实验室常规试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制

1 MTris-HCI(pH7.4,7.6,8.0)

组份浓度1 MTris-HCI

配制量1 L

配制方法1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 MTris-HCl(pH8.8)

组份浓度1.5 MTris-HCl

配制量1 L

配制方法1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压火菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化

差异很大，温

度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10 X TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)

组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA

配制量1 L

配制方法1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压火菌。

4. 室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)

组份浓度配制量配制方法PBSBuffer 组份浓度137 mMNaCl,2.73 M琴磁柚

IQO ml

1. N.1OAC - 3H.OH于100-200 m：疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵

2、加入冰酯敌讷帑pH值至4

3加去离子庆粕増液證容至20ml.

mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4

配制量1 L

配制方法1.称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至

7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1 L

4. 咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mMCaCI2和0.5 mMMgCI2。10 M醋酸铵

组份浓度10 M醋酸铵

配制量100ml

配制方法1.称量77.1 g醋酸铵置于100〜200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚

配制方法

1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些

液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160 C对

其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和

DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯

酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作

均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡

使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20 C,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取岀的苯酚首先在室温下

放置使其达到室温，然后在68 C水浴中使苯酚充分融解。

②加入羟基喹啉(8-Quinolinol )至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完

全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1 MTris-HCl ( pH8.0 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层

后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1 MTris-HCl ( pH8.0 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分

层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1 )。氯仿可使蛋白

质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1 )混合均匀后，移入棕色玻

璃瓶中4 C保存。

10%(W/V)SDS

2NNaOH

组份浓度2NNaOH

配制量100ml 配制方法

1•量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中（NaOF溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2. 称取8 gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5NHCI

组份浓度2.5NHCI

配制量100ml

配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N ），均匀混合。

2. 室温保存。

5 MNaCl

组份浓度5 MNaCl

配制量1 L

配制方法1.称取292.2 gNaCl置于1 L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至 1 L后，适量分成小份。

3. 咼温咼压火菌后，4°C保存。

20%（W/V）Glucose

组份浓度20%（W/V）Glucose

配制量100ml

配制方法

1. 称取20 gGlucose置于100〜200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解

2. 加去离子水将溶液定容至100ml。

3. 咼温咼压火菌后，4 C保存。

Solution 1（质粒提取用）

组份浓度25 mMTris-HCl （pH8.0 ）,10 mMEDTA,50 mMGlucose

配制量1 L