Astep Plus特定蛋白分析仪测定超敏C反应蛋白的性能验证

Astep Plus特定蛋白分析仪测定超敏C反应蛋白的性能验证
目的：验证国赛Astep Plus特定蛋白分析仪测定超敏C反应蛋白（hs-CRP）的性能。

方法：对Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的精密度、准确度、线性、携带污染率等性能指标进行验证。

结果：批内精密度为3.64%、2.46%、2.33%，批间精密度为9.67%、4.95%，均符合厂家要求；准确度与厂家校准品的偏倚4.47%，与国际参考品的偏倚-2.72%，均符合偏倚≤5%的要求；血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L。

携带污染率为0.48%，符合≤1%的要求；20份全血标本中，80%（16/20）偏倚≤12.5%，符合实验要求。

结论：Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的各项性能指标均能达到厂家声明的性能，结果准确、稳定，符合临床质量要求，满足实验室和临床需要。

隨着医院的发展，患儿日益增多，为适应日益增长的标本对检测结果快速、准确的要求，科室新近引进了由深圳市国赛生物技术有限公司生产的全自动Astep Plus特定蛋白分析仪，采用散射比浊法检测超敏C反应蛋白（hs-CRP）。

实验室认可的专用准则-《医学实验室质量和能力认可准则》中，要求申请认可的实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证[1-2]，证实其技术性能指标能否满足临床需要[3-4]。

笔者查阅相关文献和结合工作实际，制定了验证方案，对Astep Plus特定蛋白分析仪的hs-CRP的分析性能进行验证，现报道如下。

1 材料与方法
1.1 仪器与试剂深圳市国赛生物技术有限公司生产的Astep Plus特定蛋白分析仪（散射比浊法）及配套试剂和校准品（批号20180413）。

科室另行购买的伯乐CRP质控品（批号66342）和国际参考品ERM-DA474（欧洲标准局网站购买，批号6094）。

对比仪器：深圳市国赛生物技术有限公司Nephstar plus特定蛋白分析仪（散射比浊法）及配套试剂（试剂批号025*******）。

1.2 标本来源新鲜静脉血标本均来自深圳市儿童医院门、急诊患者。

1.3 质量控制实验前对各仪器进行了维护、校准，实验期间室内质控均在控。

实验仪器空白值均合格。

1.4 实验方法
1.4.1 精密度（1）批内精密度：取高值、中值、低值3份浓度的新鲜全血样本，每份样本连续重复测定10次，计算均值、标准差和变异系数（CV），判断是否小于厂家规定（CV≤5%）的性能标准。

（2）批间精密度：取中值、低值2个浓度的伯乐质控血清，每天检测1次，连续测定20 d，计算均值、标准差和CV，判断是否小于厂家规定（CV≤10%）的性能标准。

1.4.2 准确度（1）校准品验证：采用厂家提供1个浓度校准品（靶值160 mg/L），连续检测5次，计算
均值和偏倚，判断是否小于厂家规定（偏倚≤5%）的性能标准。

（2）参考品验证：采用国际参考品（靶值41.2 mg/L），连续检测5次，计算均值和偏倚，判断是否小于国际参考品规定（偏倚≤5%）的性能标准。

1.4.3 线性范围（1）血清线性范围：取1份高值血清标准品（靶值为320 mg/L），将标准品与稀释液按比例由低到高稀释成6个浓度梯度，每个浓度重复测定3次，取平均值。

将实测值与理论值作比较，计算y=bx+a，验证线性范围。

（2）全血线性范围：取1份高值全血样本H（尽量接近范围上限），1份低值全血样本L（检测值约0.5 mg/L）。

将高值和低值标本按0∶1、1︰15、1∶7、1∶3、1∶1、1∶0的比例进行混合，制备成6个浓度梯度的样品，每个浓度标本重复测定3次，取平均值。

将实测值与理论值作比较，计算y=bx+a，验证线性范围。

血清及全血线性范围结果判断：斜率b值为1±0.05，相关系数R≥0.975（或R2≥0.95）即线性符合要求。

1.4.4 携带污染率取高值、低值全血标本各1份依次测高值3次（H1、H2、H3）、低值3次（L1、L2、L3），计算携带污染率，携带污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%。

携带污染率<1%为可接受。

1.4.5 仪器间比较选20份不同浓度的全血标本，分别在Nephstar plus和Astep Plus仪器各检测1次，以Nephstar plus仪器检测结果为参考结果，以Astep Plus检测结果为比对结果进行偏倚统计，至少80%标本偏倚应≤1
2.5%。

2 结果
2.1 精密度3份不同浓度全血标本的批内精密度分别为
3.64%、2.46%、2.33%；2份质控血清的批间精密度分别为9.67%、
4.95%，均符合廠家要求，见表1、2。

2.2 准确度校准品5次检测结果分别为160.7、168.14、171.74、172.09、16
3.11 mg/L，计算得出偏倚
4.47%；参考品结果39.14、40.18、41.47、39.65、39.95 mg/L，计算得出偏倚-2.72%。

校准品和参考品均符合偏倚应≤5%的要求。

2.3 线性范围计算相关回归方程，均符合线性要求，得出血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L，血清和全血模式线性检测数据见表3、4，验证结果见图1、2。

2.4 携带污染率实验结果为H1 95.08 mg/L、H2 97.06 mg/L、H3 9
3.33 mg/L，L1 2.29 mg/L、L2 1.9 mg/L、L3 1.85 mg/L，根据实验结果计算得出携带污染率为0.48%，符合携带污染率≤1%的要求。

2.5 仪器间比较经比对，20份全血标本中偏倚≤12.5%有16份，计算得出80%的标本偏倚≤12.5%，符合实验要求，见表5。

3 讨论
感染性疾病是一种临床上常见的儿科疾病，具有多发性，其发病主要与细菌、病毒及支原体等有关[5]。

C反应蛋白是一种由肿瘤坏死因子、白细胞介素等炎性因子调节，并由肝细胞合成的非特异性急性时相反应蛋白，hs-CRP是根据测定方法更敏感而命名。

既往研究显示，当组织受到损伤、炎症或感染时，C反应蛋白可以在数小时内急剧上升，并在2～3 d达峰值，待病情改善时逐渐下降，恢复正常[6-8]。

C反应蛋白被广泛应用于感染的诊断与鉴别诊断，是鉴别细菌或病毒感染的一个首选指标，用于评估感染的严重程度、抗生素的疗效监测[9-11]，且C反应蛋白与多种儿科感染性疾病相关，并在临床上常与PCT等其他指标共同应用于疾病诊断[12-15]。

C反应蛋白与PCT联合检测常用于新生儿感染的诊断[16-20]。

而全血C反应蛋白的检测快速、方便、经济实惠、结果准确可靠、创伤小，容易被患儿及家长接受[21]。

从本研究验证结果看，Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的批内精密度和批间精密度均较好，完全符合厂家要求；准确度验证结果显示，与厂家校准品的偏倚为 4.47%，特别与国际参考品相比，偏倚仍然很低（仅-2.72%），说明此项目有很好的溯源性，检测结果准确；线性范围的验证实验显示，血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L；携带污染率≤1%；仪器间比较发现20份全血标本中偏倚≤12.5%有16份，计算得出80%的标本偏倚≤12.5%，符合实验要求。

相比于旧款的半自动Nephstar Plus仪器，Astep Plus 特定蛋白分析仪为全自动，有血清和全血两种模式可选，仪器自动进行结果换算，操作简单，检测速度快（180测试/h），用血量少（仪器吸血量为13 μL），可使用静脉全血管和0.5 mL EP管直接上机检测，特别是直接使用0.5 mL EP管上机检测时，标本最少只需要17μL，特别适合儿科使用。

综上所述，Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的各项指标能达到厂家声明的性能，结果准确、稳定，符合临床质量要求，满足实验室和临床需要。

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