人溶菌酶在毕赤酵母中的表达及体外抑菌活性研究
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人溶菌酶在毕赤酵母中的表达及体外抑菌活性研究
人溶菌酶是一种能够破坏细菌细胞壁的酶类蛋白,在医学领域被广泛应用于消化系统
疾病和感染性疾病的治疗中。
然而,人溶菌酶的制备技术还存在一些问题,例如制备成本高、生产周期长、难以大规模生产等。
因此,寻找一种高效、便捷的生产方法就显得尤为
重要。
而毕赤酵母优秀的表达系统和相对简单的培养可以为人溶菌酶的生产提供新的思路。
本研究通过构建含有人溶菌酶基因的毕赤酵母表达载体,并通过质粒转化的方式将其
导入毕赤酵母中,以达到在毕赤酵母中表达人溶菌酶的目的。
在完成酵母工程的基础上,
我们对毕赤酵母中表达的人溶菌酶进行了体外抑菌活性的研究。
首先,我们对表达的人溶菌酶进行了酶学鉴定,结果显示表达的蛋白质具有溶菌酶酶
学特性,说明载体成功导入毕赤酵母并表达了人溶菌酶。
接下来,我们研究了不同表达条
件(包括温度、pH值、培养时间)对人溶菌酶表达和活性的影响。
结果表明,在30℃、
pH值为6.5-7.0、培养时间为48小时的条件下,人溶菌酶的表达和活性均能达到最大值。
此外,在表达过程中添加1mmol/L的CaCl2可以提高人溶菌酶的表达量和活性。
最后,我们进行了体外抑菌实验,通过测试人溶菌酶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的
杀菌效果来评价它的体外抑菌活性。
结果显示,在添加人溶菌酶的情况下,大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌的菌落数显著降低,说明表达的人溶菌酶具有较强的体外抑菌活性。