血清总胆汁酸循环酶法测定法

血清总胆汁酸循环酶法测定法
1. 实验原理
胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。

生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。

如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。

（胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD 特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下，和NAD。

如上所述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。

）
2. 标本：
2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会
升高，应注意采血时间。

2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。

应使用新鲜标本。

标本必须避光保存。

3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。

4. 标本运输常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准细菌污染的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒
Good’s缓冲液120mmol/L
3a-羟基类固醇脱氢酶(3a-HSD) 12.5 KU/L
硫代辅酶(Thio-NAD) 6.1g/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品：使用南京威特曼公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪
8. 操作步骤:
8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以南京威特曼公司提供的TBA校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以μmol/L报告。

12. 参考值范围：成年人：<12μmol/L
13. 临床意义:椐报道，急性肝炎患者空腹TBA （F-TBA）和餐后TBA（P-TBA）测定的异常率为100%，平均增高幅度分别是正常高限的13倍和11倍。

证明TBA测定对急性肝炎早期诊断的价值与ALT和AST测定相同。

这些病例的动态观察说明ALT和AST随肝细胞损害的控制很快转为正常，F-TBA测定则随肝功能的恢复逐渐转为正常，而P-TBA的恢复缓慢。

TBA持续较高水平的患者往往慢性归转。

慢性活动性肝炎和肝硬化患者的F-TBA和P-TBA均增高，且幅度较大。

P-TBA测定对轻度肝脏病变、酒精或工业化学品引起的肝细胞损伤的灵敏度优于其他肝功能试验。

血清TBA测定对肝外胆管阻塞和肝内胆汁淤积的诊断，有较高的灵敏度。

14. 线性范围：1.06～90μmol/L。

15. 超出范围结果处理本法的检测范围为 1.06～90μmol/L。

当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。