C57 BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究
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12h明暗光采用无毒塑料笼具垫料选用具良好吸湿性无毒性无异味尘埃少的材料如电刨花一般所有的笼具垫料饲料饮水等都得经过灭菌消毒温度控制在2025保持鼠房空气相对湿度4560噪音60db四季都应进行通风换气饲养的时候需用专用小鼠饲料可在粉状饲料中添加高脂牛奶饲料中含48的粗脂肪c57bl6小鼠可获得较好的繁殖效果此外它对维生素的要求也较高适时在饲料中加些新鲜的胡萝卜片可显著提高其受孕率
4、雌鼠乳头较雄鼠明显
1.3.4性成熟期:35-55日龄；实配年龄：60日龄左右；成熟时体重：20克以上
1.3.5发情鉴定:看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口张开且呈干燥状态，可确认为动情期雌鼠。同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠。
2、实验专业设计
通过光照.温度.噪音.湿度.营养等因素对小鼠性周期的影响研究,采用自然交配法与超数排卵法,确定最佳的条件,提高其受孕率,增加产仔成活率.
3、实验统计设计
采用平均值(x)±标准差(s),两两组间比较用t检验,各组间比较用方差分析，利用统计学软件进行结果分析。
4．实验动物方法设计：
5．实验技术方法：
教研室评审意见
1、实验设计是否合理,可否达到预期目标
2、实验设计和技术路线安排是否恰当
3、实验条件是否具备
实验技术教研室
年 月 日
解决问题的思路：通过产仔成活率来判断其繁殖性能,采用阴道涂片及阴道的检查的方法,判断其动情期,用来指导其动物交配观察其产仔成活的数量,应用统计学方法分析实验结果
参考文献
[1]郝光荣．实验动物学．上海：第二军医大学出版社，1999．93
[2]管原七郎(原著)，张志超等(译)．哺育动物发育工程实验方法．南京：南京大学出版社1992．71～77．
二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）
（一）实验设计目标，拟解决的关键问题
设计目标:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究,找出影响其受孕率高低的主要因素,从而用来指导其育种繁殖.提高产仔成活率.
ZHANG Jian，WU Xian—jin，Ma Lan，HU Hao，QUAN Qing-li。
(1．Biotechnology Department，Huaihua University，Htmihua，418008，China)
(2、Monzwlonal Antibody Technology Center ofYunnan University留繁殖力强，生活力强,目标形状优良的个体
1.3.11保种方法：修饰平行线系统
1.3.12扩大繁殖生产方法：交通信号灯方法
1.4饲养管理:C57 BL／6小鼠的饲养应在开放系统的动物房进行,由于光照能刺激小鼠性激素的分泌,对雌鼠性周期有一定的影响作用,因而采用12h:12h明暗光照,采用无毒塑料笼具，垫料选用具良好吸湿性、无毒性、无异味、尘埃少的材料如电刨花，一般所有的笼具、垫料、饲料、饮水等都得经过灭菌消毒,温度控制在20-25℃,保持鼠房空气相对湿度45%-60%,噪音<60dB,四季都应进行通风换气,饲养的时候需用专用小鼠饲料,可在粉状饲料中添加高脂牛奶,饲料中含4%-8%的粗脂肪时,C57 BL／6小鼠可获得较好的繁殖效果,此外它对维生素的要求也较高,适时在饲料中加些新鲜的胡萝卜片,可显著提高其受孕率.
1.2微生物学质量:清洁级(CLA)C57BL/6小鼠，雌雄各半
1.3C57 BL／6小鼠育种繁殖
1.3.1繁殖方法:近交繁殖，
1.3.2初始动物的选择：挑选一对或几对具有育种目标要求的性状的全同胞兄妹
1.3.3性别鉴定：
1、雄鼠的生殖器距肛门较远
2、雄鼠生殖器与肛门之间长毛
3、雄鼠的生殖器较雌鼠大
5.5.统计：约19-21天后产下幼仔观察并统计其数量。
（三）可行性分析：
3．1此实验操作简便,实验指标易于观察.
3．2小鼠易获得,易饲养
（四）预期效果:在适宜的实验环境下，实验组的小鼠的受孕率较高，产仔率也较高
（五）实验设计工作时间安排：
实验项目
工作时间安排
实验小鼠的选择
30min
确认小鼠的动情周期
我们通常将裸鼠的裸基因（nu）导入C57 BL小鼠中通过杂交，互交，回交的方式来获得大批量的裸鼠。但由于其繁殖能力低给实验动物的研究带来了极大的困难。
存在的问题：不能很好把握好小鼠性周期四个时期的特征及确认性周期的动情期,从而对实验结果的判断有一定的影响.但其繁殖率较低，给实验动物的研究带来了困难。
5.3.动物交配与受孕动物的检查：将已确定为动情期的雌鼠分成实验组和对照 两组，实验组采用自然交配的方式按雌雄1：1比例晚8:o0点合笼，次日清晨做阴道涂片和阴栓的检查，对照组采用超数排卵法交配的方式，用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.阴道涂片检查：镜检发现精子，则为阳性，记为孕期0．5d。阴栓检查：检查雌鼠阴道有无阴栓，必要时用眼科镊子插入阴道，撑开阴道口，查看有无阴栓。有阴栓者确定为受孕．记为孕期0．5d。
Abstract：To improve the rate of fertilization，the productive capacity of C57 BL／6 mouse was studied and the results
showed that it was important to characterize the estms among sexual cycles．The quality of zygotes obtained by natural
国内外研究现状：
C57 BL／6小鼠是little于1921年采用遗传学原理，以毛色基因为标记育成的近交系小鼠。C BL／6纯系小鼠性成熟早，36日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在37日龄即可动情排卵、受孕。雌鼠在正常情况下，每隔4～5d为一个性周期，发情后2～3h即可排卵。妊娠期为19～21d，哺育期为20～22d。雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象。
为提高其产仔成活率现目前主要有两种方法：“预接触”和“超数排卵”。“预接触”：在交配前2d，将1只雄鼠放入5cm×5cm×5em的封闭栅栏筐中，把筐放在装有8只雌鼠的鼠笼内。雌鼠和雄鼠这样生活2d，第3d晚放出雄鼠，雌雄交配。“超数排卵”(superovulation)：用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.
拟解决的关键问题:怎样把握好小鼠性周期的特征,准确确认性周期的动情期
（二）实验设计
1、实验动物设计（遗传背景，微生物学质量，育种繁殖，饲养管理，动物模型，实验动物学技术）
1.1遗传背景:1921年Little用Abby Lathrop的小鼠株，近亲交配，育成数个近交系动物，以57号雌鼠与52号雄鼠交配为起源者标为c c，中毛色固定为巧克力色者称为C BR；毛色固定为黑色者称为c BL，其亚系有C BL／6、C 7 BL／6J、C57 BL／6N等。C57 BL／6对Graftfi白血球因子较敏感，肿瘤自发率较低约为60%，细胞免疫力随增龄较前降低，繁殖率较低
现有研究表明交配季节在各种有关生殖的实验非常重要,一般应在春秋二季节进行。因小鼠怕热畏寒，而这季节温度比较适宜，动物的受孕率较高。若在夏冬季实验，动物房室温应控制在(22±2)℃。
研究表明温度、光照、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大。当温度低于10℃时，C BL／6纯系小鼠受孕率极低，胚胎获取常失败。光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大。当噪音高于80分贝时，小鼠烦躁不安，打架撕咬，几乎没有交配现象；当空气相对湿度低于30％时，小鼠脱毛现象严重，同时可使雌鼠受孕率降低，产仔数下降,
5.4.动物交配与妊娠的识别:小鼠交配后，在雌鼠阴道口形成一种白色阴栓，外形为“Y”字形，表面有细横纹，“叉状”段连接阴道深部。小鼠阴栓一般在交配后12～24h自动脱落。常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志.识别小鼠是否妊娠，可通过观察C，BL／6小鼠的动情周期是否消失，观察阴道粘膜的色泽、粘液性状、阴道口径变化情况等加以判断.
[3]袁伯俊，王治乔．新药l临床前安全性评价与实践、北京：军事医
学科学出版社，1997．128 132
[4]张文书，钟欣，邱立明．低湿度对实验小鼠繁殖的影响．赣南
医学院学报，2003，3：358．
[5]孙敬方．动物实验方法学．北京：人民卫生出版社，2001．174．
Observation and Study on the Productive Capacity of C57 BL／6 Mouse
实验动物学设计大纲
实验名称：C57 BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究
课题来源：自选
设计班级：04级检验本科
设计人员：XXX
设计日期：2007年5月26日
指导老师：XXXX
成都医学院实验技术教研室
2007年制
一.实验设计的目的意义,实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路
目的与意义:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究从而提高其受孕率，达到最佳育种的目的。
20min
小鼠交配与受孕检查
12h
小鼠的妊娠繁殖
19-21d
三、完成实验的条件
1、仪器设备情况：棉签, 载玻片, 眼科镊子
2、实验动物来源:C57 BL／6小鼠雌雄各200只,体重20-30克,年龄60-70天
从四川大学华西医学中心购买，C57 BL／6小鼠25元/只。
3、药品试剂来源：生理盐水,甲苯胺蓝
1.3.6配种：动情前期交配
1.3.7交配形式:近亲繁殖（全同胞兄妹交配）
1.3.8妊娠诊断：摸胎法、阴道涂片法、外形涂片法、直肠检查法
1.3.9育种代数：作为亲本的全同胞兄妹（初始动物）记为0代，按雌雄1：1进行交配，所生后代记为第1代，从中又选留满意的一对或几对全同胞兄妹作亲本，按雌雄1：1进行交配，以此类推，直到20代以上
5.1.C57 BL／6纯系小鼠的选择:选用性成熟未交配过的小鼠进行,雌性生育年龄60-70天,体重20-25克.雄鼠生育年龄为60-70天,体重20-30克.
5.2.确认小鼠性周期动情期：选择适龄雌雄小鼠，交配前查看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口张开且呈干燥状态，可确认为动情期雌鼠。同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠。观察阴道涂片的组织细胞学变化和阴道口的变化情况，可确定动情期的不同阶段。
4、雌鼠乳头较雄鼠明显
1.3.4性成熟期:35-55日龄；实配年龄：60日龄左右；成熟时体重：20克以上
1.3.5发情鉴定:看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口张开且呈干燥状态，可确认为动情期雌鼠。同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠。
2、实验专业设计
通过光照.温度.噪音.湿度.营养等因素对小鼠性周期的影响研究,采用自然交配法与超数排卵法,确定最佳的条件,提高其受孕率,增加产仔成活率.
3、实验统计设计
采用平均值(x)±标准差(s),两两组间比较用t检验,各组间比较用方差分析，利用统计学软件进行结果分析。
4．实验动物方法设计：
5．实验技术方法：
教研室评审意见
1、实验设计是否合理,可否达到预期目标
2、实验设计和技术路线安排是否恰当
3、实验条件是否具备
实验技术教研室
年 月 日
解决问题的思路：通过产仔成活率来判断其繁殖性能,采用阴道涂片及阴道的检查的方法,判断其动情期,用来指导其动物交配观察其产仔成活的数量,应用统计学方法分析实验结果
参考文献
[1]郝光荣．实验动物学．上海：第二军医大学出版社，1999．93
[2]管原七郎(原著)，张志超等(译)．哺育动物发育工程实验方法．南京：南京大学出版社1992．71～77．
二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）
（一）实验设计目标，拟解决的关键问题
设计目标:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究,找出影响其受孕率高低的主要因素,从而用来指导其育种繁殖.提高产仔成活率.
ZHANG Jian，WU Xian—jin，Ma Lan，HU Hao，QUAN Qing-li。
(1．Biotechnology Department，Huaihua University，Htmihua，418008，China)
(2、Monzwlonal Antibody Technology Center ofYunnan University留繁殖力强，生活力强,目标形状优良的个体
1.3.11保种方法：修饰平行线系统
1.3.12扩大繁殖生产方法：交通信号灯方法
1.4饲养管理:C57 BL／6小鼠的饲养应在开放系统的动物房进行,由于光照能刺激小鼠性激素的分泌,对雌鼠性周期有一定的影响作用,因而采用12h:12h明暗光照,采用无毒塑料笼具，垫料选用具良好吸湿性、无毒性、无异味、尘埃少的材料如电刨花，一般所有的笼具、垫料、饲料、饮水等都得经过灭菌消毒,温度控制在20-25℃,保持鼠房空气相对湿度45%-60%,噪音<60dB,四季都应进行通风换气,饲养的时候需用专用小鼠饲料,可在粉状饲料中添加高脂牛奶,饲料中含4%-8%的粗脂肪时,C57 BL／6小鼠可获得较好的繁殖效果,此外它对维生素的要求也较高,适时在饲料中加些新鲜的胡萝卜片,可显著提高其受孕率.
1.2微生物学质量:清洁级(CLA)C57BL/6小鼠，雌雄各半
1.3C57 BL／6小鼠育种繁殖
1.3.1繁殖方法:近交繁殖，
1.3.2初始动物的选择：挑选一对或几对具有育种目标要求的性状的全同胞兄妹
1.3.3性别鉴定：
1、雄鼠的生殖器距肛门较远
2、雄鼠生殖器与肛门之间长毛
3、雄鼠的生殖器较雌鼠大
5.5.统计：约19-21天后产下幼仔观察并统计其数量。
（三）可行性分析：
3．1此实验操作简便,实验指标易于观察.
3．2小鼠易获得,易饲养
（四）预期效果:在适宜的实验环境下，实验组的小鼠的受孕率较高，产仔率也较高
（五）实验设计工作时间安排：
实验项目
工作时间安排
实验小鼠的选择
30min
确认小鼠的动情周期
我们通常将裸鼠的裸基因（nu）导入C57 BL小鼠中通过杂交，互交，回交的方式来获得大批量的裸鼠。但由于其繁殖能力低给实验动物的研究带来了极大的困难。
存在的问题：不能很好把握好小鼠性周期四个时期的特征及确认性周期的动情期,从而对实验结果的判断有一定的影响.但其繁殖率较低，给实验动物的研究带来了困难。
5.3.动物交配与受孕动物的检查：将已确定为动情期的雌鼠分成实验组和对照 两组，实验组采用自然交配的方式按雌雄1：1比例晚8:o0点合笼，次日清晨做阴道涂片和阴栓的检查，对照组采用超数排卵法交配的方式，用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.阴道涂片检查：镜检发现精子，则为阳性，记为孕期0．5d。阴栓检查：检查雌鼠阴道有无阴栓，必要时用眼科镊子插入阴道，撑开阴道口，查看有无阴栓。有阴栓者确定为受孕．记为孕期0．5d。
Abstract：To improve the rate of fertilization，the productive capacity of C57 BL／6 mouse was studied and the results
showed that it was important to characterize the estms among sexual cycles．The quality of zygotes obtained by natural
国内外研究现状：
C57 BL／6小鼠是little于1921年采用遗传学原理，以毛色基因为标记育成的近交系小鼠。C BL／6纯系小鼠性成熟早，36日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在37日龄即可动情排卵、受孕。雌鼠在正常情况下，每隔4～5d为一个性周期，发情后2～3h即可排卵。妊娠期为19～21d，哺育期为20～22d。雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象。
为提高其产仔成活率现目前主要有两种方法：“预接触”和“超数排卵”。“预接触”：在交配前2d，将1只雄鼠放入5cm×5cm×5em的封闭栅栏筐中，把筐放在装有8只雌鼠的鼠笼内。雌鼠和雄鼠这样生活2d，第3d晚放出雄鼠，雌雄交配。“超数排卵”(superovulation)：用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.
拟解决的关键问题:怎样把握好小鼠性周期的特征,准确确认性周期的动情期
（二）实验设计
1、实验动物设计（遗传背景，微生物学质量，育种繁殖，饲养管理，动物模型，实验动物学技术）
1.1遗传背景:1921年Little用Abby Lathrop的小鼠株，近亲交配，育成数个近交系动物，以57号雌鼠与52号雄鼠交配为起源者标为c c，中毛色固定为巧克力色者称为C BR；毛色固定为黑色者称为c BL，其亚系有C BL／6、C 7 BL／6J、C57 BL／6N等。C57 BL／6对Graftfi白血球因子较敏感，肿瘤自发率较低约为60%，细胞免疫力随增龄较前降低，繁殖率较低
现有研究表明交配季节在各种有关生殖的实验非常重要,一般应在春秋二季节进行。因小鼠怕热畏寒，而这季节温度比较适宜，动物的受孕率较高。若在夏冬季实验，动物房室温应控制在(22±2)℃。
研究表明温度、光照、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大。当温度低于10℃时，C BL／6纯系小鼠受孕率极低，胚胎获取常失败。光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大。当噪音高于80分贝时，小鼠烦躁不安，打架撕咬，几乎没有交配现象；当空气相对湿度低于30％时，小鼠脱毛现象严重，同时可使雌鼠受孕率降低，产仔数下降,
5.4.动物交配与妊娠的识别:小鼠交配后，在雌鼠阴道口形成一种白色阴栓，外形为“Y”字形，表面有细横纹，“叉状”段连接阴道深部。小鼠阴栓一般在交配后12～24h自动脱落。常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志.识别小鼠是否妊娠，可通过观察C，BL／6小鼠的动情周期是否消失，观察阴道粘膜的色泽、粘液性状、阴道口径变化情况等加以判断.
[3]袁伯俊，王治乔．新药l临床前安全性评价与实践、北京：军事医
学科学出版社，1997．128 132
[4]张文书，钟欣，邱立明．低湿度对实验小鼠繁殖的影响．赣南
医学院学报，2003，3：358．
[5]孙敬方．动物实验方法学．北京：人民卫生出版社，2001．174．
Observation and Study on the Productive Capacity of C57 BL／6 Mouse
实验动物学设计大纲
实验名称：C57 BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究
课题来源：自选
设计班级：04级检验本科
设计人员：XXX
设计日期：2007年5月26日
指导老师：XXXX
成都医学院实验技术教研室
2007年制
一.实验设计的目的意义,实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路
目的与意义:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究从而提高其受孕率，达到最佳育种的目的。
20min
小鼠交配与受孕检查
12h
小鼠的妊娠繁殖
19-21d
三、完成实验的条件
1、仪器设备情况：棉签, 载玻片, 眼科镊子
2、实验动物来源:C57 BL／6小鼠雌雄各200只,体重20-30克,年龄60-70天
从四川大学华西医学中心购买，C57 BL／6小鼠25元/只。
3、药品试剂来源：生理盐水,甲苯胺蓝
1.3.6配种：动情前期交配
1.3.7交配形式:近亲繁殖（全同胞兄妹交配）
1.3.8妊娠诊断：摸胎法、阴道涂片法、外形涂片法、直肠检查法
1.3.9育种代数：作为亲本的全同胞兄妹（初始动物）记为0代，按雌雄1：1进行交配，所生后代记为第1代，从中又选留满意的一对或几对全同胞兄妹作亲本，按雌雄1：1进行交配，以此类推，直到20代以上
5.1.C57 BL／6纯系小鼠的选择:选用性成熟未交配过的小鼠进行,雌性生育年龄60-70天,体重20-25克.雄鼠生育年龄为60-70天,体重20-30克.
5.2.确认小鼠性周期动情期：选择适龄雌雄小鼠，交配前查看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口张开且呈干燥状态，可确认为动情期雌鼠。同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠。观察阴道涂片的组织细胞学变化和阴道口的变化情况，可确定动情期的不同阶段。