激素测定方法

激素测定方法
激素的测定方法
参考王学奎（2015）《植物生理生化实验原理与技术》一书中的高效液相色谱法，以2016年采自尚志市水稻田的野慈姑球茎为材料，6-12月每个月测定一次野慈姑球茎内CA3和ABA的含量。

试验材料的处理
称取1-2g样品，在冰浴下研磨匀浆，加入80%的预冷甲醇20ml，保鲜膜密封，在4℃冰箱里冷浸过夜。

浸提液抽滤，10ml甲醇润洗研钵2次，过滤后与浸提液合并，40℃下减压蒸发至没有甲醇残余。

剩余水相完全转移到三角瓶中，用30ml石油醚萃取脱色2次，弃去醚相。

加0.01gPVPP（交联聚乙烯吡咯烷酮，crosslinked polyvinylpyrrolidone），超声30mim，抽滤用30ml，乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，40℃下减压蒸干。

用甲醇（色谱纯）溶解残留物并定容至2ml，经0.45μm微孔滤膜过滤得待测液，保存于4℃冰箱中。

测定
（1）标准曲线的绘制取一定量GA3和ABA标准品，用甲醇（色谱纯）溶解，配制成不同浓度的溶液，点击“运行控制”菜单，再选择“运行方法”，手动或自动进样器进样10-30μL，进行液相检测分析。

在一定浓度范围内，4种激素峰面积与浓度呈良好线性关系时，即可绘制标准曲线。

（2）取同样体积的待测样品，进样。

待样品峰全部出完，冲洗30min待基线平直后，即可分析下一个样品。

（3）定性根据标准品的保留时间判断样品中的对应激素峰。

选择与已知标样具有相同保留时间的样品的峰面积，并根据对应的标准曲线查出对应激素的浓度ρ（μg/mL），然后根据下式计算鲜样（FW）中各激素的含量：
样品中激素含量（μg/kg FW）=ρ·V T
m·V S
式中：ρ为根据样品峰面积从标准曲线查得的对应激素浓度
（μg/mL）；V T为待测样总体积（mL）；V S为进样量（μL）；m 为样品鲜质量（g）。