表面微生物的测定方法验证报告

方法验证报告
公共场所卫生检验方法
第5部分：集中空调通风系统空调风管内表面微生物
GB/T 18204.5-2013(11)
1.目的
验证培养法测定集中空调通风系统风管内表面微生物指标，来判断在本实验室此方法的适用性。

2.方法内容
2.1 原理
集中空调通风系统风管内表面采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃~37℃、48h培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数为细菌总数，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5天培养所形成的菌落数为真菌总数。

2.2 仪器和设备
2.2.1定量采样机器人或采样规格板：采样机器人采样面积为50 cm2或100 cm2，采样精度为与标准方法的相对误差小于20%；采样规格板面积为25 cm2。

2.2.2高压蒸汽灭菌器。

2.2.3恒温培养箱。

2.2.4平皿：φ90 mm。

2.3培养基和试剂
2.3.1 营养琼脂培养基：
蛋白胨10 g
氯化钠5g
肉膏5g
琼脂20 g
蒸馏水1000mL
2.3.2制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中，校正pH值为7.2~7.6，加人琼脂，121 C ，20 min灭菌备用。

2.3.3沙氏琼脂培养基：
蛋白胨10 g
葡萄糖40g
琼脂20 g
蒸馏水1000mL
制法：将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中，校正pH为5.5~6.0，加入琼脂，115 ℃，
15 min灭菌备用。

2.3.4Tween-80(=0.01%)。

2.4采样
采样：使用定量采样机器人或人工法(11.3.1)在确定的位置、规定的面积内采样，表面积尘较多时用刮拭法采样，积尘较少不适宜刮拭法时用擦拭法采样。

整个采样过程应无菌操作。

为避免人工采样对采样环境的影响，宜采用机器人采样。

2.5测量步骤
2.5.1刮拭法采集的样品：将采集的积尘样品无菌操作称取1 g，加入到Tween-80水溶液(11.4.3)中，做10倍梯级稀释,取适宜稀释度1mL倾注法接种平皿。

2.5.2擦拭法采集的样品：将擦拭物无菌操作加入到Tween-80水溶液(11.4.3)中，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度1mL倾注法接种平皿。

2.6结果计算
2.6.1风管表面细菌总数、真菌总数测定结果：菌落计数，记录结果并按稀释比换算成CFU/25 cm2(每25平方厘米风管表面菌落形成单位)。

2.6.2空调系统风管表面微生物测定结果：一个空调系统风管表面细菌总数、真菌总数的测定结果分别按该系统全部检测的风管表面细菌总数、真菌总数测定值中的最大值给出。

3.方法验证结果
3.1空白实验
对灭菌蒸馏水7次做表面微生物的测定，所得结果如下表：
表1 空白试验结果
序号样品分析编号平皿菌落数结果（CFU/25cm2）
1 灭菌蒸馏水-1 0 未检出
2 灭菌蒸馏水-2 0 未检出
3 灭菌蒸馏水-3 0 未检出
4 灭菌蒸馏水-4 0 未检出
5 灭菌蒸馏水-5 0 未检出
6 灭菌蒸馏水-6 0 未检出
7 灭菌蒸馏水-7 0 未检出
3.2样品测试
对1个样分别做7风管表面微生物的测定，所得结果如下表：
表2 样品细菌总数测试结果
序号 样品分析编号 平皿菌落数
结果（CFU/25cm 2）
1 20110302W010101 5 8
2 20110302W010201 8
3 20110302W010301
4 4 20110302W010401 6
5 20110302W010501 8
6 20110302W010601
7 7
20110302W010701
6
表3 样品真菌总数测试结果
序号 样品分析编号 平皿菌落数
结果（CFU/25cm 2）
1 20110302W010101
2 4
2 20110302W010201 2
3 20110302W010301
4 4 20110302W010401 3
5 20110302W010501 4
6 20110302W010601 3 7
20110302W010701
2
根据以上测试结果得知，蒸馏水灭菌后测得结果均为阴性，根据以上测试结果得知，空白测得结果均未检出，细菌总数测的结果为8CFU/ 25m 2，真菌总数测的结果为4 CFU/ 25m 2，因此本实验室的环境和仪器、试剂均符合标准的要求。

4.经验证，本实验室已具备开展该方法测试所需的仪器设备并已达到相关仪器检定标准，相关操作人员技术成熟，分析结果准确。

相对偏差、相对标准偏差满足标准要求。

表明本实验室已具备开展该方法进行测试的能力。