钙离子通道TRPV6在破骨细胞中的表达及功能

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司）。实验仪器：ＣＯ：恒温培养箱（Ｓａｎｙｏ），荧光倒置
相差显微镜（ＯｌｙｍｐｕｓＩＸ７１），激光共聚焦显微镜（Ｌｅｉ．ｃａ），高速离心机（Ｓａｎｙｏ）。
１．２破骨细胞的培养
在２４孔板中每孔接种５Ｘ１０
道蛋白与钙离子转运有关，并证实该蛋白可将钙离子由细胞外转运至细胞内。经研究证实，该通道蛋白属于ＴＲＰ超家族中ＴＲＰＶ亚家族，分别命名为ＴＲＰＶ５和ＴＲＰＶ６，它们是目前唯一已知的高选择性钙离子通
道。。近来已经证明，ＴＲＰＶ５和ＴＲＰＶ６是促进跨细
个小鼠成骨细胞。成骨细胞接种２４ｈ后，取６～７周小
鼠的股骨和胫骨，剪去干骺端，用含有１，２５（ＯＨ）Ｄ
和ＰＧＥ，的全 —ＭＥＭ培养基［１５％胎牛血清，１０ “
１材料与方法
１．１实验材料和仪器实验材料：抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒（Ｓｉｇｍａ），一ＭＥＭ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ），胎牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ），１，２５（ＯＨ）：Ｄ，— ｌｅｘｉｓＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ），牛血清白蛋白（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕ．
在，但其蛋白表达的量不多，且对破骨细胞内钙离子浓度影响不大。结论钙离子通道ＴＲＰＶ６在破骨细胞内存
【关键词】钙离子通道；ＴＲＰＶ６；破骨细胞
骨形成和骨吸收是重要的人体生理活动，生理情
况下两者处于一个动态的平衡过程，任何一方发生障
运到细胞间液中才能保证破骨细胞的骨吸收不断进行。钙离子通道参与了破骨细胞的移动和骨基质的降解，在骨基质的降解中起着关键作用。ＨＯＥＮＤＥＲＯＰ等在Ｘｅｎｏｐｕｓ光滑卵母细胞中发现一种新型的通
ｍｉｎ，ＢＳＡ），Ａｎｔｉ —ＴＲＰＶ６抗体（ＡｌｏｍｏｎｅＬａｂｓ，Ｌｔｄ．），兔抗磷酸甘油醛脱氢酶（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙ．
充质细胞联合培养获得破骨细胞，利用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫荧光的方法检测ＴＲＰＶ６在破骨细胞上的表达情况，并通过ＲＮＡ干扰技术检测ＴＲＰＶ６对破骨细胞钙离子转运的作用。结果在，但对其钙离子转运作用有限。免疫荧光证实ＴＲＰＶ６在破骨细胞内存
崔军，孟波，张丽。，贾黎
北京大学深圳医院口腔科（广东深圳５１８０３６）；广东省口腔医院口腔种植中心（广州５１０２８０）
【摘要】目的
探讨钙离子通道ＴＲＰＶ６在破骨细胞中的表达及功能。方法
采用骨髓单核细胞和骨髓间
广东医学２０１５年７月第３６卷第１４期ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＪｕ１．２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．１４
・
２１３３・
钙离子通道ＴＲＰＶ６在破骨细胞中的表达及功能术
（ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，ＦＩＴＣ）标记兔抗小鼠二抗，
Ｆｕｒａ一２（ｐｅｎｔａｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ，Ａｎａｓｐｅｃ）（北京博奥森公
碍都会导致相应的骨相关疾病。口腔临床中常见的牙
齿松动、种植体松动、颌骨吸收等疾病的病理基础都是
骨吸收大于骨形成。破骨细胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ）是引起骨吸
收的主要细胞。当破骨细胞数量增多、活性增强，将会导致骨吸收增加，往往会出现牙根吸收松动等方面的疾病；反之，破骨细胞数量减少、活性降低又会导致骨吸收减慢，通常会出现牙萌出障碍等方面的疾病。破骨细胞的骨吸收过程包括细胞黏附、泌酸、降解物质的运输等多个环节。骨组织是由钙磷等无机质和Ｉ型胶原等有机质组成的，破骨细胞骨吸收过程中钙基质被降解后以离子形式存留于吸收腔隙中，需要及时转
ｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＧＡＰＤＨ）多克隆抗体，辣根过氧化物酶（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）标记羊抗小鼠二抗（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ），ＤＡＰＩ，异硫氰酸荧光素