瘦素受体基因酶切分析
瘦素及其功能受体Ob-Rb在糖尿病足溃疡中的表达特征研究
瘦素及其功能受体 Ob-Rb在糖尿病足溃疡中的表达特征研究摘要：目的探究瘦素及其功能受体Ob-Rb在糖尿病足溃疡中的表达特征。
方法在本院2019年7月~2020年7月选取30例糖尿病足溃疡患者足部皮肤作为观察组，同时期患者30例正常足部皮肤作为对照组，给予两组使用免疫组织化学方法，对比两组的皮肤组织表皮真皮厚度以及Ob-Rb以及瘦素评分。
结果根据结果分析，观察者的Ob-Rb以及瘦素水平低于对照组，且观察组的表皮层厚度高于对照组且真皮层厚度低于对照组。
对比差异有统计学意义（p<0.05）。
结论结合探究得出，Ob-Rb以及瘦素水平的下调，是导致糖尿病足溃疡愈合延迟的关键因素之一。
关键词瘦素受体Ob-Rb 糖尿病足溃疡定量表达糖尿病作为我国目前临床上常见的慢性病，当前医疗水平暂无法达到治愈的效果，如任由病情恶化，便会致使血管以及神经组织遭受破坏。
糖尿病足溃疡是由于糖尿病患者的下肢神经以及血管发展病变导致的足部溃疡感染情况，深层组织遭受破坏[1]。
本研究通过探究瘦素及其功能受体Ob-Rb中该病起到的连锁影响，寻找分子水平的差异，具体报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取我院在2019年7月~2020年7月接受治疗的糖尿病足溃疡患者足部皮肤30例，同一时期选取30例正常人人足部皮肤。
纳入标准：创面形成大于一个月，入选对象均具有本次研究知情权，且自愿签订知情协议书。
排除标准：使用糖皮质激素，患有恶性溃疡创面者。
对照组：男13例，女17例，年龄41~71岁，平均年龄（51.24±7.21）岁。
观察组：男16例，女14例，年龄42~72岁，平均年龄（52.32±7.34）岁。
所有对象在性别年龄，文化程度的对比上，差异无统计学意义（p>0.05）。
1.2方法对入选对象使用无菌手术刀让部分正常皮肤组织进行0.5x1.5的皮下脂肪组织切除，放入中性甲醛溶液固定，用于HE染色，封蜡。
切片按照常规的二甲苯脱蜡，梯度行酒精脱水，进行蒸馏水冲洗，整个反应过程在在湿盒内进行，二十秒后封闭内源性酶，进行酶消化，给予0.1%的胰酶消化10min，再行蒸馏水冲洗，滴加BSA封闭液，甩掉多余液体，增加稀释一抗在湿盒，放冰箱过夜，使用PBS冲洗，加入生物素化尔康在孵箱培育20秒，冲洗滴加SABC液体，冲洗三次显色，混均加入盖玻片，终止显色反应，用苏木素染色脱水和树脂封片。
瘦素及其受体与肺癌发生的研究进展
综述一：瘦素及其受体与肺癌发生的研究进展郭华天津中医药大学2009级硕士研究生肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,半个世纪以来肺癌的发生率和死亡率一直呈明显上升趋势。
根据世界卫生组织（2003年）公布的资料显示，肺癌的发病率（120万/年）和死亡率（110万/年）均居全球癌症首位。
在我国，肺癌已超过癌症死因的20%，自2000年至2005年，我国肺癌的发病人数即增加了11.6万，死亡人数增加了10.1万，这使得肺癌已成为对人类健康与威胁最大的恶性肿瘤[1]。
自1980年以来的三十年，尽管肿瘤化疗药物及放射疗法得到了很大的进步，但非小细胞肺癌病人的5年生存率一直在16%左右，而小细胞肺癌（SCLS）患者5年生存率仅为6%，其中最主要的原因是接近2/3的病人在确诊患有肺癌时已经有转移病灶[2]。
癌症恶病质（cancer cachexia，CC）是癌症晚期的一个重要并发症，60％-80％的晚期肿瘤患者中都存在此综合征[3]，表现为体质量下降、厌食、贫血、糖代谢异常、脂肪组织分解、肌肉萎缩及胰岛素抵抗等[4]。
其中脂肪代谢紊乱，脂肪分解加速、合成减少是导致恶病质发生的重要原因。
癌症恶病质常出现脂肪代谢紊乱，包括脂肪分解加速和合成减少，既与肿瘤本身及饮食摄入等相关，也与细胞因子网络调节失衡有关。
肺癌患者尤其是晚期肺癌患者往往伴有体重减轻甚至恶病质,其能量平衡状态可能与其循环瘦素水平有关[5]。
瘦素（leptin）是肥胖基因（OB）编码的，主要由脂肪组织分泌的一种N端带有21个氨基酸信号肽的多肽。
其主要功能是调节机体的能量代谢及脂肪的合成，Leptin可以通过血液循环到达脑部，与下丘脑Leptin受体结合，抑制食欲中枢，减少摄食；Leptin通过兴奋交感神经系统的负反馈调节，促进脂肪分解，产热增加，从而发挥降低体重的功能[6]。
血清瘦素水平的高低与患者的体重有直接关系，提示瘦素与摄食密切相关。
瘦素还具有许多重要的生理作用，包括炎症放大作用和免疫功能。
乳腺癌组织瘦素、瘦素受体表达及其临床意义的初步研究的开题报告
乳腺癌组织瘦素、瘦素受体表达及其临床意义的初步研究
的开题报告
题目：乳腺癌组织瘦素、瘦素受体表达及其临床意义的初步研究
研究背景：
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其发病率不断上升。
研究发现，肥胖和能量代谢紊乱是乳腺癌发生的重要风险因素。
而瘦素是一种调节能量代谢的激素，在减轻肥胖、预防代谢紊乱等方面具有重要作用。
研究显示，瘦素及其受体在乳腺癌细胞的增殖、侵袭、转移等方面具有重要作用，但其具体机制尚不清楚。
研究目的：
本研究旨在探讨乳腺癌组织中瘦素、瘦素受体的表达状况及其与临床病理特征的关系，为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。
研究方法：
1. 收集20例乳腺癌患者和20例乳腺良性病变患者的组织标本；
2. 利用免疫组织化学方法检测瘦素、瘦素受体的表达状况，并分析其与患者病理特征的关系；
3. 应用统计学方法对数据进行分析。
研究意义：
本研究可深入了解乳腺癌发生发展的机制，有助于提高乳腺癌诊断的准确性和治疗效果，为癌症预防和治疗提供新的思路和方法。
瘦素的免疫调节作用及信号转导研究进展
瘦素的免疫调节作用及信号转导研究进展
李丽;赵跃然;王春霞
【期刊名称】《现代免疫学》
【年(卷),期】2007(27)1
【摘要】瘦素(leptin)是一种主要调节能量代谢的蛋白类激素。
瘦素可以促进多种免疫细胞的增殖、活化及细胞因子合成,促使免疫反应向Th1方向漂移,促进NK细胞的细胞毒作用,促进炎症反应,因此,瘦素在免疫系统中发挥着重要的调节作用。
瘦素受体(leptin receptor,LEP-R)与其配体结合后主要通过JAK-STAT3通路来向胞内转导活化信号,调节转录。
文章就瘦素对免疫组织器官、免疫细胞的生物学作用及其信号转导通路的研究进展作如下综述。
【总页数】4页(P77-80)
【关键词】瘦素;瘦素受体;免疫细胞;细胞因子;信号转导
【作者】李丽;赵跃然;王春霞
【作者单位】山东大学山东省立医院科研中心
【正文语种】中文
【中图分类】R392.12
【相关文献】
1.瘦素抵抗的免疫调节作用及其与肿瘤发生的关系 [J], 程欢欢;王华阳;曲迅
2.瘦素的免疫调节作用研究进展 [J], 裘辉;梁华平
3.瘦素受体信号转导研究进展 [J], 吴乐燕
4.瘦素对生殖和生长发育调节作用的研究进展 [J], 陈陵;
5.瘦素代谢调节作用研究进展 [J], 彭先镜;李双庆
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生化综述--瘦素及其信号转导通路的研究进展
瘦素及其信号转导通路的研究进展摘要:瘦素是主要由脂肪细胞分泌的一种蛋白质,与机体摄食、能量代谢、脂肪存储等的调控密切相关。
本文对瘦素及其受体的基因表达和分子结构做了简单介绍,重点分析了瘦素参与的JAK/STAT、Ras和MAPK信号通路,对其在脂类代谢和胰岛素通路中的作用也有所涉及。
关键词:瘦素瘦素受体 JAK/STAT途径 Ras途径 MAPK途径Abstract: Leptin (Lp is a kind of protein mostly secreted by the lipocyte. It closely associates with the regulation of food intake, energy expenditure and fat storage. This reviewbriefly introduces the gene expression and the molecular structure of leptin and leptinreceptor (LR; focuses on the signal transduction of leptin such as JAK/STA T, Ras andMAPK and mentions its function on the metabolism of lipids and insulin as well. Keywords:leptin, leptin receptor, JAK/STAT pathway, Ras pathway, MAPK pathway正文:瘦素(leptin,Lp是最近发现的一种蛋白质类激素,由ob基因编码,主要由脂肪细胞分泌,一直以来被认为是抑制肥胖的主要物质。
它通过与下丘脑部位相应受体的结合,参与机体对食物摄入、能量消耗、脂肪代谢等的调节作用。
新近研究发现,瘦素还在机体的神经内分泌、生殖、免疫活动等调节过程中发挥着重要作用【1】。
瘦素及其受体与甲状腺恶性肿瘤关系的研究进展
1 肥胖与甲状腺恶性肿瘤
甲状腺结节是临床常见的内分泌疾病，随着高分辨率超 声的使用以及人们健康意识的提升，甲状腺结节检出率不断 提高，但发病原因及机制尚不明确。临床评估甲状腺结节的 重要意义在于早期筛查甲状腺癌，以免贻误治疗时机。目前 有多种研究调查表明，甲状腺癌与多种因素有关，包括性别、 年 龄、遗 传 因 素、饮 食 习 惯 等，有 文 献 报 道，老 年 人、女 性、碘 缺乏地区好发甲状腺结节 [1]。甲状腺癌与代谢综合征的相关 性研究成为近年来的热门项目，与代谢综合征有关的细胞因 子与甲状腺结节及甲状腺恶性肿瘤的研究只增不减。肥胖 本身可以促进多种肿瘤的发生，甚至被认为是肿瘤发生的独 立危险因素。但肥胖症与癌症之间的关系机制尚未建立，由 于肥胖的代谢和内分泌效应可能会影响新陈代谢，在不同的 肿瘤中可能有所不同，从而影响着癌症进展。一例 Meta 分 析 [2] 研究得出，体重指数每增加 5kg/m2 甲状腺癌的发病就会 明 显 增 加（男 性 1.33，P=0.22；女 性 1.14，P=1.14）。 许 多 研 究 发 现，肥 胖 者 含 有 的 大 量 的 脂 肪 组 织，可 分 分 泌 一 些 脂 肪 因 子（a d i p o c y t o k i n e s）。 所 谓 脂 肪 因 子 是 指 脂 肪 细 胞 分 泌 的 具 有 血 管 活 性 的 激 素 和 因 子 的 统 称，在 维 持 能 量、葡 萄 糖 及 脂 质 代 谢、免 疫 应 答 等 方 面 发 挥 重 要 作 用，并 与 某 些 疾 病 有 关。其主要包括：瘦素（leptin）、脂联素（adiponctin）、抵抗素 （resistin）、内脂素（visfatin）、白细胞介素 -6（IL-6）、肿瘤坏 死因子 -α（TNF-α）等。因此，这些脂肪因子可能是肥胖 与甲状腺癌关系的介导者。
瘦素受体在胃癌组织中的表达及意义
血 管 密 度最 高 处 ， 在 高 倍镜 下 以与 周 围肿 瘤 细胞 再 和 结缔 组 织 明显 区别 的任 何一 个棕 色 染色 的 内皮 细 胞 或 细胞 丛 为一 个血 管 ， 只要 结构 不相 连 ， 其分 支 结
近 ＯｂＲ 阳性 细胞 明 显增 多 ， 旁组 织 中也 有 表达 ： — 癌
Ｋｉ ７主要定 位 于细 胞核 ； Ｄ１ ５定 位 于血管 内皮 细 一 ６ Ｃ ０ 胞 膜 ， 为单 个细 胞或 多个 簇集 的细胞 团 ． 列呈 条 多 排
有 标 本 均 经病 理 组 织 学 证 实 ， 者 术前 均 未 行 放 化 患
Ｓ ｓ １ ０统 计 软 件 处 理数 据 。 用 ｔ 验 、 差 分 Ｐ ｓ １． 采 检 方 析 和直线相 关分 析 ， Ｐ（０ ０ ． ５有统计 学差异 。
２ 结 果
１ １ 临床 资 料 ６ ． ０例 胃癌组 织 标本 均 取 自我 院手 术 患者 ， ４ 男 ２例 、 １ 女 ８例 ， 年龄 ４ ～６ ４ ８岁 、 均５ ． 平 ８７ 岁 。 中腺癌 ４ 其 ７例 ， 液腺癌 ８例 ， 黏 印戒细胞 癌 ５例 ； 临 床 分 期 Ｉ期 ５例 ， Ⅱ期 １ ６例 ， Ⅲ期 ３ ０例 ， Ⅳ期 ９
构 也 作 为一 个血 管计 数 。记 录 ５ 视 野 内 的微 血 管 个 数 ， 其平 均数作 为 ＭＶＤ值 。 取 １ ４ 统 计 学方 法 ． 统 计学 数据 以 ５ ／ ７ ± 表 示 。应 用
的关 系进 行 分 析 ， 以探 讨 ＯｂＲ 在 胃癌 发 生 、 展 过 — 发
程 中 的作用 。 １ 资 料与 方法
表 达 ． 计算 肿瘤细胞增殖指 数及微血管密 度（ 并 ＭＶＤ） 。结 果 胃癌 组 织 中 ＯｂＲ 表 达 强 度 明显 高 于 癌 旁 组 织 ． — 与 Ｋｉ ７指 数 、 一 ６ ＭＶＤ 均 呈正 相关 ， 与 胃癌 的 病 理组 织 学 分 级 、 床 分 期 及 淋 巴 结 转 移 有 关 （ ＜ ０ ０ ） 提 示 胃癌 组 并 临 Ｐ ．１。 织 中 的 ＯｂＲ 激 活 后 可通 过促 进 肿 瘤 细 胞 增 殖 和 血 管 形 成 在 胃癌 发 生 、 展 过 程 中 发 挥作 用 。 — 发
限时练4 动物生理实验题的分析与设计-2024年高三二轮复习生物学(配人教版)
综合提升
(2) 瘦 素 受 体 基 因 纯 合 突 变 小 鼠 体 内 血 糖 升 高 ， 由 此 推 测 其 抗 利 尿 激 素 含 量 __增__多____( 填 “ 增 多 ” 或 “ 减 少 ”) ， 该 纯 合 突 变 小 鼠 出 现 肥 胖 的 原 因 是 _瘦__素__受__体__基__因__纯__合__突__变__的__小__鼠__瘦__素__受__体__缺__失__，__瘦__素__无__法__发__挥__作__用__，__不__能__抑____ _制__进__食__行__为__，__同__时__细__胞__代__谢__减__弱__，__体__内__脂__肪__等__物__质__积__累__，__出__现__肥__胖__________ 。 (3)某人为探究饮食限制对糖尿病小鼠血糖和胰岛素水平的影响，以瘦素受体基 因纯合突变小鼠为实验材料进行实验。取年龄相同的雄性小鼠若干，随机均分 为两组，分别为实验组(饮食限制水平为小鼠正常能量摄入量的50%)和对照组。
123
综合提升
解析 (1)瘦素是蛋白质类激素，受体位于细胞膜表面；瘦素的作用为抑制进食， 因此机体处于饥饿状态时，瘦素的含量会减少，以促进摄食。(2)瘦素受体基因 纯合突变小鼠血糖升高，因此细胞外液渗透压会升高，抗利尿激素增多；瘦素 受体基因纯合突变的小鼠瘦素受体缺失，瘦素无法发挥作用，不能抑制进食行 为，同时细胞代谢减弱，体内脂肪等物质积累，出现肥胖。(3)实验都选用雄性 小鼠，可排除体内性激素差异对细胞代谢的影响；若胰岛素受体对胰岛素的敏 感性增强，当机体血糖水平升高时，不需要太多胰岛素就可调节使机体血糖水 平下降。因此，若实验组胰岛素和血糖水平均出现下降，则可说明饮食限制能 够提高瘦素受体基因纯合突变小鼠的胰岛素敏感性。
瘦素及其受体和血管内皮生长因子在正常子宫内膜中的表达及在血管形成中的作用
瘦素及其受体和血管内皮生长因子在正常子宫内膜中的表达及在血管形成中的作用【摘要】目的：研究瘦素(Leptin，LEP)及其受体(Ob gene receptor，Ob-R)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜的表达，探讨LEP对女性生殖的影响。
方法：采用SP免疫组织化学的方法检测LEP及其受体和VEGF在120例子宫内膜(增殖期60例，分泌期60例)的表达。
结果：LEP、Ob-R在人的子宫内膜的腺体及间质均呈阳性表达；Ob-R 在分泌期子宫内膜的表达明显高于增殖期，差异有统计学意义（P＜0.05)；VEGF在分泌期子宫内膜的表达明显高于增殖期，差异有统计学意义(P＜0.05)；分泌期子宫内膜中，Ob-R和VEGF表达存在显著正相关性(r=0.288，P＜0.05)。
结论：LEP及其受体可能通过VEGF在子宫内膜血管形成中起作用，利于分泌期胚胎着床发育。
【关键词】瘦素；血管内皮生长因子；免疫组织化学Abstract Objective: To explore the expressions of leptin，leptin receptor(Ob-R) and vascular endothelial growth factor(VEGF)in women's endometrium and the effect of leptin on women's reproduction. Methods: The expression of leptin and the leptin receptor and VEGF in endometrium from 120 normal menstrual cycle woman (60 cases of proliferative phase and 60 cases of secretive phase)were detected by immunohistochemistry. Results: The expression of leptin and Ob-R were observed in bothproliferative phase and secretive phase of endometrium. Compared with proliferative phase,the expression of Ob-R was higher in secretive phase endometrium. There was significant difference(P＜0.05). The statistica1 analysis showed that the positive rates of VEGF in secretive phase was significantly higher than that in the proliferative phase. The expression of leptin receptor in endometrium in the secretive phase was significantly correlated with that of VEGF(r=0.288，P＜0.05). Conclusion: Our results suggest that leptin and leptin receptor may play a big role in angiogenesis by VEGF in Endometrium, which is advantageous to embryonic implantation and development in the secretory phase.Key words Leptin；Vascular endothelial growth factor ；Immunohistochemistry瘦素（Leptin，LEP）是肥胖基因的表达产物，是由脂肪组织及少量其他组织分泌的激素，也称肥胖抑素，LEP通过与其受体结合发挥生物学作用。
瘦素及其受体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义
瘦素及其受体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义目的探讨瘦素及其受体在膀胱肿瘤中的表达及其意义。
方法采用免疫组化检测及显微镜观察瘦素及其受体在膀胱肿瘤组织中的表达，选择2012年5月～2012年12月山西医科大学第一临床医院经病理确诊为膀胱肿瘤的标本10例，经患者及其家属同意后进行试验，将不同肿瘤分期的标本分为两组，浅表组和浸润组，每组5例患者，并与其癌旁组作为对照，每个标本分别从癌旁组织、浅表组织和浸润组织中各选取不同位置的5块组织进行重复测定。
结果瘦素在癌旁组织、浅表组织和浸润组织中不表达，瘦素长受体（Ob-Rb）在癌旁组织、浅表组织、浸润组织中不表达，而瘦素短受体（Ob-Ra）均表达。
瘦素Ob-Ra在癌旁组中表达对比浅表组及浸润组均较强，区别明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；在浅表组中表达对比浸润组较强，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论瘦素在膀胱组织中不表达；瘦素Ob-Rb在膀胱组织中不表达；瘦素Ob-Ra可在膀胱组织中不同程度的表达，并与肿瘤组织的浸润程度呈反比，提示瘦素Ob-Ra可能与膀胱癌的发生发展相关。
标签：膀胱肿瘤；瘦素；瘦素受体；免疫组化膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿系统恶性肿瘤，发生率在男性肿瘤中已上升至第4位，在女性肿瘤中位居第8位，其主要的病理类型是膀胱移行细胞肿瘤，约占90%以上[1]。
膀胱肿瘤具有复发率较高的特点，且复发后肿瘤恶性度增高，浸润和转移等恶性行为有所增强。
瘦素（leptin）是近年来发现的一种具有多靶器官多功能的神经免疫内分泌调节激素，与其特异性受体（Ob-R）结合后激活某些信号传递通路调控特异性靶基因的转录。
瘦素受体根据其胞内片段氨基酸长度以及序列组成的差异分为长型受体（Ob-Rb）和短型受体（Ob-Ra，Ob-Rc，Ob-Rd，Ob-Re）共5种异构形式，其中Ob-Ra和Ob-Rb被认为是激活信号传递通路的主要功能性受体[2]。
近年来瘦素及其受体下游信号通路在某些恶性肿瘤发生和发展中的作用亦受到关注。
瘦素功能性受体Ob-Rb表达对胰腺癌细胞迁移的影响
瘦素功能性受体Ob-Rb表达对胰腺癌细胞迁移的影响摘要】目的：探究瘦素功能性受体Ob-Rb表达对胰腺癌细胞迁移的影响。
方法：培养人胰腺癌细胞PANC-1，抽提RNA的逆转录后以cDNA作为模板，使用RT-PCR验证Ob-Rb的mRNA表达情况；使用蛋白印迹（Western Blot，WB）法检测Ob-Rb与瘦素蛋白的关联性；使用细胞划痕测定法检测瘦素处理对胰腺癌细胞迁移情况影响。
结果：Ob-Rb全长1071bp，WB显示Ob-Rb识别瘦素蛋白受体的抗体；瘦素处理后，胰腺癌细胞相对迁移距离明显长于未用瘦素处理的胰腺癌细胞（P<0.05）。
结论：瘦素功能性受体Ob-Rb能在人胰腺癌细胞中表达，瘦素处理能增加胰腺癌细胞迁移距离，Ob-Rb表达与胰腺癌细胞迁移显著相关。
【关键词】瘦素功能性受体；胰腺癌；细胞迁移【中图分类号】R735.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）30-0202-02Effect of leptin functional receptor Ob-Rb expression on migration of pancreatic cancer cellsTan Meiyu1,Tian Xiaoyu1,Yao Yiting1,Zhang Jun2,Sheng Huiming1,XuWeihong1(Correspondence author)1Shanghai Tongren Hospital Department of Laboratory 2000502 Huashan Hospital Institute of Digestive Diseases 200041【Abstract】Objective Aim to investigate the effect of leptin functional receptor Ob-Rb expression on migration of pancreatic cancer cells. Methods The human pancreatic cancer cells PANC-1 were cultured, RNA was extracted and reverse transcripted, and cDNA was used as template to verify the expression of Ob-Rb mRNA by RT-PCR, Western Blot (WB) was used to detect the correlation between Ob-Rb and leptin, and cell scratch assay was used to detect the effect of leptin treatment on migration of pancreatic cancer cells. Results Ob-Rb was 1071 bp, WB showed that Ob-Rb recognized the antibody of leptin receptor. After leptin treatment, the relative migration distance of pancreatic cancer cells was significantly longer than that of pancreatic cancer cells untreated without leptin treatment (P< 0.05). Conclusion Leptin functional receptor Ob-Rb can be expressed in human pancreatic cancer cells. Leptin treatment can increase the migration distance of pancreatic cancer cells, and the expression of Ob-Rb is significantly associated with the migration of pancreatic cancer cells.【Key words】Leptin functional receptor; Pancreatic cancer; Cell migration瘦素（leptin）是一种主要由脂肪细胞制成的激素，有助于通过抑制饥饿来调节能量平衡[1]。
细胞外周血DNA提取、瘦素受体基因扩增、RFLP分析
四、实验步骤
一、酶切
1、在Eppendorf管中依次加入
10×酶切缓冲液
1 μl
PCR产物
8 μl
MspI 酶液（10u/μl） 1 μl
2、37℃，1.5小时。
二、电泳鉴定
1. 准备小平板电泳槽，取出平板，用胶带封口，放 回槽内，并插上样孔梳，调节上样孔梳，使上样 孔梳底部与凝胶模底板的距离为0.5-1.0mm。
5பைடு நூலகம் 在酶切扩增产物中加入2μl 6×载样缓冲液混匀， 小心加入样品孔。
6. 以靠近上样端接负极，另一端接正极，接通电 源，以5v/cm（该距离为电泳槽两电极间的距离， 非凝胶自身的长度）的电压电泳30分钟。
7. 电泳结束后，带上保护手套，倾去电极缓冲液， 取出凝胶置透明薄膜上，在紫外灯下观察电泳 结果，并照相记录结果。
8. 分析待测样品的LEPR基因的多态性。
二、PCR
1 PCR反应在20ul反应体系中进行，冰上操作
• 10×缓冲液
2.0ul
• 2.5uM dNTP • 5umol/L 上下游引物 • TaqDNA聚合酶 • 模板DNA（1ng-1ug） • 加ddH2O至
1ul 各1.0ul 1U 5.0 ul 20ul
2 扩增条件：94℃变性3min；然后94℃变性40s， 58℃退火35s，72℃延伸40s，循环35次后；72℃ 保持5min。扩增产物4℃保存。
外周血细胞基因组DNA的提取 (NaI法) 瘦素受体基因的扩增 瘦素受体基因的限制性片段长度多态性分析
实验一
• 外周血细胞基因组DNA的提取 (NaI法) • 瘦素受体基因的扩增
基因组DNA提取原理
• 从全血制备白细胞DNA，可用双蒸水溶涨红细胞及 白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核。加NaI破核膜 并使DNA从核蛋白中解离，用氯仿/异戊醇抽提使蛋 白质沉淀完全（异戊醇去泡沫），DNA存在于上层 水相中，以异丙醇沉淀 DNA，离心弃去异丙醇，并 重复操作一次，即可获得白细胞DNA。
绵羊瘦素受体基因部分序列测定及其变异位点分析
绵羊瘦素受体基因部分序列测定及其变异位点分析李利;欧志国;王林杰;张红平;杜立新【摘要】In order to lay the foundation for further study on relationship between polymorphisms of LEPR and growth traits in sheep, using DNA and RNA samples from a population crossed between Merrino and Awassi sheep, parts of ovine LEPR cDNA and intron 7 were sequenced in 4 ewes in an attempt to find polymorphisms, and DNA from 229 samples were genotyped by PCR-RFLP at two mutation loci. The 2608 bp of LEPR cDNA included complete exon 2 to exon 16 and partial sequence of exon 1 and exon 17, and the whole length of LEPR intron 7 was 160 bp. 5 point mutations were found, two in exon 2 (T240C and A279G ) , A1683G andT2373C were in exon 10 and exon 14 respectively, at the same time, a A to G mutation was found in intron 7 (1285 +A73G). They all didn't cause amino acid substitution. Frequencies for allele A at A279G and A1683G were 0. 415 and 0. 467,respectively. However, the latter was in Hardy-Weinberg disequilibrium, and GG and AA were the main haplotypes in this sheep population. The similarity scores of LEPR cDNA or intron 7 were high among species, though the former were higher, and the phylogenetic tree based on LEPR mRNA was more accurate with higher reliability value than based on LEPR intron 7, which may be caused mainly by the length of intron 7. These results indicated that ovine LEPR was highly conserved, and transition was the main mutation way, in addition, A279G and A1683G were mutational hotspots in LEPR gene.%试验旨在检测绵羊瘦素受体(leptinreceptor,LEPR)基因序列突变位点,为进一步分析LEPR基因多态性与绵羊生长性状的关系奠定基础.选用美利奴羊与阿华西羊杂交群体作为试验材料,利用RT-PCR、测序等方法测定了4只绵羊的LEPR基因cDNA部分序列及内含子7序列,同时利用PCR-RFLP分析两个位点在群体(229只)中的多态性.测定出LEPR基因cDNA序列长2608 bp(包含外显子2-16完整序列及外显子1和17的部分序列)和LEPR 第7内含子序列全长160 bp,共发现5个核苷酸变异位点,第2外显子中2个(T240C和A279G),第10、14外显子中各1个(A1683G,T2373C),内含子7中1个(1285+ A73G),外显子中的4个变异位点均未引起编码氨基酸的改变.在研究群体中,A279G与A1683G中A的频率分别为0.415、0.467,后者处于非平衡状态,GG和AA是主要的单倍型.不同物种间序列一致性分值均比较高,但LEPRmRNA区序列一致性比内含子高,基于LEPR mRNA序列构建的系统发育树更符合实际情况,且可靠性值更高.结果表明,绵羊LEPR基因的保守性较强,突变形式主要是转换,A279G和A1683G可能是突变热点.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)008【总页数】7页(P107-113)【关键词】绵羊;瘦素受体基因;单核苷酸多态性;系统发育【作者】李利;欧志国;王林杰;张红平;杜立新【作者单位】四川农业大学动物遗传育种研究所,四川雅安625014;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所,北京100193;眉山市畜牧局,四川眉山620020;四川农业大学动物遗传育种研究所,四川雅安625014;四川农业大学动物遗传育种研究所,四川雅安625014;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所,北京100193【正文语种】中文【中图分类】S823.8瘦素（leptin）是由obese基因编码并在脂肪组织中合成分泌的一种蛋白，它主要通过抑制采食并刺激能量代谢的方式调节脂肪和体重，在哺乳动物中还参与调节繁殖（Brann，2002）及免疫应答（Fruhbeck等，1998；Agarwal等，2009）。
瘦素受体基因酶切分析
5’ —CCAG—3’ 3’ —GGTC—5’
突变型纯合子440bp，GA杂合子140bp、300bp、 440bp，GG纯合子140bp和300bp，见图1。
注： 7 ：DNA分子量标准 1,6 ：AA型（440bp） 2,3 ：AG型（140bp，300bp和440bp） 4,5 ：GG型（300bp和140bp）
图1 瘦素受体基因Gln223Arg多态性电泳结果
[原理 原理] 原理
• 限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，缩写RFLP) 技术的原理是检测DNA在限 制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是 可以引起酶切位点变异的突变如点突变（新产生和去除酶 切位点）和 一段DNA的重新组织（如插入和缺失造成酶 切位点间的长度发生变化）等均可导致RFLP的产生。 • 瘦素受体（LEPR）基因，又被称为糖尿病基因，于1995 年被定位克隆，属细胞因子受体超家族，由1165个氨基酸 组成。LEPR是肥胖基因编码产物的受体，其基因变异主 要影响机体的体脂分布和脂肪代谢，并通过调节胰岛素的 敏感性来参与糖尿病的发生。LEPR基因多态性来自于其 基因序列中的单碱基变异。目前研究已经证实了瘦素受体 基因多种突变和多个多态性位点。人类LEPR 基因第六外 显子上存在有Gln223Arg变异（第668 位碱基A→G变异, 使223位氨基酸Gln被A rg取代）。
瘦素受体基因LEPR简介及酶切结果预测 简介及酶切结果预测 瘦素受体基因
• LEPR是肥胖基因编码产物的受体，其基因变异主要影 响机体的体制分布和脂肪代谢。 • 研究显示人类LEPR 基因第六外显子上存在有 Gln223Arg变异（第668 位碱基A→G变异, 使223位氨 基酸Gln被Arg取代）。 • 限制性内切酶MspI MspI酶的酶切位点： 5’ —CCGG—3’ 3’ —GGCC—5’
味觉刺激后瘦素及其受体表达的变化
味觉刺激后瘦素及其受体表达的变化韩蓁;闫剑群;魏志超【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2002(018)004【摘要】目的:研究经口腔味觉刺激后,大鼠血清瘦素水平和脑瘦素受体表达情况.方法:给大鼠口腔味觉刺激,味觉刺激物包括3 mol/L蔗糖, 5 mmol/L糖精钠, 0.1 mol/L NaCl, 0.01 mol/L HCl, 1 mmol/L奎宁H2SO4和0.1 mol/L谷氨酸钠,采用大鼠瘦素放免试剂盒测定血清瘦素水平.应用免疫组织化学ABC法对大脑切片进行染色,一抗为特异性羊抗瘦素受体IgG.结果:与对照组(以蒸馏水代替味觉刺激物)相比,仅甜味组(包括蔗糖和糖精钠)血清瘦素水平升高(P<0.05).杏仁核、下丘脑、臂旁核和孤束核等与味觉和摄食明显相关的核团均存在瘦素受体免疫反应(LR-IR)阳性细胞,但是阳性细胞数目在味觉刺激组和对照组间无显著性差异.结论:给大鼠甜味觉刺激后,血清瘦素水平升高.并且杏仁核这个在摄食的发动和引导中起重要作用的核团存在LR-IR阳性细胞.这些结果提示瘦素可能通过调节味觉感受而影响摄食,有必要对瘦素在味觉感受方面的作用进一步研究.【总页数】4页(P387-390)【作者】韩蓁;闫剑群;魏志超【作者单位】西安交通大学医学院生理学教研室,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院生理学教研室,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院生理学教研室,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R338.2;R335+.9【相关文献】1.迷走神经电刺激对脑外伤后昏迷大鼠前额叶皮质去甲肾上腺素α1受体表达变化的影响 [J], 陈琴;黄菲菲;董晓阳;冯珍2.正中神经电刺激对脑外伤后昏迷大鼠γ-氨基丁酸b受体表达变化的影响 [J], 魏天祺;冯珍3.瘦素对提高受体表达量后骨骼肌细胞PI-3K活性的影响 [J], 刘丹;程桦;王佑民4.糖尿病大鼠下颌下腺内瘦素和瘦素受体表达变化 [J], 吴学平;贾雪梅;王盛花;汪渊;朱华庆;张孝林5.梗阻性黄疸患者肠黏膜瘦素及其受体表达变化与肠黏膜细胞增殖、凋亡的关系[J], 郭松;陈强谱;林绪涛;张帆;张兴元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高血压病患者血清瘦素及可溶性瘦素受体水平检测分析
高血压病患者血清瘦素及可溶性瘦素受体水平检测分析常志文;陈晓燕【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2005(20)5【摘要】目的研究血清瘦素和可溶性瘦素受体水平与高血压病的关系. 方法应用放射免疫分析法(RIA)及酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测45例高血压病患者及33例健康对照组血清瘦素(Lp)、可溶性瘦素受体(sLR),同时检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白ApoA、ApoB、ApoA/B、胰岛素(Ins)、C肽(C-P)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、体质量指数(BMI)、腰围、臀围等指标,分析Lp、sLR与高血压、血脂异常、体形改变、BMI及胰岛素抵抗(IR)的关系. 结果高血压病组血清Lp、TC、LDL-C、ApoB明显高于对照组(P<0.05), sLR、ApoA/B明显低于对照组(P<0.01),TG、HDL-C及BMI差异无统计学意义.Lp与Ins、C-P、HOMA-IR、BMI、腰围及臀围呈正相关,与sLR呈负相关(P<0.05);sLR与Lp、C-P、BMI、腰围及臀围呈负相关(P<0.05),与Ins及HOMA-IR无显著相关.结论高血压病与Lp及sLR异常有关,其与血脂异常、体形改变、BMI、IR密切相关,共同参与高血压病的形成.【总页数】4页(P253-256)【作者】常志文;陈晓燕【作者单位】首都医科大学附属北京同仁医院,干部医疗科,北京,100730;首都医科大学附属北京同仁医院,干部医疗科,北京,100730【正文语种】中文【中图分类】R544.1【相关文献】1.2型糖尿病患者血清瘦素及可溶性瘦素受体检测分析 [J], 陈晓燕;常志文2.肥胖儿童血清高敏C反应蛋白、瘦素、可溶性瘦素受体和胰岛素的水平及意义[J], 薛敏;张协丰;姜东林;潘宇红;李成万3.老年冠心病患者血清瘦素及可溶性瘦素受体检测分析 [J], 陈晓燕;常志文4.原发性高血压病患者血清瘦素、可溶性瘦素受体及沉默信息调节因子相关酶3水平与动脉粥样硬化的关系研究 [J], 胡迪聃;徐彤彤;王文艳;顾婉红5.子痫前期患者血清瘦素及可溶性瘦素受体水平检测分析 [J], 李付军;李玉山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
瘦素及其受体与大肠癌发生、发展和预后关系
瘦素及其受体与大肠癌发生、发展和预后关系彭治香; 谭科; 王小叶【期刊名称】《《上海医药》》【年(卷),期】2019(040)015【总页数】3页(P55-57)【关键词】瘦素; 瘦素受; 大肠癌; 免疫组织化学【作者】彭治香; 谭科; 王小叶【作者单位】湘西土家族苗族自治州民族中医院消化科湖南吉首 416000【正文语种】中文【中图分类】R735.34瘦素是一种脂肪组织分泌的蛋白质，由肥胖基因编码，其受体是一种广泛分布于体内的单链跨膜糖蛋白，由糖尿病基因编码，预示着瘦素可能在机体内存在广泛的生理功能。
瘦素发挥生物功能的主要方式为其与受体结合激活酪氨酸酶信号通路，进而参与机体免疫、能量代谢、生长发育等各项生命活动[1-2]。
已有研究表明，能量代谢和大肠癌间存在一定关系[3]，但瘦素及其受体是否参与其中目前仍无定论。
本研究旨在探讨瘦素及其受体与大肠癌发生发展和预后关系，为该疾病的诊断治疗提供新思路。
1 资料与方法1.1 一般资料本研究选取2016年1月—2018年5月收治的经术后病理检查确诊的大肠癌患者60例（大肠癌组）。
其中，男36例，女24例；年龄28～76岁，平均（58.2±6.1）岁；临床分期：早期17例，晚期43例；高-中分化癌22例，低分化癌38例。
另取同时期肠镜下的大肠腺瘤性息肉40例（大肠腺瘤组）以及正常大肠黏膜组织40例（正常组）进行对比。
3组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2 方法RT-PCR及免疫组化方法检测瘦素及其受体，RTPCR法及免疫组化法操作步骤按试剂盒说明进行。
1.3 结果判定瘦素、瘦素受体阳性细胞按以下方法进行半定量分类：组织标本不染色为-；肿瘤细胞染色＜25%为+；25%≤肿瘤细胞染色＜50%为++；50%≤肿瘤细胞染色＜75%为+++；肿瘤细胞染色≥75%为++++。
每片选4个不同视野取平均值作为最终结果。
1.4 统计学处理数据采用SPSS 17.0进行分析，计数资料采用χ2检验；计量资料采用t检验。
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实验步骤：
1.向已配好的5ul的酶切体系中加入5ul的PCR产物，37° 1.向已配好的5ul的酶切体系中加入5ul的PCR产物，37° 向已配好的5ul的酶切体系中加入5ul 产物 酶切1.5h 酶切1.5h 酶切体系（10ul）： Buffer 1.0ul Msp Ⅰ 1.0ul PCR产物 5.0ul ddH2O 3.0ul 2.电泳鉴定酶切结果 2.电泳鉴定酶切结果
前次PCR实验结果分析
• 全班13组中有5组成功扩增出440bp的产物； • 电泳图学生有copy；
瘦素受体基因的限制性片段长度多态性分析
实验目的： 实验目的： • 了解限制性片段长度多态性分析的原理和操作步骤。 实验原理: 实验原理: • 限制性片段长度多态性(restrictionfragment length polymorphism，缩写RFLP) 技术的原理是检测DNA在限制 性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。 • 因此凡是可以引起酶切位点变异的突变如点突变（新产生 和去除酶切位点）和一段DNA的重新组织（如插入和缺失 造成酶切位点间的长度发生变化）等均可导致RFLP的产生。
野生型
5’ —CCAG—3’ 3’ —GGTC—5’
突变型
• PCR扩增产物为440bp，内切酶MspI作用后有三种 结果：AA纯合子440bp，GA杂合子140bp、300bp、 440bp，GG纯合子140bp和300bp，见图1。
注： 7 ：DNA分子量标准 1,6 ：AA型（440bp） 2,3 ：AG型（140bp，300bp和440bp） 4,5 ：GG型（300bp和140bp）
[原理 原理] 原理
• 限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，缩写RFLP) 技术的原理是检测DNA在限 制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是 可以引起酶切位点变异的突变如点突变（新产生和去除酶 切位点）和 一段DNA的重新组织（如插入和缺失造成酶 切位点间的长度发生变化）等均可导致RFLP的产生。 • 瘦素受体（LEPR）基因，又被称为糖尿病基因，于1995 年被定位克隆，属细胞因子受体超家族，由1165个氨基酸 组成。LEPR是肥胖基因编码产物的受体，其基因变异主 要影响机体的体脂分布和脂肪代谢，并通过调节胰岛素的 敏感性来参与糖尿病的发生。LEPR基因多态性来自于其 基因序列中的单碱基变异。目前研究已经证实了瘦素受体 基因多种突变和多个多态性位点。人类LEPR 基因第六外 显子上存在有Gln223Arg变异（第668 位碱基A→G变异, 使223位氨基酸Gln被A rg取代）。
瘦素受体基因LEPR简介及酶切结果预测 简介及酶切结果预测 瘦素受体基因
• LEPR是肥胖基因编码产物的受体，其基因变异主要影 响机体的体制分布和脂肪代谢。 • 研究显示人类LEPR 基因第六外显子上存在有 Gl被Arg取代）。 • 限制性内切酶MspI MspI酶的酶切位点： 5’ —CCGG—3’ 3’ —GGCC—5’
图1 瘦素受体基因Gln223Arg多态性电泳结果
• 假如DNA 顺序中的某个碱基发生了突变，使突变所在 部位的DNA 序列产生（或缺失）某种限制性内切酶的 位点。这样，利用该限制性内切酶消化此DNA 时，便 会产生与正常不同的限制性片段。这样，在同种生物 的不同个体中会出现不同长度的限制性片段类型，即 限制性片段多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism ，RFLP ）。