丙磺舒钠增效实验

氨节西林钠/丙磺舒钠相关试验研究
一、氨节西林钠/丙磺舒钠急性毒性试验
1、摘要
本试验采用小鼠单次静脉及腹腔注射给药途径，观察氨节西林钠/丙磺舒钠对小鼠的急性毒性反应，测得静脉注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为2594mg/kg及(2380～2858) mg/kg;测得腹腔注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为3113mg/kg及(2880～3383) mg/kg。

2、目的
通过给小鼠单次静脉及腹腔注射氨节西林钠/丙磺舒钠后，观察其毒性反应及测定LD50，为临床应用提供急性毒性试验资料。

3、试验材料
(1)药品:氨节西林钠/丙磺舒钠(3: 1)，试验前用生理盐水溶解后使用
(2)动物:ICR清洁级小白鼠，体重18～20g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK(吉)2003-00010
4、方法与结果
(1)氨节西林钠/丙磺舒钠小鼠静脉注射LD50的测定
根据预试结果计算出组间距为1: ，分为5个剂量组。

取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别以lOg体重静脉注射，给药后即刻观察记录动物反应症状及死亡时间，连续观察14天，结果表明，高剂量组给药后，小鼠出现抽搐死亡，其它剂量组给药后活动减少，对死亡小鼠立即剖检，肉眼未见各脏器异常改变，随着药物剂量减少，小鼠死亡数减少，根据各剂量组死亡率，用SPSS处理软件计算其LD50及95%可信区限，结果见表1。

(2)氨节西林钠/丙磺舒钠小鼠腹腔注射LD50的测定
根据预试结果计算出组间距为1: ，分为5个剂量组。

取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别以10g体重腹腔注射，给药后即刻观察记录动物反应症状及死亡时间，连续观察14天，结果表明，高剂量组给药后，小鼠出现抽搐死亡，其它剂量组给药后活动减少，对死亡小鼠立即剖检，肉眼未见各脏器异常改变，随着药物剂量减少，小鼠死亡数减少，根据各剂量组死亡率，用SPSS处理软件计算其LD50及95%可信区限，结果见表2。

5、结论
采用小鼠单次静脉及腹腔注射氨节西林钠/丙磺舒钠，测得静脉注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为2594mg/kg及(2380～2858) mg/kg;测得腹腔注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为3113mg/kg及(2880～3383)
mg/kg。

二、氨节西林钠/丙磺舒钠大鼠亚急性毒性试验
1、摘要本试验将氨节西林钠/丙磺舒钠以二个剂量给予大鼠腹腔注射，氨节西林钠/丙磺舒钠剂量分别为:高剂量kg;低剂量kg ;(相当于大鼠LD50的1/,1/。

腹腔注射容积为100g体重，连续三周，其亚急性毒性试验结果表明，氨节西林钠/丙磺舒钠对动物进食量，外观行为，体重，毛发生长，粪便排泄等无明显影响;脏器系数与对照组相比无明显差异;血常规与对照组比较无明显差异;血液生化学指标中尿素氮(UREA)高剂量组略有升高，与对照组比较有差异(P < ，其他各项指标与对照组比较无明显差异，病理组织学检查各脏器形态变化与对照组无明显差异。

提示:长期用药可能引起一过性尿素氮升高。

2、试验目的观察及测定大鼠长期腹腔注射氨节西林钠/丙磺舒钠后，是否由于药物蓄积而产生毒性反应，并提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆程度，为临床用药的安全性提供试验依据。

3、试验材料
(1)药物:氨节西林钠/丙磺舒钠((3:1)，试验前用生理盐水溶解后使用
(2)动物:Wistar大鼠，体重80～100g，雌雄各半，由吉林大学基础医学院动物中心提供。

质量合格证号:SCXK(吉)2003-0001。

4、试验方法
试验采用6～8周龄(体重80～100g) Wistar大鼠，动物正常饲养适应一周后，按体重随机分成三组，每组雌雄各5只，每天上午9时腹腔注射给药，氨节西林钠/丙磺舒钠剂量为:高剂量kg;低剂量kg;给药容积为100g体重，对照组给予同体积生理盐水。

给药期间观察动物一般状态，行为活动、饮食及尿便情况，
随时记录异常变化，每周称量体重一次，每天记录进食量，并根据体重变化重新计算给药量，停药次日各组动物各取5只于腹主动脉取血测定血液学及血液生化学各项指标，包括红细胞数、白细胞数、血小板计数，白细胞分类及血红蛋白测定;分离血清进行肝、肾功能检查，然后取出并称重大鼠脏器，包括心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、甲状腺、胸腺、脑、垂体、眼球、视神经、脊髓、延髓、膀肤、翠丸(附翠)、子宫(卵巢)、前列腺、胸骨柄、气管、淋巴结，按体重计算主要脏器系数，并对各剂量组进行肉眼及镜下病理学检查，剩余动物停药继续饲养，观察恢复期变化。

5、试验结果
(1)一般观察:
氨节西林钠/丙磺舒钠给予大鼠腹腔注射高、低二个剂量连续三周，受试动物全部存活，给药前、给药期间及恢复期各组动物活动正常，行为活泼，生长正常，被毛理顺光滑，饮食正常，尿便正常，未见其他异常体征。

试验结果表明，氨节西林钠/丙磺舒钠连续给予大鼠腹腔注射，对大鼠行为活动及外观体征无明显影响。

(2)对体重、进食量的影响
给药前、给药期间及恢复期各剂量组大鼠饮食饮水正常，体重增长，给药组与对照组比较无显著性差异(见表, ,。

6、临床检验:
(1)血液学:
给药期各剂量组用美国雅培血球计数仪测定白细胞(WBC )、红细胞(RBC)、淋巴细胞(LY)、血红蛋白(Hb )、血小板((PLT)中性分叶(GRAN)。

检测结果:给药组动物各项血液学指标均在正常范围内，与对照组比较无显著性差异(见表3)
(2)血液生化学:
给药期各剂量组用日立(7150)全自动生化分析仪测定天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(UREA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、总胆红素(TBIL )、肌肝(CRE )、总胆固醇(CHO)。

检测结果:氨节西林钠/丙磺舒钠给药高剂量组尿素氮(UREA)略有升高，与对组比较有差异(P< =，其他生化学指标均在正常范内，与对组比较无显著性差异(见表4)。

7、组织学检查
（1）肉眼观察:给予大鼠氨节西林钠/丙磺舒钠腹腔注射三周后处死，各剂量组主要脏器肉眼观察(包括心、肝、脾、肺、肾、胃、肾上腺、甲状腺、脑、胸腺、翠丸(附翠)、前列腺、子宫(卵巢)无明显变化，脏器系数与对照组比较无显著性差异(见表5)。

(2)镜下观察:给予大鼠氨节西林钠/丙磺舒钠腹腔注射三周后，各剂量组与对照组各主要脏器(同上)的标本经常规固定、HE染色及组织切片、镜下观察，未见明显病理学改变，结果见病理报告。

8、试验结论
氨节西林钠/丙磺舒钠高、低二个剂量组大鼠腹腔注射三周后，血液生化学指标中尿素氮(UREA)高剂量组与对照组比较有差异(P<，提示:长期用药应监测肾功能变化，其他各项指标与对照组比较无明显差异，病理组织学检查各脏器形态变化与对照组无明显差异。

三、氨节西林钠/丙磺舒钠血管刺激性试验
1、摘要:经试验表明:氨节西林钠/丙磺舒钠静脉滴注无明显血管刺激性。

2、试验目的:通过试验观察氨节西林钠/丙磺舒钠有无血管刺激性。

3、试验药物:氨节西林钠/丙磺舒钠(3：1)，试验时用生理盐水溶解后使用。

4、试验动物:新西兰大耳白家兔，体重～。

由吉林大学实验动物
部提供。

合格证号:SCXK(吉)2003-0001 a
5、试验方法:取健康家兔4只，雌雄各半。

按体重及性别分为%氯化钠注射液对照组和氨节西林钠/丙磺舒钠，每组2只。

氨节西林钠/丙磺舒钠于家兔左耳耳缘静脉慢速滴注lOml/kg，每日1次，连续7日。

对照组同法静脉滴注%氯化钠注射液。

除每次给药时及给药后观察给药局部表现外，于末次静脉滴注后剪下药侧耳廓，常规固定后，在距静脉滴注入针近心端1cm处，每隔1cm切取宽标本，共取3块标本。

切片染色，进行镜下病理观察。

6、结果:肉眼观察未见兔耳廓血管扩张，无红肿;镜下病理检查，对照组及药物组未见炎细胞浸润，余未见明显改变。

7、结论:氨节西林钠/丙磺舒钠于家兔耳缘静脉滴注10m1/kg,每日1次，连续7日。

肉眼及镜下病理检查结果表明，氨节西林钠/丙磺舒钠静脉滴注无局部刺激性。

四、氨节西林钠/丙磺舒钠的溶血试验
1、摘要:经试验表明:氨节西林钠/丙磺舒钠无溶血和红细胞凝集现象。

2、试验目的:观察氨节西林钠/丙磺舒钠有无溶血和红细胞凝集现象。

3、试验药物:氨节西林钠/丙磺舒钠，由委托方提供。

试验时用生理盐水溶解后使用。

4、试验动物:新西兰大耳白家兔，体重。

由吉林大学实验动物部提供。

5、试验方法:取去纤维蛋白的新西兰大耳白家兔血液，加生理盐水摇匀，离心后倾去上清液，量取红血球稀释成2%的红细胞混悬液供试验用。

取试管若干只，编号并按表1所示，加入各种试液，轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别观察并记录, 1, 2, 3, 4小时的结果，观察有无溶血和红细胞凝集现象，并于室温下放置24小时，继续观察有无溶血及红细胞凝集发生。

6、试验结果:氨节西林钠/丙磺舒钠在37℃水浴中观察4小时，除溶血对照第7管呈明显粉红色溶血，无红细胞下沉，其它各管在, 1. 2, 3, 4h均未出现溶血和红细胞凝集现象，可见红细胞下沉，摇动试管后，下沉红细胞上浮，未见红细胞凝集。

7、结论:氨节西林钠/丙磺舒钠在表2、表3所示浓度置37℃水浴中观察4小时，无溶血，室温放置24小时亦未见溶血及凝集发生。

五、氨节西林钠/丙磺舒钠在比格犬体内的药物动力学试验
1、目的:本试验旨在观察相同剂量下犬单独静脉注射氨节西林与联合给予氨节西林钠/丙磺舒钠后的氨节西林钠的药物动力学过程，以确认丙磺舒钠采用静脉给药途径是否能延长氨节西林钠的曲线下面积(AUC)与血消除半衰期(<tv2} )，为该复方制剂的剂型改造奠定基础。

2、试验材料
药品与试剂
氨节西林钠和氨节西林钠/丙磺舒钠;马来酸依那普利(内标，北京药品生物制品检定所提供纯度:% );犬空白血浆(由吉林大
学基础医学院实验动物部提供)。

甲醇为色谱纯，购自天津康科德科技有限公司，其他试剂均为分析纯，为天津福晨化学试剂厂和北京化工厂产品。

试验动物
成年比格犬6只，体重范围为士吨，购自四川省医学科学
院实验动物中心，合格证号:医动字第号。

试验方案与给药方式
6只犬随机分为两组(对照组R和试验组T)，进行双周期交叉试验，两次给药周期间隔为7天。

给药剂量和给药方式如下:
对照组:每只犬单独给予氨节西林钠对照品40, 80和，用生理盐水溶解，然后静脉注射。

实验组:每只犬给予氨节西林钠/丙磺舒钠40/, 80/27和160/54 mg . kg -1，用生理盐水溶解，然后静脉注射。

样品采集与处理
静脉注射采血时间点:, , , , , , , , , , h.(对照组继续取, , h)
按上述采血时间点由犬后肢小隐静脉采血约1 ml。

血样取出后立即移入肝素试管，离心(3500 rpm) 10 min，分离血浆，冷冻保存于-20℃冰箱中至测定。

血浆样品分析方法
犬血浆样品采用LCIMS/MS法进行测定。

数据处理
列出每只犬静脉注射氨节西林钠和氨节西林钠刀丙磺舒钠后的血药浓度数据，给出血药浓度一时间曲线，并根据血药浓度一时间数据，采用Topfit 软件(Thomae GmbH，德国)的非室模型计算犬静脉注射给药和经口给药后的药代动力学参数，并对对照组和试验组的氨节西林的t1/2β, AUC0-t和AUC0-α二进行比较，考察其结果是否有统计学差异。

3、结果与讨论
比格犬静脉注射给药后血药浓度及药物动力学参数
6只比格犬静脉注射低，中，高三个剂量组的氨节西林钠(对照组)和氨节西林钠/丙磺舒钠(试验组)后氨节西林钠平均血药浓度-时间曲线如图1所示。

由图1可以看出，静脉注射氨节西林钠/丙磺舒钠后，氨节西林在每个采血时间点的平均血药浓度均高于对照组。

对照组和试验组的药代动力学参数分别见表1至表6。

结果
比格犬单独给予氨节西林钠(对照组)，剂量分别为40, 80和160 ，时，血浆中氨节西林钠的t1/2β分别为士，土和士h; AUC0-t分别为士, 士和士 . h. mL-1, AUC0-∞分别为士, 士和士ug .h . mL-1;比格犬静脉给予氨节西林钠/丙磺舒钠(试验组)，剂量分别为40/, 80/27和160/54 时，血浆中氨节西林钠的t1/2β分别为士, 士和士; AUCo_t分别为士, 士和士 . h . mL-1, AUC0-∞分别为士, 士和士。

特别值得提及的是，高、中、低三个剂量组试验组氨节西林的血药浓度超过某一特定细菌最小抑菌浓度(MIC)的时间，都比对照组长两个小时。

4、讨论
研究发现，试验组低，中，高剂量水平氨节西林的血消除半衰期t1/2β均比对照组有所延长，分别延长, 和h;试验组氨节西林的AUC0-t和AUC0-∞也比对照组有所提高，分别提高%,%和%。

上述数据经过统计学处理，差异均显著(P<0.
05 )。

3个剂量组AUCo-t和AUCo-与给药剂量线性相关((r>0. 9708, P < 0. 05 ) 。

由此说明，丙磺舒钠(钾)可以明显延长氨节西林钠的半衰期和提高血药浓度，这样也就相应增加了氨节西林单位时间内在体内的药物总量，因此将会明显提高药效。

特别重要的是，丙磺舒可以使氨节西林钠超过相应细菌MIC的时间明显延长，这既有利于杀死细菌，也更有利于减少耐药的发生和发展，因为学药浓度低于MIC时是非常容易导致耐药菌株的产生。

丙磺舒钠(钾)对青霉素G钠盐、头孢唑林钠、头孢呋辛钠、头孢噻肟钠以及头孢
西丁钠血消除半衰期(t1/2β)的影响
1、目的:本试验旨在观察丙磺舒钠(钾)对青霉素G钠盐、头孢唑林钠、头孢呋辛钠、头孢噻肟钠以及头孢西丁钠血消除半衰期(t1/2β)的影响，为系列复方
针剂的研发奠定基础。

2、试验材料
药品与试剂
丙磺舒钠(钾)/青霉素G钠盐、丙磺舒钠(钾)/ 头孢唑林钠、丙磺舒钠(钾)/ 头孢呋辛钠、丙磺舒钠(钾)/ 头孢噻肟钠和丙磺舒钠(钾)/头孢西丁钠复方针剂粉(西林瓶装)以及相应抗生素对照品;马来酸依那普利(内标，北京药品生物制品检定所提供纯度:% );犬空白血浆(由吉林大学基础医学院实验动物部提供)。

甲醇为色谱纯，购自天津康科德科技有限公司，其他试剂均为分析纯，为天津福晨化学试剂厂和北京化工厂产品。

试验动物
成年比格大，体重范围为士kg，购自四川省医学科学院实验动物中心。

试验方案与给药方式
比格犬随机分组(对照组R和试验组T)，进行双周期交叉试验，两次给药周期间隔为7天。

给药剂量和给药方式如下:
对照组:每个对照组中的每只犬单独给予相应抗生素对照品二用生理盐水溶解，然后静脉注射。

具体剂量为:
青霉素G: kg，头孢唑林:kg，头孢呋辛:kg,头孢噻肟:kg，头孢西丁: mg/kg。

实验组:每个试验组中的每只犬给予相应抗生素和丙磺舒钠(钾)合剂，用生理盐水溶解，然后静脉注射。

具体剂量为:每只犬除了给予与上述对照组同样的抗生素之外，同时要静脉注射丙磺舒8mg/kg 。

样品采集与处
由犬后肢小隐静脉采血约1 ml。

血样取出后立即移入肝素试管，离心(3500
rpm) 10 min，分离血浆，冷冻保存于一20℃冰箱中至测定。

血浆样品分析方法
犬血浆样品采用LC/MS1MS法进行测定。

数据处理
比较并考察实验组和对照组的血消除半衰期(t1/2β)结果是否有统计学差异。

3、结果
4、讨论
研究发现，丙磺舒钠(钾)均显著延长试验组抗生素的血消除半衰期(tl/2β)。

由于上述的β一内酞胺类抗生素都属于时间依赖性抗生素，而时间依赖性抗生素抗菌效果的最关键因素并不在于血药峰浓度的高低，而关键是血药浓度是否超过相应致病菌的MIC。

而丙磺舒钠(钾)延长上述抗生素的半衰期，就说明丙磺舒钠(钾)能够使得上述抗生素血药浓度超过相应致病菌MIC的时间明显延长。

由此说明，丙磺舒钠(钾)也可以和上述的β一内酞胺类抗生素组成复方制剂。

此外，丙磺舒的钠盐和钾盐在延长上述抗生素的作用没有明显差别。

本发明的积极效果在于:丙磺舒钠(钾)与β一内酞胺类抗生素同时静脉注射或静脉滴注，增加了β一内酞胺类抗生素单位时间内在体内的药物总量，能明显的提高药效。

同时还能减少抗生素的用量和延长给药间隔，既节省了资源又方便了
患者。

其安全无毒副作用，有很好的药用前景;制备工艺简单，使用更方便。

减少细菌耐药的发生和发展，节省抗生素资源，方便病人，符合医药经济学的原则具体实施方式:
1、将丙磺舒钠与青霉素G钠按重量比l:3～5的比例进行混合；
2、将丙磺舒钠与氨苄西林钠按重量比1:～5的比例进行混合；
3、将丙磺舒钠与阿莫西林钠按重量比1:～5的比例进行混合；
4、将丙磺舒钠与头孢唑林钠按重量比1:2～5的比例进行混合；
5、将丙磺舒钠与头孢呋辛钠按重量比1:～5的比例进行混合；
6、将丙磺舒钾与头孢噻肟钠按重量比l:～5的比例混合；
7、将丙磺舒钾与头孢西丁钠按重量比l: 2～5的比例混合；
8、将丙磺舒钠与水溶性头孢拉定按重量比1:3～5的比例进行混合；
9、将丙磺舒钠与头孢噻呋钠按重量比1: ～5的比例进行混合；
10、将丙磺舒钠与头胞哌酮舒巴坦钠按重量比1: 3～5的比例进行混合；
11、将丙磺舒钠与精氨酸头孢吡肟按重量比1: 4～5的比例进行混合；
12、将丙磺舒钠与精氨酸头孢克肟按重量比1: 4～5的比例进行混合。

13、将丙磺舒钾与诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、
二氟沙星、达诺沙星、马波沙星按重量比l:4～8的比例混合；
14、将丙磺舒钠与利福平l:4～8的比例混合。