碱性磷酸酶(ALP) SFBC速率法

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血清碱性磷酸酶磷酸对硝基苯酚法测定

血清碱性磷酸酶（ALP）磷酸对硝基苯酚法测定1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。

2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 6×64 ml ＋试剂2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液0.90mol/L（pH:10.4）醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。

反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。

若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

碱性磷酸酶km值测定实验报告

碱性磷酸酶km值测定实验报告碱性磷酸酶 Km 值测定实验报告一、实验目的1、掌握测定碱性磷酸酶（ALP）Km 值的原理和方法。

2、了解底物浓度对酶促反应速度的影响。

3、熟悉分光光度计的使用。

二、实验原理碱性磷酸酶是一种广泛分布于人体各脏器器官中的酶，在骨、肝、肠、胎盘等组织中含量较高。

它能催化磷酸酯的水解反应，产生无机磷酸和醇、酚等物质。

在酶促反应中，反应速度（v）与底物浓度S之间的关系可用米氏方程表示：v ＝ VmaxS ／（Km ＋ S) ，其中 Vmax 为最大反应速度，Km 为米氏常数。

Km 值是酶的一个重要特征常数，它表示酶与底物的亲和力。

Km 值越小，酶与底物的亲和力越大；反之，Km 值越大，酶与底物的亲和力越小。

本实验通过测定不同底物浓度下的酶促反应速度，以反应速度 v 对底物浓度S作图，通过双倒数作图法（LineweaverBurk 作图法），即1/v 对 1/S作图，可求得碱性磷酸酶的 Km 值。

三、实验材料与仪器1、材料碱性磷酸酶提取液磷酸苯二钠溶液（不同浓度）01mol/L 氢氧化钠溶液004mol/L 碳酸钠溶液05mol/L 三氯乙酸溶液2、仪器分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、准备试剂配制不同浓度的磷酸苯二钠溶液：0005mol/L、001mol/L、002mol/L、003mol/L、004mol/L。

配制显色剂：将 01mol/L 氢氧化钠溶液和 004mol/L 碳酸钠溶液按4:1 的体积比混合。

2、反应体系设置取 7 支干净的试管，按下表加入试剂：｜试管编号|1|2|3|4|5|6|7|｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜磷酸苯二钠溶液（mL）｜000|020|040|060|080|100|＿____|｜蒸馏水（mL）｜100|080|060|040|020|000|＿____|｜37℃预温5min 后，各加入05mL 碱性磷酸酶提取液，立即混匀，37℃水浴准确反应 15min|｜反应结束后，各加入 05mL 05mol/L 三氯乙酸溶液终止反应|3、显色与比色各管加入 45mL 显色剂，充分摇匀。

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。

产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。

此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。

在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。

按照下表稀释系列标准品溶液。

012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。

血清碱性磷酸酶(ALP)

血清碱性磷酸酶（ALP）血清碱性磷酸酶（ALP）介绍：血清碱性磷酸酶正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自肝和骨骼，碱性磷酸酶测定主要用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，是反映肝外胆道梗阻、肝内占位性病变和佝偻病的重要指标。

血清碱性磷酸酶（ALP）正常值：(1)酶速率法(37℃)：成人：40～160U/L；儿童：<350U/L；(2)磷酸苯二钠法：成人：3～13Kat单位；儿童：5～30kat单位；(3)动态法：成人：20~110U/L；青少年：1.男性：<750U/L；2.女性：<500U/L；儿童：<500U/L；婴儿：50~240U/L。

(注：具体参考值请根据各实验室而定。

)血清碱性磷酸酶（ALP）临床意义：(1)升高：①无黄疸：肝硬化、肝细胞癌、胆管疾病(胆管癌，肝内结石)、局限性肝损害(转移性肝癌、肝脓疡、肉芽肿性肝损伤)、其他肝疾病(慢性肝炎、脂肪肝)、骨疾病(佝偻病骨软化症、或骨肉瘤)、转移性骨癌、甲状腺功能亢进症，甲状旁腺功能亢进症，慢性肾功能健康搜索不全，恶性肿瘤(骨、肝转移)等。

②有黄疸：病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损害、肝炎病毒以外的病毒引起的肝损害、原发性胆汁性肝硬化、其他肝内胆汁瘀滞、阻塞性黄疸(胆管癌、胆管细胞癌、胰头癌，总胆管结石火罐网，硬化性胆管炎)。

(2)降低：牛奶-碱综合征、坏血病、甲状腺功能减退症、维生素D 摄入过多、恶性贫血、重症慢性肾炎、呆小病、恶病质等。

血清碱性磷酸酶（ALP）注意事项：1、空腹抽血，抽血前禁食10小时。

2、使用某些药物如避孕药等可引起ALP结果升高。

血清碱性磷酸酶（ALP）检查过程：暂无相关信息。

血清酶学改变诊断详述

血清酶学改变诊断详述
*导读：血清酶学改变症状的临床表现和初步诊断?如何缓解和预防？
血清酶学检查：
1、丙氨酸转氨酶(ALT)
[正常参考值]
速率法(酶法)：5-35IU/L。

2、天门冬氨酸转氨酶(AST)
[正常参考值]
速率法(酶法)：10-36IU/L。

3、碱性磷酸酶(ALP)
[正常参考值]
速率法：50-170IU/L。

4、乳酸脱氢酶(LDH)
[正常参考值]
速率法：55-135U/L。

急性一氧化碳中毒和急性脑出血急性期都会引起血清酶学的改变。

急性一氧化碳中毒(ACMr)导致低氧血症可造成脑、心脏、肝等
系统的缺氧,不但引起心电图特异改变,血清醉学变化也很明显。

脑出血是临床常见病和多发病,急性期有许多应激性改变,如血
清胃泌素增高,应激性血糖增高，血清酶学的改变。

迅速将病人转移到空气新鲜的地方，卧床休息，保暖，保持呼吸道通畅。

*结语：以上就是对于血清酶学改变的诊断，血清酶学改变怎么处理的相关内容介绍，更多有关血清酶学改变方面的知识，请继续关注或者站内搜索了解更多。

血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书

血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。

2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料：6.1 上海奥林巴斯ALP测定试剂盒试剂1 ＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。

反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。

若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序

碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。

测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。

5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。

在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。

−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。

AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。

试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

碱性磷酸酶(ALP)

碱性磷酸酶锁定医学容仅供参考，不能视作专业意见。

网上任何关于疾病的建议都不能替代执业医师的当面诊断。

碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织，。

这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。

但它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。

其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。

生长期儿童血清的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。

1化学特征2有何影响3偏高的危害4升高5来源▪人体情况▪研究应用6测定方法7正常围8临床意义9药物意义10异常原因11抑制作用12肝胆疾病化学特征碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)细菌ALP二级结构现多用ALP系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase;glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase;orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphataseCAS 号: 9001-78-9碱性磷酸酶(AKP或ALP)属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。

每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。

血清碱性磷酸酶的测定

(一)器材 5mL移液管、1mL 移液管、100 μL或200 μL微量可调式移液器、721E型分光光度计、1cm比色皿、37 ℃恒温水浴锅。 (二)试剂 (1) 0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH=10.0)：称取无水碳酸钠6.36g 、碳酸氢钠3.36g 、 4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸馏水中，定容至1L，置于棕色瓶中贮存。
（2） 20mmol/L磷酸苯二钠溶液：先将500mL蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g，冷却后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱内保存。用剩的溶液不应再倒回瓶中。（3）铁氰化钾液：分别称铁氰化钾2.5g，硼酸17g，各溶于400ml蒸馏水中，二液混合后，加蒸馏水至 1L。棕色瓶中避光保存。如出现蓝绿色，说明试剂变质，应弃去。（4）酚标准工作液(0.05mg/ml,酶促反应在单位生成一定量的产物或消耗一定量的底物所需要的酶量。国际单位（IU）：在特定条件下，1min内将 1μmol底物转化为产物所需的酶量为1个国际单位。 Kat单位：在特定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量。（1 IU=16.67 ×10-9Katal）常用单位：活性测定方法的建立者所规定的单位。一般是在规定的反应条件和反应时间中，产物的生成量来表示。如碱性磷酸酶活力单位Kings定义，即每100mL血清在37℃时与底物作用15min,产生 1mg苯酚的酶量为1个Kings 单位。

（1）铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定最后所显红色的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色即作废。（2）目前市售的酚标准液多数为安瓿装，开后不能久置。本法呈色较稳定，因此用标准曲线更为方便。（3）底物液中不应含有酚，如含有酚时空白管显红色，说明磷酸苯二钠已开始分解，不宜继续使用。否则可因底物浓度降低，酶反应不完全而致结果偏低。（4）加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则显色不充分。

碱性磷酸酶(ALP)测定试剂(盒)(NPP底物—AMP缓冲液法)产品技术要求新产业

碱性磷酸酶（AL P）测定试剂（盒）（N PP 底物-AMP 缓冲液
法）
2.性能指标
2.1外观
试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。

2.2装量
试剂装量的装量应按表1，液体装量的最大允许负偏差应为5%。

2.3试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度
试剂（盒）测试空白样本，在37 ℃±0.1 ℃ 、405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.500 Abs。

2.3.2试剂空白吸光度变化率
试剂（盒）测试空白样本，在37℃ 0.1℃，405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度变化率≤0.003 Abs/min。

2.4分析灵敏度
试剂（盒）测试206 U/L 的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）≥0.065 Abs/min。

2.5线性范围
试剂（盒）线性在(0～1000] U/L 范围内的分析性能应符合如下要求：
a) 线性相关系数r≥0.990；
b) (0～100] U/L 范围内，线性绝对偏差应在±10 U/L 以内；(100～1000] U/L 范围内，线
性相对偏差应在±10%以内。

2.6精密度
2.6.1重复性
试剂（盒）测试活性在（120±12）U/L 范围内的样本时，变异系数CV≤4.0%。

2.6.2批间差
试剂（盒）测试活性在（120±12）U/L 范围内的样本时，相对极差R≤6.0%。

2.7准确度
测可溯源至有证参考物质的校准品，相对偏差 B 在±10%范围内。

碱性磷酸酶值测定实验报告

碱性磷酸酶值测定实验报告一、实验目的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简称 ALP）是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

本次实验的目的是测定样本中碱性磷酸酶的活性，以评估相关生理或病理状态。

二、实验原理碱性磷酸酶在碱性环境下能够催化磷酸酯的水解反应，生成无机磷和醇。

通过测定生成的无机磷的量，可以间接反映碱性磷酸酶的活性。

本实验采用磷酸苯二钠法，磷酸苯二钠在碱性条件下被碱性磷酸酶水解生成苯酚和磷酸氢二钠。

苯酚与 4-氨基安替比林反应生成红色醌亚胺衍生物，在 510nm 波长处有最大吸收峰。

通过测定吸光度值，并与标准曲线对照，即可计算出碱性磷酸酶的活性。

三、实验材料与设备1、材料血清样本磷酸苯二钠溶液碳酸盐缓冲液（pH 100）4-氨基安替比林溶液铁氰化钾溶液酚标准液2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干净试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。

按表 1 向各试管中加入试剂，混匀。

置于 37℃水浴中保温 15 分钟。

加入铁氰化钾溶液 30ml，立即混匀。

用分光光度计在 510nm 波长处，以 0 号管调零，读取各管的吸光度值。

以酚含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

表 1 标准曲线绘制的试剂加入量｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜酚标准液（ml）｜0|005|010|020|030|040|｜蒸馏水（ml）｜10|095|090|080|070|060|｜碳酸盐缓冲液（ml）｜30|30|30|30|30|30|｜4-氨基安替比林溶液（ml）｜10|10|10|10|10|10|｜铁氰化钾溶液（ml）｜30|30|30|30|30|30|2、样本测定取 3 支干净试管，分别编号为测定管、对照管和空白管。

按表 2 向各试管中加入试剂，混匀。

置于 37℃水浴中保温 15 分钟。

碱性磷酸酶检测方法研究进展

第３６卷㊀第５期㊀吉㊀林㊀化㊀工㊀学㊀院㊀学㊀报Ｖｏｌ.３６Ｎｏ.５㊀２０１９年５月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＪＩＬＩＮＩＮＳＴＩＴＵＴＥＯＦＣＨＥＭＩＣＡＬＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＭａｙ.㊀２０１９收稿日期:２０１９￣０４￣０２基金项目:吉林省科技发展计划项目(２０１９０３０３１１６ＳＦ)作者简介:李晓双(１９９１￣)ꎬ女ꎬ吉林省吉林市人ꎬ吉林化工学院硕士研究生ꎬ主要从事荧光纳米材料制备及生物传感器方面的研究.∗通信作者:娄大伟ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｄｗｌｏｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍ㊀㊀文章编号:１００７￣２８５３(２０１９)０５￣０００６￣０６碱性磷酸酶检测方法研究进展李晓双ꎬ张㊀浩ꎬ娄大伟∗(吉林化工学院化学与制药工程学院ꎬ吉林吉林１３２０２２)摘要:碱性磷酸酶(ＡＬＰ)广泛存在于人体内ꎬ它可以控制多种生物体内的生物过程ꎬ目前已经广泛应用于临床㊁生物㊁医学等各个领域.作为一个与多种疾病有关的生物标志物和研究实验的主要工具酶ꎬ对ＡＬＰ进行分析的经典方法已经不能满足新类型样品对灵敏度㊁精度㊁抗干扰性和针对性的需求.因此ꎬ为了更好地研究检测ＡＬＰ的方法ꎬ阐述了国内外最新的ＡＬＰ提取方法和检测技术ꎬ同时将这些研究的主要优缺点进行了总结和比较.最后ꎬ对ＡＬＰ检测技术的发展前景和研究趋势进行了探讨ꎬ为今后的工作提供一些启示.关键词:碱性磷酸酶ꎻ检测方法ꎻ提取方法中图分类号:Ｏ６５文献标志码:ＡＤＯＩ:１０.１６０３９/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｎ２２－１２４９.２０１９.０５.００２㊀㊀生物酶ꎬ可以调节代谢途径ꎬ控制各种生物体内的生理过程ꎬ因此酶活性反应了有机体的生命活力[１].碱性磷酸酶(ＡＬＰ)是一种十分常见的也是对人体有重要作用的一种磷酸酶之一[２].ＡＬＰ作为生物化学的代表性介质ꎬ几乎参与了生物过程的各个方面[３].ＡＬＰ是一种胞外酶ꎬ它与成骨细胞有密不可分的关系ꎬ对ＡＬＰ活性的表达是成骨细胞的分化过程中非常重要的一个指标.ＡＬＰ是一种非特异性的磷酸酯酶ꎬ能够将单酯通过水解反应生成醇㊁酚㊁糖㊁核苷酸㊁生物碱和许多其他有机化合物.非天然单磷酸盐也可以通过碱性磷酸酶水解催化[４].碱性磷酸酶在机体中的主要生理功能是在成骨过程中水解磷酸酯ꎬ为羟基磷灰石的沉积提供必要的磷酸.同时水解焦磷酸盐ꎬ解除其对骨盐形成的抑制作用ꎬ有利于骨骼的形成.ＡＬＰ在信号传导和细胞内调节中起着重要作用[５]ꎬ它参与细胞生长㊁凋亡和信号传导等过程ꎬ广泛存在于骨㊁肝㊁肾等一系列组织中[６].ＡＬＰ活性在临床诊断和治疗中具有重要意义.ＡＬＰ被发现与许多疾病有关ꎬ可以用作诊断指示器[７ꎬ８].血清ＡＬＰ异常是一系列疾病的诊断指标ꎬ如糖尿病[９]㊁前列腺癌[１０]㊁骨病[１１ꎬ１２]及肝功能不全[１２]等.因此必须建立广泛㊁精确和敏感的分析方法来检测ＡＬＰ的含量.目前ꎬ国内外ＡＬＰ的检测方法大致可以分为比色法[１３ꎬ１４]㊁荧光法[１５ꎬ１６]㊁光学法[１７]㊁电化学法[１８]㊁光电化学法[１９]等.在此基础上ꎬ我们总结这一课题的研究进展和面临的挑战ꎬ希望为今后的工作提供一些启示.１㊀碱性磷酸酶提取方法碱性磷酸酶(ＡＬＰ)广泛分布于人体各个组织结构中ꎬ通常可以从哺乳动物的肝脏㊁骨骼㊁肠及肾等一些组织来对ＡＬＰ进行提取和分离.常用的提取方法主要有盐析法㊁有机溶剂沉淀法及亲和层析法等.１.１㊀盐析法盐析法是利用中性盐进行分级沉淀进而去除杂质蛋白质ꎬ再利用半透膜除去引入的铵根离子进而得到酶.Ｅｒｎｓｔ等人采用盐析法成功地在猪肾中提取ＡＬＰꎬ研究发现:利用硫酸铵盐在猪肾中分级沉淀ꎬ可以将四聚体糖蛋白从膜上释放出来.再通过半透膜的透析作用除去铵根离子ꎬ实现对ＡＬＰ的有效提取[２０].１.２㊀有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法的原理是利用有机溶剂(如甲醇㊁乙醇及丙酮等)与水互溶ꎬ然后使蛋白质在水中的溶解度显著降低ꎬ进而产生沉淀的方法.加入有机溶剂后ꎬ水溶液的介电常数降低ꎬ进而引起蛋白质沉淀ꎬ两个相反电荷基团之间的吸引力增强ꎬ促进了蛋白质分子的聚集和沉淀.Ｊａｍｅｓ等人利用有机溶剂沉淀法将猪肾上皮中的ＡＬＰ成功地提取出来.将含有胰酶的酶ꎬ用丙酮分次沉淀ꎬ此时酶溶液的介电常数降低ꎬ再通过调节溶液ｐＨ将杂质蛋白质除去得到ＡＬＰ[２１ꎬ２２].１.３㊀亲和层析法亲和层析是利用生物大分子与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的层析方法.亲和层析是分离蛋白质的一种很有效的方法ꎬ通常只需一步处理即可得到纯度较高的蛋白质[２３].２㊀碱性磷酸酶检测方法２.１㊀电化学发光法电化学发光是化学发光方法与电化学方法相互结合的产物ꎬ是指通过电化学方法来产生一些特殊的物质ꎬ然后这些电生的物质之间或电生物质与其他物质之间进一步反应而产生的发光现象.电化学发光保留了化学发光方法所具有的灵敏度高㊁线性范围宽㊁观察方便和仪器简单等优点ꎻ同时又具有许多化学发光方法无法比拟的优点ꎬ如重现性好㊁试剂稳定㊁容易控制和一些试剂可以重复使用等.因此ꎬ电化学发光被广泛地应用于生物㊁医学㊁药学㊁临床㊁环境㊁食品㊁免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域.电化学发光(ＥＣＬ)通过电极表面产生的电化学反应生成电子转移形成发射光的激发态[２４].ＥＣＬ技术在灵敏度和信噪比(Ｓ/Ｎ)方面均优于荧光技术ꎬ而且所使用的仪器简单.ＥＣＬ已成为生物分析和临床诊断领域中一种强大的分析技术.生物相关分子和酶的特异性相互作用在设计新的生物传感和临床诊断程序中发挥着重要作用.在此ꎬＺｏｕ等人发现使用双稳定剂可将壁碳纳米管量子点(ＱＤｓ)封闭在多ＣｄＳｅ的复合膜中ꎬ表现出可见的单色电致化学发光(ＥＣＬ)ꎬ可为检测抗坏血酸(ＡＡ)及ＡＬＰ的活性提供良好的ＥＣＬ信号.随着ＡＡ浓度的增加ꎬＥＣＬ的猝灭度增大ꎬ检测限(ＬＯＤ)为５ｐｍｏｌ/Ｌ[２５].２.２㊀电化学法电化学分析法是仪器分析重要组成部分之一.它是根据溶液中物质的电化学性质及其变化规律ꎬ建立以电位㊁电导㊁电流和电量等电学量与被测物质某些量之间的计量关系.在此基础之上ꎬ对组分进行定性和定量分析ꎬ该法也称电分析化学法[２６].Ｓｉｌｖａｎａ等人提出了一种新的电化学分析检测ＡＬＰ的方法ꎬ利用纳米材料独特的氧化还原活性对ＡＬＰ进行分析[２７].Ｇａｏ等人成功合成并应用了硫化铜纳米颗粒修饰石墨烯片(ＣｕＳ＠ＧＲ)作为电化学检测ＡＬＰ活性的信号放大平台.采用微波辅助水热法制备了ＣｕＳ＠ＧＲ.制备的ＣｕＳ＠Ｇｒ纳米复合材料如１￣萘酚具有良好的电催化活性和高导电性.这些优点使得纳米复合材料成为一个高效的检测ＡＬＰ活性的电化学方法.因此ꎬ用１￣萘酚制备了用于电化学检测ＡＬＰ活性的ＣｕＳ＠ＧＲ纳米复合材料.ＣｕＳ＠Ｇｒ纳米复合材料促进了ＡＬＰ水解产物产生强烈的电流响应.电流响应随ＡＬＰ浓度线性增加ꎬ线性范围０.１~１００Ｕ/Ｌꎬ检测限０.０２Ｕ/Ｌ[２８].２.３㊀比色法比色法是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法.比色法有着相对悠久的历史.Ｓｉｌｖａｎａ等人发现一种比色检测碱性磷酸酶(ＡＬＰ)活性的方法ꎬ该方法利用了ＡＬＰ催化产物之间的相互作用而导致纳米材料颜色的变化ꎬ使用纳米材料可以精简分析步骤ꎬ减少底物和酶稳定性差的问题.这个分析方法操作简单㊁反应速度快及成本低.以前不能用于ＡＬＰ催化的水解产物(如邻苯二酚一磷酸㊁抗坏血酸￣２￣磷酸和对苯二酚二磷酸)都可用这种方法可以方便地进行比色测定.以抗坏血酸￣２￣磷酸为底物ꎬ检测线可达２Ｕ/Ｌ.此分析方法已被成功应用于人类血清中ＡＬＰ活性的检测[２９].Ｚｈａｎｇ等人提出了一种检测ＡＬＰ的新比色法.基于Ｃｕ２＋￣过氧化物酶(ＨＲＰ)￣四甲基联苯胺(ＴＭＢ)￣Ｈ２Ｏ２体系设计ꎬ在ＡＬＰ存在的情况下ꎬＬ￣抗坏血酸￣２￣磷酸(ＡＡＰ)可水解成抗坏血酸ꎬ从而使Ｃｕ２＋还原成Ｃｕ原子.ＨＲＰ￣ＴＭＢ￣Ｈ２Ｏ２系统的颜色由Ｃｕ２＋决定而显示出蓝色.ＡＬＰ浓度的检测限为５.４ｍＵ/Ｌꎬ因为焦磷酸盐离子(ＰＰＩ)的螯合作用可明显抑制ＡＡ对Ｃｕ２＋的转化ꎬ所以带有Ｃｕ２＋的比色系统ＨＲＰ￣ＴＭＢ￣Ｈ２Ｏ２也能很好地检测ＰＰＩ.该方法具有灵敏度高㊁重现性好及无须标记等优点ꎬ且比色法的使用更符合现场检测和绿色化学的要求[３０].７㊀㊀第５期李晓双ꎬ等:碱性磷酸酶检测方法研究进展㊀㊀㊀２.４㊀荧光法基于荧光的检测方法操作简单㊁灵敏度高㊁成本低ꎬ近年来引起人们的极大兴趣.相比于传统的比色法ꎬ荧光分析往往以灵敏度高㊁对样品量要求较低而被大家所重视.因此ꎬ设计适合的荧光分析方法来对ＡＬＰ检测已变成了当前领域的研究热点.金纳米团簇(ＡｕＮＣｓ)常用于ＡＬＰ检测.Ｑｕ等人提出了一种荧光￣比色双检测法ꎬ基于ＡｕＮＣｓ可检测的活性ＡＬＰ.ＰＡＨ￣ＡｕＮＣｓ中带正电荷的ＰＡＨ能吸附带负电荷的２ꎬ６￣二氯苯酚￣吲哚酚(ＤＣＩＰ)ꎬＰＡＨ￣ＡｕＮＣｓ的荧光得到抑制.在ＡＬＰ存在的情况下Ｌ￣抗坏血酸(ＡＡ)从蓝色变为无色ꎬ磷酸￣Ｌ￣抗坏血酸(ＡＡＰ)干扰了多环芳烃与ＤＣＩＰ之间作用ꎬ荧光恢复.因此可以对ＡＬＰ活性进行检测ꎬ得到ＡＬＰ的检测范围是０.５~１００Ｕ/Ｌ[３１].Ｓｈｉｍｅｌｅｓ等人利用牛血清白蛋白制备出功能化纳米金团簇(ＢＳＡ￣ＡｕＮＣｓ)作为纳米传感器探针对ＡＬＰ的活性进行检测.利用磷酸吡哆醛(ＰＬＰ)作为一种新的生物传感的底物ꎬ探讨了ＰＬＰ荧光猝灭的机理.ＰＬＰ对ＢＳＡ￣ＡｕＮＣｓ的荧光影响不大ꎬ荧光不发光.加入ＡＬＰ后ꎬＡＬＰ催化ＰＬＰ水解生成吡哆醛ꎬ可增强ＢＳＡ￣ＡｕＮＣｓ的荧光.基于此开发了一种新的检测ＡＬＰ活性的方法.ＡＬＰ的检测限为０.０５Ｕ/Ｌ.同时该传感器在葡萄糖氧化酶㊁溶菌酶㊁胰蛋白酶等多种酶中具有良好的选择性[３２].量子点(ＱＤｓ)尺寸通常不超过１０ｎｍ.由于具有相对较小的尺寸ꎬ量子点具有良好的生物相容性ꎬ以及荧光稳定性和水溶性ꎬ常被用于ＡＬＰ的检测.Ｚｈａｏ等人提出了一种利用氧化钼量子点(ＭｏＯｘＱＤｓ)检测碱性磷酸酶(ＡＬＰ)的新方法.Ｃｕ２＋对ＭｏＯｘＱＤｓ有较强的猝灭能力ꎬ但由于Ｃｕ２＋和焦磷酸盐离子(ＰＰＩ)之间有很强的亲和力ꎬ当ＰＰＩ被加入到含有ＭｏＯｘＱＤｓ和Ｃｕ２＋的体系中时ꎬ会产生显著的光致发光.当加入ＡＬＰ后ＰＰＩ被催化水解成ＰＩꎬ这时Ｃｕ２＋￣ＰＰＩ复合物就会分解并释放出游离的Ｃｕ２＋ꎬ导致光致发光猝灭.通过荧光强度的变化可实现对ＡＬＰ的检测ꎬ线性范围为０.１~５.０Ｕ/Ｌꎬ检测限为０.０２Ｕ/Ｌ.该方法具有操作方便㊁成本低㊁灵敏度高等优点[３３].Ｓｏｎｇ等人使用量子点和ｐ￣硝基苯磷酸盐(ＰＮＰＰ)作为荧光指示剂和底物ꎬ可以对ＡＬＰ的活性进行测定.该传感器检测人血清中ＡＬＰ活性ꎬ检出限为０.０１Ｕ/Ｌ[３４].Ｌｉ等人以硅量子点作为荧光探针ꎬ建立了ＡＬＰ活性的测定方法.在这项工作中ꎬ可调节发射波长的亲水性硅量子点(ＳｉＱＤｓ)采用水热法合成ꎬ制备出的ＳｉＱＤｓ荧光稳定ꎬ在生理环境中表现出良好的抗离子干扰能力.ＡＬＰ活性的检测是通过测量量子点的荧光猝灭实现的.ＡＬＰ活性的定量限值为１Ｕ/Ｌꎬ且线性关系为１~７５００Ｕ/Ｌ[３５].有机染料分子荧光在生物成像或分子追踪中具有很强的应用潜力ꎬ它们都有一些优点ꎬ如操作简单㊁成本低廉㊁检测速度快捷及较低的检测限等ꎬ因此有机染料分子可荧光检测ＡＬＰ.近红外荧光团是指发射近红外区的荧光在６５０~９００ｎｍ处的荧光基团.与大多数其他传统荧光探针相比ꎬ那些近红外荧光团有着独特的优势.使用近红外探针可以最大限度地减少对生物样品的光损伤ꎬ并降低背景荧光[３６ꎬ３７].Ｓｕｎ等人开发了第一种基于近红外探针(ＤＨＸＰ)用于敏感检测ＡＬＰ活性的方法.研究表明近红外探针显示高达６６倍的荧光.ＡＬＰ的检出限为０.０７Ｕ/Ｌꎬ低于大多数ＡＬＰ探针.此外ꎬ还证明了该探针可用于检测细胞和小鼠的ＡＬＰ活性ꎬ证明探针具有优良的生物相容性[３８].２.５㊀化学发光法化学发光法是分子发光光谱分析法中的一类ꎬ它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理ꎬ利用仪器对体系化学发光强度的检测ꎬ而确定待测物含量的一种痕量分析方法.化学发光法在对ＡＬＰ进行检测时具有灵敏度高㊁反应速度快㊁操作简单等优点.Ｋｏｎｇ等人研制了一种电子转移诱导荧光猝灭分析方法来测定人血清ＡＬＰ的活性.ＡＬＰ可以催化酶解产物抗坏血酸￣２￣磷酸释放抗坏血酸(ＡＡ)ꎬＡＡ会导致Ｃｕ(ＢＣＤｓ)２２￣探针在波长４０２ｎｍ处产生荧光的静态猝灭现象.检测ＡＬＰ的活性的检测限为０.２７ｍＵ/Ｌ.这种荧光探针的制备过程非常简单ꎬ在化学稳定性方面具有优势ꎬ具有良好的水溶性和生物相容性[３９].Ｗａｎｇ等人研究发现ꎬ借助电化学发光系统ꎬ使用硒化镉(ＣｄＳｅ)纳米粒子和三乙胺可检测ＡＬＰ[４０].Ｌｉ等人利用ＥＣＬ细胞传感器ꎬ以ＡＬＰ作为探针实现对ＡＬＰ的检测[４１].２.６㊀表面增强拉曼散射法表面增强拉曼散射(ＳＥＲＳ)是在传统拉曼散射基础上发展出的一种检测技术ꎬ在ＳＥＲＳ中粗８㊀㊀吉㊀林㊀化㊀工㊀学㊀院㊀学㊀报㊀㊀２０１９年㊀㊀糙的金属表面可增强被吸附分子的拉曼散射.根据其独特的原理ꎬＳＥＲＳ能够在超低浓度检测ＡＬＰ活性.Ｈｕ等人研究设计了一种快速㊁可靠的表面增强拉曼散射(ＳＥＲＳ)检测试剂盒.该试剂盒可在几分钟内实现人血清中ＡＬＰ的一步检测ꎬ操作过程简单ꎬ可供临床使用.在此方法中ꎬＡｇ＋由于静电作用被吸附在金核上ꎬ加入ＡＬＰ导致了Ａｇ＋的还原ꎬ银以可控方式在金核的表面生长ꎬ形成金核和银壳之间斑点ꎬ其中ＳＥＲＳ的信号将被高度放大ꎬ研究结果显示ＡＬＰ检测限为０.０１Ｕ/Ｌ[４２].Ｈｕａｎ等人设计一种简单快速的ＳＥＲＳ免疫分析方法ꎬ通过ＡＬＰ催化水解反应ꎬ使用改良抗体与磁珠结合ꎬ捕获小鼠ＩｇＧꎬ然后通过添加ＡＬＰ标记抗体ꎬ形成免疫结合物.此方法不需要准备复杂的ＳＥＲＳ标记ꎬ并且整个反应是在均相体系中进行的[４３].Ｇｕ等人研究发现了一种新的表面增强拉曼散射方法来检测超低浓度ＡＬＰ的活性.这种方法是基于纳米颗粒ＡｕＮＣｓ作为ＳＥＲＳ的材料ꎬ以５￣溴￣４￣氯￣３￣吲哚磷酸盐(ＢＣＩＰ)为底物ꎬ进而检测ＡＬＰ的浓度[４４].２.７㊀色谱法色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配ꎬ以流动相对固定相中混合物进行洗脱ꎬ混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动ꎬ最终达到分离的效果.Ｇａｏ等人利用石墨烯(Ｇｒ)表面修饰的ＣｕＳ纳米粒子成功设计出可用作临床ＡＬＰ活性检测方法.通过制备ＣｕＳ＠Ｇｒ纳米复合材料的表征表明ꎬ有大量平均尺寸约为４０ｎｍ的ＣｕＳ纳米颗粒负载在Ｇｒ表面.ＣｕＳ＠Ｇｒ纳米复合材料具有优异性能.电流响应随ＡＬＰ浓度线性增加ꎬ线性范围０.１~１００Ｕ/Ｌꎬ检测限０.０２Ｕ/Ｌ[４５].３㊀结论与展望众所周知ꎬＡＬＰ的检测在现代生活产业有很重要的作用.随着患病人数以及与ＡＬＰ相关研究的增长ꎬ开发出灵敏度低㊁检测速度快的ＡＬＰ检测方法已经变得十分重要.综述总结了这些科研人员的努力并比较他们各自检测方法的优缺点.令人高兴的是ꎬ大多数检测方法均在生物样品中获得了令人满意的分析性能ꎬ甚至有些已经成功在体内应用.通过回顾有关ＡＬＰ检测的研究ꎬ我们不难发现ꎬＡＬＰ检测方法的发展ꎬ在很大程度上取决于一些具有良好生物相容性的新型纳米材料的制备.因此ꎬ在新材料和分析原理领域同时进行研究或优化仍然是制定更好检测手段的关键.基于人们对ＡＬＰ检测的持续关注ꎬ我们认为对ＡＬＰ检测新方法的研究将促进和发展未来的现代生命科学与工业.参考文献:[１]㊀ＬｉｕＱꎬＬｉＨꎬＪｉｎＲꎬｅｔａｌ.Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｕｓｉｎｇ３￣ａｍｉｎｏｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃａｃｉｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄｇｏｌｄｎａｎｏｃｌｕｓｔｅｒｓ[Ｊ].ＳｅｎｓｏｒｓａｎｄＡｃｔｕａｔｏｒｓＢ￣ｃｈｅｍｉｃａｌꎬ２０１９(２８１):１７５￣１８１. 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[６]㊀ＪｕｌｉｅｎＳＧꎬＤｕｂｅＮꎬＨａｒｄｙＳꎬｅｔａｌ.Ｉｎｓｉｄｅｔｈｅｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｔｙｒｏｓｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｏｍｅ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＣａｎｃｅｒꎬ２０１１ꎬ１１(１):３５￣４９.[７]㊀ＭａｋｉｌＥＳꎬＴａｎｇＸꎬＦｒａｚｉｅｒＥＡꎬｅｔａｌ.ＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓ￣ｐｈａｔａｓｅ:ＡＢｉｏｍａｒｋｅｒｏｆＣａｒｄｉａｃＦｕｎｃｔｉｏｎｉｎＰｅｄｉａｔｒｉｃＰａｔｉｅｎｔｓ[Ｊ].ＰｅｄｉａｔｒｉｃＣａｒｄｉｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ３８(４):７６２￣７６９.[８]㊀ＧｏｍｅｚＢꎬＡｒｄａｋａｎｉＳꎬＪｕＪꎬｅｔａｌ.Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｓｓａｙｆｏｒｍｅａｓｕｒｉｎｇｂｏｎｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｓｅｒｕｍ.[Ｊ].ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ１９９５ꎬ４１(１１):１５６０￣１５６６.[９]㊀ＧｏｌｄｂｅｒｇＤＭꎬＭａｒｔｉｎＪＶꎬＫｎｉｇｈｔＡＨꎬｅｔａｌ.Ｅｌｅｖａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄｅｎ￣ｚｙｍｅｓｉｎｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ[Ｊ].ＣｌｉｎｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ１９７７ꎬ１０(１):８￣１１.[１０]ＬｏｒｅｎｔｅＪＡꎬＶａｌｅｎｚｕｅｌａＨꎬＭｏｒｏｔｅＪꎬｅｔａｌ.Ｓｅｒｕｍｂｏｎｅａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｌｅｖｅｌｓｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｕｔｉｌｉｔｙｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎｉｎｔｈｅｓｔａｇｉｎｇｏｆｎｅｗｌｙｄｉａｇ￣ｎｏｓｅｄｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ[Ｊ].ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍａｇｉｎｇꎬ１９９９ꎬ２６(６):６２５￣６３２.９㊀㊀第５期李晓双ꎬ等:碱性磷酸酶检测方法研究进展㊀㊀㊀[１１]ＳａｒｄｉｗａｌＳꎬＭａｇｎｕｓｓｏｎＰꎬＧｏｌｄｓｍｉｔｈＤꎬｅｔａｌ.ＢｏｎｅＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅｉｎＣＫＤ￣ＭｉｎｅｒａｌＢｏｎｅＤｉｓｏｒｄｅｒ[Ｊ].ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＫｉｄｎｅｙＤｉｓｅａｓｅｓꎬ２０１３ꎬ６２(４):８１０￣８２２.[１２]ＳｈｉＹꎬＹａｎｇＭꎬＬｉｕＬꎬｅｔａｌ.ＧＴＰａｓａｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ￣ｍｉｍｉｃｔｏｍｅｄｉａｔｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｃａｓｃａｄｅｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ￣ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ[Ｊ].ＳｅｎｓｏｒｓａｎｄＡｃｔｕａｔｏｒｓＢ￣ｃｈｅｍｉｃａｌꎬ２０１８(２７５):４３￣４９.[１３]ＪｉａｏＨꎬＣｈｅｎＪꎬＬｉＷꎬｅｔａｌ.ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ￣ＲｅｇｕｌａｔｅｄＰｅｒｙｌｅｎｅＰｒｏｂｅ￣ＩｎｄｕｃｅｄＧｏｌｄＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ:ＡＮｅｗＳｔｒａｔｅｇｙｆｏｒＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃＳｅｎｓｉｎｇｏｆＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＩｎｈｉｂｉｔｏｒＳｃｒｅｅｎｉｎｇ[Ｊ].ＡＣＳＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓꎬ２０１４ꎬ６(３):１９７９￣１９８５.[１４]宋岩ꎬ王芳菲ꎬ周琳媛.基于罗丹明衍生物的Ｃｕ２＋荧光/比色传感器[Ｊ].吉林化工学院学报ꎬ２０１９ꎬ３６(１):６９￣７４.[１５]ＫｏｎｇＲꎬＦｕＴꎬＳｕｎＮꎬｅｔａｌ.Ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄＺｎ２＋￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＤＮＡｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ:Ａｎａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｌｕｏ￣ｒｅｓｃｅｎｃｅｓｅｎｓｉｎｇｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬ２０１３(５０):３５１￣３５５. [１６]曾晓丹ꎬ马明硕ꎬ柳彩云ꎬ等.罗丹明类荧光分子探针与血清白蛋白之间相互作用的研究[Ｊ].基因组学与应用生物学ꎬ２０１９ꎬ３８(１):１２９￣１３４.[１７]ＤｏｎｇＪꎬＬｉＹꎬＺｈａｎｇＭꎬｅｔａｌ.Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎ￣ｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓ￣ｐｈａｔａｓｅ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓꎬ２０１４ꎬ６(２２):９１６８￣９１７２.[１８]ＺｈａｎｇＬꎬＨｏｕＴꎬＬｉＨꎬｅｔａｌ.Ａｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｈｏｍｏｇｅ￣ｎｅｏｕｓｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｓｓａｙｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｂａｓｅｄｏｎｓｉｎｇｌｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ￣ｉｎｉｔｉａｔｅｄＴ７ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｓｉｇｎａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ[Ｊ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２０１５ꎬ１４０(１２):４０３０￣４０３６.[１９]ＷａｃｈｓｍｕｔｈＥＤꎬＨｉｗａｄａＫ.Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｆｒｏｍｐｉｇｋｉｄｎｅｙ.Ｍｅｔｈｏｄｏｆｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｐ￣ｅｒｔｉｅｓ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌꎬ１９７４ꎬ１４１(１):２７３￣２８２.[２０]张强.碱性磷酸酶的提取及在线固定化研究[Ｄ].大连:辽宁师范大学ꎬ２０１１.[２１]ＪｃＭ.Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｈｉｇｈｌｙｐｕｒｉｆｉｅｄａｌｋａ￣ｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｆｒｏｍｓｗｉｎｅｋｉｄｎｅｙｓ.[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ１９５８ꎬ２３３(５):１１２１￣１１２７. [２２]ＱｕＦꎬＰｅｉＨꎬＫｏｎｇＲꎬｅｔａｌ.Ｎｏｖｅｌｔｕｒｎ￣ｏｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｂａｓｅｄｏｎｇｒｅｅｎｓｙｎ￣ｔｈｅｓｉｚｅｄｃａｒｂｏｎｄｏｔｓａｎｄＭｎＯ２ｎａｎｏｓｈｅｅｔｓ[Ｊ].Ｔａｌａｎｔａꎬ２０１７(１６５):１３６￣１４２.[２３]ＡｒｏｒａＳꎬＳａｘｅｎａＶꎬＡｙｙａｒＢＶ.Ａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ:Ａｖｅｒｓａｔｉｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒａｎｔｉｂｏｄｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ２０１７(１１６):８４￣９４.[２４]ＭａＸꎬＺｈａｎｇＸꎬＧｕｏＸꎬｅｔａｌ.Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇａｓｃｏｒｂｉｃａｃｉｄａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓ￣ｐｈａｔａｓｅｂａｓｅｄｏｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｏｆｄｕａｌ￣ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ￣ｃａｐｐｅｄＣｄＳｅｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓｉｎｃａｒｂｏｎｎａｎｏ￣ｔｕｂｅ￣ｎａｆｉｏｎｃｏｍｐｏｓｉｔｅ.[Ｊ].Ｔａｌａｎｔａꎬ２０１６(１５４):１７５￣１８２.[２５]ＪｉａｎｇＨꎬＪｕＨ.ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｓｅｎｓｏｒｓｆｏｒｓｃａｖｅｎｇｅｒｓｏｆｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌｂａｓｅｄｏｎｉｔｓａｎｎｉｈｉｌａｔｉｏｎｉｎＣｄＳｅｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓｆｉｌｍ/ｐｅｒｏｘｉｄｅｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].Ａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２００７ꎬ７９(１７):６６９０￣６６９６.[２６]ＰａｌｅｃｅｋＥꎬＤｏｒｃａｋＶ.Ｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ[Ｊ].ＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｅｒｉａｌｓＴｏｄａｙꎬ２０１７ꎬ９:４３４￣４５０.[２７]ＨａｙａｔＡꎬＡｎｄｒｅｅｓｃｕＳ.Ｎａｎｏｃｅｒｉａｐａｒｔｉｃｌｅｓａｓｃａｔａｌｙｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｒｓｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｓｓａｙｓ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１３ꎬ８５(２１):１００２８￣１００３２. [２８]ＰｅｎｇＪꎬＨａｎＸꎬＺｈａｎｇＱꎬｅｔａｌ.Ｃｏｐｐｅｒｓｕｌｆｉｄｅｎａｎｏｐａｒ￣ｔｉｃｌｅ￣ｄｅｃｏｒａｔｅｄｇｒａｐｈｅｎｅａｓａｃａｔａｌｙｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｌａｔｆｏｒｍｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓ￣ｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａꎬ２０１５(８７８):８７￣９４.[２９]ＨａｙａｔＡꎬＢｕｌｂｕｌＧꎬＡｎｄｒｅｅｓｃｕＳꎬｅｔａｌ.Ｐｒｏｂｉｎｇｐｈｏｓ￣ｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｕｓｉｎｇｒｅｄｏｘａｃｔｉｖｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ:ａｎｏｖｅｌｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ.[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬ２０１４(５６):３３４￣３３９.[３０]ＳｈｉＤꎬＳｕｎＹꎬＬｉｎＬꎬｅｔａｌ.Ｎａｋｅｄ￣ｅｙｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ(ＡＬＰ)ａｎｄｐｙｒｏｐｈｏｓ￣ｐｈａｔｅ(ＰＰＩ)ｂａｓｅｄｏｎＨｏｒｓｅｒａｄｉｓｈＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＣａｔａｌｙｔｉｃＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｙｓｔｅｍｗｉｔｈＣｕ(ＩＩ)[Ｊ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２０１６ꎬ１４１(１９):５５４９￣５５５４.[３１]ＨａｎＸꎬＨａｎＭꎬＭａＬꎬｅｔａｌ.Ｓｅｌｆ￣ａｓｓｅｍｂｌｅｄｇｏｌｄｎａｎｏ￣ｃｌｕｓｔｅｒｓｆｏｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｕｒｎ￣ｏｎａｎｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｄｕａｌ￣ｒｅａｄｏｕｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｖｉａＤＣＩＰ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｇｙｔｒａｎｓｆｅｒ[Ｊ].Ｔａｌａｎｔａꎬ２０１９(１９４):５５￣６２.[３２]ＨａｌａｗａＭＩꎬＧａｏＷꎬＳａｑｉｂＭꎬｅｔａｌ.Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｂｙｓｗｉｔｃｈｉｎｇｏｎｇｏｌｄｎａｎｏｃｌｕｓ￣ｔｅｒｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｅｄｂｙｐｙｒｉｄｏｘａｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬ２０１７(９５):８￣１４. [３３]ＺｈａｎｇＬꎬＨｏｎｇＭＦꎬＣｈｕＺＪꎬｅｔａｌ.Ａｎｅｗｃｏｐｐｅｒｍｅｄｉ￣ａｔｅｄｏｎ￣ｏｆｆａｓｓａｙｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎＭｏＯｘｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓ[Ｊ].ＭｉｃｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１８(１４８):１７０￣１７５.[３４]ＺｈａｎｇＦꎬＨｅＸꎬＭａＰꎬｅｔａｌ.ＲａｐｉｄａｑｕｅｏｕｓｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＣｕＩｎＳ/ＺｎＳｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓａｓｓｅｎｓｏｒｐｒｏｂｅｆｏｒａｌｋａｌｉｎｅ０１㊀㊀吉㊀林㊀化㊀工㊀学㊀院㊀学㊀报㊀㊀２０１９年㊀㊀ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｔａｒｇｅｔｅｄｉｍａｇｉｎｇｉｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｔａｌａｎｔａꎬ２０１８(１４１):４１１￣４１７.[３５]ＬｉＺꎬＲｅｎＸꎬＨａｏＣꎬｅｔａｌ.Ｓｉｌｉｃｏｎｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓｗｉｔｈｔｕｎａｂｌｅｅｍｉｓｓｉｏｎｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｖｉａｏｎｅ￣ｓｔｅｐｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＳｅｎｓｏｒｓａｎｄＡｃｔｕａｔｏｒｓＢ￣ｃｈｅｍｉｃａｌꎬ２０１８(１８９):４２６￣４３１.[３６]ＧｕｏＺꎬＰａｒｋＳꎬＹｏｏｎＪꎬｅｔａｌ.Ｒｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｄｅ￣ｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｅａｒ￣ｉｎｆｒａｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｂｅｓｆｏｒｂｉｏ￣ｉｍａｇｉｎｇａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＲｅｖｉｅｗｓꎬ２０１４ꎬ４３(１):１６￣２９.[３７]ＫｉｙｏｓｅＫꎬＫｏｊｉｍａＨꎬＮａｇａｎｏＴ.Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｎｅａｒ￣ｉｎｆｒａｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｂｅｓ[Ｊ].Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ￣ＡｎＡｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１０ꎬ３(３):５０６￣５１５.[３８]ＴａｎＹꎬＺｈａｎｇＬꎬＭａｎＫＨꎬｅｔａｌ.Ｒｅａｃｔｉｏｎ￣ｂａｓｅｄｏｆｆ￣ｏｎｎｅａｒ￣ｉｎｆｒａｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｂｅｆｏｒｉｍａｇｉｎｇａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｌｉｖｉｎｇｃｅｌｌｓａｎｄｍｉｃｅ[Ｊ].ＡＣＳＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓꎬ２０１７ꎬ９(８):６７９６￣６８０３.[３９]ＭｅｉＹꎬＨｕＱꎬＺｈｏｕＢꎬｅｔａｌ.Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇｂａｓｅｄａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ[Ｊ].Ｔａｌａｎｔａꎬ２０１８ꎬ１７６:５２￣５８.[４０]ＪｉａｎｇＨꎬＷａｎｇＸ.Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅａｎｏｄｉｃｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｏｆｃｄｓｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１２ꎬ８４(１６):６９８６￣６９９３.[４１]ＣｈｅｎＸꎬＨｅＹꎬＺｈａｎｇＹꎬｅｔａｌ.Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｇｌｙｃａｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｂａｓｅｄｏｎａｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｎｄａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｂｉｏｓｅｎｓｏｒ[Ｊ].Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１４ꎬ６(１９):１１１９６￣１１２０３.[４２]ＺｅｎｇＹꎬＲｅｎＪꎬＷａｎｇＳꎬｅｔａｌ.Ｒａｐｉｄａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｂｙａｈｏｔｓｐｏｔｓａｍｐｌｉｆｉｃａ￣ｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｙｂａｓｅｄｏｎｗｅｌｌ￣ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄａｓｓｅｍｂｌｙｏｎｓｉｎｇｌｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ[Ｊ].ＡＣＳＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓꎬ２０１７ꎬ９(３５):２９５４７￣２９５５３.[４３]ＣｈｅｎＹꎬＣｈｅｎｇＨꎬＴｒａｍＫꎬｅｔａｌ.Ａｐａｐｅｒ￣ｂａｓｅｄｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｏｎａｎｃｅＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ(ＳＥＲＲＳ)ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｕｓｉｎｇｍａｇｎｅｔｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｅｎｚｙｍｅ￣ｃａｔａｌｙｚｅｄｒｅａｃｔｉｏｎ[Ｊ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２０１３ꎬ１３８(９):２６２４￣２６３１.[４４]ＲｕａｎＣꎬＷａｎｇＷꎬＧｕＢꎬｅｔａｌ.Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｕｓｉｎｇｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２００６ꎬ７８(１０):３３７９￣３３８４.[４５]ＰｅｎｇＪꎬＨａｎＸＸꎬＺｈａｎｇＱＣꎬｅｔａｌ.Ｃｏｐｐｅｒｓｕｌｆｉｄｅｎａｎｏ￣ｐａｒｔｉｃｌｅ￣ｄｅｃｏｒａｔｅｄｇｒａｐｈｅｎｅａｓａｃａｔａｌｙｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｌａｔｆｏｒｍｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＡｎａｌｙｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａꎬ２０１５(８７８):８７￣９４.ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＬＩＸｉａｏｓｈｕａｎｇꎬＺＨＡＮＧＨａｏꎬＬＯＵＤａｗｅｉ∗(ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈａｒｍｅａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＪｉｌｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＪｉｌｉｎＣｉｔｙ１３２０２２ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ(ＡＬＰ)ｅｘｉｓｔｓｗｉｄｅｌｙｉｎｈｕｍａｎｂｏｄｙａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｓｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｖａｒｉｏｕｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｏｒｇａｎｉｓｍｓ.Ａｔｐｒｅｓｅｎｔꎬｉｔｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃａｌꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌꎬｍｅｄｉｃａｌａｎｄｏｔｈｅｒｆｉｅｌｄｓ.ＡｓａｋｅｙｂｉｏｍａｒｋｅｒｏｆｍａｎｙｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄａｍａｊｏｒｔｏｏｌｏｆｅｎｚｙｍｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓꎬｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌＡＬＰａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｎｏｔｍｅｅｔｔｈｅｎｅｗｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙꎬａｃｃｕｒａｃｙꎬａｎｔｉ￣ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅａｎｄｗｉｄｅｒａｎｇｅｏｆｔａｒｇｅｔｅｄｓａｍｐｌｅｔｙｐｅｓ.ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｂｅｔｔｅｒｓｔｕｄｙＡＬＰｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅｓｃｒｉｂｅｓａｖａｒｉｅｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｌａｔｅｓｔＡＬＰｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄ.Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｗｅｓｕｍｍａｒｉｚｅａｎｄｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｍａｉｎａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｔｈｅｓｅｓｔｕｄｉｅｓꎬａｎｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｐｒｏｓｐｅｃｔｓａｎｄｔｒｅｎｄｓａｒｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄꎬｈｏｐｉｎｇｔｏｐｒｏｖｉｄｅｓｏｍｅｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｔｕｒｅｗｏｒｋ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅꎻｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎻｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ１１㊀㊀第５期李晓双ꎬ等:碱性磷酸酶检测方法研究进展㊀㊀㊀。

小鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒产品简介

小鼠碱性磷酸酶(ALP）ELISA试剂盒产品简介小鼠碱性磷酸酶(ALP）ELISA试剂盒产品简介小鼠碱性磷酸酶(ALP）ELISA试剂盒实验原理小鼠碱性磷酸酶(ALP）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被小鼠碱性磷酸酶(ALP）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠碱性磷酸酶(ALP）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

碱性磷酸酶ALP测定标准操作程序SOP文件

C）生理性增高：见于处于骨骼生长期的儿童和青少年。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-17
ALP测定
版序：ABCD
页码：第4页，共4页
ALP参数设置表
TEST NAME [ ALP ]
R.VOLUME(R4) [ 0 ]
TEST CORD [ 158 ]
ABSORBANCE LIMIT [ 10000/INCREASE ]
页码：第2页，共4页
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6上机操作
见仪器作业指导书。
7参考范围
男性：40-129IU/l
8性能指标
本法线性范围为1-1200u/l，不准确度允许范围 ±10%，不精密度CV=0.67%，灵敏度为0.67u/l。
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
S1 ABS(LOW) [ -32000 ]
R.VOLUME(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 32000 ]
R.VOLUME(R3) [ 36 ]
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-17
ALP测定
版序：ABCD
页码：第3页，共4页
增高可见于下列情况：
a）肝胆疾病：阻塞性黄疸，急性或慢性黄疸型肝炎，肝癌等。
b)骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放入血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。

碱性磷酸酶ALPIFCC速率法作业指导书

碱性磷酸酶ALPIFCC速率法作业指导书1、前言试验名称：碱性磷酸酶测定，英文名称：ALP，方法：IFCC 速率法。

本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的碱性磷酸酶酶活力，以保证测定结果的准确可靠。

本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中碱性磷酸酶的活力。

碱性磷酸酶几乎存在于机体各个组织，但以骨骼与牙齿、肝脏中含量较多，儿童时期含量尤多。

碱性磷酸酶主要由成骨细胞产生，在骨骼疾患，特有新骨生成时，血液内碱性磷酸酶活性增高。

又因由肝脏排泄，故在肝脏疾患时血液中ALP 含量增高。

增高常见于骨折愈合期、转移性骨瘤等。

阻塞性黄疸、伴有黄疸的急性或慢性肝炎或肝癌等血清ALP常升高，还见于其它疾患，如甲状腺机能亢进，佝偻病等。

血清碱性磷酸酶降低常见于重症慢性肾炎，儿童甲状腺机能不全，贫血等。

2、测定原理本试验测定原理基于IFCC推荐的方法，该方法采用对-硝基苯磷酸盐为底物，在最适反应条件下，样本中的ALP催化下述转辚酸反应：对-硝基苯磷酸盐+H2O ALP 对-硝基酚+磷酸在上述反应中，对-硝基酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比，通过在405nm波长处测定吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活力。

3、试剂试剂生产商：长海科华公司。

剂型：液体双试剂。

包装量：R1：4*40ml R2：2*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2401172号。

生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。

基本成份：试剂1：乙酸镁 3.0mmol/l硫酸锌 1.5mmol/lHEDTA 3.0mmol/lAMP缓冲液420mmol/l试剂2对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/lAMP缓冲液420mmol/lEDTA 5.0mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。

启用后2―10℃可稳定14天，若试剂混浊，或空白在405nm 下吸光度值大于0.8A时，则不能使用。

育儿知识：血清碱性磷酸酶正常值

血清碱性磷酸酶正常值很多人在每次体检时，都会发现血清碱性磷酸酶都是有变化的，而且检查的参考正常值也会有所不同。

其实碱性磷酸酶的参考正常值会根据测试方法或人群的不同会有所区别，正常值范围的不同也与各医院使用的方法和仪器有关。

那么，血清碱性磷酸酶正常值是多少呢？血清碱性磷酸酶正常值1、比色法：ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解，生成磷酸和游离酚，后者与4-氨基安替比林作用，并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物，其颜色的深浅与ALP活性成正比。

2、连续监测法：ALP在碱性条件下，使磷酸对硝基苯酚（4-NPP）释放出磷酸基团，AMP 参与磷酸酰基的转移，促进酶反应速率，生成游离的对硝基苯酚（4-NP），并形成黄色的醌，其吸光度的增高速率与酶活力成正比。

血清碱性磷酸酶的临床意义1、血清碱性磷酸酶升高（1）阻塞性黄疸：肝内、外阻塞性黄疸患者因胆汁排泄不畅，ALP滞留于血中而增高，其增高的程度与梗阻的程度、持续的时间呈正比。

以肝外阻塞肝内阻塞，完全阻塞不完全阻塞，恶性肿瘤胆石症。

（2）伴有黄疸的急、慢性肝炎，肝硬化，肝坏死等：ALP活性也增高。

一般认为，肝细胞性黄疸患者ALP持续低水平升高，若胆红素逐渐升高，而ALP降低，提示肝细胞严重受损。

反之，则说明肝细胞逐渐恢复。

严重弥漫性肝损伤时，ALP活性降低。

（3）肝癌：约半数原发性肝癌和90%转移性肝癌ALP升高，在肝病中升高最为显着。

无黄疸患者ALP异常升高应警惕肝癌之可能。

其他肿瘤ALP亦可升高。

（4）骨骼系统疾病：骨软化症、佝偻病、骨折恢复期等，因ALP生成亢进，使ALP活性升高。

2、血清碱性磷酸酶降低血清碱性磷酸酶活性降低：牛奶-碱综合征、坏血病、甲状腺功能减退症、维生素D摄入过多、恶性贫血、重症慢性肾炎、呆小病、恶病质等。

突然胃痛怎么快速缓解有时候一些人会突然发生胃痛的现象，其实胃痛疾病是很常见的，所以说当出现胃痛的时候，也一定要掌握他的一些快速缓解方法，因为这样的话才能给自己减轻病痛。