小鼠腹腔巨噬细胞提取流程

小鼠腹腔巨噬细胞提取流程
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小鼠腹腔巨噬细胞的提取流程如下：
1. 实验材料准备
- 实验动物：C57BL/6小鼠，6-8周龄，体重18-22g。

- 动物饲养条件：常规条件下分笼饲养，自由摄取食物和水。

- 实验试剂：PBS溶液、75%乙醇、无菌手术器械、酶消化试剂（如胶原酶IV）等。

2. 小鼠腹腔注射
- 给小鼠腹腔注射10%的淀粉溶液，每只小鼠注射0.2ml。

- 注射后轻轻按摩小鼠腹部，促进淀粉溶液的吸收。

3. 提取巨噬细胞
- 等待30分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠。

- 迅速打开小鼠腹腔，暴露出内脏。

- 用无菌手术器械轻轻夹出内脏，放入预先准备的PBS溶液中。

- 用剪刀将内脏剪成小块，放入离心管中。

4. 酶消化
- 向离心管中加入适量的酶消化试剂（如胶原酶IV），混匀。

- 将离心管放入37℃水浴锅中，消化30分钟。

- 期间轻轻摇晃离心管，使细胞均匀消化。

5. 细胞悬液制备
- 消化结束后，将离心管从水浴锅中取出。

- 向离心管中加入适量的PBS溶液，用吸管轻轻吹打，使细胞悬浮。

- 离心管中收集到的细胞悬液即为小鼠腹腔巨噬细胞。

6. 细胞计数和纯度鉴定
- 取适量细胞悬液，用台盼蓝染色，观察细胞形态和数量。

- 细胞计数和纯度鉴定后，将细胞悬液分装到不同离心管中，冻存于-80℃冰箱备用。

注意事项：
- 实验过程中应严格遵守无菌操作规程，避免污染。

- 在处理小鼠时，应尽量减少对小鼠的伤害，减少痛苦。

- 细胞悬液的制备过程中，应注意吹打的力度和次数，避免过度吹打导致细胞损伤。

- 细胞计数和纯度鉴定时，应确保台盼蓝染色的准确性和观察的准确性。

- 实验结果仅供参考，如需进一步研究，请进行相关实验验证。