BCA法测蛋白浓度(课件)

BCA法测蛋白浓度的实验器材
1
BCA试剂盒
包括BCA试剂、还原剂、蛋白标准品等。
微孔板
2
用于加样和反应过程。
3
移液器
用于准确地移取少量液体。
光度计
4
用于测定反应液的吸光度。
BCA法测蛋白浓度的实验步骤
1 制备标准品
用卵清或白蛋白制备不同浓度的标准品。
2 添加BCA试剂
将待测样品和标准品加入微孔板中，每个孔 均加入BCA试剂。
3 反应
在高温下盖上微孔板盖，使用振荡器震动反 应。
4 测定吸光度
测定反应溶液吸光度，与标准曲线对照得出 样品蛋白质浓度。
BCA法测蛋白浓度的结果分析
优点
• 检测灵敏度高 • 线性范围广 • 精度好
缺点
• 对氧化还原剂敏感 • 有干扰物质存在时误差大 • 不适用于测定含有3个或更多组胺基酸的蛋白质
BCA法测蛋白浓度
本课件将介绍BCA法测蛋白浓度的原理、步骤、实验器材、实验步骤、结果 分析、优缺点和总结，帮助您更好地理解实验过程和数据分析。
BCA法测蛋白浓度的原理
还原铜离子
BCA试剂中含有Cu2+离子，和还原剂NaBH4反应后形成Cu+。
和蛋白质反应
在碱性条件下，Cu+和蛋白质中的酪氨酸、半胱氨酸等离子体发生还原反应并生成紫色络合 物。
测定吸光度
采用光度计，在562nm处测定紫色合物的吸光度，与标准曲线进行比对即可得到蛋白质浓 度。
BCA法测蛋白浓度的步骤
制备标准品
用卵清或白蛋白制备不同浓度的标准品。
加样
将待测样品和标准品加入微孔板中，每个孔均加入 BCA试剂。
反应
在高温下盖上微孔板盖，使用振荡器震动反应。
测定吸光度
测定反应溶液吸光度，与标准曲线对照得出样品蛋 白质浓度。
BCA法测蛋白浓度的优缺点
优点
BCA法与Lowry法相比，敏感度更高，能够快速准确 地检测蛋白质浓度。
缺点
BCA法对氧化还原剂敏感，有干扰物质存在时误差 大，不适用于测定含有3个或更多组胺基酸的蛋白质。
总结
通过本课件的介绍，您已经了解了BCA法测蛋白浓度的原理、步骤、实验器 材、实验步骤、结果分析和优缺点，希望对您进行实验设计和数据分析有所 帮助。