2.2.1动物细胞培养和核移植技术
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2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？
诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。
(二)、体细胞核移植的过程：
P49讨论：
1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏(P49小资料）。
细核受胞M精P卵F活缺性乏也发高育，能但力不。能因用此作，受目体前卵广母泛细采胞用。MⅡ期卵母细
胞做受体。
Hale Waihona Puke 1907年，哈里森（Harrison）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培 养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由 此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养 的基础。之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传 代效率并减少了污染。1923年，卡雷尔（Carrel）设计了卡氏瓶培 养法，扩大了组织生存空间。 1951年， 厄尔 （Earle） 发明了 体外培养动物细胞的人工合成培养基。1951年，波米拉（Pomerat） 设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微 摄影和细胞代谢的研究。1957年，格拉夫（Graff）用灌流技术进 一步提高了细胞悬浮培养的效率。1957年，杜尔贝科（Dulbecco） 等人采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层 细胞培养。单层培养法的出现，对组织培养的发展起了很大的推动 作用。此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。20世纪60年代 后，动物细胞大规模培养技术开始起步，并逐步发展。20世纪80年 代后，随着基因工程和其他细胞工程技术的发展，细胞培养技术已 成为转基因技术、生物制药及其他许多技术的基础，在现代生物技 术中发挥着重要的作用。
比较项目 原理
培养基性质
植物组织培养 细胞的全能性
固体培养基
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基
培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清
培养结果 培养目的
植物体
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或细胞
无病毒植株
分泌蛋白
(四) 动物细胞培养技术的应用
1、大规模的生产生物制品。(病毒疫苗、干 扰素）
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
2、作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、
病理、药理等方面的研究，如用于 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症
及其他疾病提供理论依据。 5、克隆细胞用于研究
二.动物细胞核移植技术和克隆动物 (一)、 动物细胞核移植概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已 经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并 发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最 终发育为动物个体（克隆动物）
2.2.1动物细胞培养和核移植技术
为什么要进行动物细胞培养? 一.动物细胞培养
(一)概念 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单
个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生 长和增殖。
如何进行细胞培养?
P44旁栏
1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分 散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？ 用胃蛋白酶行吗？ 提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质 主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当 pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作 用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养 的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有 活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰 蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，想一想，这是为什么？
培养的动物细胞一般当传代至10～50代左 右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基 础，通常采用传代10代以内的细胞。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类
体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性不容易
(二)、体细胞核移植的过程：
请看教材P48图2-21
思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细
胞作为受体细胞有什么好处？ MⅡ中期卵母细胞 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富， 提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体 现全能性的物质。
思考与探究
2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高 度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了 发育成完整个体的能力，所以，动物细胞 也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱 分化过程了。要想使培养的动物细胞定向 分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使 其分化成所需要的组织或器官。
细胞增殖
细胞悬液
用胰蛋白酶分散
能力强， 有丝分裂
贴接1壁触0代生抑长制以内，保持原正常代二培倍养体核细间蛋型胞的白，物质说质。明主动细要物胞是细
旺盛。分
10代细胞
胞培养适宜的PH
能化低越力养程 容，越度易繁。强洗越培殖动不成，涤物能生细最物、分胞终体培培稀离养养释5、0代细胞传细缓型化代胞慢可培增，能养殖核变
P44寻根问底
胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
(二) 动物细胞培养过程动定物量组的织弹细性胞纤间维隙等中蛋含白有质一，
比物老的•龄组胚动织胎或剪幼碎龄动物的组将定胰细弹织蛋胞性器网和白官络韧酶起 性或来 的胶形 组原成 织蛋具 和白有 器一 官酶。
1、无菌、无毒环境（无菌处理 和添加抗生素目的？更换培养液 的好处？） 2、营养与体内相同。合成培养基：糖、 氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素 等，通常需加入血清、血浆等一些天然成 分 3、。温度和PH，36~37℃、7.2~7.4） 4、气体环境95%空气、5%CO2-维持培养液PH）
植物组织培养和动物细胞培养的比 较
细3胞.体知核细识移胞植拓核技展术移中植能技用术作为受什体么细胞要的选通择常M有ⅡM期Ⅱ的期卵母母细细胞
和胞受做精受卵（体合细子胞）？。早期核移植技术中常用受精卵，后来
基本上用MⅡ期卵母细胞取代了受精卵，主要因为两者的细 胞质环境不同。有人认为重组需要的因子存在于MⅡ期卵母 细胞的胞质中，而在原核形成时这些因子已被降解或用光， 因此，原核扩张后受精卵去核可引起胞质中重组因子缺乏。 成熟促进因子（MPF）是卵母细胞细胞质中重要的胞质影响 因子，MPF的活性在卵母细胞减数分裂的MI期和MⅡ期达到 最高，受精或激活后，MPF迅速灭活，因此，MⅡ期卵母细 胞中MPF活性高，而受精卵中MPF活性低。MPF水平的高低可 影响供体核染色质的状态和复制。MⅡ期卵母细胞细胞核、 细也有胞人质认已为成用熟去，核而合MI子卵做母受细体胞时细，胞可核能、由细于胞合质子尚去未核成时熟一， 其些细早胞 期质发不 育能 必支 需持 的胚 因胎子的随全原程核发的育去，除因而此 被， 去尽 掉管 了，MI而期使卵去母
知识拓展
2.为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用酶消化的
是什么物质？
细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞 群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培 养。 分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的 营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养 时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因 此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时， 分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术 得以实现。 用酶消化的是细胞间基质，细胞间基质主要成分有胶原蛋 白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等成分。用蛋白 酶可使其消化，从而使细胞相互分离。
为7.2—7.4，此 环境下胃蛋白酶 （2.0）没有活 性，而胰蛋白酶 (7.2-8.4)的活
性较高。
•原代培养和传代培养、细胞株和细胞系
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞 悬浮 液
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养 （一般）
传代培养
多数组织细胞固定在表面 生长和分裂。叫做？
P46讨 论
4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存 在什么问题？请你查阅资料，了解这方面 的前沿动态。
研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制 尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形 率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些 问题尚在研究中。
应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模 应用还有一定距离。
1.动知物识细拓胞培展养技术是如何发展起来的？
3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头 名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为 30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目 前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般 为4可础十，以t。。几 利卢吨用，卢辛达而辛的我达国的产奶奶 体量牛 细产 胞很高奶 克，量 隆年 的有高平 奶产均 牛奶水其的平遗遗仅传传为物基质3～ （达基传围内吗本基1）？上础推能请全，广利，说部如用明来果克体理自精隆细牛由 该 心胞。 奶 培再核牛 育与移高， 和植其 饲产技克 养的术公隆 ，克牛 有牛隆具 可自高有能然产高在繁奶产世殖牛的界，卢遗范可辛 得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？
充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境
(三) 动物细胞培养的条件P46
(三)、体细胞核移植技术的应用前景：
1、在畜牧业中 可以加速家畜遗 传改良的进程
2、保护濒危物种
3、医药卫生领 域生产医用蛋白 质及组织器官的 移植 4、了解胚胎发育和 衰老过程；追踪研 究疾病的发展过程 和治疗疾病
(四)、体细胞核移植技术存在的问题：
• 阅读课本P50页
思考与探究
1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低 的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于 培养？思考一下，这是什么道理？ 提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的 关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄 动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物 则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比 老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞 的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易 培养。
诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。
(二)、体细胞核移植的过程：
P49讨论：
1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏(P49小资料）。
细核受胞M精P卵F活缺性乏也发高育，能但力不。能因用此作，受目体前卵广母泛细采胞用。MⅡ期卵母细
胞做受体。
Hale Waihona Puke 1907年，哈里森（Harrison）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培 养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由 此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养 的基础。之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传 代效率并减少了污染。1923年，卡雷尔（Carrel）设计了卡氏瓶培 养法，扩大了组织生存空间。 1951年， 厄尔 （Earle） 发明了 体外培养动物细胞的人工合成培养基。1951年，波米拉（Pomerat） 设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微 摄影和细胞代谢的研究。1957年，格拉夫（Graff）用灌流技术进 一步提高了细胞悬浮培养的效率。1957年，杜尔贝科（Dulbecco） 等人采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层 细胞培养。单层培养法的出现，对组织培养的发展起了很大的推动 作用。此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。20世纪60年代 后，动物细胞大规模培养技术开始起步，并逐步发展。20世纪80年 代后，随着基因工程和其他细胞工程技术的发展，细胞培养技术已 成为转基因技术、生物制药及其他许多技术的基础，在现代生物技 术中发挥着重要的作用。
比较项目 原理
培养基性质
植物组织培养 细胞的全能性
固体培养基
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基
培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清
培养结果 培养目的
植物体
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或细胞
无病毒植株
分泌蛋白
(四) 动物细胞培养技术的应用
1、大规模的生产生物制品。(病毒疫苗、干 扰素）
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
2、作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、
病理、药理等方面的研究，如用于 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症
及其他疾病提供理论依据。 5、克隆细胞用于研究
二.动物细胞核移植技术和克隆动物 (一)、 动物细胞核移植概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已 经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并 发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最 终发育为动物个体（克隆动物）
2.2.1动物细胞培养和核移植技术
为什么要进行动物细胞培养? 一.动物细胞培养
(一)概念 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单
个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生 长和增殖。
如何进行细胞培养?
P44旁栏
1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分 散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？ 用胃蛋白酶行吗？ 提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质 主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当 pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作 用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养 的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有 活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰 蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，想一想，这是为什么？
培养的动物细胞一般当传代至10～50代左 右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基 础，通常采用传代10代以内的细胞。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类
体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性不容易
(二)、体细胞核移植的过程：
请看教材P48图2-21
思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细
胞作为受体细胞有什么好处？ MⅡ中期卵母细胞 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富， 提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体 现全能性的物质。
思考与探究
2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高 度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了 发育成完整个体的能力，所以，动物细胞 也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱 分化过程了。要想使培养的动物细胞定向 分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使 其分化成所需要的组织或器官。
细胞增殖
细胞悬液
用胰蛋白酶分散
能力强， 有丝分裂
贴接1壁触0代生抑长制以内，保持原正常代二培倍养体核细间蛋型胞的白，物质说质。明主动细要物胞是细
旺盛。分
10代细胞
胞培养适宜的PH
能化低越力养程 容，越度易繁。强洗越培殖动不成，涤物能生细最物、分胞终体培培稀离养养释5、0代细胞传细缓型化代胞慢可培增，能养殖核变
P44寻根问底
胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
(二) 动物细胞培养过程动定物量组的织弹细性胞纤间维隙等中蛋含白有质一，
比物老的•龄组胚动织胎或剪幼碎龄动物的组将定胰细弹织蛋胞性器网和白官络韧酶起 性或来 的胶形 组原成 织蛋具 和白有 器一 官酶。
1、无菌、无毒环境（无菌处理 和添加抗生素目的？更换培养液 的好处？） 2、营养与体内相同。合成培养基：糖、 氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素 等，通常需加入血清、血浆等一些天然成 分 3、。温度和PH，36~37℃、7.2~7.4） 4、气体环境95%空气、5%CO2-维持培养液PH）
植物组织培养和动物细胞培养的比 较
细3胞.体知核细识移胞植拓核技展术移中植能技用术作为受什体么细胞要的选通择常M有ⅡM期Ⅱ的期卵母母细细胞
和胞受做精受卵（体合细子胞）？。早期核移植技术中常用受精卵，后来
基本上用MⅡ期卵母细胞取代了受精卵，主要因为两者的细 胞质环境不同。有人认为重组需要的因子存在于MⅡ期卵母 细胞的胞质中，而在原核形成时这些因子已被降解或用光， 因此，原核扩张后受精卵去核可引起胞质中重组因子缺乏。 成熟促进因子（MPF）是卵母细胞细胞质中重要的胞质影响 因子，MPF的活性在卵母细胞减数分裂的MI期和MⅡ期达到 最高，受精或激活后，MPF迅速灭活，因此，MⅡ期卵母细 胞中MPF活性高，而受精卵中MPF活性低。MPF水平的高低可 影响供体核染色质的状态和复制。MⅡ期卵母细胞细胞核、 细也有胞人质认已为成用熟去，核而合MI子卵做母受细体胞时细，胞可核能、由细于胞合质子尚去未核成时熟一， 其些细早胞 期质发不 育能 必支 需持 的胚 因胎子的随全原程核发的育去，除因而此 被， 去尽 掉管 了，MI而期使卵去母
知识拓展
2.为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用酶消化的
是什么物质？
细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞 群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培 养。 分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的 营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养 时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因 此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时， 分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术 得以实现。 用酶消化的是细胞间基质，细胞间基质主要成分有胶原蛋 白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等成分。用蛋白 酶可使其消化，从而使细胞相互分离。
为7.2—7.4，此 环境下胃蛋白酶 （2.0）没有活 性，而胰蛋白酶 (7.2-8.4)的活
性较高。
•原代培养和传代培养、细胞株和细胞系
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞 悬浮 液
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养 （一般）
传代培养
多数组织细胞固定在表面 生长和分裂。叫做？
P46讨 论
4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存 在什么问题？请你查阅资料，了解这方面 的前沿动态。
研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制 尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形 率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些 问题尚在研究中。
应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模 应用还有一定距离。
1.动知物识细拓胞培展养技术是如何发展起来的？
3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头 名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为 30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目 前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般 为4可础十，以t。。几 利卢吨用，卢辛达而辛的我达国的产奶奶 体量牛 细产 胞很高奶 克，量 隆年 的有高平 奶产均 牛奶水其的平遗遗仅传传为物基质3～ （达基传围内吗本基1）？上础推能请全，广利，说部如用明来果克体理自精隆细牛由 该 心胞。 奶 培再核牛 育与移高， 和植其 饲产技克 养的术公隆 ，克牛 有牛隆具 可自高有能然产高在繁奶产世殖牛的界，卢遗范可辛 得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？
充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境
(三) 动物细胞培养的条件P46
(三)、体细胞核移植技术的应用前景：
1、在畜牧业中 可以加速家畜遗 传改良的进程
2、保护濒危物种
3、医药卫生领 域生产医用蛋白 质及组织器官的 移植 4、了解胚胎发育和 衰老过程；追踪研 究疾病的发展过程 和治疗疾病
(四)、体细胞核移植技术存在的问题：
• 阅读课本P50页
思考与探究
1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低 的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于 培养？思考一下，这是什么道理？ 提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的 关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄 动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物 则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比 老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞 的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易 培养。