硫磺菌鉴定及人工驯化栽培研究

图2
硫磺菌菌株系统发育树
硫磺菌
（）又名硫磺多孔菌[1-2]，具有基内菌丝和气生
菌丝[3]，子实体在药用方面有较大作用[4]，内含齿孔酸，可合成甾体药物肾上腺皮质激素，在很多疾病上有很好治疗作用[5]，多糖[6]以其它成分含量也较丰富[7]，具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤作用[8]。

本研究对野生硫磺菌鉴定，活性成分测定，培养基优化，驯化栽培进行研究，旨在为药用真菌资源的驯化和利用提供理论和实验基础。

1材料与方法
1.1菌株：菌株于2021年6月21日采自吉林省延边朝鲜族自治
州延吉市园艺农场四队苹果梨园（东经129°27′33″，北纬42°54′56″，海拔218m ），其余试验材料（LH 、Li 、Dai ）均来自延边大学农学院食药用真菌研究所。

1.2方法1.2.1
ITS 鉴定：菌丝体DNA 提取利用试剂盒，
鉴定利用ITS 通用引物ITS1和ITS4对DNA 样本序列进行PCR 扩增，产物进行测序。

将获得的ITS 序列利用NCBI 进行比对，采用MEGA 11.0软件构建系统发育树。

1.2.2
营养成分测定：
分别对4个菌株进行多糖、黄酮、三萜、多酚的测定，进行超声提取后紫外分光光度计在相应波长下测定吸光值，并带入标准曲线计算含量。

1.2.3硫磺菌菌丝体培养基优化1.2.3.1
单因素试验：基础培养基：葡萄糖20g ·L -1、蛋白胨2.0g ·L -1、
硫酸镁0.5g ·L -1、琼脂20g ·L -1，水1L 。

碳源：添加等量葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖；氮源：添加蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硝酸铵、黄豆粉；无机盐：添加硫酸镁、氯化钠、硫酸锌、硫酸锰、磷酸二氢钾，以基础培养基不加相应物质为对照；设置3个重复，置于25℃避光培养7~10d ，用十字交叉法测定菌落直径。

1.2.3.2
正交试验：对碳源、氮源、无机盐三个单因素进行正交设
计选出最优组合，以确定硫磺菌的最佳培养基配方。

正交设计采用L 9（33）
试验设计（见表1）。

1.2.4硫磺菌培养料筛选1.2.4.1
二级种培养基筛选：二级级种分别选用以麦麸20%、石膏
1%、白糖1%为基础，分别添加杂木屑78%、棉籽壳78%、苹果梨木屑78%，以杂木屑41.5%、麦麸10%、玉米粉5%、石膏1%、白糖
1%为基础分别添加棉籽壳41.5%、苹果梨木屑41.5%。

以麦麸
10%、玉米粉5%、石膏1%、白糖1%为基础配方，分别在两个配方中添加苹果梨木屑41.5%、棉籽壳41.5%，设置5个重复，25℃恒温培养，记录吃料速度、长势、满瓶时间。

1.2.4.2
三级种培养基筛选：三级种培养料以杂木屑、苹果梨木
屑、棉籽壳为主料，在麦麸10%、石膏1%、白糖1%的栽培袋中分别加入杂木屑83%和玉米粉5%，杂木屑86%和玉米粉2%，苹果
梨树木屑83%和玉米粉5%，苹果梨树木屑86%和玉米粉2%，杂木屑43%、棉籽壳43%和玉米粉2%，杂木屑54%、棉籽壳29%和玉米粉5%，苹果梨木屑54%、棉籽壳29%和玉米粉5%，设置5个重复，25℃培养，记录生长速度、生长势、
菌满袋天数。

2结果与分析
2.1
形态学鉴定：硫磺菌（LHJ ）子实体没有着生菌柄，
菌盖直生于菌丝基部，呈扇形，菌盖直径12~14cm ，菌盖边缘厚度0.2~0.4cm ，橘黄色，表面有白色绒毛，边缘呈波浪状，
菌肉呈乳黄色，有明显沟壑（见图1）。

2.2ITS 鉴定：菌株LHJ 、LH 、Li 为硫磺菌属（）的
奶油硫磺菌（），菌株Dai 为硫磺菌属
（
）的硫色硫磺菌
（），与形态
学鉴定结果相符（见图2）。

硫磺菌鉴定及人工驯化栽培研究
程天帅卯明娟
杜雨桐李卓宸赵玉俊
刘
迪*
（延边大学农学院吉林窑延吉133002）
摘要：硫磺菌是一种珍贵的药食兼用的大型真菌，ITS 分类鉴定为奶油硫磺菌（），对该菇进行培养条件优化研究结
果为，最佳培养条件为：葡萄糖25g ·L -1，酵母膏2.0g ·L -1，氯化钠0.5g ·L -1；驯化栽培试验出现原基，表明该菌驯化成功，
本试验为开发利用及生产栽培这一野生资源奠定理论基础。

关键词：硫磺菌；鉴定；培养基优化；
驯化栽培基金项目：大学生创新创业计划项目“硫磺菌鉴定及人工驯化栽培研究”（编号：2023YDCXCY124）。

作者简介：
程天帅（2003-），男，本科生。

研究方向为食药用菌资源、驯化栽培。

E-mail ：*****************
*通讯作者：刘迪（1973-），男，副教授，博士，研究方向为食药用菌资
源、驯化栽培。

E-mai:**************.cn
表1L 9（33
)正交表
无机盐（C ）/（g ·L -1）0.30.50.7
编号
123碳源（A ）/（g ·L -1）152025氮源（B ）/（g ·L -1）1.522.5图1子实体形态
10.16627/22-1215/s.2023.04.079
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2.3
活性成分分析：对4个菌株活性成分进行测定，如表2，菌株LHJ 其多糖、多酚、黄酮、三萜含量均最高，且显著高于其他菌株，综合得出菌株LHJ 最优，后续选取该菌株进行试验。

2.4培养基优化2.4.1
碳源：如表3，以葡萄糖为碳源的硫磺菌菌丝体长势最好。

综合碳源的适用顺序为：葡萄糖>麦芽糖>果糖>蔗糖>乳糖。

2.4.2氮源：菌丝体在不同氮源下均可生长，如表4，蛋白胨最佳，硝酸铵最弱，无氮源中基本停止生长。

综合对5种氮源的适用顺序为：蛋白胨>黄豆粉>牛肉膏>酵母膏>硫酸铵。

2.4.3
无机盐：菌丝体在不同无机盐下均可生长，如表5，氯化钠
时长势最好，硫酸锰时长势最弱，综合适用顺序为：氯化钠>硫酸锌>硫酸镁>磷酸二氢钾>硫酸锰。

2.4.6正交试验：如表6，对硫磺菌菌丝体生长影响为碳源>氮源>无机盐，配方8菌丝生长速度最大，故最佳配方组合为A 3B 2C 2。

2.5原种配方对菌丝体的影响：如表7，配方5菌丝生长最慢，配方2菌丝生长速度最快为0.517cm ·d -1
，满瓶时间最短，为菌丝生长最适原种配方。

2.6
栽培种配方对菌丝体生长的影响：如表8，配方5菌丝生长
速度最快且与其他配方差异显著，为最佳栽培种培养料配方，配方4生长最慢，在配方5、6、7、8中都出现原基，说明驯化成功。

3讨论与结论
通过对该菌进行鉴定，结果表明该菇为硫磺菌，各菌株中
LHJ 多糖、黄酮、多酚、三萜含量均高于其他，为优势菌株。

对该菌进行培养基优化，最佳因素为葡萄糖、蛋白胨、氯化钠，最佳组合为葡萄糖25g ·L -1，酵母膏2.0g ·L -1，氯化钠0.5g ·L -1。

最佳二级种为配方2生长速度最快。

最佳三级种为配方5，且有原基出现，证明驯化成功。

总之，硫磺菌分布广泛，不同来源菌株在遗传特性上可能会存在区别[7]，本研究结果可为硫磺菌培养和栽培提供一定理论依据。

参考文献
[1]杨娟，林佩婷，赖滢妮，等.硫磺菌子实体多糖的提取及其抗氧化活性[J].福建农林大学学报，2021，50（06）：843-849.
[2]Saba E,Son Y,Jeon BR,et al.Acetyl Eburicoic Acid from Laetiporus
sulpHureus var.miniatus Suppresses Inflammation in Murine MacropHage RAW 264.7Cells.[J].Mycobiology ，2015，43（2）：250-263.[3]兰玉菲，安秀荣，唐丽娜，等.泰山硫磺菌硫磺原变种的生物学特性研究[J].山东农业科学，2012，44（08）：46-48.[4]张云龙.一株野生食用菌鉴定及其生物学特性研究[D].河北工程大学，2020.
[5]卯晓岚.中国大型真菌[M].河南科技出版社，2001.405.
[6]Body of Laetiporus versisporus [J].Chemical and pHarmaceutical
Bulletin ，2000，48（10）：1418-1422.
[7]
王艳华，朱巍巍.硫磺菌研究进展[J].食用菌学报，2023，30（03）：110.
表2不同菌株活性成分含量
黄酮（mg ·g -1）42.03±1.23a 16.8±0.26c 29.12±0.51b 12.87±0.26d
编号
LHJ Dai Li LH
多糖（mg ·g -1）53.31±0.36a 31.13±0.38b 7.36±0.36d 11.62±1.21c
三萜（mg ·g -1）34.16±0.66a 18.53±0.56d 21.37±0.34c 24.19±0.72b
多酚（mg ·g -1）21.23±0.68a 9.71±0.40c 11.88±0.81b 9.71±0.30c
注：数据均为“平均值±SD （n=3）”，同一列不同小写字母表示数值差异显著（P<0.05），下同。

表6L 9（33
)正交试验结果
注：“+”表示菌丝长势，“+”越多菌丝长势越好，
下同。

表4
氮源对菌丝体生长的影响
长势++++++++++++
氮源
酵母膏牛肉膏蛋白胨黄豆粉硝酸铵CK
生长速度（cm ·d -1）
0.152±0.008a 0.153±0.007a 0.158±0.004a 0.157±0.004a 0.104±0.014b 0.094±0.010b
表8栽培种配方对菌丝体生长的影响
表3
碳源对菌丝体生长的影响
长势+++++++++
碳源
葡萄糖麦芽糖果糖蔗糖乳糖CK
生长速度（cm ·d -1）
0.157±0.008a 0.150±0.011a 0.147±0.002ab 0.132±0.002bc 0.124±0.013cd 0.110±0.009d
菌丝长势
+++++++++++++++++++
编号
123456789优组合
生长速度（cm ·d -1）
0.191±0.005a 0.191±0.009a 0.187±0.010ab 0.197±0.004a 0.199±0.005a 0.179±0.009b 0.198±0.004a 0.204±0.006a 0.202±0.002a A 3B 2C 2
表5
无机盐对硫磺菌菌丝体生长的影响
长势++++++++++++++++
无机盐
磷酸二氢钾硫酸镁硫酸锌氯化钠硫酸锰CK
生长速度（cm ·d -1）
0.155±0.003a 0.158±0.005a 0.159±0.002a 0.163±0.000a 0.139±0.001b 0.130±0.013b
长势+++++++++++++++++++
满袋时间（d ）4844405426372932
生长速度（cm ·d -1）0.313±0.14d 0.341±0.21cd 0.261±0.08de 0.161±0.17e 0.577±0.26a 0.314±0.41d 0.483±0.11b 0.395±0.28c
配方12345678
表7原种配方对菌丝体生长的影响
长势++++++++++++++
满瓶时间（d ）401831204823
生长速度（cm ·d -1）0.232±0.21e 0.517±0.11a 0.301±0.16d 0.465±0.08b 0.188±0.35f 0.391±0.19c
配方123456
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