痰液脱落细胞检查专家讲座

铁锈色:大叶性肺炎,肺梗死
黄色脓痰:呼吸道化脓性感染，化脓性支气管炎,肺结核;
黄绿色:绿脓杆菌,干酪性肺炎
烂桃样灰黄色:肺吸虫病;
棕褐色:阿米巴肺脓肿、慢性充血性心衰肺淤血
痰液脱落细胞黑检查色:煤矿,锅炉工人或大量吸烟者
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➢ 性状:
粘液痰：多见于慢性支气管炎缓解期、支气管哮喘或肺癌病例。痰液透 明、无色、粘稠，用镊子牵拉时，往往可拉成很长细丝。假如其中有乳 白色颗粒状物，往往提醒有肺癌可能，必须取这部分痰液做涂片检验。 粘液脓性痰：是在粘液痰基础上混有一部分脓液。检验时必须仔细挑选 粘液丝部分做细胞学检验，以提升癌细胞检验阳性率。 脓性痰：为黄色或黄绿色粘痰，因细菌种类不一样，痰粘稠度和颜色可 有不一样。常见于气管、支气管和肺化脓性感染。其中有大量中性粒细 胞和核碎片。对这种痰最好经抗感染治疗后再送检，以取得很好结果。 泡沫痰：即痰呈泡沫状，此种痰应在除去泡沫后，采取其中粘液丝做涂 片检验。 血丝痰：即痰内带有少许血液，这是支气管黏膜某个局部小血管破裂出 血或肺泡内出血所致。常见于肺癌或支气管结核，有时也见于支气管炎。 为了明确出血原因，应将带血丝及其附近部分痰全部制成涂片，进行检 验。
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（二）制片
1、标本取样
（1）大致观察：
❖ 量：无或少许，呼吸道粘膜和肺泡受刺激时增多。
❖ 颜色: 正常：无色或灰白色，
病理情况有以下改变：
水样痰：黏液少，呈水样，常有泡沫。
灰白色黏液痰：黏液丰富，胶样。
红色或棕红色：含血液或血红蛋白
血性痰:血液量多，肺癌、肺结核、支气管扩张
粉红色泡沫样:急性肺水肿
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⑶沉渣涂片或细胞蜡块制作：
❖ 需要较大样本量，通常是用三天咳痰量混合 在一起制作取样，须注意标本预固定及适当 保留。
❖ 标本需作液化、离心沉淀预处理（同前）。
❖ 沉淀后细胞量少作涂片用，3-5张；沉淀后细 胞丰富者作细胞蜡块。
❖ 普查、科研等情况下应用较多，因其样本量 大也可深入应用分子、免疫等新技术。
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其配制方法：
⑴10g聚乙二醇(熔点为43-46℃)在50-100℃温
箱中溶化后倒入500ml 50%乙醇液中混匀成聚
乙二醇溶解液备用(此液不会凝固).。
⑵1升2%聚乙二醇和50%乙醇溶解混合液组成
配方为：
水
437ml
95%乙醇液 526ml
聚乙二醇乙醇液 40ml
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痰液脱落细胞检查查24小时痰量和分层检验：无色广口瓶。
细菌学检验：无菌容器，及时送检。 细胞学检验：3-5口（约5ml）,或早晨9-10 时新鲜痰液。 无痰或痰少患者：化痰药(雾化吸入法)。 昏迷患者：清理口腔，负压吸引法吸痰。 幼儿：棉拭刺激喉部，棉拭刮取。 纤维支气管镜检验：直接病灶采集。
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7、上皮细胞：正常少许 炎症/其它呼吸系统疾病时大量增加
8、肺泡巨噬细胞： 炭末细胞：吞噬炭粒（炭末从容症及大量烟尘吸入者） 含铁血黄素细胞/心力衰竭细胞：吞噬含铁血黄素 心力衰竭引发肺淤血、肺梗死、肺出血
9、硫磺样颗粒：黄色小颗粒，放线菌病 压平可见菌丝放射状排列呈菊花形(放线菌)
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采集痰液方法和质量直接影响痰检验阳性率， 采集痰液分析基本要求是：
①痰液必须是从肺部咳出；
②痰液必须新鲜；
③对首次痰检验患者，应亲自指导和观察患 者咳痰。
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❖ 起源： 肺泡、支气管、气管所产生分泌物
❖ 目标: 辅助诊疗：支气管哮喘、支气管扩张 确诊：肺结核、肺癌 观察疗效和预后判断
②压拉涂片：将取样标本置于一张玻片上后另一张 玻片正面朝下压拉下一张玻片，屡次推拉、挤压均 匀后二边分开得到二张涂片；优点是相对厚薄均匀， 但可能细胞挤压分散，镜下沿粘液丝查找线索相对 不显著。
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⑵液基制片：是指经过标本预处理后先把痰液粘液
溶解、液化且细胞固定后再经过一定技术伎俩把细 胞成份转移到玻片上制片方法，制作过程等同普通 液基片，然应注意标本预处理中以下方面。
10、寄生虫及虫卵 肺吸虫卵：肺吸虫病 溶组织阿米巴滋养体：阿米巴肺脓肿/阿米巴肝脓肿入肺
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镜检 染色: 脱落细胞：肺部咳出，标本新鲜，一小时内固定 巴氏(papanicolaou)染色、 苏木素-伊红(H-E)染色 细菌学涂片检验： 革兰(Gram)染色：检测细菌、真菌 抗酸染色：检测结核杆菌 荧光染色：检测真菌、支原体
对原发肺癌敏感性可达60%-80%，特异性到 达100%。
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二、方法学
（一）标本准备 1、咳痰 ❖ ⑴提议用晨痰，涮牙、嗽口后进行，深咳。 ❖ ⑵有条件者可采取雾化吸入后诱咳采痰。 ❖ ⑶纤维支气管镜检后咳取痰液能提升阳性率。
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2、采集
❖ ⑴一次咳痰提议留取3-5口痰液。
镜下见到以下成份表明此样本合格：
❖ 吞噬反应组织细胞（尘细胞）。 ❖ 柱状上皮细胞（伴或不伴退变）。 ❖ 支气管形成粘液丝（枯丝曼氏螺旋体）。
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⑵不满意样本：不能作出诊疗意见，提议重新 取样制片。
申请单内容不全，咳痰时未经专业指导。 不能确认标本与申请单一致性。 涂片面积少于二分之一阴性标本。 缺乏满意样本应有三种成份阴性标本。 固定、染色效果差，细胞严重变形。
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（四）染色
痰液脱落细胞病理学检验常规染色方法是 H.E染色和巴氏染色,特殊需要时也可使用 抗酸染色，
（五）透明及封片
为保留痰液中细胞结构清楚，涂片染色脱
水后必须经二甲苯透明及中性树胶封固。
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（六）痰液标本安全管理与院感控制
痰液样本因经常伴随特异性感染，而且需开放性处 理，所以其试验室安全管理及院感控制必须引发重 视。
黏液丰富样本与水样样本应注意区分取样痰 液量，普通情况下后者取样量应多于前者。
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2、制片
⑴普通涂片：
①直接涂片：用镊子或竹签直接涂抹在玻片上，尽 可能分开粘液丝及血性部份，做到相对均匀，涂片 面积应超出玻片空白部位三分之二，其优点是粘液 丝分布显著，病变细胞相对集中，缺点是涂片厚薄 不匀、重合现象多见而影响观察及封片，普通一次 制片二张以上。
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三、痰液涂片脱落细胞病理学诊疗
㈠ 镜检前准备及镜检规范： ㈡ 镜检内容
1、标本满意度评定： 在满意标本前提下检验样本才含有可信性，才可确保检验敏 感性与特异性。
⑴满意样本要求：
合格申请单，有详细临床资料和病史提供，咳痰方法已经过指导， 方法正确。
涂片面积大于玻片面积三分之二以上，分布均匀，厚薄相对一致， 可见粘液丝（普通涂片）。
第六章 细胞病理学诊疗工作相关技术 指南
第一节 痰液脱落细胞病理学检验
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一、目标
是经过检验痰液中脱落细胞形态学改变来检验 呼吸道及肺部病变一个细胞病理学方法。
检验含有非损伤性、非介入性且经济、方便、 特异性高等优点，与其它部位细胞病理学检验 不一样是痰液细胞病理学检验主要是检出恶性 肿瘤细胞（癌细胞），而对癌前病变检验无意 义。
❖ ⑵存放标本容器必须是无吸水性干燥塑料或玻璃器 皿,须有盖子密封,标签明确，标签应统计相关内容, 包含姓名、门诊号（住院号）、送检时间等。
❖ ⑶二种标准送检方法：
每日一次，连续三天送检，天天制片。
每日一次，连续三天，天天搜集后先预固定，一次 性提取细胞成份后离心沉渣涂片或制成细胞蜡块 （CB）。
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痰标本应尽快涂片，在室温下，能够保留2～ 4小时，在冰箱内可保留两天；痰液量普通以 3ml-5ml(3-5口痰)为宜；
采痰时应采取内面涂蜡痰盒，可预防痰液被 吸收而难于挑痰制片；
采集痰标本没有禁忌证，但假如病人在行支 气管镜检验之后，马上进行痰细胞学检验， 往往会混有一些嗜酸性细胞碎片和炎性细胞， 而误认为高分化鳞癌。最好在支气管镜检验 5～10天后再行痰细胞学检验。
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（七）分子病理学技术在痰液样本中应用
痰液细胞学样本分子病理学检测尽管临床应 用较少，但在科研、专题普查等领域则经常 开展，应用最多是经过PCR或原位杂交技术 检测上皮细胞以下项目：
❖端粒及端粒酶检测 ❖P16基因甲基化检测 ❖异源核糖核蛋白A2及其异构体 ❖P53基因 ❖EGFR相关基因等
❖ 以上评定可写入汇报单内容中，以将标本满 意度信息反馈给临床医师及患者。
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脱落细胞检验基本知识
第一节 细胞诊疗学基本概念
一、细胞增生活跃
细胞体积增大，核显著增大，核染色质增多，颗粒 增粗，核仁增大增多，核浆百分比失常，胞浆蓝染（ 巴氏），可伴核分裂像。
二、组织修复细胞
组织损伤或修复过程中从新生上皮脱落下来细胞。 特征：细胞多成片出现，似合体细胞，排列规则；细胞稍 增大，胞核也增大，核不深染，胞浆尚丰富，深染；核仁显著 增大或增多；可能出现核分裂像 。
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3、送检：标准上留取后马上送检，保持标本 新鲜；普通夏天存放时间应＜2小时，冬天＜ 4小时，如确有困难或须做沉渣切片则能够预 固定后放置冰箱内冷藏，但不宜＞5天。
4、接收：查对送检单与样本盒（瓶）上相关 信息，一致后签收标本，若信息不一致则需 重新与相关人员、科室查对，标本签收制度 必须严格按要求执行。
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3、制片质量控制
❖ ⑴ 样本选取：直接关系到检验阳性率，屡次 检验多张涂片结果前后一致性应大于80%以 上。
❖ ⑵ 涂片应相对均匀，重合部份面积＜20%， 涂片部分面积应大于玻片面积三分之二以上， 合格涂片百分比应＞80%。
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（三）固定
必须采取湿固定，即制片后马上固定，一旦固定不
❖必须使用密闭性器皿来存放标本。
❖制片操作人员必须带口罩、帽子等隔离办法。
❖有条件单位对痰液样本在制片前可进行预消毒 固定处理,惯用预固定液为2%聚乙二醇和50% 乙醇混合。
❖ 每日一次空气、环境紫外线消毒，并统计时 间，定时检测紫外灯管紫外线强度。
❖残留样本及盛具统一1%过氧乙酸液消毒处理, 统一存放专用医疗垃圾袋后处理，处理标本过 程中产生相关污染液体经专用医用污水管道排 放。
2024/4/30
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组织修复细胞
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三、细胞化生
1、未成熟鳞状上皮化生细胞特征： 似正常上皮外底层细胞大小；多成群出现，可呈 铺砖式排列；细胞呈圆或卵圆形，边缘有小突起； 胞浆常有小空泡使胞浆透亮。 2、成熟鳞状上皮化生细胞特征： 细胞似正常鳞状上皮中层细胞大小；多成群出现 ，细胞呈多边形，有锐角突起，形态多样；胞浆中 常见小空泡。胞浆少，排列紧密，无细胞间桥。
➢ 气味:正常无特殊气味,
血腥味(血性痰),恶臭(合并厌氧感染)， 特殊臭味(晚期肺癌)
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（2）取样：选择性取有价值部分
用镊子、竹签等无吸水性材料夹取,不主张 用玻璃制品、棉签等取样。
标准上优先选取以下部位：
含血丝粘液痰。 灰白色豆渣样痰丝（形似白色细线）。 透明粘液丝丰富处。 血液与粘液交界处痰液。
及时，涂片在空气中干燥后，细胞形态特征将显著 受损，所以及时固定非常主要。
普通要求制片后马上固定，通常＜5秒钟。 固定时间涂片＞15分钟，细胞蜡块＞30分钟。 固定液：为常规固定液。
垂直快速放入或自由落体放入固定液，不然会出现细胞 堆积而引发皱折现象。
必须注意固定液及时更换。 固定槽内多个样本同时放置要杜绝相互间交叉污染。
❖ 选取痰液样本量通常为一张普通制片痰液量3-5倍。 ❖ 在清洗、固定作用保留液内存放15分钟以上，保留
液各厂家不尽相同，但主要成份类似：酒精、甲醛、 甲醇等。 ❖ 1，4-二硫苏糖醇（DTT）液消化粘液：用清洗液加 10%DTT粉剂配制成DTT液加入到保留液中1-2ml, 震荡10分钟以上，即可完全溶解保留液中粘液，使 标本完全液体化。
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痰液检验
镜检：
观察有形成份种类、数量、形态改变
1、白细胞：正常少许 2、中性粒细胞/脓细胞↑：化脓性炎症或有混合感染 3、嗜酸性粒细胞↑：支气管哮喘、过敏性支气管炎、
肺吸虫病等 4、淋巴细胞↑：肺结核病 5、红细胞：正常无 6、呼吸道疾病、出血性疾病（镜检/隐血试验）
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