癌细胞实验报告

一、实验目的
1. 学习细胞培养的基本操作方法。

2. 掌握癌细胞体外培养的技术。

3. 了解癌细胞与正常细胞的区别，并对癌细胞进行鉴定。

二、实验原理
细胞培养是指将细胞从生物体内取出，在体外的人工条件下进行生存、生长、繁殖和传代的一种技术。

癌细胞是指发生癌变的细胞，其具有无限增殖、形态改变、侵袭和转移等特征。

通过体外培养癌细胞，可以研究其生物学特性，为癌症的诊断、治疗和预防提供理论依据。

三、实验材料
1. 细胞：HeLa细胞（人宫颈癌细胞）
2. 器材：手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管（灭菌后备用）、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜
3. 试剂：含有5%小牛血清的MEM培养液、0.01mol/L PBS、0.25%胰蛋白酶-
0.02%EDTA混合消化液、75%乙醇
四、实验方法
1. 原代细胞培养
（1）取材：用颈椎脱位法使乳兔迅速死亡。

然后，把整个动物浸入盛有75%乙醇
的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。

用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏。

置于无菌平皿中。

（2）切割：用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗几次，然后用手术刀将脏器切成
1mm×1mm×1mm的小块。

（3）接种：将小块组织放入含有5%小牛血清的MEM培养液中，用吸管轻轻吹打，
使组织分散成细胞悬液。

将细胞悬液接种于培养瓶中，放入二氧化碳培养箱中培养。

2. 细胞传代培养
当细胞生长到一定程度后，用胰蛋白酶-EDTA混合消化液消化细胞，然后接种于新
的培养瓶中，继续培养。

3. 细胞鉴定
（1）形态学观察：用倒置显微镜观察细胞形态，比较癌细胞与正常细胞的差异。

（2）细胞周期检测：采用流式细胞术检测细胞周期。

（3）细胞表面标志物检测：采用免疫荧光法检测癌细胞表面标志物。

五、实验结果
1. 原代细胞培养：接种后，细胞在培养瓶中生长良好，呈贴壁生长。

2. 细胞传代培养：细胞传代后，生长速度加快，形态趋于一致。

3. 细胞鉴定：
（1）形态学观察：癌细胞呈多形性，细胞核大、深染，核仁明显，与正常细胞相比，癌细胞体积较大，形态不规则。

（2）细胞周期检测：癌细胞处于S期和G2/M期的时间明显缩短，表明癌细胞增殖速度较快。

（3）细胞表面标志物检测：癌细胞表面表达E-cadherin、PCNA等标志物，与正常细胞相比，表达水平较高。

六、实验讨论
1. 本实验成功培养了HeLa细胞，并通过形态学、细胞周期和细胞表面标志物等指标对癌细胞进行了鉴定。

2. 细胞培养过程中，要注意无菌操作，避免污染。

3. 细胞传代培养时，要掌握合适的传代时间，避免细胞生长过快或过慢。

4. 本实验为研究癌细胞生物学特性提供了实验基础，有助于进一步探讨癌症的发生、发展和治疗。

七、实验结论
本实验成功培养了HeLa细胞，并通过多种方法对癌细胞进行了鉴定，为后续研究癌细胞生物学特性提供了实验基础。