实验4 病原性球菌
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作用：
乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→ 菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。
胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠 道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。
病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色
EMB平板
肺炎链球菌 ＋（黄色） ＋（澄清） +
+
甲型链球菌 －（紫色） －（混浊） -
-
ASO试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ原理
对照血清
溶血素O
病人血清
抗O抗体 多余抗O抗体
乳胶颗粒 凝集反应
SLO 乳胶试剂 SLO
病人血清
ASO操作方法 (间接凝集试验)
混匀，3min 混匀，2min
对照（正常）血清
抗“O”试验——中和试验
取喉拭子标本中的菌落
• 革兰染色
药敏试验
• 用接种环取金葡菌菌落， 均匀涂布于营养琼脂平板。
青霉素
• 用无菌镊子镊取无菌抗菌素 滤纸片，紧贴于琼脂表面。 链霉素
• 置37℃培养箱16－18小时 后，取出，观察记录结果
（透明抑菌圈宽度）
庆大霉素 对照
血浆凝固酶实验（玻片法）
取一滴生理盐水与洁净的玻片上 用接种环挑取一环细菌于生理盐水中并制成
+
耐热DNA酶试验
+
甘露醇发酵试验
+
致病力
强
表皮葡萄球菌 白色 – – – –
弱或无
喉拭子/脓汁标本的处理
脓汁或 喉拭子
涂片、革兰染色、镜检
血琼脂平板
37℃ 24h
观察菌落特征 及溶血情况
生化反应、致病力试验及药敏试验
操作：
取脓汁标本中的两种菌落
• 革兰染色 • 接种甘露醇发酵管 • 药敏试验 • 血浆凝固酶实验（玻片法）
意义：风湿热及其活动性的辅助诊断
粪便标本肠道致病菌鉴别流程
标本
鉴别培养基 （SS培养基）
生化反应 （双糖管）
血清学鉴定
SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落)
接种双糖管
培养,观察
SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基
成分：
基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌 绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）
病原性球菌
G+ 病原性球菌 （化脓性球菌）
G-
葡萄球菌 链球菌 肠球菌
脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌
病原性球菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneumoniae
N.meningitidis
N. gonorrhoeae
葡萄球菌的鉴别
金黄色葡萄球菌
色素
金黄色
α-溶血素
+
血浆凝固酶试验
浓菌悬液 加一环血浆混合，静置10s 观察结果：出现明显凝集者为阳性；否则为
阴性
链球菌的鉴别
不溶血
菌落小、半透明、 表面光滑、边缘整齐
完全溶血
菊糖发酵实验 胆汁溶菌实验
不完全溶血 草绿色溶血环
丙型链球菌
乙型链球菌 肺炎链球菌 甲型链球菌
菊糖发酵试验
胆汁溶菌试验
Optochin 试验
动物 试验
病原菌:透明,无色
非致病菌:紫黑色
双糖管
▼ 观察：
上层：乳糖,Fe2+ 固体
下层：葡萄糖 半固体
致病菌红色
发酵乳糖
非致病菌黄色
H2S试验
发酵葡萄糖(产酸产气)及动力
指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红）
双糖管接种方法
穿刺—斜面接种法
The End
Thanks
实验四 病原性球菌
Content
示教
病原性球菌(金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、 肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌)形态和染色性
葡萄球菌的鉴别(培养、血浆凝固酶、甘露醇发酵等） 链球菌的培养特性 肺炎链球菌与甲型链球菌区别（培养、胆汁溶菌、菊糖发酵）
操作 抗“O”试验（ASO） 脓汁/喉拭子标本的分离和鉴定 溶菌酶测定结果观察 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——划线分离
乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→ 菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。
胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠 道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。
病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色
EMB平板
肺炎链球菌 ＋（黄色） ＋（澄清） +
+
甲型链球菌 －（紫色） －（混浊） -
-
ASO试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ原理
对照血清
溶血素O
病人血清
抗O抗体 多余抗O抗体
乳胶颗粒 凝集反应
SLO 乳胶试剂 SLO
病人血清
ASO操作方法 (间接凝集试验)
混匀，3min 混匀，2min
对照（正常）血清
抗“O”试验——中和试验
取喉拭子标本中的菌落
• 革兰染色
药敏试验
• 用接种环取金葡菌菌落， 均匀涂布于营养琼脂平板。
青霉素
• 用无菌镊子镊取无菌抗菌素 滤纸片，紧贴于琼脂表面。 链霉素
• 置37℃培养箱16－18小时 后，取出，观察记录结果
（透明抑菌圈宽度）
庆大霉素 对照
血浆凝固酶实验（玻片法）
取一滴生理盐水与洁净的玻片上 用接种环挑取一环细菌于生理盐水中并制成
+
耐热DNA酶试验
+
甘露醇发酵试验
+
致病力
强
表皮葡萄球菌 白色 – – – –
弱或无
喉拭子/脓汁标本的处理
脓汁或 喉拭子
涂片、革兰染色、镜检
血琼脂平板
37℃ 24h
观察菌落特征 及溶血情况
生化反应、致病力试验及药敏试验
操作：
取脓汁标本中的两种菌落
• 革兰染色 • 接种甘露醇发酵管 • 药敏试验 • 血浆凝固酶实验（玻片法）
意义：风湿热及其活动性的辅助诊断
粪便标本肠道致病菌鉴别流程
标本
鉴别培养基 （SS培养基）
生化反应 （双糖管）
血清学鉴定
SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落)
接种双糖管
培养,观察
SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基
成分：
基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌 绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）
病原性球菌
G+ 病原性球菌 （化脓性球菌）
G-
葡萄球菌 链球菌 肠球菌
脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌
病原性球菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneumoniae
N.meningitidis
N. gonorrhoeae
葡萄球菌的鉴别
金黄色葡萄球菌
色素
金黄色
α-溶血素
+
血浆凝固酶试验
浓菌悬液 加一环血浆混合，静置10s 观察结果：出现明显凝集者为阳性；否则为
阴性
链球菌的鉴别
不溶血
菌落小、半透明、 表面光滑、边缘整齐
完全溶血
菊糖发酵实验 胆汁溶菌实验
不完全溶血 草绿色溶血环
丙型链球菌
乙型链球菌 肺炎链球菌 甲型链球菌
菊糖发酵试验
胆汁溶菌试验
Optochin 试验
动物 试验
病原菌:透明,无色
非致病菌:紫黑色
双糖管
▼ 观察：
上层：乳糖,Fe2+ 固体
下层：葡萄糖 半固体
致病菌红色
发酵乳糖
非致病菌黄色
H2S试验
发酵葡萄糖(产酸产气)及动力
指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红）
双糖管接种方法
穿刺—斜面接种法
The End
Thanks
实验四 病原性球菌
Content
示教
病原性球菌(金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、 肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌)形态和染色性
葡萄球菌的鉴别(培养、血浆凝固酶、甘露醇发酵等） 链球菌的培养特性 肺炎链球菌与甲型链球菌区别（培养、胆汁溶菌、菊糖发酵）
操作 抗“O”试验（ASO） 脓汁/喉拭子标本的分离和鉴定 溶菌酶测定结果观察 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——划线分离