碱性磷酸酶(ALP) SFBC速率法

目录

1. 检测原理

2. 标本采集与处理

2.1 受检者的准备

2.2 静脉采血

2.3 抗凝剂

2.4 标本处理

3. 试剂

3.1 试剂

3.2 校准血清

3.3 试剂、校准血清的稳定性

4. 仪器

5. 操作

6. 计算

7. 操作性能

7.1 精密度

7.2 准确度

7.3 灵敏度

7.4 可报告范围

7.5 特异性

7.6 干扰

8. 参考值

9. 临床意义

附录A: 参数

1. 检测原理

无色的对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下，生成在405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。

碱性磷酸酶

对硝基苯磷酸二钠+ H2O ----------------- 对硝基苯酚+ H3PO4

2．本采集与处理

2.1 受检者的准备：

病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：

除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：

血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。

2.4 标本处理：

血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂

3.1 试剂：

本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALP试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：

3.2 校准血清：

使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。

校准频次：

空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。

3.3 试剂、校准血清的稳定性：

原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。当应用试剂空白吸光度高于0.7时，试剂按照失效处理。

多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。

4．仪器

KONELAB 30型号仪器。

性能：波长405nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。

5．操作

样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为SFBC法。参数见后附，附录A。

试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。

6．计算

ΔA/min×Vt×1000

ALP(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F

e×Vs×d

式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率； e ——18.5 摩尔吸光系数；

Vt——反应液总体积（ml）；d ——1 比色杯光径（cm）；

1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；

7．操作性能

7.1 精密度：

批内CV< 0.22%，批间CV< 3.4%。

7.2 准确度：

检测结果的相对不准确度≤±10%。

7.3 灵敏度：

碱性磷酸酶浓度为：400U/L时，吸光度变化率ΔA405nm/min为0.108～0.132。

7.4 可报告范围：

血清与试剂用量之比为1:60时，测定上限为800U/L。

7.5 特异性：

测量值在给定值的90%-110％范围内。

7.6 干扰：

内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。

8．参考值

40～150U/L。

9．临床意义

碱性磷酸酶测定试剂用于定量测定人体血清中碱性磷酸酶的活性。

碱性磷酸酶(ALP)几乎存在于人体的各个组织中。正常人血清中的ALP主要来自骨骼，由成骨细胞产生。故骨骼疾病，特别是当有新骨质生成时和正在生长的儿童期，血液内的ALP活性增高。因为酶由肝脏排泄，且有部分酶来自肝脏，故肝胆疾病特别是胆道堵塞时ALP活性增高。

附录A: 参数