动物医学 生化实验《实验五 动物组织中DNA的制备》课件
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SDS使蛋白成分变性，释放DNA，除蛋白； 用95%乙醇沉淀DNA。
柠檬酸盐，EDห้องสมุดไป่ตู้A等螯合剂 除DNase 所需 Mg2＋，降低该酶活性。
【 试剂 】 1．NaCl–柠檬酸钠 。 2. NaCl– EDTANa2 。 3．5% SDS 。 4．氯仿–异戊醇溶液 。 5．0.01mol/LNaOH 。 6．95％乙醇 。
实验五 动物组织中DNA的制备
【原理】 将肝脏组织细胞破碎提取细胞核中DNA。 脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白在不同盐溶液
中具不同的溶解度。在0.15mol/L NaCl的稀盐 溶液中核糖核蛋白的溶解度最大，脱氧核糖核蛋 白的溶解度则最小 。在1mol/L NaCl的浓盐溶 液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度增大，核糖核蛋 白的溶解度则明显降低。
【器材】 1．玻璃匀浆器。 2 ．离心机 。 3 ．30ml离心管。 4 ．加样枪。
【材料】 肝脏
【操作】 1.取1g肝，置入玻璃匀浆器，加入2ml
0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液， 匀浆，使细胞充分破碎，再加该溶液至5ml。 2 .转移至5ml离心管中，6 000r/min离心 15min。弃上清，沉淀中加入4倍体积 0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液 搅匀， 6 000r/min离心15min ，弃上清， 留沉淀。
3.将沉淀中加入5倍体积0.015 mol/L NaCl–0.1 mol/L EDTANa2 溶液，搅 拌溶解。边搅边滴加5%SDS溶液，至 SDS的终浓度达1%为止。此时溶液变 粘稠。加5mol/L NaCl使终浓度达 1mol/L，溶液由稠变稀。
4 .将溶液转入30ml塑料离心管中，加入等 体积的氯仿–异戊醇溶液振荡混匀，静止 10min。3 000r/min离心10min 。
结果：离心液分为3层：上层为水溶液， 中层为变性蛋白块，下层为氯仿–异戊醇。
5 .取上层水相，重复步骤4，1~2次.
6 .将上清转至5ml离心管中，加入2倍体 积95%冷乙醇，混匀，静置5min。
7. 10000r/min离心 1min ，倒上清，沉 淀中加入100μl~200μl 0.01 mol/L NaOH溶液溶解。
柠檬酸盐，EDห้องสมุดไป่ตู้A等螯合剂 除DNase 所需 Mg2＋，降低该酶活性。
【 试剂 】 1．NaCl–柠檬酸钠 。 2. NaCl– EDTANa2 。 3．5% SDS 。 4．氯仿–异戊醇溶液 。 5．0.01mol/LNaOH 。 6．95％乙醇 。
实验五 动物组织中DNA的制备
【原理】 将肝脏组织细胞破碎提取细胞核中DNA。 脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白在不同盐溶液
中具不同的溶解度。在0.15mol/L NaCl的稀盐 溶液中核糖核蛋白的溶解度最大，脱氧核糖核蛋 白的溶解度则最小 。在1mol/L NaCl的浓盐溶 液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度增大，核糖核蛋 白的溶解度则明显降低。
【器材】 1．玻璃匀浆器。 2 ．离心机 。 3 ．30ml离心管。 4 ．加样枪。
【材料】 肝脏
【操作】 1.取1g肝，置入玻璃匀浆器，加入2ml
0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液， 匀浆，使细胞充分破碎，再加该溶液至5ml。 2 .转移至5ml离心管中，6 000r/min离心 15min。弃上清，沉淀中加入4倍体积 0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液 搅匀， 6 000r/min离心15min ，弃上清， 留沉淀。
3.将沉淀中加入5倍体积0.015 mol/L NaCl–0.1 mol/L EDTANa2 溶液，搅 拌溶解。边搅边滴加5%SDS溶液，至 SDS的终浓度达1%为止。此时溶液变 粘稠。加5mol/L NaCl使终浓度达 1mol/L，溶液由稠变稀。
4 .将溶液转入30ml塑料离心管中，加入等 体积的氯仿–异戊醇溶液振荡混匀，静止 10min。3 000r/min离心10min 。
结果：离心液分为3层：上层为水溶液， 中层为变性蛋白块，下层为氯仿–异戊醇。
5 .取上层水相，重复步骤4，1~2次.
6 .将上清转至5ml离心管中，加入2倍体 积95%冷乙醇，混匀，静置5min。
7. 10000r/min离心 1min ，倒上清，沉 淀中加入100μl~200μl 0.01 mol/L NaOH溶液溶解。