疫苗生产工艺流程图
病毒性疫苗制造技术
病毒性疫苗制造技术任务一灭活苗的制造流程菌种的选择（强毒株) → 菌液培养→ 灭活↓↓配苗（5份菌液+1份铝胶配苗) ←浓缩工序一菌种与种子培养选取毒力强、免疫原性好的1～3个品系菌株，按规定定期复壮和鉴定，将合格菌种增殖培养并经无菌检验、活菌计数达到标准后作为种子液。
种子液保存于2～8℃冷暗处，在有效期内用于菌苗生产种子使用。
大肠杆菌病的菌种应采集动物心血、腹水、肝渗出物、气囊附着物或正常动物的肠道内容物作为接种物。
如用含大肠杆菌的病料，首先对大肠杆菌进行分离、鉴定，符合要求方可作为菌种使用。
工序二菌液的培养用于规模化细菌培养的方法很多，有手工式、机械化或自动化等方式。
可供菌体培养的方法有：固体表面培养法、液体静置培养法、液体深层通气培养法和透析培养法。
一般固体培养易获得高浓度细菌悬液，含培养基成分少，易稀释成不同的浓度，但生产量较小。
因此，大量生产疫苗时常用液体培养法。
实例大肠杆菌的菌液培养方法(1)．将生化结果典型的菌种接种于伊红美兰琼脂平板或麦康凯琼脂平板上，置37℃温箱中培养18～24h，挑取单个典型菌落接种于琼脂斜面，置37℃温箱中培养18～24h，经显微镜检查无杂菌污染者，即可作为种子培养物。
(2)．取5ml马丁肉汤加入琼脂斜面洗下菌苔作为一级种子，用灭菌吸管按5%的量将一级种子接种于马丁肉汤中，置37℃培养18～24h后作为二级种子。
(3)．二级种子可以接种到营养琼脂培养基或马丁肉汤中做进一步扩大培养。
如接种到营养琼脂培养基表面，37℃培养24～48h后，加入灭菌生理盐水，用灭菌接种环或特制的刮子将菌苔刮下，倾入灭菌的离心管中，低速离心5min (500r/min)，使其中可能掺杂的琼脂块下沉。
吸取上层细菌悬浮液加入盛有玻璃珠的灭菌瓶中，用手或振荡器振荡30min，使细菌均匀分散,取少量菌液装于灭菌试管中供计数用，其余细菌将灭活(强毒细菌须在杀菌后，再行计数)。
如接种于马丁肉汤培养基，经37℃培养24～48h后，直接取少量菌液供计数用，其余细菌则灭活。
新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程
新城疫冻干疫苗生产工艺流程1 生产用毒种制备1.1 毒种繁殖将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。
选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。
将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。
注明收获日期,毒种代数等。
1.2 毒种鉴定1.2.1 病毒含量按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。
1.2.2 纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。
1.3 毒种保存在-15℃以下保存,应不超过1年。
1.4 毒种继代应不超过3代。
2 制苗材料选择选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。
3 制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。
3.2 孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。
60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。
3.3 收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。
疫苗生产工艺流程图
疫苗⽣产⼯艺流程图
鸡胚培养灭活疫苗⽣产⼯艺流程
蛋库洗蛋接毒鸡胚前孵化
熏蛋后孵化冷蛋（4℃）收获病毒中间品检验灭活抗原保存4℃超滤乳化配苗浓缩装箱贴标轧盖压塞分装⼊库2-8℃灭菌⽩油标签
灭菌粗洗
清洗
胶塞
铝盖
配制灭菌照蛋
中间品检验
病毒液暂存-15℃
化苗照蛋灭菌
塑料瓶
精洗
粗洗
精洗
成品检验
细胞培养灭活疫苗⽣产⼯艺流程
蛋库洗蛋接毒
鸡胚孵化熏蛋转瓶培养38.5±1℃
收获病毒中间品检验灭活制细胞悬液转瓶培养38.5±1℃
照蛋
转瓶灭菌
晾⼲精洗粗洗培养液
冷库-15℃解冻2-8℃病毒液暂存-15℃
化苗抗原保存4℃乳化配苗浓缩中间品检验
分装灭菌⽩油粗洗
胶塞
配制灭菌灭菌
塑料瓶
精洗
粗洗
精洗
装箱贴标轧盖压塞⼊库2-8℃标签
灭菌清洗
铝盖
成品检验
菌种培养灭活疫苗⽣产⼯艺流程菌种发酵罐培养
收毒中间品检验
灭活2-8℃种⼦培养培养基
灭菌抗原保存4℃
乳化配苗浓缩
分装灭菌
⽩油粗洗
胶塞
配制灭菌灭菌
塑料瓶
精洗
粗洗
精洗
装箱贴标轧盖压塞⼊库2-8℃标签
灭菌铝盖
成品检验
清洗
爱拼才会赢。
疫苗生产流程
疫苗生产项目简介
2、圆弧转角； 、圆弧转角；
疫苗生产项目简介
3、单圆弧收边； 、单圆弧收边；
疫苗生产项目简介
4、可调式地轨+PVC地面； 、可调式地轨 地面； 地面
44 75
疫苗生产项目简介
5、双层玻璃观察窗； 、双层玻璃观察窗；
疫苗生产项目简介
6、暗架龙骨吊顶； 、暗架龙骨吊顶；
C
A
A B B
疫苗生产项目简介
3、设计中要把节约和合理利用能源放在重要 位置加以考虑。积极采用节能措施， 位置加以考虑。积极采用节能措施，尽量选用 节能工艺和设备，充分利用地下资源， 节能工艺和设备，充分利用地下资源，搞好水 的循环利 用。 设计中要精打细算， 4、 设计中要精打细算，把有限的资金用在关 键设备上，使资金使用更加合理化。 键设备上，使资金使用更加合理化。 5、严格按照国家环保法和有关文件精神搞好 “三废”治理和职业安全卫生设计工作。 三废”治理和职业安全卫生设计工作。
疫苗生产项目简介 生产过程举例１ 一. 生产过程举例１：
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介 二、生产过程举例２： 生产过程举例２
发 酵
安全/抑制有效病原体
收集/灭活
安全/尤其产生不稳定病毒
加 工
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质 在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
配制和灌装
疫苗生产项目简介
疫苗生产项目简介
• 3、细胞培养法 • 不同的病毒选用相应的敏感细胞，采用转瓶培养 不同的病毒选用相应的敏感细胞， •
、多层培养、微载体培养或悬浮搅拌培养等方法, 多层培养、微载体培养或悬浮搅拌培养等方法, 先大量增殖细胞，然后接种一定量的病毒, 先大量增殖细胞，然后接种一定量的病毒,继续培 养适当时间时，冻融细胞后，离心收获上清。 养适当时间时，冻融细胞后，离心收获上清。 以上病毒大量生产后可制作病毒疫苗（ 以上病毒大量生产后可制作病毒疫苗（死疫苗或 减毒活疫苗）， ），也可用来作干扰素诱生剂或提取 减毒活疫苗），也可用来作干扰素诱生剂或提取 病毒表面抗原成分。 病毒表面抗原成分。
乙脑减毒活疫苗的生产工艺流程
乙脑减毒活疫苗的生产工艺流程《乙脑减毒活疫苗的生产工艺流程》一、原料的准备乙脑减毒活疫苗的生产需要以下主要原料：鸡蛋、活病毒、细胞培养基和其他辅助试剂。
首先需要对原料进行严格的筛选和检验，确保其符合生产要求。
二、活病毒的培养1.细胞培养：将特定细胞株接种在培养基中，提供适合生长的环境。
细胞培养柔箱中要坚持无菌操作，保持培养环境的纯净。
2.病毒接种：将乙脑病毒接种至培养基中，供其在细胞中复制和繁殖。
通过观察病毒复制的情况，选择最佳的繁殖时间。
三、病毒的扩增和收获1.细胞破碎：将繁殖后的细胞进行破碎，释放出其中的病毒。
通过离心等操作，获取病毒上清液。
2.提取和纯化：对上清液进行提取和纯化步骤，进行多次离心和过滤操作，去除杂质和细胞碎片，获得高纯度的病毒液。
四、病毒的灭活和减毒由于乙脑病毒具有高度的传染性和病原性，为了保证乙脑减毒活疫苗的安全性，需要进行灭活和减毒处理。
通常采用化学灭活或选择性传代的方法，消除病毒活性，并保留免疫原性。
五、稳定剂的添加和包装在减毒后的活疫苗中添加稳定剂，以防止疫苗在运输和储存过程中的失效。
然后将疫苗注入适当的容器中，常见的是玻璃瓶或注射器。
六、灭菌和质量检测对疫苗进行灭菌处理，以确保产品的无菌性。
然后对疫苗进行一系列的质量检测，包括病毒灵敏度试验、生物学安全性评价、免疫原性评价等。
七、包装和储存将灭菌后的疫苗进行最终的包装，通常采用密闭的包装方式，以保证产品的安全性和有效性。
然后将包装好的疫苗储存于恒温的冷藏环境中，确保疫苗的长期保存。
总结：乙脑减毒活疫苗的生产工艺涉及到多个环节，包括原料准备、活病毒培养、病毒扩增和收获、灭活和减毒、稳定剂添加和包装、灭菌和质量检测、包装和储存等。
每个环节都需要严格的操作和控制，以确保乙脑减毒活疫苗的质量和安全性。
疫苗的研发技术路线和生产工艺流程
疫苗的研发技术路线和生产工艺流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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1. 初步研究阶段。
疫苗制备工艺
灭活疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗
基因工程亚 蛋白质疫苗 单位疫苗
基因缺失疫 核酸疫苗 苗
载体疫苗 核酸疫苗
多糖疫苗
疫苗制备
概述
组分疫苗
是用单一组分制备的疫苗。
类毒素疫苗：用丧失毒性而保留免疫原性的毒素所制 成的疫苗，如白喉类毒素、破伤风类毒素
亚单位疫苗：病原微生物的表面抗原成分制成的疫苗， 如乙肝表面抗原疫苗。
• 物理方法，化学方法
疫苗制备
灭活技术
一、灭活技术
•物理方法灭活
• 加热：使蛋白质变性失活，病原体失去传染能 力。菌毒液于水浴（56－60℃），维持1小时。 受热要均匀，注意不同病原体的耐热性。如霍 乱疫苗、布氏菌制剂、假单胞杆菌疫苗等。
• 紫外线：使核酸形成TT二聚体，失去遗传功能。 最大限度保留了完整抗原性和免疫原性，但灭 活程度不完全，有光复活的可能性，未在实际 中应用。
疫苗制备
灭活技术
化学方法灭活
一、灭活技术
• 甲醛，β-丙内酯，磷酸三丁酯，丙酮，乙烯亚胺， 双乙烯亚胺，戊二醛，硫柳汞。
• 甲醛灭活：破坏蛋白质的结构，使核酸烷基化。过 程复杂，有时抗原性受到破坏，但病原体仍然存活。 在实际操作中要严格控制各种条件，如温度、浓度、 时间和pH等，保证疫苗的安全和稳定性。
•体外减活 •温敏性突变 •化学诱变
疫苗制备
减活技术
体外减活技术
体外减活：连续传代减活。病毒可在单一宿主 中反复传代，也可在异源宿主中繁殖连续传代
登革热病毒在狗肾或非洲绿猴肾细胞上系列传 代减毒，达到人用安全性。
卡介苗，传代230代，得到一株致病力完全丧失 的活菌株。
疫苗制备
减活技术
冷适应性减活技术
病毒类疫苗的无菌生产工艺布局
摘要：结合病毒类生物疫苗的生产工艺流程及设备分析，总结了不同生产工艺步骤的洁净室级别，针对不同生产工艺要求的病毒类疫苗的无菌生产，对其工艺布局进行了分析和优化，提出了经济、有效、可行性较高的工艺布局模式。
关键词：无菌生产；病毒类疫苗；工艺布局；生物反应器0引言无菌是生物技术中的一个重要概念。
培养基、发酵设备等只有处于无菌前提下，微生物接种后，才能实现纯种培养，最终得到所需的产品。
生物疫苗可分为细菌类疫苗和病毒类疫苗。
细菌类疫苗以培养、发酵工艺为主，病毒类疫苗以细胞培养、病毒扩增工艺为主，这两类疫苗的工艺生产具有相似性。
本文针对不同生产工艺的、非最终灭菌的病毒类生物疫苗产品，对其生产车间的工艺布局进行了分析，提出了更经济、更高效、更合理的工艺布局模式。
1生产工艺流程及设备分析1.1工艺流程分析病毒类疫苗的生产流程（图1）可以分为以下几个阶段：（1）细胞复苏培养及扩增，该生产过程为无毒生产过程；（2）细胞扩增到一定程度后进行细胞洗涤，并加入病毒液接种，然后带毒培养，并不断洗涤；（3）细胞培养好后，收集疫苗液；（4）如果制作灭活疫苗则需要进行病毒灭活、制作过程，如果生产活疫苗则不需要该过程；（5）配制疫苗原液；（6）分装入库。
同时，病毒接种前需要经过复苏培养及扩增阶段。
图1病毒类疫苗生产流程1.2工艺设备分析目前，病毒类生物疫苗的原液生产工艺主要包括：转瓶培养、细胞工厂培养以及生物反应器培养（罐培养）等。
转瓶培养技术是传统的细胞培养技术，工艺相对落后。
现国内各企业通过工艺的优化升级，逐步将传统的转瓶培养工艺升级为细胞工厂培养或者生物反应器培养工艺。
细胞工厂培养技术，对贴壁细胞的大规模培养有着明显优势。
首先，采用细胞工厂培养工艺，适用于扩大生产，无需添加生产设备，大大缩短了从研发到生产的时间。
其次，细胞工厂培养工艺的一次性投入很少，无需大型昂贵设备，也无需复杂的管道设计。
此外，细胞工厂培养工艺能够灵活地根据市场需求，安排生产规模。
疫苗发酵生产工艺流程
疫苗发酵生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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②发酵罐培养：将种子液接入发酵罐，控制适宜的温度、pH值、氧气供应等条件，进行大规模菌体繁殖，产生抗原蛋白。
③过程监控：实时监测发酵参数，如溶解氧、糖浓度、代谢产物等，调整培养条件以优化抗原表达。
④收获与破碎：发酵达到峰值后，终止发酵过程，收集菌体，通过物理或化学方法破碎细胞，释放内含的抗原蛋白。
⑤初步纯化：使用离心、过滤等手段去除细胞碎片、杂质，获取粗提液。
⑥精细纯化：采用层析、超滤、电泳等技术，对粗提液进行多步纯化，提高疫苗成分的纯度和浓度。
⑦配制与佐剂添加：将纯化后的抗原与适宜的佐剂混合，佐剂可增强免疫反应，制备成疫苗半成品。
⑧灭活与浓缩（如适用）：对于需要灭活处理的疫苗，进行化学或物理灭活，之后进行浓缩，确保疫苗效力与安全性。
⑨灌装与封口：将疫苗半成品无菌灌装至适宜容器，如玻璃瓶或预充式注射器，并进行封口密封。
⑩终检与包装：完成的疫苗产品需经过严格的质量检验，包括效力、安全性和稳定性测试，合格后进行包装，准备分发。
禽流感疫苗的制作
工作步骤：一、病毒分离
• 选取相应的器官组织 进行摘取。 • 加广谱抗生素 • 进行组织捣碎 • 反复冻融 • 检测细菌。
病毒提取液接种
• 选用合适 （9~11）日 龄的鸡胚和 优秀的SPF 胚 • 选择恰当的 注射部位 （尿囊腔等）
制作有严格的条件要求
检测
• 鸡胚内不能有菌 • 病毒要进行鉴别,要除 去可能其它病毒 • 要注意H5病毒对鸡胚 的致死时间有时与其 它普通病毒不一致。
世界范围内的禽流感流行和病毒在传播过程中不断地当地 的毒株进行重组或基因交换使得禽流感毒株过二到四年就有 一个变化，使得以前有效的疫苗变得无效。
及早地分析当地的毒株并进行毒株测序和利用新的野毒株检测疫 苗有效性是一种较为可行的方法（比如有的学者用攻毒试验发现H5re— 1、re—5株对08年的禽流感毒株保护率低于8%。这也就是08年为什么出 现打苗的鸡也有大批死亡的原因。用老百姓的话说：“病毒变异了，以 前的苗不顶事了”。）
种鸡场和商品代养殖场的措施
• 1、各场之间相互交流，选择质量好合格的 副作用小的疫苗厂的产品。 • 2、有疾病信息及早交流。避免都受疫病的 伤害。 • 3、有条件的场，可按国家规定在有相关硬 应条件的情况及时分离和鉴定新毒株。也 可请有关科研机构、定点疫苗厂及时做这 些工作。
疫苗生产需要一些严格的条件和相关的国家规定 （附参考图片）
油苗的制作
• 水相与油相比例：1： 3 • 水相中加吐温 • 油相为白油、司本和 硬脂酸铝 • 用胶体磨将水相与油 相混合成胶体。 • 检测，离心应不分层 • 灭活水相检测 • 血凝价检测：胶体金 试纸法 微量血疑试验 法 • 胚胎法。盲传三代应 正常存活。 • 无抗体活鸡或SPF鸡 检测，应正常存活。 • 油苗检测，见《生物 制品规范》。
08_疫苗制造基本程序
在纯化区域的多个小屋子里，我多次穿过一些特 殊的筛子、管道，并被放在高速离心机中旋转了很久， 我逐渐被浓缩，而那些灭活剂和鸡蛋中的杂质等就被 陆续去除掉了。期间工作人员还往我身边加入了一种 叫做裂解剂的特殊物质，使我由一个完整的病毒分开 成碎片，我身上的核酸和一些可能会引起人体不良反 应的大分子蛋白以及裂解剂经进一步的纯化被去除， 主要保留了能引起人体免疫反应的表面抗原有效成分 和部分的内部抗原蛋白。在除菌过滤过后，我就有了 一个新的身份：病毒原液。接下来我被按照一定的比 例用注射用水进行稀释，并加入适量的盐分，形成了 疫苗半成品
（一）鸡胚选择
受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用抗生素药物的非免疫鸡群，以 免受母源抗体的干扰和残留抗生素的影响。 从受精卵入孵开始至培养全过程都应保持无菌，要求一定的温度和 湿度，且需不断翻动，然后选择。选择一定日龄、发育正常的胚用于接 毒培养。
一、病毒性禽胚培养疫苗制造
鸡胚选择
种毒与毒种继代 接毒与收获 配苗
三、病毒性动物组织疫苗制造
动物选择 种毒与接种 观察与收 获 配苗
（三）观察与收获
动物在接种感染后应每天观察和检查规定的各项指标，指标或项目因 不同病毒而异。常规观察、检查的项目如食欲、精神和活动状态、体温、 粪便、尿和血液变化等。 根据观察的征象和检查的结果选出符合要求的发病动物按规定方式剖 杀，采取收集含毒量高的器官组织。如猪瘟结晶紫疫苗采取发病猪的血液 制备；兔出血症组织灭活疫苗采集病兔肝脏生产；狂犬病疫苗利用发病羊 的羊脑组织制造。
我的今生：与家族决裂
要制备大量的流感疫苗，首先必须繁殖大量的流感病 毒。经过近百年的探索，科学家发现我非常适合在鸡胚的 尿囊腔中繁殖。 接种机将非常少量的我准确地注入鸡胚的尿囊腔中，然 后一车车的鸡胚被放入无菌、恒温的孵化间，我就悄悄地 在里头快速繁殖着……三天过后，我已经繁殖出很多很多 的病毒了。 此后，大量的我被合并在一起并转移到灭活间，一种 特殊的灭活剂被加入到容器中，在不断搅拌的过程中我慢 慢失去了知觉，沉沉睡去……大约一周过后，我从噩梦中 惊醒，却赫然发现自己已经完全失去了活性，无法使人致 病也无法繁殖和生长了！
新城疫油苗和冻干苗疫苗的 生产工艺流程
加塞 压盖 物理性状 安全检验 无菌检验 外源病毒检验 效力检验 *后孵化及照蛋
*冷ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ蛋
铝盖 分装瓶
纯化水粗洗 注射水洗 照蛋时间 培养温湿度 冷蛋时间 冷蛋温度
*隧道烘箱灭菌
清洗 *灭菌
新城疫灭活疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭活生理盐水作适当稀释（如10-4或10-5），尿 囊腔内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml。选接种后72～120小时之间死 亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液（尿囊液及羊水），装于灭菌容 器内。将检验无菌，且对1%鸡红细胞凝集价在1：640（微量法1： 512）以上的鸡胚液混合，定量分装于安瓿瓶中，冷冻保存。注明收获 日期、毒种代次等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚 0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存，应不超过6个月。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好9～10日龄的易感鸡胚作为制苗材料。
新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔 内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕 明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无 菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分 装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚 0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检 验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外 源病毒检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备 3.1接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿 囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。 3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚 弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120 小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。
【兽医生物制品技术课件】病毒性疫苗生产工艺流程
病毒性疫苗 生产工艺流程
制备生产毒种
毒种
制造兽医生物制品的基础
质量的优劣 直接关系到 制品的质量
合格的种子是 生产高质量 制品的前提 和重要保证
制备生产毒种
兽医生物制品的生产与检验用菌(毒）种实行 种子批和分级管理制度
原始种子
01
基础种子
种子
02
03
生产种子
制备生产毒种
原始种子
由中国兽医药品监察所或其委 托的单位负责保管
配苗
病毒性灭活疫苗
病毒液检验合格后先加入灭活剂进行灭活， 制成灭活的病毒液，然后进行配苗。
传统的病毒灭活苗
氢氧化铝胶佐剂
白油佐剂
蜂胶佐剂
配苗与分装
配苗
氢氧化铝胶佐剂 蜂胶佐剂 白油佐剂
病毒液灭活后加入适量，并混匀即可
要加入乳化剂，将灭活的病毒悬液与等量的 含有一定比例吐温、司盘的白油进行乳化
乳化过程
基础种子
由中国兽医药品监察所或其委托的 单位负责制备、鉴定、保管和供应
生产种子 由生产企业制备、鉴定和保管
建立 种子批
病毒接种、培养和收获
禽胚
01 动物
02
进行病毒的培养，收获病毒
03 细胞
病毒液检验
收获的病毒进行相关检验
检验的技术依据
检验合格后进行制苗
配苗与分装
配苗
配苗是向病毒液中加入合适的保护剂
加塞
加铝盖
主要工序中直接操作人员的姓名
配苗与分装
分装
分装后 制品
每批 亚批
在分装过程的前、中、后三个阶段任意抽取样品 送质量检定部门检定
冻干
如果是病毒性活疫苗，分装后还 需要放入冻干机中进行冻干。 冻干完毕，开箱取出产品， 将干燥的产品进行密封保存。
疫苗生产技术
是用弱毒、但免疫原性强的病原微生物及代谢产物， 经培养繁殖，或接种于动物、鸡胚、组织、细胞生 长繁殖后制成的疫苗。 已丧失其致病力，但仍保留一定的剩余毒力、免疫 原性和繁殖能力。
疫苗接种人体后，使肌体产生一次轻微的自然感染 过程，但不会发病，而获得免疫力。 在体内作用 时间长，接种次数少，免疫效果好。
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基因重组疫苗
• 利用现代基因工程技术将有效的特异性抗 原基因插入易于增殖的载体，在载体增殖 时可表达有效特异性抗原，取之作为疫苗。 如基因工程乙肝疫苗。
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华兰生物脑膜炎球菌多糖疫苗
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华兰生物基因重组乙肝疫苗来自1213• 合成疫苗— 通过化学分解或有控制的蛋白水解方法使天然 蛋白质分段选出具有免疫活性的片段，仿特异 性抗原的某些肽链或蛋白人工合成的抗原，正 在研究中。 • 核酸疫苗— 将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA） 直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录 系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对抗原蛋白 的免疫应答，达到预防目的。
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亚单位疫苗（组分疫苗）
提取或合成细菌或病毒外壳的特殊蛋白 结构，即抗原决定族制成的疫苗。如流脑、
流感疫苗、肺炎疫苗等。 亚单位疫苗含几种主要表面蛋白，消除了许 多无关抗原决定族和粗制或半提纯制剂诱发的 抗体，从而减少疫苗副反应和疫苗引起的相关 疾病。
不足：免疫原性低，需与佐剂合用。
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合成疫苗和核酸疫苗
疫苗生产技术
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华 兰 生 物 疫 苗 生 产 流 程 图
2
疫苗生产技术就是这样？
感觉有点简单，没有想象的有技术含量
还是让我们了解以下疫苗吧
3
疫苗
疫苗是生物制品的一个类别； 疫苗—是利用微生物及其代谢产物，经人 工减毒或灭活或基因工程等方法方法制成， 用于预防疾病的自动免疫制剂。
13价肺炎疫苗生产工艺流程
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疫苗制造基本程序
制造疫苗用的细胞大体为原代细胞和传代细胞两类，根据 病毒种类、疫苗性质与工艺流程选择不同的细胞。 选择的依据包括：病毒的适应性高、毒价高、细胞来源方 便、制备简单、生命力强。 如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗采用犊牛睾丸原代细胞； 脊髓灰质炎活疫苗选择vero细胞；狂犬病弱毒细胞适应疫苗 采取BHK21细胞增殖病毒等。
动物或胚胎
毒 株
培育 鉴定 种 毒 扩增 鉴定 种 子 原 料 配制 保护剂
组 织
剪碎 消化 细胞悬液 生长细胞 培养 收获 灭活
原 料 配制
——
细胞培养液
传代细胞 原 料 配制 灭菌 佐剂
原 苗
配 苗
灭活病毒
配 苗
（混匀、乳化）
分装、冻干 检验 活疫苗
分装
检验 灭活疫苗
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三、病毒性动物组织疫苗制造
减毒 弱毒菌种
原 料 配制 灭菌 佐剂
灭活菌液
灭活
菌苗原液
配苗 分装、冻干
配制 灭菌 保护剂
配苗、乳化
分装 检验
灭活疫苗
检验
活疫苗
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项目三
病毒疫苗制造
病毒性禽胚培养疫苗制造
病毒性细胞培养疫苗制造
病毒性动物组织疫苗制造
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一、病毒性禽胚培养疫苗制造
鸡胚选择
种毒与毒种继代 接毒与收获 配苗