最新实验5琥珀酸脱氢酶ALTPPT课件
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2 掌握酶活性单位的概念和计算方法 3 微量移液器的使用
分光光度计的使用
样品池
波长
毛面
读数
光面
拉杆，1-4档
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式下调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
结束语
谢谢大家聆听！！！
19
实验结果
方法一：以空白管调0，测A测定、A标准、A对照
谷丙转氨酶活性单位/mL鼠肝匀浆 = ? U/ml
测定管中生成丙酮酸的质量
=
—A—测定— A标准
×
m标准
对照管中生成丙酮酸的质量
=
—A—对照— A标准
×
m标准
30min中生成丙酮酸的质量 = m测定 – m对照
=
—A测—定—-A—对照— A标准
血清谷-丙转氨酶活性单位
在pH 7.4、37℃条件下， 每毫升肝匀浆与底物保温30min后， 每生成2.5 g的丙酮酸作为 1个谷-丙转氨酶的活性单位， 血清中GPT正常值为2-40 U/mL。
实验步骤
标准管法测定酶活性： 1、取干燥试管4支，标号
测定管 对照管 标准管 空白管 2、依次加入试剂，混匀，37℃保温 3、呈色反应后，520nm比色测OD值
实验目的
了解琥珀酸脱氢酶的作用及 酶促反应中的竞争性抑制作用
注意事项
注意区分肌肉与筋膜； 家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多； 12 ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入； 碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干； 滴加试剂时，一定要看清试剂的名称和浓度； 滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入，盖住液面即可； 观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝； 实验完成后试管要用皂粉清洗。
比色杯 1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光线从光面通过
2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面
ALT测定的临床意义
用本法测定血ALT正常值为40 U/ml以下
肝细胞中ALT最丰富，当肝脏疾病致肝细胞受损时， ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。 测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死； 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎； 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。 饮酒、油腻饮食、过劳等因素也会导致ALT短暂增高
×
m标准
活性单位
=
30min生成丙酮酸的质量 ————————————
1 ·——
2.5 g
V测定
方法二：以空白管调0，测A'标准 以对照管调0，测A'测定
活性单位
=
——AA—''—测 标—定准——×—m—标准——
1 ·——
(U/ml)
2.5 g
V测定
注意事项
• 保温温度和时间要精确，即酶发挥催化作用 的环境要一致。
实 验 22
改良Mohum法测定 鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性
实验目的
掌握GPT活性测定的基本原理 熟悉GPT活性测定的具体操作方法 了解血清GPT活性测定的临床意义
实验原理
丙氨酸
-酮戊二酸
GPT
丙酮酸
谷氨酸
2,4-二硝基苯
丙酮酸二硝基苯（碱性溶液中呈棕色）
在520nm波长测定其光密度，与已知浓度的丙酮 酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性
分光光度计的使用
样品池
波长
毛面
读数
光面
拉杆，1-4档
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式下调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
结束语
谢谢大家聆听！！！
19
实验结果
方法一：以空白管调0，测A测定、A标准、A对照
谷丙转氨酶活性单位/mL鼠肝匀浆 = ? U/ml
测定管中生成丙酮酸的质量
=
—A—测定— A标准
×
m标准
对照管中生成丙酮酸的质量
=
—A—对照— A标准
×
m标准
30min中生成丙酮酸的质量 = m测定 – m对照
=
—A测—定—-A—对照— A标准
血清谷-丙转氨酶活性单位
在pH 7.4、37℃条件下， 每毫升肝匀浆与底物保温30min后， 每生成2.5 g的丙酮酸作为 1个谷-丙转氨酶的活性单位， 血清中GPT正常值为2-40 U/mL。
实验步骤
标准管法测定酶活性： 1、取干燥试管4支，标号
测定管 对照管 标准管 空白管 2、依次加入试剂，混匀，37℃保温 3、呈色反应后，520nm比色测OD值
实验目的
了解琥珀酸脱氢酶的作用及 酶促反应中的竞争性抑制作用
注意事项
注意区分肌肉与筋膜； 家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多； 12 ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入； 碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干； 滴加试剂时，一定要看清试剂的名称和浓度； 滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入，盖住液面即可； 观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝； 实验完成后试管要用皂粉清洗。
比色杯 1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光线从光面通过
2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面
ALT测定的临床意义
用本法测定血ALT正常值为40 U/ml以下
肝细胞中ALT最丰富，当肝脏疾病致肝细胞受损时， ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。 测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死； 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎； 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。 饮酒、油腻饮食、过劳等因素也会导致ALT短暂增高
×
m标准
活性单位
=
30min生成丙酮酸的质量 ————————————
1 ·——
2.5 g
V测定
方法二：以空白管调0，测A'标准 以对照管调0，测A'测定
活性单位
=
——AA—''—测 标—定准——×—m—标准——
1 ·——
(U/ml)
2.5 g
V测定
注意事项
• 保温温度和时间要精确，即酶发挥催化作用 的环境要一致。
实 验 22
改良Mohum法测定 鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性
实验目的
掌握GPT活性测定的基本原理 熟悉GPT活性测定的具体操作方法 了解血清GPT活性测定的临床意义
实验原理
丙氨酸
-酮戊二酸
GPT
丙酮酸
谷氨酸
2,4-二硝基苯
丙酮酸二硝基苯（碱性溶液中呈棕色）
在520nm波长测定其光密度，与已知浓度的丙酮 酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性