神经生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的效果观察

调控神经元分化 、 轴突生长 、 抑制神经细胞凋亡等作 用 ～ ’ Ｊ 。Ｎ Ｇ Ｆ可 诱 导 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ分 化为 胆 碱 神 经 细 胞 』 ， 与功能受体 Ｔ ｒ ｋ Ａ结合 ， 通过非 Ｒ ａ ｓ 依赖途径 调控神经细胞 的分化 Ｊ 。 目前没 有可诱导 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ
骨髓 间 充 质 干 细 胞 （ Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ ） 是 一 种 多 能 干 细 胞， 取材 方 便 。研 究 发 现 ， Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ可 向多 种 细 胞 及
大 鼠４只 ， 由河北北方学院实验动物中心提供 ， 大鼠
Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ的分 离 、 培养 及 鉴定 在 河 北 北 方 学 院实 验 中
山东医药 ２ ０ １ ６ 年第 ５ ６卷第 ３ ９ 期
神 经 生 长 因子诱 导 大 鼠骨 髓 间充 质 干 细 胞 向神 经 细 胞 分 化 的效 果 观察 及 相关 蛋 白网络 分 析
苏立宁， 宋小 青 ， 魏 家 口 ０ ７ ５ ０ ０ ０ ）
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ － ２ ６ ６ Ｘ ． ２ ０ １ ６ ． ３ ９ ． ０ １ ０
中图分 类号 ： Ｒ ７ ３ ８ ． １
文献标 志码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ ２ － ２ ６ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ６ ） ３ ９ － ０ ０ ３ ３ － ０ ３
导完成后加入 １ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ Ｎ Ｇ Ｆ 、 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ ／ Ｆ １ ２ 诱导液诱导４ ８ ｈ 。对照组不加任何药物。诱导完成后倒置显微镜观察
两组细胞形态 变化 ， 用免疫组化法检测 两组 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ中的神经元特异性烯醇 酶（ Ｎ Ｓ Ｅ） 蛋 白， 用实 时荧光定 量 Ｐ Ｃ Ｒ法 检测 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 中的 Ｎ Ｓ Ｅ ｍＲ Ｎ Ａ。采用 生物信息学软件 Ｓ Ｔ Ｒ Ｉ Ｎ Ｇ Ｉ Ｏ ． ０分析 Ｎ Ｇ Ｆ在诱 导 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 向神经细胞分化 中参 与 的蛋 白网络 ， 并对网络系统 中编码蛋 白的基 因进 行功能富集分析 。结果 镜 下可见 观察组细胞 体积增大 ， 细胞 核
神经样 细胞分 化ｕ Ｊ ， 但Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 的分化机制复 杂。
神经 生 长 因子 （ Ｎ Ｇ Ｆ ） 高 表达 于 中枢 神 经 系 统 ， 具 有
心细胞室完成。饲养条件符合各等级动物的卫生质
量 要求 。 Ｄ ＭＥ Ｍ 、 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ ／ Ｆ ． １ ２培 养 基 购 自上 海 立 菲 生
固缩 ， 核 质 比降低 ， 细长 突起 明显 ， 部分细胞 间以 网络 状连 接。对照组 细胞 密度较 均匀 ， 形态 以长梭形 为主 。诱 导
完成第 １ 、 ２ 、 ４天 ， 观察组 Ｎ Ｓ Ｅ ｍ Ｒ Ｎ Ａ相对表 达量分别 为 １ ． ３ ４± ０ ０ ６ 、 ２ ． ２ ３±０ ． ２ ３ 、 １ ． ５ ６士０ ． ０ ９， 两组 比较 ， Ｐ均 ＜
摘要 ： 目的 观察神 经生长因子 （ Ｎ Ｇ Ｆ ） 诱 导大鼠骨髓 间充质 干细胞 （ Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ ） 向神 经细胞分 化 的效果 ， 并 分析 相 关蛋 白网络 。方 法 将 ４周 龄健康 ｓ Ｄ大 鼠４只 ， 脱 臼处死取股 骨分离 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 并传代 。取第 ５代 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 制备细 胞爬 片 ， 分为观察组 和对 照组 两组 ， 观察组加入 ３ ％ ＤＭ Ｓ Ｏ、 ６ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ Ｎ Ｇ Ｆ、 Ｄ ＭＥ Ｍ／ Ｆ １ ２预诱 导液预 诱导 ２ ｈ ， 预诱
分化 为稳 定 存 活 的神 经 细胞 的方 法 。２ ０ １ ５年 ３～８
物技术 有 限公 司； 胎 牛 血清 （ Ｆ Ｂ Ｓ ）购 自美 国 Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ公 司 ； Ｎ Ｇ Ｆ 购 自美 国 Ｇ ｅ ｎ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ公 司 ；
０ ． ０ ５ 。观察组诱 导完成第 １ 、 ２天 时 Ｎ Ｓ Ｅ蛋 白阳性细胞数分 别为 （ ３ ５±８ ） 、 （ １ ３ ３－ ４ － ６ ） 个， 对 照组未检 测到 Ｎ Ｓ Ｅ蛋 白 阳性细胞 ， 两组 比较 ， Ｐ均 ＜０ ． ０ ５ 。以 Ｎ Ｇ Ｆ为种子节点得到与 Ｎ Ｇ Ｆ直接发生作用 的 １ ０ ５个蛋 白节点 ， 共 ３个 中心节 点， 分别 为 Ｎ Ｇ Ｆ 、 神经生长 因子受体 和泛素 Ｃ 。对 网络 中的各 个节点进行 Ｇ Ｏ功能 富集分 析 ， 结果 富集在神经分 化 、 神 经发育及调控神经凋亡等生物学过 程。Ｎ Ｇ Ｆ与 Ｒ ａ ｓ 蛋 白特定鸟 嘌呤核 苷酸释 放因子 １ 、脑衍 生神经 营养 因子 、 生长抑 制蛋 白、 Ｎ Ｇ Ｆ 、 Ｎ Ｇ Ｆ Ｒ、 神经营养受体酪氨酸激酶 １ 、 神经 营养 受体酪氨酸激酶 ２ 、神经 营养 因子 ３ 、 极微 小蛋 白激 酶 Ｃ、 Ｇ Ｔ Ｐ结合蛋 白 Ｒ Ａ Ｃ、 核糖体蛋 白 ￥ ２ ７ Ａ、 信 号传导子及 转录激 活子 ３ 、酪氨酸 羟化 酶、泛 素 Ａ － ５ ２ 、 泛素 Ｂ 和Ｕ Ｂ Ｃ等蛋 白相互作 用调控神经分化过程 。模块分析结果显示 中心节点 Ｎ Ｇ Ｆ 、 Ｎ Ｇ Ｆ Ｒ和 Ｕ Ｂ Ｃ在模块 １中发挥核心 的作用 。结果 Ｎ Ｇ Ｆ可诱 导大 鼠 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ向神经细胞分化 。以 Ｎ Ｇ Ｆ为种子 节点 ， 筛选 到 １ ０ ５ 个与 Ｎ Ｇ Ｆ直接发生互 作 的蛋 白节点。Ｎ Ｇ Ｆ 、 Ｎ Ｇ Ｆ Ｒ和 Ｕ Ｂ Ｃ在 Ｎ Ｇ Ｆ诱导 大鼠 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 向神经细胞分化 的蛋 白网络 中发挥核心 作用 。 关键 词 ： 骨髓 间充质干 细胞 ； 神经生长 因子 ； 诱 导分化 ； 蛋 白互 作用 ； 动物实验