内容】
1．细胞计数 ①将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。 ②将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。 ③静置3分钟。 ④镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝（4大格细胞总数/ 4）×10000 注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
【作业与思考题】
1．根据实验结果，画出生长曲线。 2．试述用MTT法测定细胞生长曲线的过程及注意事项。 3．细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有什么关系？ 4．为什么细胞计数时，细胞悬液逸出槽外时要重做？

MTT法检测细胞相对数和相对活力

MTT法检测细胞相对数和相对活力
MTT法检测细胞相对数和相对活力
一、实验原理
MTT比色法是一种检测细胞存活率和增殖率的方法，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，其颜色深浅与酶活力成正比，所以测定570nm 波长的O.D值可以反映琥珀酸脱氢酶活力高低，间接反映活细胞数量多少。

二、实验目的
了解并掌握MTT法的基本原理及基本过程。

三、实验器具
96孔细胞培养板、微量加样器、吸头、吸头盒、酶联免疫检测仪、显微镜、细胞计数板等。

四、实验方法
1.细胞接种: 将处于对数生长期的细胞用培养基制成2×105细胞/ml的悬液，用微量加样器接种于96孔板中,每孔100ul, 边缘孔中不加细胞，仅加培养基作为无细胞空白。

37℃培养箱中培养，使细胞贴壁。

2.加药: 弃去培养掖，于相应实验孔中加不同浓度的药物，每孔100ul，留数孔不加药，而加入等体积培养液作空白对照，继续培养24h。

3.加MTT: 弃培养液，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次，每孔再加入100ul MTT(1mg/ml)，37o C继续培养4小时。

4.洗板:吸去MTT，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次,最后吸干孔内液体。

5.溶解: 每孔中加入二甲亚砜(DMSO)200ul，溶解细胞内MTT，室温下放30min, 并不时摇动。

6.测定: 在酶联免疫仪上于570nm波长处测定O.D值。

以无细胞空白孔为零点，作好记录。

细胞计数及细胞活率

细胞活率计算细胞活率就是活细胞的比例，可用台盼蓝拒染法计数活细胞:1. 加5mL培养基彻底混合细胞悬液。

2. 直接用台盼蓝溶液稀释样本。

例如：取20ul细胞悬液加入80ul台盼蓝溶液中，稀释5倍。

涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。

3. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。

仔细的将盖玻片覆盖两个小室。

4. 用微量移液器吸取10ul稀释的样本充满两个小室，不要过满或不足。

5. 计数4个大方格中的细胞总数(1x1x0.1mm)。

死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏而吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。

6. 细胞密度计算方法：每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL。

7. 活细胞百分比计算方法如下：活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100% =活细胞百分比。

细胞计数板使用方法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104。

说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3，而 1ml=1000mm3 。

（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）细胞计数板的使用血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

细胞计数和存活率的测定

细胞计数和存活率的测定目的学会细胞计数和鉴别细胞死活的方法。

实验前的思考体外培养细胞常常需要测定细胞的培养密度，即单位体积内的细胞数，同时还需要鉴别细胞的死活，从而了解细胞的存活情况。

细胞密度测定最常用的工具是血球计数板，细胞死活测定的最简单方法是染料排斥法，常用鉴别染料为台酚蓝。

材料器具蟾蜍或小白鼠的骨髓细胞；显微镜，血球计数板，吸管，培养皿，试管，软布或擦镜纸；0.4%台酚蓝染液，两栖动物生理盐水（0.65%氯化钠溶液）或哺乳动物生理盐水（0.9%氯化钠溶液）。

步骤1.制备骨髓细胞悬液具体方法参见第660页实验“赡蜍骨髓细胞染色体的制备”。

2.细胞计数准备取一副血球计数板，用软布或擦镜纸擦净，把盖玻片盖在血球计数板中央的计数室上。

把上述制得骨髓细胞悬液摇匀，用吸管吸取少量细胞悬液轻轻地滴在计数室边缘的斜面上，让它自然地流入盖玻片下的空隙，均匀地充满在计数室内。

悬液不能过多或过少，过多会使盖玻片浮起，过少会出现空隙或气泡。

如果有上述现象必须洗去，擦干重做，否则会影响计数准确性。

3.细胞计数方法静置2～3分钟，待细胞在计数室下沉后，在低倍镜下计数（详见本书第777页实验《血细胞的计数》。

4.细胞存活力鉴别取0.5毫升骨髓细胞悬液放入小试管里，再加0.4%台酚蓝染液0.5毫升，用吸管轻轻吹打混匀，染色2～3分钟。

然后把悬液摇匀，吸取悬液滴一滴在干净载玻片上，加盖玻片，在低倍镜下，随机计数上、下、左、中、右五个视野内的细胞总数和被染成蓝色的细胞数，蓝色细胞为死细胞，按以下公式计算细胞存活率：上述细胞计数和细胞存活力测定也可以合并在一起做。

分析和讨论1.细胞计数时，应该先调焦，看清计数板上的格线。

细胞密度太高时，计数不便，应该先把原液稀释若干倍后再计数，随后把测得结果乘以稀释倍数即为原液细胞密度。

计数时，以每大格点数在几十到一百多为宜。

2.台酚蓝染液一般不能渗透到活细胞里，所以活细胞不会着色。

但是如果延长染色时间或提高染液的浓度，造成活细胞膜损伤时，活细胞也可着色。

细胞增殖及细胞活力检测方法

细胞增殖及细胞活力检测方法目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。

一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。

另一种是间接的方法，即细胞活力（cellviability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。

显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。

如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。

所以最直接的证据应该采用方法一。

用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞，再检测DNA链中氚含量。

若细胞具有增殖能力，DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA的合成。

但更为常用的方法是BrdU检测法。

用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。

细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量（如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。

Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒，以微孔板的形式，合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。

比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数，所有操作在3小时内结束。

而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。

1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时，100个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。

BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。

有些情况下，研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，然而，在变性条件下，DNA的双链结构将被破坏，DAPI和Hoechest33342等核酸标记探针就不再能识别DNA，因而也无法估计DNA总量。