中空纤维应用集锦2

GE Healthcare
中空纤维滤柱分离纯化应用集锦(二) Application notes for hollow fiber cartridges (2)
目录
中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用 (1)
生物制药工艺中无热原缓冲液的快速制备 (14)
中空纤维膜过滤技术在胰岛素晶体收集中的应用 (17)
中空纤维在乳胶免疫比浊法中去除游离抗体的应用 (21)
中空纤维膜过滤技术在人用病毒类疫苗中的应用 (25)
中空纤维膜过滤技术在动物病毒疫苗中的应用 (35)
中空纤维过滤技术在百白破疫苗中的应用 (45)
中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用
作为生物药物的“重磅炸弹”，大规模动物细胞培养生产治疗用单抗已成为生物制药发展的主导。

Mabselect SuRe亲和层析结合Capto Adhere复合离子交换两步层析工艺已经成为抗体生产工艺的亮点，而中空纤维膜过滤技术是一种快速高效的膜分离技术，具有容尘量高、温和低剪切力、操作灵活、成本低、易于放大等优点，因此广泛应用于重组蛋白、疫苗等生物制药领域。

通过将中空纤维膜过滤技术和下游两步层析工艺相结合，可以成功的迎接几十甚至上百公斤单抗生产所面临的挑战。

1.单抗的发展和面临的挑战
近年来，高密度细胞培养技术和大规模蛋白质生产纯化技术的不断进步，推动了治疗用抗体产业化的发展。

和传统的基因工程蛋白药物相比，治疗用单抗具有一些不同的特点：(1) 高剂量
单抗的给药剂量较高，一般从数百毫克到克级，且给药方式多为静脉注射。

因此，抗体的生产规模和产品质量都面临着巨大挑战。

为了满足日益增长的高剂量抗体药物需求，大规模细胞培养技术不断发展：细胞密度已达107 ~ 108 cell/ml；表达量从1~5g/L增加到>10g/L，甚至出现27g/L的表达量新高1；细胞培养规模从上千升增加到20,000升。

这就要求开发一条高速、高载量的下游分离纯化工艺，以便能够快速处理上万升的培养液，并实现每批几十公斤甚至上百公斤抗体的生产。

另外，高的给药剂量也对产品质量提出了更高的要求。

为了保证药品安全，很多杂质成分必需降低到极低水平，如宿主DNA，内毒素等；潜在的病毒、泄漏的亲和配基以及抗体的聚集体也必须有效去除，这就要求采用更高效的分离纯化工艺，并对每步工艺去除各种杂质的能力进行深入研究。

(2) 易形成多种变体
抗体是一类结构比较复杂的大分子，比活和稳定性很大程度上取决于其翻译后修饰的程度，如糖基化、磷酸化等。

在生产过程中会由于糖基化程度不同、蛋白酶作用、以及脱氨基和脱酰胺等化学反应而产生性质不同的多种抗体变体2；另外，氧化、聚集和片段化也是常见的降解途径。

针对这些变体，在表达和纯化过程中选择参数 (如pH、盐浓度等) 时要充分考虑到抗体的稳定性；另外，应严格控制细胞培养的条件，如溶氧、渗透压等3；同时加快下游分离纯化的速度，最大程度避免抗体在纯化过程中产生变体，保证终产品的均一性和高比活，也有利于控制终产品的内毒素水平。

(3) 高附加值
作为多种癌症和抗排异的特效药，高纯度的治疗用抗体具有极高的市场价值。

因此收率成为抗体生产过程中的重要考量指标。

减少不必要的工艺步骤不仅可以提高收率，还能提高生产效率。

1
基于抗体药物的上述特点，为了提高生产效率，达到严格的产品质量要求，抗体的生产工艺也必须着眼于：高处理速度、高载量，更简单有效！
通用电气医疗集团为单抗生产提供了快速高效的完整解决方案（图1），将中空纤维膜过滤技术和高流速高载量的新一代Mabselect SuRe亲和层析介质、Capto Adhere两步层析工艺相结合，成为治疗用抗体生产纯化的趋势4。

注射用抗体
图1治疗用单抗的一般生产工艺流程
Mabselect SuRe亲和层析介质采用改造过的新型SuRe配基，可以耐受0.1-0.5M NaOH的反复在位清洗5。

可以避免抗体产品批间交叉污染，显著降低内毒素水平，也有利于延长层析介质寿命，降低CIP/SIP的成本。

R.Hahn6发现，与其他蛋白A亲和层析介质相比，Mabselect SuRe具有无可比拟的稳定性，配基脱落最少，寿命最长，宿主蛋白HCP的残留比玻璃基架的蛋白A介质低10倍以上。

Mabselect SuRe和Capto Adhere采用高流速琼脂糖骨架，专为大规模层析柱的装填而设计，可以在高流速下仍保持高动态载量和较低的反压，尤其适于自动装填大规模层析柱以快速处理上万升细胞培养液，如图2。

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图2大型工业层析柱的自动化填装
2.中空纤维膜分离技术
2.1切向流过滤技术简介
膜过滤技术，又称膜分离技术，是采用具有一定孔径的高分子聚合物，根据体积大小对不同的物质进行筛分的物理分离手段。

膜分离技术在生物药物生产过程中扮演着重要角色，尤其近二十年来，膜分离技术发展迅速，不断出现新的膜结构、材质以及操作方式，以满足生物制药日益增长的需求。

切向流技术（Tangential Flow Filtration, TFF ）又称错流过滤（Cross-Flow Filtration ，CFF ），其操作原理如图3：料液以一定的流速在膜表面循环，小于膜孔径的物质可以透过膜到透过端，而大于膜孔径的物质会被膜截留，从而实现不同物质的分级分离。

5，料液/缓冲液补料口
4，Permeate （透过端）压力表
3，Retentate （回流端）压力表
2，Feed （入口端）压力表
1，料液储罐
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图3 切向流过滤示意图
切向流过滤膜按孔径可分为超滤膜和微滤膜：孔径较小的超滤膜常用于蛋白质的浓缩；而孔径较大的微滤膜( 如 0.45μ )常用于培养液中细胞和细胞碎片的去除，实现层析前料液的澄清。

由于切向流过滤技术引入了平行于过滤膜表面的切向流速(Crossflow)，在过滤过程中对膜表面不断进行冲刷，一定程度上可以缓解浓度极化层(Concentration Polarization Layer)和滤饼(Filter Cake)的形成，从而降低过滤阻力(Filtration Resistance)，提高单位膜面积的处理量和过滤速度。

2.2中空纤维膜分离技术
中空纤维膜采用切向流过滤的方式，其膜组件结构如图4所示：一定孔径的膜 (如0.45 μ) 制成纤维状的膜管结构，细胞培养液在膜管的内部流过形成切向流，目标抗体透过膜孔，而细胞和细胞碎片被截留，收集透过端(permeate)即得到澄清的培养液。

图4 中空纤维膜开放式的流道结构
Robert van Reis 等人早在90年代初就进行了0.2 μ中空纤维膜澄清CHO细胞培养液生产 rt-PA的研究8，并放大到180平方米的中空纤维膜系统处理12,000L细胞培养液，澄清收率99%，每平米膜每小时平均处理速度达27升。

此外，细胞培养液在处理前后，总细胞密度
4
收率为102 ± 18%，细胞活率(viability)降低仅7%。

这表明中空纤维膜的低剪切力有利于保持细胞的完整性，操作过程中并不会打碎细胞，避免胞内杂质的释放。

中空纤维膜低剪切力的特点也广泛用于病毒类大分子的浓缩和澄清，可以有效保护病毒分子的完整性，如采用0.65 μ中空纤维滤膜澄清酵母裂解液生产HPV疫苗9；750k中空纤维膜浓缩MDCK细胞流感病毒培养液，同时有效去除宿主DNA等10,11。

无血清悬浮培养的动物细胞 (如CHO细胞) 将单抗分泌到培养液上清，培养液中含有大量细胞和细胞碎片。

传统方式采用高速离心结合死端过滤，或是多级的死端过滤经过“粗滤-精滤”等不同的过滤阶段去除固体颗粒物质。

但对于几千升乃至上万升的细胞培养液，传统操作方式的弊端也非常明显：大型连续流高速离心机的设备非常昂贵，而转子的日常维护成本更使企业不堪重负；离心后的料液还必须再经过0.2~0.45 μ死端过滤才能将小的细胞碎片完全除去，增加了操作步骤和成本。

而多级死端过滤工艺的滤芯成本非常昂贵，上游料液性质的波动也会显著影响死端过滤的效能，工艺耐用性不好。

中空纤维膜具有开放式管状流道，容尘量高，不易堵塞。

细胞培养液可以不经过任何预处理直接用中空纤维膜进行一步澄清，简化了操作步骤，降低了成本。

2.3膜分离术语
剪切力 (Shear force, 1/sec) = 4Q / n π r3。

Q – feed 进样流量(m3/sec), n – 中空纤维管的根数, r – 中空纤维管的内径(m)
剪切力(Shear)是切向流速的另一种表达方式，剪切力和切向流速成正比，和纤维管的内径和纤维管的数量成反比。

剪切力越大，流体对膜表面冲刷能力越强。

透膜压力（TMP，transmembrane pressure，psi 磅每平方英寸) = (P F+P R)/2 - P P P F (psi 磅每平方英寸；bar 巴): Feed (入口) 压力
P R(psi 磅每平方英寸；bar 巴): Retentate (回流端) 压力
P P (psi 磅每平方英寸；bar 巴): Permeate (透过端) 压力
透膜压力(TMP)是膜两侧的压差（ΔP），是过滤的推动力。

根据流体力学，切向流过滤膜内侧压力沿着膜表面流道逐渐降低(P F > P R)，从而导致TMP沿着流道也逐渐降低。

透过通量(Flux, LMH, L/m2/hr)：单位时间单位膜面积的过滤速度，可以直接利用小试Flux 数据作为线性放大后所需膜面积或操作时间的依据。

膜载量(Capacity, L/m2)：单位膜面积在规定时间内所能处理的料液量，表征膜的处理
能力。

对于细胞培养液的澄清，膜载量还要考虑操作过程中因膜逐渐堵塞而导致膜对抗体的截留。

因此一定操作条件下膜的载量可以理解为：在保证抗体通透性的前提下，规定的操作时间内所能处理的料液体积。

剪切力(切向流速)和透膜压力是非常重要的操作参数，需要在实验过程中进行优化，以达到最佳的透过通量和膜载量！
2.4 过滤理论
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中空纤维微滤膜进行细胞培养液的澄清，需要使目标抗体能够透过膜，而细胞和细胞碎片等颗粒被充分截留。

过程评价主要指标包括：处理速度(Flux)、膜载量(Capacity)和收率。

如图5所示：切向流微滤过程中，培养液中的细胞和碎片等固体颗粒会倾向于在膜表面沉积，形成厚度为L c的动态的滤饼层(Filter Cake)。

动态的滤饼层会产生额外的传质阻力使部分抗体截留，因此在滤饼层表面产生厚度为δ的浓度极化层(Concentration Polarization Layer)，形成抗体分子的浓度梯度。

图5 切向流微滤过程中膜表面滤饼层和浓度极化层示意图
根据过滤理论12，Flux可表示为：Flux = ΔP / μ R t = TMP /μ R t, (1)
其中ΔP为过滤的推动力，μ为料液黏度， R t为总的过滤阻力。

总过滤阻力(R t)等于各部分过滤阻力之和：即R t = R c + R p + R if + R m，其中R c为滤饼层阻力，R p为浓度极化层阻力，R if为膜内部堵塞所产生的阻力，R m为洁净的膜本身的过滤阻力。

对于开放式的微孔滤膜进行细胞培养液的澄清，滤饼阻力R c为主要阻力，其他阻力项基本可以忽略不计。

滤饼层阻力13R c = αav×w c =αav×ρs(1−εav) L c (2)
其中αav– 滤饼的比过滤阻力（m/kg），ρs– 滤饼密度（kg/m3）, εav – 滤饼平均孔隙率，L c – 滤饼厚度(m)
(2)式中，αav和εav可以表示为ΔP的函数。

增加剪切力（切向流速）可以增强流体对膜表面滤饼的冲洗能力，使滤饼厚度L c下降，从而降低过滤阻力，增加Flux，减轻膜堵塞的程度。

增加过滤压力ΔP会导致滤饼被压缩，因而比过滤阻力αav增加，滤饼孔隙率εav降低，同时压力增加使更多固体颗粒倾向于在膜上沉积，因此滤饼厚度L c也相应增加，导致过滤阻力增加。

过滤阻力的增加往往会超过推动力ΔP的增加，最终导致透过通量降低，膜容易堵塞，影响抗体的通透性。

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所以，为了避免中空纤维膜堵塞，改善膜的透过通量Flux，需要尽可能提高剪切力shear(切向流速)，并降低过滤压力。

除透过通量外，还必须考虑抗体的通透性以保证抗体收率。

如图5，抗体须经过浓度极化层到达滤饼表面，然后透过滤饼才能最终透过膜。

然而滤饼表面的部分抗体可能被切向流冲刷带走而无法有效透过。

因此定义冲刷因子（φ）为滤饼表面被切向流带走的抗体的分数。

显然，剪切力越高，φ值越大，能够进入滤饼的抗体越少。

滤饼的过滤阻力或冲刷因子增加到一定程度，抗体分子的通透性降低，表现为膜对抗体分子的透过产生排斥。

膜对抗体的排斥程度可以用R rej来表示：
R rej = 1- C p/C b (3)
R rej越大，膜透过液中抗体浓度C p越低，膜总阻力越大，对抗体的排斥程度就越严重。

增加过滤压力ΔP，滤饼会被压缩，单位厚度滤饼对抗体的通透性降低，导致R rej增加。

增加剪切力，可以降低滤饼厚度减少阻力，改善抗体通透性；但剪切力增加到一定程度后，冲刷因子的增加占据主导地位，导致进入滤饼层的抗体减少，从而影响抗体的通透性。

2.5操作参数和操作方式
为了保证较高的透过通量Flux和好的抗体通透性，ΔP（TMP）应尽量降低，而剪切力不能过低也不能过高。

对于动物细胞培养液的澄清，根据不同的细胞密度和细胞活率，4000~8000 1/sec的剪切力比较适中，过高或过低均可能导致抗体通透性降低。

为了降低过滤压力TMP，推荐采用控制透过端流速的操作方式(Permeate Flow Control，PFC)，即用泵或阀限制透过端的流速，通过增加透过端压力(P p >0)来降低过滤压力，从而有效增加Flux和抗体通透性14。

图6采用PFC操作方式，可避免过滤初期由于过滤速度过快导致膜的快速堵塞，在较长的时间内保持恒定的Flux，延缓过滤阻力的增加，在增加膜载量的同时保证高收率。

合适的PFC流量可以使膜载量和透过通量达到最优，一般可以在30~50LMH之间进行优化。

图6 PFC操作方式
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随着过滤的进行，回流端含固体的料液逐渐被浓缩，固体浓度不断增加。

增加的固体浓度会导致滤饼厚度L c进一步增加，从而增加TMP，降低Flux和抗体通透性。

所以在过滤过程中，要对关键参数TMP的升高进行监控，控制合适的浓缩倍数，及时开始洗滤(diafiltration)，使收率最大化。

对于高密度动物细胞培养液，一般在浓缩倍数为5~10x时开始滤洗，滤洗次数3~5x，使收率最大化。

2.6 中空纤维膜的选择
中空纤维膜根据纤维管的内径和纤维管长度分为不同的型号，对于培养液澄清而言，中空纤维膜的选择遵循一些基本的原则15。

(1) 纤维管内径
纤维管内径直接决定了中空纤维膜的容尘量，为了降低入口压力P F，倾向于选择纤维管内径1mm以上的较开放的中空纤维滤柱，直接处理固含量较高的高密度细胞培养液。

(2) 纤维管长度
根据流体力学12，TMP和Flux沿切向流流道逐渐下降。

当剪切力一定时，含固体的粘稠料液流经较长的流道会使入口处的压力P F增加，导致中空纤维膜沿流道各处的TMP、Flux和抗体通透性都产生较大差异；高P F也会限制滤洗前所能浓缩的倍数。

图 7 沿流道的压力分布
如图7，透过端采用PFC方式使透过端压力P p增加：即透过端P p >0。

对于较高剪切力或较低的透过端流速，P p有可能会大于P R，在靠近中空纤维回流端出口附近的一段膜面积上形成反流。

入口处的高压力和靠近回流端的反流会导致膜总体利用率下降。

因此，对于采用PFC的澄清应用，一般选择较短的中空纤维滤柱。

常见的纤维管长度有30cm，60cm, 115cm，为了降低入口压力并提高膜利用率，30~60cm的中空纤维滤柱比较合适。

3.中空纤维澄清动物细胞培养液实例
3.1 实验条件
细胞培养液：无血清CHO细胞培养液，Batch No. 20081210
X t = ~5 x 106 cell/ml，活率viability 50~60%
实验仪器： Quixstand 中空纤维系统 + Masterflex I/P73 蠕动泵
中空纤维滤柱：CFP-4-E-4MA_0.042m2（0.45 μ），CFP-2-E-4MA_0.042m2 (0.2 μ)
以上两种滤膜，纤维管内径为1mm, 纤维管长度30cm
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3.2 条件优化
采用PFC 操作方式，对不同膜孔径、shear 和滤洗倍数等进行了初步优化。

3.2.1滤膜孔径
根据一般的原则，为保证较好的通透性，膜孔径应至少比目标物大10倍。

对于直径约10nm 的抗体，膜的孔径应大于0.1 μ；同时为了有效去除固体颗粒以保护昂贵的亲和层析柱，我们选择0.45 μ和0.2 μ的中空纤维膜进行实验，实验条件如下：
表1膜孔径选择的实验条件
Membranes
HF 0.45 μ HF 0.2 μ Area (m 2) 0.042 0.042 Sample (ml) 2000 1600
Load (L/m 2) 48 38 Shear (1/sec) 4000-6000 8000 CF when dia* 5x 4x Filtrate Quality Good Good
* 指开始滤洗时的浓缩倍数
图8 不同孔径膜的透过通量和收率比较
图8结果表明，使用0.45 μ和0.2 μ的滤膜都可以有效的去除颗粒物，达到保护层析柱的目的。

0.2 μ的中空纤维膜采用8000 1/sec 的较高剪切力来冲刷膜表面，但仍不能有效避免膜堵塞和透过通量的降低；相比之下，0.45 μ的滤膜具有更好的抗体通透性，收率大于80%，透过通量也比0.2 μ膜高近一倍。

料液中细胞碎片的颗粒大小分布和目标分子分子量的不同，可以对不同孔径膜的表现作出一定的解释。

下面使用0.45 μ中空纤维膜进行进一步研究。

3.2.2 膜载量和浓缩倍数 (0.45 μ)
为了降低滤饼阻力对抗体通透性的影响，将剪切力提高到8000 1/sec ，仍采用PFC 操作方式，比较不同处理量和浓缩倍数的影响。

实验结果如下：
表2 不同的处理量和浓缩倍数对澄清的影响
Experiments
Exp 1
Exp 2
Load (L/m 2) 36 48 Shear (1/sec) 8000 8000 PFC (LMH) 25 35 CF when dia 3x 5x Dia. factor 3x 4x Ave. Flux (LMH) 23 21 IgG Recovery % 105% 92% Total time (hr)
2.58
3.60
Dilution 1.7 1.6
由表2，提高剪切力，收率和Flux 均有所增加。

膜处理量为36L/m 2并采用较低的浓缩倍数3x 时，回流料液固含量增加有限，过滤过程中膜基本未发生堵塞，抗体通透性好，因此收率极高。

将处理量增加到48L/m 2，并浓缩到5x 后再开始洗滤，回流端固含量增加5x ，膜通透性有所降低；但通过有效的洗滤，澄清收率仍达到92%，总处理时间仅为3.6hr 。

图9 Exp 2澄清过程中Flux 和TMP 变化趋势
如图9，采用PFC操作方式，可以避免初始阶段微滤膜的快速堵塞，而TMP在过滤过程中逐渐增加，可通过对TMP的监控，确定合适的洗滤时机。

Flux在初始阶段略有下降，后期逐渐平稳，适当降低PFC流速到30LMH会使Flux更加稳定。

因此，实际生产过程中，可以通过微调PFC Flux和洗滤时机等参数，灵活面对上游不同批次料液的性质波动（如细胞密度活率等），工艺耐用性强。

3.2.3 洗滤倍数
料液浓缩一定倍数后进行滤洗，可以最大程度回收回流液中残留的抗体，通过对细胞的充分洗涤使收率最大化。

但过低的浓缩倍数和过多的滤洗易导致样品稀释，因此需要在收率和稀释倍数间做权衡。

图10 洗滤倍数的确定
如图10，Exp1和Exp2分别浓缩3x和5x再开始洗滤，可以看出，浓缩倍数增加，回流端固含量增加，抗体通透性有所降低，但最终混合后的体积也会显著降低。

对于Exp2，滤洗1~4x即可使收率达92%，为了有效避免样品稀释，DV5可以根据情况决定取舍。

多数情况下，亲和层析对体积增加并不敏感，可以考虑回收DV5以提高收率。

实验结果表明，使用0.45 μ中空纤维膜可以方便的进行抗体培养液一步澄清，膜载量
48L/m2，处理时间仅3.6hr，抗体收率可达92%，小试工艺可以直接线性放大到工业规模。

目前国内最大规模的中空纤维系统超过400平米，运行良好。

4.总结和展望
综上，中空纤维一步澄清细胞培养液具有以下特点16：
(1) 中空纤维澄清步骤少，速度快，使产品更均一；
(2) 降低设备投资和操作成本;
(3) 化学稳定性好，有利于内毒素控制；
(4) 开放式孔道直接处理高固含量料液，温和低剪切力有利于抗体稳定；
(5) 工艺耐用性强(Robustness)；
(6) 易于线性放大：由于流体在管状流道中的流体力学模型非常完善，通过维持操作参数恒定，可以直接线性放大。

生产规模中空纤维系统 (图11) 处理量可达上千升甚至上万升。

图11 生产规模的中空纤维过滤系统
基于中空纤维膜过滤技术的上述优点，国外已成功建立了用于大规模澄清细胞培养液的中空纤维系统8。

目前，中空纤维已越来越广泛的用于抗体和其他生物药物的生产，成为大规模抗体两步层析工艺的有力补充，极大的推动了生物制药产业的发展！
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GE Healthcare Life Sciences
应用文章
通用电气医疗集团生命科学部, 2012
生物制药工艺中无热原缓冲液的快速制备
摘要
为保证生物制品质量和安全性，生物制药生产工艺中需要对内毒素进行严格控制。

制药工艺中采用无热原缓冲液可以从源头更有效的避免内毒素对产品的污染，降低分离纯化工艺对内毒素去除能力的要求，实现更稳定可靠的生产过程。

本文采用内毒素挑战实验对制药级中空纤维超滤膜的内毒素截留效率进行验证和评价，取得了满意的结果。

1 介绍
热原（Pyrogen ）又称内毒素（Endotoxin ）,源于革兰氏阴性（Gram-negative ）细菌的细胞外璧，其化学本质是一种脂多糖物质，相对分子质量从几十万到几百万不等。

内毒素经过注射进入人体血液会引起发热、白细胞减少、弥散性血管内凝血等热原反应，严重者会引发休克甚至致死[1]。

因此，为保证药品质量和用药安全，内毒素的控制和去除成为药品工艺开发和工艺控制的重要环节[2]，中华人民共和国历届药典也明确将内毒素检测作为各种生物制品重要的检定指标之一[3]。

近年来，全球蛋白类药物的增长十分迅速，大规模发酵技术、高表达细胞株的构建以及大规模公斤级蛋白纯化技术
的发展引领生物制药领域进入了新的时代。

对于大剂量的药用重组蛋白药物，如人血清白蛋白(rHSA)和单抗而言，内毒素的控制和去除面临更加严峻的挑战[7]。

以单抗药物美罗华(MabThera)为例，其推荐剂量可达500-600mg/dose [4]，终产品内毒素要求<0.05EU/mg ，比微克-毫克级剂量药物的要求更加严格。

而对于剂量达到5-10克的白蛋白药物，其生产工艺控制更是近乎苛刻：不仅要求下游分离纯化工艺具有足够的内毒素去除能力；还需要完善的生产环节控制以尽一切可能避免引入外源内毒素，因此对于生产环境、设备、生产工艺等均提出更高的要求，而严格采用无热原缓冲溶液被证明是确保生产过程产品质量安全的有效手段之一。

超滤法进行热原去除是一种物理分离方法[1]，5k 截留分子量的超滤膜可以将内毒素有效截留，因而成为小分子物质去除热原的标准方法。

制药级中空纤维膜[5]具有接近理想状态的均匀孔径分布（图1），可以在高选择截留效
关键词：热原，内毒素，中空纤维，5k
，无热原缓冲液，超滤，抗体
图1 接近理想状态的均匀膜孔径分布。