紫杉醇

紫杉醇针剂
市售成品一般为注射液
性状：无色或淡黄色透明粘稠液体 规格：5ml/30mg 适应症：卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠
癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤 也都有一定疗效。
用法用量：将紫杉醇用5%葡萄糖生理盐
水稀释成0.3~1.2 mg/ml溶液，静滴3小 时。
价格昂贵
国际市场上高纯度紫杉醇（>98%）价格在40万美元/kg以 上。
2. 粉碎
粉碎室内的温度一般不能超过60℃，采用功率和容量尽量大的 粉碎机，粉碎的粒度以40目左右为宜。
3. 95%乙醇浸取
原料+2700L 95%乙醇 浸取24h
残渣
残渣+1600L 95%乙醇 浸取24h
残渣
残渣+1500L 95%乙醇 浸取24h
浸取液
浸取液
作为下一轮第一 次浸取的溶剂
1100kg糖浆状浸膏
cephalomannine
HPLC分析结晶 产物紫杉醇含量 为62.5%
10-DAB
紫杉醇
注意事项：
1. 重结晶过程中加水量和加水速 度都影响结晶效果，应避免溶 液的过饱和度过大。
2. 结晶的母液经氯仿萃取两次， 氯仿萃取液经浓缩、拌样后回 第三次柱层析。
0 5 10 15 20 25 时间/min
4. 液液分配（萃取剂：氯仿）
浸膏
水
氯仿
料液
搅拌30min
含有紫杉醇的 静置2h 氯仿萃取液
液液分配过程中极易发生乳化现象，严重影响成本和产物的收率，所 以这一步骤是分离纯化紫杉醇的难点之一。
应对方法：
1. 浸膏中的乙醇浓度是液液分配的关键。真空浓缩浸取液制备浸膏 过程中调节乙醇含量，使液液分配器中水相的乙醇浓度控制在 10%~15%。
接真空
接溶剂
视
流动相槽 镜
玻璃视镜
拌样硅胶
空白硅胶
梯度洗脱（以氯仿/甲醇为洗脱剂）和 三次过柱
空白硅胶目 数（目）
空白硅胶 拌样硅胶
不同甲醇含量的流动相（氯仿—甲醇）用量（L） 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 7% 8%
第一次柱层析 60~100
2
第二次柱层析 100~200
3
40 40 40 40 40 40
微管
紫杉醇属有丝分裂抑制剂或纺锤体毒素，和目前常用的化疗药作用机理 不同，它诱导和促进微管的装配。紫杉醇具有聚合和稳定微管的作用， 致使快速分裂的肿瘤细胞在有丝分裂阶段被牢牢固定，使癌细胞复制受 阻断而死亡。
紫杉醇引起的各种并发症
1
0.80
0.75
0.62
0.55
0.59
0.47
0.5
0.39
0.30
9. 制备型高压液相色谱
将得到的紫杉醇粗产品（680g、62.5%）经过制备型 高压液相色谱进一步分离纯化，最后得到含量高于 98%的紫杉醇产品。
0.25
0 1234567
1-过敏反应 2-严重中性粒细胞减少 3-周围神经病变 4-心血管毒性 5-肌肉关节疼痛 6-脱发 7-胃肠道反应
注意事项：
1.有过敏史者及白细胞／血小板低下者应慎用；怀孕和哺乳期妇女禁用。 2.在给药12小时和6小时前服用20mg地塞米松。 3.滴注开始后每15min应测血压、心率、呼吸一次，注意有无过敏反应。 4.注药后每周应检查血样至少2次，3~4周后视情况可再重复。
1. 经萃取的氯仿溶液在40 ℃以下真空浓缩。 2. 按照固含量：硅胶（60~100目）为1：3的比例拌样、蒸干
（干法上样）。
6. 硅胶柱层析—关键步骤
装柱好坏严重影响分离 效果
采取措施：
1. 底部抽真空 2. 用木榔头连续敲击
柱子四周
工艺特点：
1. 干法上样
2. 梯度洗脱
3. 三次过柱
接N2钢瓶
原因：
1.红豆杉数量少，生长速度缓慢
野生红豆杉一般散生在海拔2500-3000米的深山密林中，自然条件下 成材需50~250年。
2. 紫杉醇含量极低
一般含量仅为万分之几，含量最高的曼地亚红豆杉也仅为 0.03%~0.06%。
1kg100年树龄的树皮，仅仅能获得50~100mg的紫杉醇。
3. 紫杉醇分离纯化困难
紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物。
红 豆 杉 及 其 果 实
红豆杉的红豆，宛如南国的相思豆。红豆杉得名 也是因为它生长着与红豆一样的果实。
药理毒理
紫杉醇是目前所了解的惟一一种可以促进微管聚合和稳定 已聚合微管的药物。
α-微管蛋白 β-微管蛋白
微管功能：
1-支架作用 2-细胞内运输 3-形成纺锤体 4-纤毛与鞭毛的运动
紫杉醇
——治疗癌症的最后一道屏障！
紫杉醇（paclitaxel/taxol）
发现历史：
1963年美国化学家首次从一种生长在美国西部大森林 中称谓太平洋杉树皮和木材中分离到了紫杉醇的粗提 物。实验发现这种粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有 很高活性，并开始分离这种活性成份。
直到1971年，利用X射线分析才 确定了该活性成份的化学结构— —一种四环二萜化合物，并把它 命名为紫杉醇（taxol）。
2. 加水量也影响萃取效果，加水过多会出现严重的乳化，太少会使 萃取过程分层困难。操作过程中，以1：2~1：3的体积比控制加 水量（每50L浸膏加水100~150L）。
3. 每份料液用氯仿萃取4次。依此加入氯仿50L、20L、15L、10L。 每次搅拌时间30min，静置2h。
5. 真空浓缩与拌样
类似物多, 具有热敏性, 产物在提取过程中易于分解、变性, 不同产 地、不同季节的植物资源成分相差甚远, 因此分离提取工作难度很 大。
紫杉醇分离纯化工艺
——以5t红豆杉树皮为原料生产紫杉醇的中试工艺
工艺要点
1. 红豆杉树皮预处理
采集新鲜的原料晒2~6d七成干后，再置于通风处阴干。经抽样 检验紫杉醇的平均含量为0.012%。
0.5
5馏分
紫杉醇 10-DAB 6馏分
0 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 馏分收集瓶序号
7. 活性炭脱色
经三次柱层析得到的紫杉醇馏分浓缩后，溶解于甲 醇中（1g浓缩物溶解于60ml甲醇），以3~4ml/min 的流速流过经水洗、甲醇洗的活性炭柱子。
8. 重结晶
紫杉醇不溶于水，通过向脱色流出液中加水的方法结 晶出紫杉醇。加水量随溶液中产物的浓度不同而变 化，控制在溶液微显混浊时停止加入，静置一夜后可 得白色棉花状结晶。结晶产物经过滤后用甲醇/水重结 晶二次，最后经真空干燥后得到白色针状结晶物。
紫杉醇制剂居世界抗癌药首位
1990年进入III期临床试验； 1992年底获美国FDA批准上
市； 1999年美国市场销售额为
8.17亿美元； 2003年全球总销售额超过20
亿美元并以20%/年的速度递 增； 2006年，紫杉醇剂的国际 市场总销售额已达37亿美 元，高居世界抗癌药物之 首。
40
40 40 40 40 40 40
40
第三次柱层析 200~300
4
50 50 50 50 50 50
TLC定性分析流出液组分
展开剂：氯仿/ 5%甲醇 各标样的展开系数：Rf紫杉醇=0.61；RfbaccatinIII=0.49；
Rf10-DAB=0.40。
Rf
1馏分
1.0
2馏分 3馏分 4馏分