由黑曲霉引发的单宁酸高效效降解

mM Tris/10mM EDTA，pH 7.5）重悬核酸沉淀。

四、颜色突变体的分离
紫外照射后两天肉眼观察生长在基本培养基平板上的非黑色的 分 生 孢 子 。 纯 色 突 变 被 分 类 为 浅 黄 褐 色 （ fwn ） ， 褐 色
（ brn ），白色（ whi ），灰色（ gry ）或橄榄绿（ olv ）。
Efficient degradation of tannic acid by black Aspergillus species
由黑曲霉引发的单宁酸高效效降解
报告人:--
目录
简介
实验材料 和方法
1.品种和培养条件 2.黑曲霉在含有单宁酸培养基上的分离 3.线粒体DNA RELP鉴定 4.颜色突变体的分离 5.单宁酶基因
结论

1 、与其他霉菌相比，黑曲霉能够利用碳源，在含有高浓 度的单宁酸的培养基中生长是明显的特征。 2 、黑曲霉的表型与其分解单宁酸的能力没有必然的联系。 3 、单宁酶同源基因在不同的黑曲霉中都找到，它们的表 达产物作用于不同单宁酸分子，同时其他的酶也可能参与 了单宁酸的降解。

实验材料和方法


一、品种和培养条件
50种荷兰，英国和印尼野生型黑曲霉菌株，在非选择培养基中
分离出黑曲霉，47种黑曲霉的菌种保藏菌株和相关曲美。在基本
培养基或完全培养基中培养，并向内补充1mg/L硫酸锌，硫酸亚铁， 氯化锰和硫酸铜。液体完全培养基中补充不同浓度的单宁酸，酸
性越强的单宁酸会阻止琼脂凝固。含有5%单宁酸的培养基PH3.3,


五、单宁酶基因
A . n i g e r 单 宁 酶 基 因 在 G e n b a n k 进 行 同 源 性 序 列 查 找 。 A. fumigatus Af293的序列在.网站基因组研究 所获得。A. nidulans FGSC-4a在序列. 网站获得.......
结果分析
1.单宁酸的利用 2.单宁酶
讨论
背景
黑曲霉菌丛呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈 黑、黑褐色，平滑或粗糙。对紫外线以及臭氧的耐性强。菌丝发达， 多分枝，有多核的多细胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁从膨大的 菌丝细胞（足细胞）上垂直生出；分生孢子头状如“菊花”。黑曲霉 的菌丝、孢子经常呈现各种颜色，如：黑、棕、绿、黄、橙、褐等， 菌种不同，颜色也不同。
后在MM上分离纯化所有漂浮的曲霉菌落。估测局部孢子密度并根 据线粒体单体型对所有菌株进行分类。
三、线粒体DNA限制性酶切片段长度多态性鉴定：
所有黑曲霉菌株，无论是通过培养物收集还是天然分离获得的， 均通过线粒体多态性单体型基础进行分类。通过苯酚/氯仿萃取总
核酸：过夜±0.1 克菌丝体丛，生长在液体 CM ，被用液氮冷冻在
黑曲霉能够利用植物单宁酸作为碳源，同时黑曲霉具有安全性，因此 广泛应用于有机酸、酶的生产以及食品发酵工业。
简介
本文的研究明了了：
1、 能够生长在高浓度的单宁酸环境中是黑曲霉独有的特性，同 时我们可以根据这一特性对它进行定性和定量的分离。 2 、 黑曲霉黑色素的产生与它降解单宁酸的能力没有什么必然的 联系。 3、在相关物种检测中， A. niger 基因组中包含许多同系物都有 的单宁酶基因。本文还讨论黑曲霉它们这种独特的生态位与其高 效降解单宁酸的能力的联系。
20%单宁酸的培养基 PH2.65. 天然黑曲霉菌株的标准分离是含有 20%单宁酸的完全培养基中进行的，并且在30℃下培养。
二、黑曲霉在单宁酶培养基中分离：
收集土壤和腐殖质上层样品（5~50g），用作接种物接种 于CM+tan培养基上。样品储存于5℃下，可在两周内用于分离。所
使用的新鲜土壤或稀释物等份试样取决于其中繁殖体的密度。5天
1.5ml EP管中，并在0.5ml的EP管中用杵破坏其大小，移入更大的 小瓶中。加入预热的提取缓冲液（ 0.5M NaCl ， 10 mM Tris-
HCl ，10 mM Na2EDTA， 1% SDS， pH 7.5 ）于悬浮液中，在65
℃孵育30分钟。

限制性酶切：核酸然后用1:1酚：氯仿萃取一次和用24： 1的氯仿：异戊醇萃取一次。异丙醇用来沉淀核酸，沉 淀用 70 ％的乙醇洗涤，最后用德米水或 TE 缓冲液（ 10
表中所有的黑曲霉都能在含有20%单宁酸的培养基中生长而非黑曲霉则不能 在含有5%的单宁酸培养基中生长。这表明在含有20%单宁酸培养基中生长是 黑曲霉所特有的能力。
不同颜色的黑曲霉均能在含有20%的单宁酸培养基中生长，这说 明黑曲霉的表型与其分解单宁酸的能力没有必然的联系。
此图为不同颜色的突变菌株 在含有高浓度单宁酸的培养 基中的生长情况。